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白藜芦醇对肿瘤坏死因子α诱导内皮细胞白细胞介素6及基因表达谱的影响
目的 观察白藜芦醇对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)炎症因子的影响,并借助基因芯片技术及富集方法分析基因差异性表达情况,探讨白藜芦醇保护内皮功能的可能分子机制.方法 应用体外HUVEC原代培养细胞,分别用10 μg/L的TNF-α及加入不同浓度白藜芦醇刺激HUVEC后,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞上清液的炎症因子白细胞介素6(IL-6)和趋化因子单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的水平,改良Boyden室模型评估单核细胞迁移.采用全基因组表达谱芯片筛选白藜芦醇干预HUVEC后的差异表达基因,同时用富集分析方法进行基因本体(GO)、京都基因和基因组学百科全书(KEGG)通路分析可能的分子功能.结果 未加任何药物处理的HUVEC产生的IL-6浓度为(165.1±151.4) ng/L,MCP-1浓度为(65.44±12.14)ng/L;10 μg/L的TNF-α刺激HUVEC后IL-6浓度为(346.8±86.0) ng/L,MCP-1浓度为(98.82±26.83) ng/L;10 μmol/L白藜芦醇干预细胞后IL-6浓度为(183.8±146.7)ng/L,MCP-1浓度为(62.57±19.51)ng/L;20 μmol/L白藜芦醇干预后IL-6浓度为(117.0±83.1)ng/L,MCP-1浓度为(55.73±23.34) ng/L;提示白藜芦醇呈浓度依赖性抑制TNF-α刺激HUVEC后的IL-6和MCP-1的水平(P＜0.05),同时白藜芦醇可明显减少单核细胞向内皮细胞的迁移(10 μmol/L白藜芦醇降低了30％,20 μmol/L白藜芦醇降低了80％,P＜0.01).与单用TNF-α刺激HUVEC相比,白藜芦醇预处理后有1604个基因表达上调,2157个基因下调.GO功能分析提示差异表达基因主要富集在化学物质应激反应、细胞外基质组织、结构组织、心血管系统发育、炎症反应等生物学过程.KEGG通路分析显示磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt),血小板活化信号通路受到影响.结论 白藜芦醇可抑制内皮细胞的炎症反应,可能通过多条信号机制影响炎症因子和保护心血管系统.
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替米沙坦减轻高糖引起的人血管内皮细胞损伤
目的 探讨替米沙坦对高糖环境下人血管内皮细胞的保护作用及相关的机制.方法 替米沙坦及不同浓度葡萄糖(5、30 mmol/L)分别作用于培养的脐带静脉内皮细胞(HUVEC)0、12、24、36、48 h,比色法测定细胞培养上清中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平;收集培养24 h的内皮细胞,蛋白质免疫印迹法(Western-blot)检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)蛋白表达量.结果 在高糖处理的细胞条件培养上清中MDA含量升高[干预前:(1 2±0 06)mmol/mL vs干预后:(1 6±0 1)mmol/mL, P<0 05],而SOD活性降低[干预前:(22 9±1 4 )nU/mL vs干预后:(19 4±1 0)nU/mL, P<0 05],同时细胞PPAR-γ蛋白表达量降低(P<0 05);而替米沙坦(1×10-6 mol/L)减轻上述不良变化,降低内皮细胞MDA 含量、增强SOD[MDA:(1 4±0 1)mmol/mL,SOD:(20 7±0 3)nU/mL],以及促进PPAR-γ蛋白质含量增加(P<0 05).结论 替米沙坦可抑制高糖诱导的内皮细胞活性氧产生,增强抗氧化酶活性,维持高糖状态下细胞氧化平衡,促进PPAR-γ蛋白分泌,提示替米沙坦对高糖状态下的内皮细胞具有保护作用,其作用机制可能与调节内皮细胞氧化平衡和激动PPAR-γ有关.
