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登革病毒感染对血管内皮细胞ICAM-1表达的影响
目的 探讨登革病毒2型(DV2)体外感染对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达细胞间黏附分子(intercellular adhesion molecule,ICAM-1)的影响.方法 原代分离培养HUVEC,用生长良好的2、3代细胞进行实验.用CCK-8法测定DV2感染前后的细胞活性.流式细胞仪测定DV2感染组和对照组细胞在不同实验时间点细胞表面ICAM-1蛋白表达的情况.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和图像定量分析技术分析DV2感染组和对照组在不同实验时间点HUVEC内ICAM-1 mRNA水平.结果 病毒感染HUVEC对细胞活力的影响与对照组相比差异无统计学意义.DV2感染HUVEC促进ICAM-1 mRNA转录,DV2组与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).其中,正常状态下HUVEC有一定水平ICAM-1 mRNA转录,但感染后显著增加(P＜0.05),24～72 h维持于高水平,与其他时间表达差异有统计学意义(P＜0.05).DV2感染HUVEC,细胞表达ICAM-1蛋白在12～72 h显著升高,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 DV2感染上调HUVEC的ICAM-1 mRNA水平和蛋白表达,从而诱发并加重血管内皮局部的损伤,破坏血管的屏障功能,促进血管渗漏的形成与发展.这可能是DV2感染诱发患者血管通透性升高和血浆渗漏的重要分子机制之一.
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柯萨奇B组3型、5型病毒在人脐静脉血管内皮细胞中持续感染模型的建立
柯萨奇B组病毒(group B coxsackieviruses, CVB)可引起人类多种疾病.如病毒性心肌炎,有的患者可转为慢性,晚期形成扩张型心肌病,导致心衰,预后不良.目前认为扩张型心肌病的病因与病毒在心肌组织中的持续存在有关[1].CVB可形成病毒血症,侵入血管内皮细胞或经血管内皮细胞穿越内皮屏障,感染相应靶组织.ECV304为一株自发突变为可传代的人脐静脉内皮细胞,其主要生物学特性与原代细胞相似.本研究在ECV304细胞中建立CVB3、CVB5持续感染的细胞模型,通过对病毒、细胞各种指标的检测,印证病毒长期存在于感染细胞中.为病毒性心肌炎及扩张型心肌病发病机制的深入研究及治疗药物的筛选提供参考依据.
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登革病毒感染的人脐静脉内皮细胞与人CD4+ T细胞相互作用对黏附分子和抑炎细胞因子表达的影响
目的 探讨Ⅱ型登革病毒(DENV-2)感染的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)与CD4+T细胞的共培养对HUVECs表达细胞间黏附分子(ICAM-1)、血管细胞黏附分子(VCAM-1) mRNA和 CD4+T细胞表达IL-10、TGF-β1 mRNA产生的影响,以进一步了解DENV感染的免疫学机制.方法 S1P1选择性激动剂CYM-5442处理HUVECs 24 h,用103半数组织培养感染剂量(TCID50)的DENV-2感染HUVECs后与人CD4+T细胞共培养.于4、8、12、24、48及72 h,分别收集细胞样本,用real-time PCR检测DENV-2非结构蛋白1(NS1)、鞘氨醇激酶1(SPHK1)、ICAM-1、VCAM-1、IL-10、TGF-β1 mRNA表达变化.结果 HUVECs被DENV-2感染后,病毒NS1 mRNA的表达呈一定时效性,在24 h达到高峰.在DENV-2感染的不同实验组中,CYM-5442处理和未处理组,DENV-2 NS1 mRNA的表达均无明显差异.HUVECs被CYM-5442处理和DENV-2感染后,SPHK1 mRNA表达明显上升,差异有统计学意义(P<0.05);在DENV-2感染的HUVECs与CD4+T细胞共培养的情况下,HUVECs ICAM-1和VCAM-1 mRNA高表达,相对HUVECs仅被DENV-2感染组和未处理组差异有统计学意义(P<0.01),CD4+T细胞TGF-β1 mRNA表达无明显差异,IL-10 mRNA表达上调,差异有统计学意义(P<0.05).结论 实验证明DENV-2能在HUVECs内复制增殖,CD4+T细胞可抑制DENV-2增殖;CD4+T细胞对DENV-2感染的HUVECs产生黏附分子VCAM-1和ICAM-1有明显的促进作用,CD4+T细胞可促使HUVECs活化,增强炎症反应,这可能与DENV-2感染诱发血管通透性升高有关.DENV-2感染的HUVECs对CD4+T细胞IL-10 mRNA表达有一定上调作用,对TGF-β1的表达没有明显的影响.
