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非洛地平对氧化损伤的人脐静脉内皮细胞的保护作用
目的 研究非洛地平(felodipine)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)活性氧(ROS)及细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)mRNA表达的影响,探讨其独立于降血压外的抗动脉粥样硬化的作用机制.方法 筛选ox-LDL与HUVECs细胞孵育适的干预浓度梯度与时间,然后与不同浓度的非洛地平(0.1、1、10μmol/L)共同孵育24h,流式细胞仪测定细胞内ROS,real time-PCR检测细胞ICAM-1、VCAM-1mRNA的表达.结果 ox-LDL对HUVECs内ROS的产生呈浓度依赖效应,随着刺激浓度的升高,ROS产生增多,25mg/L ox-LDL作用为显著(P<0.01),非洛地平可抑制ox-LDL诱导的HUVECs ROS(P<0.05)的产生;随ox-LDL刺激浓度的增加,ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达逐渐上调,当浓度达到25mg/L时,作用为显著(P<0.05),非洛地平可下调ICAM-1、VCAM-1 mRNA的表达(P<0.05).结论 非洛地平可抑制ox-LDL诱导的HUVECs ROS的产生以及下调ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达,发挥抗氧化抗炎的内皮保护功能.
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ADSCs 与 HUVECs 体外共培养促进HUVECs 增殖及成血管化作用
目的：为制备血管化胰岛，分离、培养脂肪来源干细胞（adipose derived stem cells ，ADSCs ），观察细胞共培养条件下，ADSCs对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell ，HUVECs）增殖及成血管化功能的促进作用并探讨其机制。方法采用胶原酶消化法分别原代培养获得ADSCs与HUVECs ，细胞形态学、免疫荧光或多向诱导分化鉴定，建立 HUVECs与ADSCs接触式及间接共培养体系，设立 HUVECs单独培养为对照组，比较两组成血管化功能、HUVECs增殖状况及上清液血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor ，VEGF）、碱性成纤维生长因子（basic fibroblast growth factor ，b‐FGF）浓度。结果通过原代培养成功获得ADSCs与 HUVECs ；第3代AD‐SCs呈均一的长梭形纤维细胞样形态，免疫荧光检测见CD44／CD49d（＋）、CD31／CD34（－），并具有多向分化功能；第2代 HUVECs免疫荧光检测示vWF／CD31（＋）。于Matrigel内接触式共培养4 h ，ADSCs＋ HUVECs组血管密度高于 HUVECs组；间接共培养时，HUVECs生长曲线于 ADSCs＋ HUVECs 组上移，在对数生长期的第3、4、5天， ADSCs＋ HUVECs组HUVECs计数为（4．52±0．31）×104、（7．18±0．45）×104、（8．23±0．36）×104，大于单独 HU‐VECs组的（2．71±0．25）×104、（4．87±0．26）×104、（6．86±0．33）×104（P＜0．01）；ADSCs＋ HUVECs组 HUVECs群体倍增时间为（1．36±0．23）d ，短于单独 HUVECs组的（1．62±0．31）d。四甲基噻唑蓝（methylthiazol tetraztlium ， MTT）法测定HUVECs的A值培养第1、3、5、7天的ADSCs＋ HUVECs组高于单独 HUVECs组（P＜0．01）。培养第3、7、13天时ADSCs＋ HUVECs组上清液 VEGF、b‐FGF浓度均高于 HUVECs组（P＜0．01）。结论 ADSCs与HUVECs共培养时，ADSCs可能通过分泌或增加 HUVECs分泌VEGF、b‐FGF等细胞因子，进而促进 HUVECs增殖及成血管化。
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替格瑞洛对oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达的影响
目的 探究不同浓度的替格瑞洛对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞在蛋白及RNA水平表达细胞间黏附分子-1的影响.方法 离体培养人脐静脉内皮细胞,平均接种于6孔培养板,待细胞生长至融合状态时取三孔加入ox-LDL(50μg/ml),再分别加入不同浓度的替格瑞洛(0、20、40μmol/L).刺激干预24 h后采用Western Blot法测定ICAM-1的蛋白表达水平.重复实验,采用Real-time PCR法测定ICAM-1的RNA表达水平.结果 ①oxLDL能明显上调ICAM-1的表达;②Western Blot蛋白定量结果显示,oxLDL诱导组ICAM-1的蛋白表达明显高于对应的非诱导组(<0.05);未予替格瑞洛干预组ICAM-1的蛋白表达高于替格瑞洛低浓度组(<0.05);替格瑞洛低浓度组ICAM-1的蛋白表达高于替格瑞洛高浓度组(<0.05);③Real-time PCR结果与Western Blot蛋白定量结果一致.结论 oxLDL能在RNA水平提高ICAM-1表达,替格瑞洛能在RNA水平抑制ICAM-1的表达,并与浓度正相关.