关键词： 人脐静脉内皮细胞 替米沙坦 丙二醛 超氧化物歧化酶 过氧化物酶体增殖物激活受体γ -
多巴胺D4受体对糖尿病血管内皮损伤的保护作用
目的 研究多巴胺D4受体对高糖诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用及相关机制.方法 构建链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型,Western blot法检测内皮组织D4受体表达的变化.以体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为靶细胞,测定在高糖(33 mmol/L)刺激下细胞的活力,同时检测D4受体表达变化;用高糖刺激HUVEC后,在D4受体激动剂PD168077(10-7 mol/L)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002(5×10-5 mol/L)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(l-NAME) (10-4 mol/L)分别作用的情况下,检测HUVEC细胞活力水平的变化,并检测细胞中蛋白激酶B(Akt)和eNOS的磷酸化水平以及总的Akt和eNOS表达水平.结果 D4受体在糖尿病大鼠胸主动脉内皮组织和HUVEC的表达下降(均P＜0.05).高糖条件下,HUVEC的细胞活力下降(P＜0.05);与高糖组比较,加入PD168077后HUVEC的细胞活力增加(P＜0.05).在LY294002和l-NAME的作用下,HUVEC的细胞活力下降(P＜0.05);同时,p-Akt[高糖+LY294002+ PD168077组(0.59±0.09),高糖+l-NAME+ PD168077组(0.62±0.07),高糖+PD168077组(1.44±0.07),P＜0.05]和p-eNOS[高糖+LY294002+ PD168077组(0.62±0.05),高糖+l-NAME+PD168077组(0.66土0.08),高糖+PD168077组(1.44±0.08),P＜0.05]的蛋白表达水平也降低.结论 多巴胺D4受体可以改善高糖诱导的HUVEC的损伤,该作用可能与PI3K/Akt/eNOS信号通路相关.
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不同降压药和他汀类药物对波动高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡及增殖的影响
目的 探讨不同降压药物和他汀类药物对波动高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及凋亡的影响.方法 以体外培养的HUVEC为研究对象,分为以下几种处理:①不做任何处理(正常对照);②以5.5/30.5 mmol/L波动高糖干预细胞,每24 h交替更换一次(波动高糖);③分别以3种浓度(0.2、1.0、5.0 μmol/L)的硝苯地平、缬沙坦、氟伐他汀、卡托普利先与细胞孵育1h后再加入波动高糖(5.5/30.5 mmol/L)培养基,分别于干预后48、72、120和168 h采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率和AnnexinV-PI染色流式细胞仪法检测细胞早期凋亡率(波动高糖+药物).结果 早期凋亡率结果显示,除波动高糖+氟伐他汀[(22.6±11.2)％]外,波动高糖+硝苯地平[(7.5±3.9)％]、波动高糖+缬沙坦[(8.0±3.1)％]、波动高糖+卡托普利[(6.4±3.9)％]早期凋亡率低于波动高糖组[(13.1±5.9)％](均P＜0.01);在波动高糖+氟伐他汀组中,随着药物剂量的加大,细胞早期凋亡率逐渐增大,其中大剂量组(5 μmol/L)明显高于波动高糖组(P＜0.01).细胞存活率结果显示,除波动高糖+大剂量氟伐他汀组(0.38±0.25)外,波动高糖+硝苯地平(2.06±0.91)、波动高糖+缬沙坦(1.97±0.89)、波动高糖+卡托普利(1.56±0.72)、波动高糖+0.2 μmol/L氟伐他汀(1.60±0.58)、波动高糖+1μmol/L氟伐他汀(1.49±0.70)组细胞存活率高于波动高糖组(1.00±0.35,均P＜0.01).细胞凋亡率与存活率多因素析因分析显示,干预方式与药物剂量、干预方式与干预时间之间存在交互作用(均P＜0.01).结论 硝苯地平、卡托普利和缬沙坦3种药物可有效抑制波动高糖诱导的HUVEC凋亡并改善其增殖;大剂量氟伐他汀则促进其凋亡并抑制其增殖.
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血管紧张素转换酶和糜酶抑制剂对人脐静脉内皮细胞产生血管紧张素Ⅱ的影响
目的探讨血管紧张素转换酶和糜酶抑制剂对人脐静脉内皮细胞产生血管紧张素Ⅱ的影响.方法培养的人脐静脉内皮细胞培养液中加入不同浓度开搏通和/或糜酶抑制剂孵育24小时,取上清液用放免法测定血管紧张素Ⅱ浓度.结果 10-2 μmol/L Ang Ⅰ使内皮细胞产生Ang Ⅰ明显增加,约为对照组的11.5倍.100、1000 μmol/L开搏通使Ang Ⅱ的生成分别降低了11.15%和17.06%.100、1000 μmol/L 糜酶抑制剂使Ang Ⅱ的生成分别降低了60.23%和68.48%.1 μmol/L 抑肽酶使Ang Ⅱ的生成降低了13.96%.氯沙坦使培养液中Ang Ⅱ浓度略有升高.开搏通+糜酶抑制剂使HUVEC产生Ang Ⅱ减少85.81%,开搏通+抑肽酶抑制29.57% Ang Ⅱ的生成,开搏通+糜酶抑制剂+抑肽酶几乎完全抑制HUVEC将Ang Ⅰ转变成Ang Ⅱ,与Ang Ⅰ组相比降低97.71%.结论人脐静脉内皮细胞存在ACE和非ACE途径Ang Ⅱ生成,非ACE途径是主要的,影响非ACE途径血管紧张素Ⅱ生成的酶主要是糜酶抑制剂.