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IL-22在氧化型低密度脂蛋白损伤内皮细胞中的调节作用
目的 研究氧化型低密度脂蛋白通过IL-22对人脐静脉内皮细胞(CRL-1730)增殖的影响及机制,初步探讨IL-22与冠状动脉粥样硬化(AS)发病机制的关系.方法 采用RT-PCR检测8例无明显冠状动脉狭窄的健康个体和30例AS患者外周血单个核细胞(PBMC) IL-22 mRNA的表达,ELISA法检测22例无明显冠状动脉狭窄的健康个体和79例AS患者血浆IL-22的浓度,分析IL-22的表达与AS患者冠状动脉大狭窄程度及受累支数的关系.使用不同浓度氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激CRL-1730细胞,24 h后流式细胞术检测IL-22R1阳性细胞百分比.100 μg/ml ox-LDL和20 ng/ml IL-22共刺激CRL-1730细胞后,MTS法检测细胞的增殖能力,RT-PCR和ELISA检测碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达.结果 随着患者冠状动脉狭窄程度和受累支数的增加,AS患者外周血PBMC中IL-22 mRNA和血浆中IL-22水平逐渐降低.ox-LDL呈剂量依赖性地上调CRL-1730细胞中IL-22R1的表达.ox-LDL刺激可以引起CRL-1730细胞增殖能力受损、表达bFGF的能力降低,IL42可以部分逆转ox-LDL的此种效应.结论 IL-22可能具有抗AS的生物学效应,这种生物学效应可能与其拮抗ox-LDL对CRL-1730细胞增殖能力和表达bFGF的抑制作用有关.
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线粒体凋亡途经参与热应激后人脐静脉内皮细胞凋亡的研究
目的 观察细胞色素C、caspase-9和caspase-3在热应激后人脐静脉内皮细胞的表达及相互关系,阐明热应激后人脐静脉内皮细胞凋亡的信号转导机制,探讨重症中暑所致血管内皮损害的发病机理.方法 建立人脐静脉内皮细胞热应激模型,对照组将细胞置于标准37℃、5％ CO2细胞培养箱,热应激组将细胞置于39℃、41℃、43℃细胞培养箱中进行热应激2h,热应激后继续在细胞培养箱孵育24h.电子显微镜观察人脐静脉内皮细胞(37℃、43℃)线粒体改变,应用Annexin V-FITC/PI双染色方法检测不同温度热应激后细胞凋亡率、Western blot检测细胞色素C、caspase-9、caspase-3蛋白表达.结果 电镜观察对照组(37℃)HUVEC细胞线粒体结构基本正常.热应激后(43℃)HUVEC细胞线粒体肿胀并出现结构改变;与对照组比较,39℃热应激对内皮细胞凋亡无明显影响(P＞0.05),随着热应激温度的增加人脐静脉内皮细胞凋亡明显增多(41℃17.8％,4 3℃25.6％)并且细胞色素C、caspase-9、caspase-3蛋白表达明显增加(P＜0.05).结论 线粒体通路的激活参与了热应激后人脐静脉内皮细胞凋亡的调控;血管内皮细胞凋亡可能与重症中暑的发病存在相关性.