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间歇性高浓度胰岛素促进HUECV304细胞eNOS蛋白的表达
目的以人脐静脉内皮细胞(HUECV304细胞)为研究对象，研究持续性高浓度胰岛素及间歇性高浓度胰岛素对体外培育的内皮细胞内皮型一氧化氮合酶eNOS(Endothelial Nitric Oxide Synsase)蛋白表达的作用，从而进一步研究间歇性高浓度胰岛素血症导致动脉粥样硬化形成中的原因及机制。方法采用体外培育的人脐静脉内皮细胞(HUECV304细胞)为研究对象，研究间歇性高浓度胰岛素对HUECV304细胞eNOS(Endothelial Nitric Oxide Synsase)蛋白表达水平的影响。实验分为4组，即间歇性高浓度胰岛素组(含100 nmol/L胰岛素的条件培养液及含1 nmol/L胰岛素的条件培养液轮换培养)与持续性高浓度胰岛素组(持续含100 nmol/L的胰岛素)，含正常浓度胰岛素组(持续含1nmol/L的胰岛素)、阴性对照组(不含胰岛素)。实验期间每隔8h四组同时更换新鲜条件培养液一次，四组共作用72h。采用Western immunoblot ing方法检测人脐静脉内皮细胞eNOS(Endothelial Nitric Oxide Synsase)蛋白表达。结果人脐静脉内皮细胞经过不同浓度的胰岛素作用72h后，结果显示：含正常浓度胰岛素组内皮细胞的eNOS蛋白的表达水平、间歇性高浓度胰岛素组内皮细胞的eNOS蛋白的表达水平与持续性高浓度胰岛素组内皮细胞的eNOS蛋白的表达水平均不同程度的增加，分别为阴性对照组的1.60倍(<0.001)、3.37倍(<0.001)和2.74倍(<0.001)。其中以间歇性高浓度胰岛素组内皮细胞eNOS蛋白的表达水平上升更加明显，显著高于持续性高浓度胰岛素组内皮细胞的eNOS蛋白的表达水平(<0.001)。结论间歇性高浓度胰岛素相对于持续性高浓度胰岛素能增强人脐静脉内皮细胞(HUECV304细胞)eNOS蛋白的表达。提示间歇性高浓度胰岛素可能通过影响人脐静脉内皮细胞eNOS(Endothelial Nitric Oxide Synsase)蛋白的表达而影响血管内皮细胞的功能，从而进一步促进糖尿病慢性血管并发症的产生并发展。
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替格瑞洛对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞vWF表达的影响
目的探讨不同浓度的替格瑞洛(Tigeralor)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cel s，HUVECs)血管性假血友病因子(vWF)表达的影响。方法离体培养人脐静脉内皮细胞，以1×10/ml接种于6孔培养板，200ul/孔，待细胞生长到融合状态时取三孔加人ox-LDL (50ug/m1)，处理24h后分别加入不同浓度的替格瑞洛(0、20及40umol/L)再作用24h。然后采用Western Blot法测定vWF的蛋白表达水平。结果 ox-LDL可增加vWF的蛋白表达；替格瑞洛可抑制ox-LDL诱导的HUVECs vWF的蛋白表达，并呈浓度依赖性。
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6-姜烯酮保护过氧化低密度脂蛋白诱发的内皮细胞损伤的实验研究
目的：调查6-姜烯酮保护过氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的分子机制．方法：包括检测细胞凋亡、过氧化细胞损伤、Bcl-2表达、Caspase-3、-8、-9．结果：oxLDL提高了血管内皮细胞上植物血凝素样oxLDL受体1（Lox-1）的表达、导致细胞活性氧簇ROS的水平升高和Caspase-3、-9激活，而Bcl-2表达下降，使用6-姜烯酮可以拮抗上述过程．过表达Lox-1可以中和6-姜烯酮的保护作用，给予6-姜烯酮可以降低oxLDL介导的Caspase-3、9的活性和细胞凋亡，6姜烯酮可以有效保护内皮细胞．结论：6姜烯酮可能是一种天然的抗氧化损伤、抗凋亡药物，可用于治疗动脉粥样硬化。
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5-氮杂-2'-脱氧胞苷对人脐静脉内皮细胞血管生成的影响及机制研究