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人谷氧还蛋白基因的分子克隆及表达
目的:克隆人脐静脉内皮细胞谷氧还蛋白(glutaredoxin,Grx)编码区的cDNA序列并进行序列测定,构建原核表达载体并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.方法:从人脐静脉内皮细胞中提取总RNA,采用RT-pCR技术,获得该基因编码区的cDNA,并重组入原核克隆表达载体pRSETA,构建重组质粒pRSET-Grx,通过菌落PCR筛选及限制性内切酶鉴定,选择阳性克隆并测序.将测序正确的重组质粒pRSET-Grx 转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达.结果:将所得序列与GenBank提供的序列(NM002064)比较,测出的序列在核苷酸序列上有一处碱基不同,但在氨基酸序列上与已知序列一致.经IPTG诱导4-5 h后,150 g/LSDS-PAGE分析,表达出Mr16000的蛋白.结论:从人脐静脉内皮细胞中成功地获得Grx编码区的cDNA,成功构建了原核融合表达载体pRSET-Grx并获得表达.
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半枝莲黄酮类化合物对体外肿瘤血管生成的影响
目的:探讨中药半枝莲黄酮类化合物A06对体外肿瘤血管生成的影响.方法:分别采用小管形成实验、Transwell小室、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、硝酸还原酶法检测半枝莲黄酮类化合物A06对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)小管形成、迁移及人宫颈癌Hela细胞血管内皮细胞生长因子(VEGF)、一氧化氮(NO)表达的影响.结果:与对照组相比,半枝莲黄酮类化合物A06(50和100 mg/L)都能有效抑制HUVEC细胞的迁移(37.7%±10.7%,13.7%±6.0% vs 68.0%±8.2%,均P＜0.01),减少小管样结构形成(9.7%±4.5%,1.8%±1.2% vs 30.2%±5.4%,均P＜0.05),以及降低24 h后Hela细胞VEGF和NO的表达(VEGF:135.6±14.6 ng/L,108.3±7.7 ng/L vs 231.1±6.4 ng/L,均P＜0.01;NO:42.3±2.3μmol/L,25.9±5.2 μmol/L vs 70.1±8.1 μmol/L,均P＜0.01).结论:半枝莲黄酮类化合物A06有抑制体外肿瘤血管生成的作用,可能与抑制肿瘤细胞血管生成相关因子的表达,抑制内皮细胞迁移、形成管样结构有关.
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三氧化二砷对肝癌诱导血管内皮细胞相关基因蛋白表达的影响
目的:研究三氧化二砷(As2O3)注射液对肝癌诱导血管内皮细胞相关基因蛋白表达的影响.方法:构建了人肝癌SMMC-7721细胞株诱导人脐静脉内皮细胞ECV304增殖的实验模型,应用免疫组织化学方法,严密观察了As2O3注射液对SMMC-7721细胞、ECV304细胞及SMMC-7721细胞条件培养液培养的ECV304细胞,有关基因蛋白表达的影响.结果:2 mg/L的As2O3注射液,对SMMC-7721细胞、ECV304细胞及SMMC-7721细胞条件培养液培养的ECV304细胞表达肿瘤相关基因蛋白,均有一定的调节作用;可下调VFGF、整合素β1和EGFR的表达;上调E-钙粘连蛋白的表达.结论:As2O3注射液抗原发性肝癌及防治肝癌复发和转移的作用机制,可能与其能调节肝癌细胞及血管内皮细胞VEGF、整合素β1、E-钙粘连蛋白和EGFR等基因蛋白的表达,干预细胞的信号转导,抑制肿瘤血管形成有关.