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卡托普利对百草枯致急性肺损伤的保护作用
目的 构建百草枯(paraquat,PQ)诱导的急性肺损伤细胞模型,探讨血管紧张素转化酶抑制剂卡托普利(captopril,CAP)对PQ中毒模型的保护作用.方法实验地点在武汉协和医院中心实验室,采用人脐静脉内皮细胞系(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),给予含不同浓度的PQ和CAP堵养基孵育HUVECs,制备实验模型,MTT法检测细胞活性,半数成活率判定模型成功与否.依据干预药物的不同确定实验分组:不予以药物干预为正常对照组(normal control group,NCG);给予含400μmol/LPQ的培养基制备PQ损伤组;在PQ损伤同时予以CAP(10μmol/L)干预的为CAP保护组;因CAP干预时间的不同,分CAPA,CAPB,CAPC.检测在PQ损伤24 h后检测培养幕上清内SOD、MDA;免疫组织化学染色法检测业细胞结构的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡,数据采用(x±s)表示,应用SPSS 16.0软件行统计学分析.结果 MTT法榆测PQ作用浓度,时间和CAP各组数值,采用单因素方差分析,F值分别为56.734,172.025,P<0.01,成功构建了PQ模型及确定CAP干预浓度;与PQ组相比,CAP各组MDA含量降低(t分别为5.913,3.945,-3.426,P<0.01),而SOD含量升高(t分别为5.463,-2.292,-1.297,P<0.01);细胞色素C含量明显减少及CAP绀凋亡率降低.结论 血管紧张素抑制剂CAP具有清除活性氧自由基作用,可拮抗PQ对HUVECs细胞的损伤作用,为PQ中毒的基础研究和临床治疗提供思考.
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ADMA 通过引起脐静脉内皮细胞内质网应激而诱导细胞凋亡
目的探讨非对称性二甲基精氨酸（ADMA）是否通过内质网应激引起人脐静脉内皮细胞（ HUVEC）凋亡。方法对 HUVEC 进行体外培养，通过流式细胞仪检测细胞凋亡水平，用 RT - PCT 检测 CHOP mRNA 和 ATF4 mR-NA 水平，用 Western blot 检测 RNA 蛋白激酶的内质网类似激酶（PERK）、转录激活因子-4（ATF4）、转录因子 C/ EBP同源蛋白（CHOP）的蛋白水平。结果流式细胞仪结果表明 ADMA 引起 HUVEC 凋亡，RT - PCR 结果表明 ADMA 引起CHOP mRNA 和 ATF4 mRNA 表达增加，Western blot 结果表明 ADMA 引起 PERK、ATF4、CHOP 蛋白表达明显增高。结论ADMA 通过内质网应激而引起 HUVEC 凋亡，从而加快动脉硬化的进展。
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烟酸抑制血管紧张素II诱导的内皮细胞凋亡
目的 探讨烟酸对血管紧张素II诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响.方法 分别使用不同浓度烟酸(0.25 mM,0.5 mM或1.0 mM)预处理HUVECs不同时间(1 h、3 h、6 h、12 h)后,使用血管紧张素II(1 μM)诱导HUVECs凋亡.终端转移酶介导的dUTP缺口标记技术(TUNEL法)检测内皮细胞的凋亡指数;H2DCF-DA荧光标记法测定细胞内氧自由基(ROS)的生成.结果 预处理一定时间后,烟酸能抑制血管紧张素II诱导的HUVECs的凋亡,而且这种抑制呈浓度依赖性.HUVECs在使用1 mM烟酸预处理6 h后,血管紧张素II加烟酸(AngII+Niacin)组与血管紧张素II(AngII)组相比,ROS的生成有明显降低(P＜0.05).结论 烟酸能抑制AngII诱导的HUVECs凋亡,抑制ROS生成是可能的机制之一.
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超声辐照载诺帝脂质微泡对血管内皮细胞增殖的影响及体外内皮细胞三维成型的抑制作用研究
目的 探讨超声辐照载诺帝脂质微泡对正常血管内皮细胞增殖的影响及体外内皮细胞三维成型的抑制作用研究.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),并且进行内皮细胞体外三维培养.将细胞分5组,即对照组,载诺帝微泡组,诺帝溶液组,超声辐照诺帝溶液组,超声辐照载诺帝脂质微泡组.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察不同处理组对细胞生长的影响.比较不同处理组对内皮细胞三维培养的影响.结果 在诺帝浓度为200 μmol/L时,超声辐照载诺帝微泡组对细胞增殖抑制作用强于其他处理组及对照组；在三维培养3、5、7、9d后观察发现,超声辐照载诺帝微泡组对体外管腔形成的抑制作用更显著,差异有统计学意义.结论 超声辐照载诺帝脂质微泡造影剂对人脐静脉内皮细胞的生长和体外管腔形成有明显抑制作用.
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久强脑立清对人脐静脉内皮细胞一氧化氮和内皮素分泌的影响
目的观察久强脑力清(JNQ)含药血清对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌一氧化氮(NO)和内皮素(ET-1)的影响,探讨其对HUVECs血管活性分子分泌的调节作用.方法取原始JNQ含药血清体积分数的80%、 40%、20%、 10%和 5% 作用于原代培养的HUVECs 24 h后,分别检测上清中的NO和EI-1的含量.结果不同浓度的JNQ含药血清作用组的NO、ET-1含量与正常血清对照组比较增加(P<0.05); NO/ET-1比值随着含药血清浓度的增加,比正常血清组增高(P<0.05).结论JNQ含药血清通过提高HUVECs分泌NO和ET-1,具有保护内皮细胞功能和维持NO/ ET-1平衡的作用.
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尿毒症血清促进脐静脉内皮细胞活性氧、白介素-6的产生及左旋肉毒碱的干预作用
目的 观察体外尿毒症血清环境诱导的脐静脉内皮细胞(HUVEC)活性氧(ROS)及白介素-6(IL-6)的产生及左旋肉毒碱(L-CN)对它们的影响.方法 以2、7-二氢二氯荧光素染色(DCFH)和荧光分光光度计法检测ROS强度,RT-PCR和ELISA方法检测IL-6表达,观察尿毒症血清对HUVEC的影响和不同浓度LCN(25 μM,250 μM,1 000 μM,2 500 μM)的干预作用.结果 尿毒症血清环境能使细胞内ROS产生及IL-6表达明显增加;而L-CN可明显抑制尿毒症血清环境中细胞内ROS产生及IL-6表达,且有浓度依赖效应.结论 尿毒症血清促使血管内皮微炎症状态的建立,L-CN可抑制其组织活性氧及白介素-6的产生,减轻尿毒症患者慢性炎症反应,对血管粥样硬化病变可能有延缓作用.
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阿托伐他汀抑制高糖诱导的人脐静脉内皮细胞的氧化应激反应
目的：探讨阿托伐他汀（Atv）对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的影响及保护作用、可能作用机制。方法 HUVECs 低糖培养贴壁后分为对照 A 组；持续性高糖 B0组、持续性高糖＋不同浓度药物（0.1、1.0、10.0μmol/L Atv）B1～B3组；波动性高糖C组。高糖干预、药物培养24 h 后检测超氧化物歧化酶（SOD）活性及一氧化氮（NO）含量；细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞增殖；流式细胞仪检测细胞凋亡率；RT-PCR检测还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶NOX4和NOX2/gp91phox亚基的表达。所有计量数据采用均数±标准差（ x?s ）表示，SPSS 17.0软件处理分析。结果（1）与对照组相比，高糖各组细胞增殖均降低（CCK-8 D450值：B0组0.74±0.085 vs. A组1.20±0.045，P＜0.01；C组0.56±0.083 vs. A组1.20±0.045，P＜0.01），阿托伐他汀可改善高糖对 HUVECs 增殖的抑制作用，呈浓度依赖性。（2）与对照组比较，高糖组NO含量及SOD活性明显降低、NOX4 mRNA及NOX2/gp91phox mRNA的表达升高，细胞凋亡率显著增高。波动性高糖组变化趋势更明显[早期凋亡率：B0组（23.48±0.73）%vs. C组（27.33±0.89）%， P＜0.01]。（3）阿托伐他汀可明显升高持续性高糖诱导的SOD活性及NO的释放，减少细胞凋亡，抑制NOX4 mRNA及NOX2/gp91phox mRNA表达的增加幅度，具有明显的浓度依赖性。结论持续性高糖与波动性高糖对内皮细胞均有损伤作用，其损伤作用可能是通过氧化应激作用来实现的，波动性高糖较持续性高糖对内皮细胞的损伤作用更大。不同浓度的Atv对持续性高糖诱导的内皮细胞损伤有保护作用，呈浓度依赖性。