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激酶非催化的C-叶域蛋白质1对人脐静脉内皮细胞衰老作用的影响及机制
目的:探讨激酶非催化的C-叶域蛋白质1(KNDC1)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)衰老作用的分子机制.方法:体外分离培养HUVEC,选择第6代HUVEC转染KNDC1腺病毒为实验组,另设空白对照组与阴性对照组.显微镜下观察细胞形态变化,通过qPCR检测内皮细胞的KNDC1的mR-NA的表达,用β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况,Western blot检测衰老相关蛋白,分光光度法检测内皮细胞抗氧化酶活性.结果:第6代的HUVEC呈现出有别于前期传代细胞的衰老特征,细胞变得扁平,体积增大,增殖能力降低;实验组KNDC1的mRNA水平较对照组增高(239％ ～ 344％,P＜0.05)及蛋白质表达也显著增高(249％ ～441％,P＜0.05),实验组HUVEC的SA-β-gal染色阳性率显著上升(P＜0.01),与KNDC1腺病毒转染剂量呈剂量依赖性.实验组磷酸化p53较对照组增加[(244.3±19.5)vs.(113.5±9.0),P＜0.05]及抗氧化酶SOD及GPX含量(0.84±0.079);(0.82±0.062)较对照组下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:KNDC1过度表达可能通过启动p53信号通路增加ROS表达,进而加速细胞衰老的进程.
关键词： 激酶非催化的C-叶域蛋白质1 人脐静脉内皮细胞 衰老 分子机制 -
烟草提取物对人脐静脉内皮细胞影响的研究
目的:观察香烟提取物(CES)对人脐静脉内皮细胞的影响,并初步探讨吸烟导致动脉粥样硬化的可能机制.方法:采用浓度分别为2.5％、5％、10％、20％和40％的CSE以相同的时间24h处理人脐静脉内皮细胞,另用同一浓度10％ CSE分别处理人脐静脉内皮细胞6,12,24和48 h,用MT方法分析浓度及时间梯度CES处理后细胞的抑制率.采用未加CES处理的人脐静脉内皮细胞作为对照组,ELISA方法检测VCAM-1、ICAM-I、TNF-α及IL-6等细胞因子的水平;Westem blot方法检测人脐静脉内皮细胞自噬基因蛋白的表达水平.结果:MTT检测显示CSE以浓度梯度和时间梯度的方式降低HUVEC的细胞活性;ELISA检测结果表明CES增加VCAM-1、ICAM-1、TNFα及IL-6等黏附因子和炎症因子水平;Western blot结果表明10％ CSE处理人脐静脉内皮细胞会降低抑制凋亡基因Bcl-2蛋白的表达水平,增加促凋亡基因Bax及促进细胞自噬的基因Beclin1的蛋白表达水平.结论:研究结果显示CES可能通过提高细胞黏附因子和炎症因子水平,促进HUVEC的凋亡和自噬,从而对内皮细胞及血管内皮产生影响.
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慢性间歇性缺氧激活内质网应激PERK-eIF2α-ATF4通路损伤HUVECs胰岛素信号转导
目的:探讨慢性间歇性缺氧(CIH)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)胰岛素转导通路的影响,并观察内质网应激在其中的作用.方法:建立CIH的HUVECs细胞模型,采用Western Blot方法在HUVECs中观察CIH对基础和胰岛素刺激(100μmol)后内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平的影响;观察CIH对HUVECs内质网应激关键蛋白表达水平的影响;应用内质网应激抑制剂牛磺熊去氧胆酸(TUDCA,100 μM)预孵育,检测CIH状态下HUVECs胰岛素信号转导通路变化.结果:与常氧组相比,CIH可显著升高基础状态下HUVECs中AKT的和eNOS的磷酸化水平(P＜0.05).给予100nmol/L胰岛素刺激后,常氧组HUVECs中AKT和eNOS的磷酸化水平与胰岛素未刺激组相比显著升高(均P＜0.05);CIH干预48h和72h后,胰岛素刺激后HUVECs中AKT和eNOS磷酸化水平与基础状态无明显变化.与常氧组相比,CIH可时间依赖性升高HUVECs中蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、真核起始因子2α(eIF2α)的磷酸化水平以及活化转录因子4(ATF4)的蛋白表达水平(均P＜0.05).TUDCA预孵育可逆转上述CIH诱导的HUVECs胰岛素信号转导损伤.结论:CIH激活内质网应激PERK-eIF2α-ATF4通路,进而损伤HUVECs的AKT-eNOS胰岛素信号转导通路.