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TLR4激动上调内皮细胞氧化低密度脂蛋白受体LOX-1表达
目的近年研究表明介导先天免疫反应的受体Toll样受体4(TLR4)参与了动脉硬化的发生发展.业已证明氧化低密度脂蛋白受体LOX-1介导内皮细胞活化和功能失调,激发炎症过程,在动脉粥样硬化的发生和发展中起着极为重要作用.本研究观察TLR4激动是否调节内皮细胞LOX-1表达.方法应用脂多糖(LPS)刺激体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)24 h.采用RT-PCR和流式细胞术分别检测TLR4、LOX-1 mRNA和蛋白表达水平.为了观察转录因子NF-κB在调节LOX-1表达中的作用,应用NF-κB特异性抑制剂咖啡酸苯乙酯(CAPE)预处理细胞,然后以LPS刺激,检测LOX-1 mRNA和蛋白变化.结果LPS(10～1 000 ng/mL)上调HUVECs TLR4和LOX-1 mRNA表达,LPS(1 000ng/mL)上调TLR4和LOX-1蛋白表达,CAPE(20μg/mL)可抑制LPS介导的LOX-1表达上调.结论TLR4/NF-κB信号途径可能通过上调内皮细胞LOX-1表达参与动脉粥样硬化的发生及发展.
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缓激肽在血管紧张素(1～7)保护血管内皮细胞中的作用
目的 观察缓激肽(BK)在血管紧张素(1～7)[Ang(1～7)]对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤、凋亡中的影响及可能作用机制.方法 体外培养HUVECs,随机分为6组:对照组,AngⅡ组,Ang(1～7)组,AngⅡ+Ang(1～7)组,HOE-140组和AngⅡ+Ang(1～7)+HOE-140组.采用分光光度计测定培养的HUVECs乳酸脱氢酶(LDH)漏出,流式细胞仪技术检测细胞凋亡,硝酸还原酶法和放射免疫分析技术分别测定HUVECs上清液中一氧化氮(NO)和内皮素-1(ET-1)的含量,免疫组化法结合图像分析测定细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达.结果 (1)与对照组比较,AngⅡ(0.1 μmol/L)孵育细胞24 h后显著增加HUVECs的LDH漏出[(231.5±74.4 vs 76.6±19.4)U/L,P＜0.01]、ET-1分泌[(97.6±15.7 vs 48.8±9.3)pg/mL,P＜0.01]、ICAM-1表达[0.070±0.001 vs 0.041±0.003,P＜0.01]和HUVECs凋亡率[24.8%±0.6%vs 1.4%±0.6%,P＜0.01];Ang(1～7)(1 μmol/L)明显抑制了AngⅡ的上述作用,同时还促进HUVECsNO的释放;(2)缓激肽B2受体拮抗剂HOE-140(1 μmol/L)明显减弱Ang(1～7)对抗AngⅡ的作用(P＜0.01);(3)单用Ang(1～7)、HOE-140对HUVECs无明显影响.结论 Ang(1～7)能有效抑制AngⅡ引起的HUVECs的损伤和凋亡,其作用至少部分是通过BK B2受体介导的.