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体外冠状动脉痉挛微环境模型的构建
目的 通过体外损伤人脐静脉内皮细胞(HUVECs)构建冠状动脉痉挛微环境,为冠状动脉痉挛在内皮细胞水平的研究提供新方法.方法 培养HUVECs,采用分别用不同浓度(0、25、50、75、l00μg/mL)脂多糖(LPS)体外诱导HUVECs损伤,建立细胞损伤模型,Cellcounting kit-8(CCK8)法检测细胞活力,超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒检测超氧化物歧化酶抑制率.采用乙酰胆碱(Ach)刺激细胞构建冠脉痉挛微环境模型,倒置荧光显微镜检测细胞内钙离子水平([Ca2]i)的变化评价模型的模拟.结果 LPS作用24小时诱导内皮损伤呈剂量依赖性,LPS浓度在75μg/mL时HUVECs与其他浓度相比细胞存活率明显降低(P＜0.05),并且SOD抑制率下降,间接反映内皮细胞损伤模型构建成功.Ach刺激未受损伤的HUVECs,[Ca2+]i明显增加,而Ach刺激LPS损伤的HUVECs,[Ca2+]i水平变化不显著,说明冠脉痉挛微环境模拟成功.结论 Ach刺激未受损伤细胞时,细胞内钙离子明显增加,而Ach刺激受损伤的细胞时,细胞内钙离子变化不明显.本模型为冠脉痉挛在内皮细胞水平的研究提供了新思路.
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MiR-34a对人脐静脉内皮细胞端粒酶活性的影响
目的 研究miR-34a对脐静脉内皮细胞端粒酶活性及细胞衰老的影响.方法 原代培养人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),通过传代培养,计算细胞群体倍增水平(Population doublings,PDL),得到年轻的内皮细胞(PDL8)及衰老细胞模型(PDL44),检测两组细胞SIRT1、hTERT、c-myc、p53及miR-34a表达水平的差异.并在PDL8细胞中过表达miR-34a,PDL44细胞中抑制miR-34a的表达,qPCR检测以上基因表达水平、TRAP-qPCR法检测端粒酶活性、SA-β-gal法显示细胞衰老状态的变化.结果 SIRT1、hTERT、c-myc基因在PDL44的HUVECs细胞中表达下调,p53及miR-34a表达上调.PDL8 HUVECs过表达miR-34a 48h后,SIRT1和hTERT表达分别下调43％和25％,TRAP-qPCR显示端粒酶活性降低21％,SA-β-gal法染色阳性细胞百分比由5.1％上升至8.7％;PDL44 HUVECs抑制miR-34a的表达,SIRT1和hTERT表达水平分别上调63％和30％,端粒酶活性上升20％,SA-p-gal法染色显示衰老细胞数量未见显著性变化.结论 MiR-34a可以抑制内皮细胞SIRT1、hTERT基因表达及端粒酶活性,加速细胞衰老;抑制miR-34a可以上调SIRT1及hTERT表达,端粒酶活性升高;因此miR-34a可能通过抑制SIRT1表达和端粒酶活性的共同作用,参与内皮细胞衰老的调节.
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长链非编码RNA ASO3973调控内皮细胞IL-6和ICAM-1的基因表达
目的 本研究探索冠心病差异表达长链非编码RNA ASO3973在人脐静脉内皮细胞中对白细胞介素-6(IL-6)和细胞间黏附分子(ICAM-1)的表达调控作用.方法 应用敲低和过表达ASO3973的策略,利用real-time PCR技术检测炎症因子和黏附分子的mRNA表达水平;利用Western Blot和ELISA检测IL-6、ICAM-1的蛋白表达水平;利用免疫荧光流式细胞术检测细胞膜表面ICAM-1的表达.结果 敲低ASO3973导致炎症因子(IL-6、IL-8、IL-1 β)和黏附分子(ICAM-1、VCAM-1)的mRNA水平显著降低(P＜0.05),细胞上清液中的IL-6分泌量显著降低(P＜0.05),细胞总蛋白中IL-6和ICAM-1的蛋白表达水平显著降低(P＜0.05),细胞膜表面ICAM-1的表达显著降低(P＜0.01);过表达ASO3973导致IL-6、ICAM-1、VCAM-1的mRNA表达水平显著升高(P＜0.05),细胞上清液中的IL-6的分泌量显著升高(P＜0.05),细胞膜表面ICAM-1的表达显著升高(P＜0.01).结论 LncRNA ASO3973显著调控内皮细胞IL-6、ICAM-1的基因表达水平.提示ASO3973可能通过调控内皮细胞炎症因子和粘附分子的表达,影响血管内皮细胞功能,参与动脉粥样硬化的发生.
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生长激素释放肽通过激活哺乳动物雷帕霉素靶蛋白／p70S6K 通路促进人脐静脉内皮细胞增殖的观察
目的：探讨促生长激素释放肽（Ghrelin）促进人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖的分子机制。方法将 HUVEC分为正常对照（Con）组、Ghr组、D‐Lys‐3‐GHRP组、Ghr＋D‐Lys‐3‐GHRP组、雷帕霉素（Rapa）组及Ghr＋Rapa组，采用MTT法检测细胞增殖能力，Western blot检测HUVEC中Gh‐relin受体（GHSR1a）的表达及哺乳类雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、p70S6K和S6的磷酸化水平。结果与Con组相比，MTT检测显示Ghr组细胞增殖增强，且高于Ghr＋D‐Lys‐3‐GHRP组和Ghr＋ Rapa组；Western blot检测显示，与Con组比较，mTOR、p70S6K和S6在Ghr组快速磷酸化，Ghr＋D‐Lys‐3‐GH‐RP组mTOR、P70S6K和S6磷酸化水平低于Ghr组。结论 Ghrelin与其受体GHSR1a结合后，活化mTOR／p70S6K信号通路，促进HUVEC增殖。
关键词： 促生长激素释放肽 人脐静脉内皮细胞 哺乳类雷帕霉素靶蛋白 增殖 -
大黄酸对肿瘤坏死因子-α诱导的脐静脉内皮细胞黏附作用影响的观察
目的 观察不同剂量的大黄酸(Rhein)对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)黏附作用的影响. 方法 将HUVECs分为单纯HUVECs组、单纯TNF-α 40 ng/ml(TNF-α)组、Rhein100 μg/ml+TNF-α 40 ng/ml(Rhein100)组、Rhein 50 μg/ml+TNF-α 40 ng/ml(Rhein50)组、Rhein 10 μg/ml+TNF-α 40 ng/ml (Rhein10)组.采用Western blot和RT-PCR检测HUVECs细胞间黏附因子-1(ICAM-1)的蛋白和mRNA的水平.采用人单核细胞株(THP-1)和HUVECs的黏附性实验检测内皮细胞的黏附功能. 结果 与TNF-α组比较,Rhein100、Rhein50、Rhein10组ICAM-1蛋白相对表达量下降[(2.88±0.04)vs(1.27±0.32),(1.28±0.17),(1.32±0.25),P＜0.05或P＜ 0.01];Rhein100和Rhein50组ICAM-1 mRNA的水平下降[(2.12±0.24)vs(1.19±0.17),(1.26±0.23),P＜0.05或P＜0.01];在黏附性实验中,Rhein100组HUVECs所黏附的单核细胞数目下降[(1.28±0.07)vs(1.07±0.14),P＜0.01]. 结论 Rhein能抑制TNF-α所诱导的HUVECs的ICAM-1的过度表达,可能是Rhein对HUVECs的保护机制之一.
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miR-328对高糖诱导人脐静脉内皮细胞间质转化调控作用的研究
目的 探讨miR-328对高糖诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)间质转化的调控作用.方法 构建miR-328和antagomiR-328慢病毒,培养HUVECs分为正常对照组(NC)、甘露醇对照组(M T)、高浓度葡萄糖组(HG),miR-328、miR-328阴性组、高浓度葡萄糖+antagomiR-328组、高浓度葡萄糖+antagomiR-328阴性组共7组.免疫荧光鉴定HUVECs间质转化;qRT-PCR检测miR-328;Western blot检测Ⅰ 、Ⅲ型胶原蛋白.结果 高糖处理HUVECs呈CD31、α-SMA双阳性;HG组较NC组miR-328表达增高[(2.800±0.175)vs 1,P<0.05];HG组及miR-328组Ⅰ 、Ⅲ型胶原蛋白较NC组表达增加[(0.414±0.014)v s(0.403±0.016)v s(0.175±0.025),(0.501±0.014)v s(0.474±0.016)v s(0.185±0.014),P<0.05];antagomiR-328组Ⅰ 、Ⅲ型胶原蛋白较HG组表达减少[(0.227±0.012)vs(0.414±0.014),(0.222±0.015)vs(0.501±0.014),P<0.05].结论 高糖诱导HUVECs间质转化,miR-328表达增加;过表达miR-328诱导HUVECs间质转化,并具有相应分泌功能,而过表达antagomiR-328可抑制这一现象.