关键词： 血管紧张素(1～7) 血管紧张素Ⅱ缓激肽 人脐静脉内皮细胞 凋亡 -
阿托伐他汀下调内皮细胞Toll样受体4及其下游分子的表达
背景他汀类药物有独立于调脂作用之外的抗炎作用.近年研究表明Toll-样受体4(TLR4)参与了动脉粥样硬化的形成和发展.目的 观察阿托伐他汀对脂多糖(LPS)诱导的内皮细胞TLR4及其下游分子表达的影响,以探讨他汀类药物抗炎作用的分子机制.方法 采用阿托伐他汀(1及10μmol/L)或核转录因子(NF)κB抑制剂咖啡酸苯乙酯(CAPE)预孵育人脐静脉内皮细胞(HUVEC)30 min后,应用LPS(1 mg/L)作用24 h.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法 检测TLR4、细胞间黏附分子1(ICAM-1)和E选择素mRNA表达水平;采用流式细胞术检测TLR4蛋白表达水平;采用蛋白质印迹技术检测核蛋白NF-κB p65表达的变化.结果 与LPS组比较,阿托伐他汀1 μmol/L,组减轻LPS介导的TLR4表达增加[TLR4 mRNA:(1.24±0.21)比LPS组(1.82±0.27),P<0.05;TLR4阳性细胞数(50.1±4.7)%比LPS组(69.5±7.8)%,P<0.05],阿托伐他汀减轻LPS介导的ICAM-1和E选择素的表达增加.阿托伐他汀抑制LPS介导的NF-κB p65活化(50.4±10.1比LPS组72.3±12.5,P<0.05),10 μmol/L阿托伐他汀较1 μtmol/L作用更明显;CAPE(20 mg/L)也明显抑制了LPS介导的TLR4及ICAM-1和E选择素表达上调.结论 阿托伐他汀抑制TLR4/NF-κB及其下游分子表达是他汀类药物抗炎作用机制之一.
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趋化因子分形素Fractalkine介导的单核细胞黏附
背景分形素Fractalkine(FKN)是新近发现的唯一兼具黏附功能的趋化因子,不仅能够诱导单核细胞的定向迁移,还能介导单核细胞与血管内皮细胞的紧密黏附,参与动脉粥样硬化(AS)的形成.目的 观察白细胞介素18(IL-18)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)上调表达FKN后,FKN介导的HUVEC与人单核细胞细胞株1(THP-1)的黏附.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HUVEC FKN mRNA的表达,应用FlowChamber装置观察HUVEC与人单核细胞THP-1的黏附,以及FKN中和抗体对黏附效应的影响.结果 IL-18可剂量相关地诱导FKN mRNA表达,与0 μg/L组(0.10±0.01)相比,25、50、100μg/L组分别增加为:(0.49±0.04),(0.63±0.09),(0.85±0.07)(均P<0.01).FKN表达上调相应地明显增加HUVEC与单核细胞的黏附,单核细胞黏附数在0、25、50、100μg/L IL-18组,分别为:(7.4±2.6),(26.8±5.2)、(43.0±5.4)、(70.8±10.7)/HP(均P<0.01).FKN中和抗体可明显抑制此种黏附效应.结论 FKN在介导HUVEC与单核细胞的黏附过程中发挥作用.
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内脂素在人脐静脉内皮细胞增殖凋亡中的作用及机制
目的 研究内脂素在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖凋亡中的作用及机制.方法 选取产科提供的健康剖腹产的孕妇脐带进行原代培养HUVEC.使用MTT法检测内皮细胞增殖,流式细胞仪法检测细胞凋亡情况,通过Western blot检测内皮细胞中磷酸化热休克蛋白27(p-HSP27)的蛋白表达量.内脂素(10 nmol/L)分别加入10μmol/L的丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK),磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)或细胞外信号调节激酶(ERK) 1/2选择性抑制剂(分别为SB202190,LY294002和U0126)预处理的内皮细胞后,检测内皮细胞增殖、凋亡及蛋白表达情况改变.结果 10 nmol/L的内脂素能促进HUVEC的增殖、抑制高糖诱导的凋亡(均P＜0.05).预先给予LY294002或U0126能够有效地减少内脂素诱导的HSP27磷酸化的表达,分别使磷酸化峰值减少77.8％和51.7％(均P＜0.01),并且LY294002或U0126可以阻断内脂素诱导的HUVEC的增殖促进及凋亡保护作用.结论 内脂素通过ERK1/2和PI3K/蛋白激酶B(Akt)信号通路激活HSP27磷酸化,从而促进HUVEC增殖并抑制高糖诱导凋亡的重要过程.
关键词： 人脐静脉内皮细胞 内脂素 热休克蛋白27磷酸化 -
血管紧张素(1～7)对氧化低密度脂蛋白诱导人血管内皮细胞单核细胞趋化蛋白1表达的影响
目的 探讨血管紧张素(Ang)(1～7)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人血管内皮细胞单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的影响.方法 原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),分别以不同终浓度的Ang(1～7)(10、100、1000 nmol/L)和ox-LDL[25、50、100 mg/L(蛋白质含量)]进行单独或联合刺激,并以A-779[Ang(1～7)特异性受体阻断剂,终浓度为100 nmol/L)]预处理,孵育24 h,以ELISA方法检测培养基上清液中MCP-1蛋白含量,RT-PCR法检测其mRNA的表达.结果 ox-LDL使MCP-1蛋白、基因表达增加,呈剂量依赖性(P＜0.05～0.01);基础状态下,Ang(1～7)对MCP-1表达无显著影响,但对ox-LDL诱导MCP-1的表达增强有抑制作用(P＜0.05～0.01);以A-779预处理后,Ang(1～7)的作用消失.结论 Ang(1～7)对氧化低密度脂蛋白诱导的内皮细胞单核细胞趋化因子1升高具有显著的抑制作用,此作用是通过特异性受体介导的.
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食欲刺激素抑制血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞活性氧生成及内皮素1表达
目的 研究食欲刺激素(Ghrelin)在不同浓度下对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)体外诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)活性氧(ROS)生成和内皮素1(E-1)表达的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,用AngⅡ和Ghrelin联合干预细胞18 h后,采用流式细胞术测定细胞内ROS水平,放射免疫方法测定ET-1含量,用RT0-PCR法测定ET-1 mRNA表达.结果 AngⅡ明显增加HUVECs的ROS生成[(21.4±2.2)比(2.9±0.9)10-7 mol/L]和E-1分泌(111.3±7.9比43.2±9.7)ng/L,P＜0.05;Ghrelin对基础ROS及ET-1分泌无影响,但在10-8～10-6 mol/L范围内剂量依赖性地抑制AngⅡ诱导ROS生成[(14.2±0.7)、(10.4±1.4)和(6.6±0.5)10-7 mol/L]及E-1分泌[(119.3±7.2)、(101.5±2.8)和(72.3±8.8)ng/L]与AngⅡ组(40.5±12.7)ng/L比较,P均＜0.05;RT-PCR显示AngⅡ明显增加ET-1 mRNA表达,此作用可为Ghrelin所抑制,且在10-8～10-6 mol/L浓度范围呈浓度依赖性.结论 Ghelin能够抑制AngⅡ诱导的HUVECs ROS的生成,ET-1的释放及ET-1 mRNA表达,且在一定的浓度范围内(10-8～10-6 mol/L)呈浓度依赖性.
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决明子提取物对大鼠主动脉扩血管作用的机制
背景 决明子在动物实验和临床实践中发现有降压作用,但降压机制的研究未见报道.目的 研究决明子提取物的扩血管作用并探讨其机制.方法 制备SD大鼠有内皮和去内皮胸主动脉环,分别预先做氯化钾和去氧肾上腺素(PE)处理.制备量效曲线,观察决明子提取物0.1及1.0 mg/L在有内皮、无内皮细胞,有钙及无钙等不同条件下,对氯化钾和PE量效曲线的影响(n=6),以及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)引起人脐静脉内皮细胞(HUVEC)一氧化氮、总一氧化氮合酶(TNOS)和诱生型一氧化氮合酶(iNOS)的变化.化学法检测细胞上清液中一氧化氮含量,重氮法检测细胞匀浆中TNOS和iNOS的活性(n=7).结果 决明子提取物能使有内皮血管环氯化钾缩血管量效曲线向右下移,对去内皮血管环氯化钾量效曲线无明显影响;对去内皮和有内皮血管环PE缩血管量效曲线均有明显向右下移作用;对无钙克氏液中PE引起的血管收缩无影响.溶液Ca~(2+)分别为1.1和2.2 mmol/L时,决明子1.0及0.1 mg/L都有减少PE引起血管收缩的作用.决明子还能对抗AngⅡ(10~(-6)mol/L)引起内皮细胞培养液NO下降,iNOS增高的作用.结论 决明子提取物的扩血管作用可能与抑制受体操纵性钙通道开放、调节血管内皮细胞iNOS和一氧化氮释放有关.