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利拉鲁肽对人脐静脉内皮细胞一氧化氮合酶及胰岛素受体底物-1表达的影响
目的：探讨胰升血糖素样肽‐1（GLP‐1）类似物利拉鲁肽对体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）胰岛素受体底物‐1（IRS‐1）、一氧化氮合酶（eNOS）和磷酸化eNOS（p‐eNOS）表达的影响。方法以含有5.5 mmol／L葡萄糖的DMEM培养基体外培养 HUVECs ，将上述细胞分为10组，各组中均加入3 nmol／L的利拉鲁肽注射液干预，分别于第0、10、15、30、45、60、90、120、150、180 min提取细胞，以Western blot检测各组细胞IRS‐1、eNOS及p‐eNOS表达情况。结果利拉鲁肽干预HUVECs不同时间后，各组细胞表达IRS‐1和p‐eNOS有所不同，0、10、15 min细胞p‐eNOS表达比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。从第30 min开始，p‐eNOS表达逐渐增加，至第150 min达峰，随之p‐eNOS表达量开始下降（P＜0.05）；IRS‐1表达趋势与p‐eNOS相似，也具有利拉鲁肽时间依赖性，且作用高峰亦为150 min（P＜0.05）；而各时间点eNOS表达比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 GLP‐1类似物利拉鲁肽呈时间依赖性的促进正糖培养的 HUVECs IRS‐1及 p‐eNOS 的表达，其作用高峰为第150 min ，而对eNOS的表达未观察到促进作用。
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软脂酸对人脐静脉内皮细胞凋亡影响及其机制的研究
目的 探讨软脂酸(PA)对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及其可能机制.方法 (1)将人脐静脉内皮细胞分为:①正常对照(NC)组；②PA组(浓度分别为0.2、0.4、0.8 mmol/L),培养24 h,采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术及Hoechst 33258核染色检测各组细胞凋亡情况.(2)人脐静脉内皮细胞分为:①NC组；②PA组(0.4 mmol/L)；③PA+雷帕霉素(PA+ Rapamycin)组.采用Western blot法分析各组马铃薯球蛋白(Tuberin)、P-Tuberin、核糖体蛋白S6激酶(S6K)、P-S6K、Bcl-2、Bax,以及Caspase3蛋白表达水平.结果 经MTT检测显示,与NC组比较,PA组细胞增殖(OD值)下降(P＜0.05),且呈剂量依赖性.经Western blot分析显示,与NC组比较,PA组细胞凋亡率增加(P＜0.05),且呈剂量依赖性.与NC组比较,PA组P-Tuberin、P-Tuberin/Tuberin、S6K、P-S6K/S6K、Bax、Caspase3表达水平增高,Bcl-2表达降低(P＜0.05)；PA+ Rapamycin组S6K、P-S6K/S6K、Bax、Caspase3 表达水平低于PA组,Bcl-2表达高于PA组(P＜0.05).结论 PA能够诱导人脐静脉内皮细胞凋亡,其机制可能是通过上调tuberin/mTOR活性,而降低Bcl-2表达、增加Bax及Caspase3表达,终导致血管内皮细胞凋亡.
关键词： 软脂酸 人脐静脉内皮细胞 凋亡 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物 -
胰岛素对高糖状态下血管内皮细胞凋亡、eNOS、bcl-xL、bax表达的影响
高浓度葡萄糖使人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡增加,bcl-xL和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达减少;加入生理浓度或高浓度Ins后,HUVEC凋亡显著减少,bcl-xL、bax和eNOS表达增加;HUVEC凋亡与eNOS、bcl-xL、bax表达均呈负相关(r=-0.85,r=-0.81).表明胰岛素可以抑制高糖引起的HUVEC凋亡,该作用可能与bcl-xL、bax和eNOS表达增加有关.