目的 观察5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管生成的影响,并初步探讨其机制.方法 采用MTT法检测5-Aza-CdR对人脐静脉内皮细胞增殖的影响,利用Transwell小室研究5-Aza-CdR对HUVECs细胞迁移的影响,利用Matrigel胶模拟细胞外基质成分分析5-Aza-CdR对HUVECs细胞管样结构形成的影响,通过Western Blot法检测其对HUVECs细胞血管内皮生长因子受体(VEGFR2)表达的影响.结果 5-Aza-CdR可有效抑制HUVECs细胞增殖,且效果呈剂量、时间依赖性,1μmol/L、5μmol/L和10μmol/L 5-Aza-CdR在24 h时对HUVECs细胞的增殖抑制率分别为(2.5±0.2)%、(12.7±0.2)%和(29.3±0.2)%,差异有显著性(P<0.05);在72 h时对HUVECs细胞的增殖抑制率分别为(12.6±0.7)%、(67.1±0.2)%和(95.8±1.2)%,差异有显著性(P<0.05).与对照组相比,各浓度5-Aza-CdR均对HUVECs的迁移表现出显著的抑制作用.当浓度为1μmol/L、5μmol/L和10μmol/L时,抑制率分别为12.8%、28.6%、59.4%.不同浓度的5-Aza-CdR可明显抑制管样结构形成,1μmol/L、5μmol/L和10μmol/L的5-Aza-CdR对管样结构形成的抑制率分别为19.3%、37.2%和74.6%.用不同浓度的5-Aza-CdR处理HUVECs后,VEGFR2表达的下调呈剂量依赖性.结论 5-Aza-CdR可显著抑制HUVECs细胞增殖、迁移和管样结构形成,其机制可能与下调HUVECs细胞膜表面VEGFR2的表达有关.
关键词： 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 人脐静脉内皮细胞 迁移 管样结构 血管内皮生长因子受体 -
血栓通对血管内皮功能的影响
目的:观察血栓通的成分三七总皂苷(PNS)中单体皂苷:人参皂苷Rg1、三七皂苷R1 等对受损的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用.方法:将不同的三七总皂苷单体皂苷人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1 分别与6～10 mmol/L 的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)共同作用于HUVECs24 小时后,采用硝酸还原酶法和放射免疫法分析技术分别测定HUVECs上清液中一氧化氮(NO)和内皮素(ET-1)含量.结果:AngⅡ组孵育24小时后,内皮细胞与空白对照组比较(P=0.000),NO释放明显减少(P=0.000),ET-1明显增加(P=0.000).三种单体可显著抑制AngⅡ促ET-1 分泌(P＜0.05),促进HUVECs 释放NO(P＜0.05).但三种单体组间比较,对NO及ET-1释放作用无统计学意义(P＜0.05).结论:AngⅡ可直接引起HUVECs 的损伤与功能失调,血栓通三七总皂苷能够抑制血管紧张素Ⅱ引起的体外培养内皮细胞损伤,可保护内皮细胞结构及功能的完整性.
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四种黄芪黄酮类化合物单体对血管内皮细胞功能的保护作用
目的 观察从甘肃陇西产黄芪中提取的黄酮类化合物芒柄花素、毛蕊异黄酮-7-o-β-D-吡喃葡萄糖(CG)、毛蕊异黄酮和2’-OH-3’,4’-二甲氧基异黄烷-7-o-β-D-吡喃葡萄糖(DG)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用.方法 将芒柄花素、CG、毛蕊异黄酮和DG分别与1 μmol/L的AngⅡ共同作用于HUVECs 24 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡,采用硝酸还原酶法和放射免疫分析技术分别测定HUVECs上清液中NO和内皮素-1(ET-1)的含量.结果 孵育24 h后,AngⅡ组内皮细胞凋亡率明显多于空白对照组(P＜0.05),NO释放明显减少(P＜0.05),ET-1明显增加(P＜0.05),芒柄花素、CG、毛蕊异黄酮和DG可显著抑制AngⅡ诱导的内皮细胞凋亡(P＜0.05),同时可以抑制AngⅡ促ET-1分泌(P＜0.05),明显促进HUVECs释放NO(P ＜0.05).4种黄酮类化合物组间比较,对内皮细胞凋亡、NO及ET-1释放作用差别无统计学意义.结论 AngⅡ可直接引起HUVECs的损伤及功能失调,芒柄花素、CG、毛蕊异黄酮和DG可抑制AngⅡ所致的体外培养的HUVECs损伤,对内皮细胞具有保护作用.
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人脂肪间充质干细胞与脐静脉内皮细胞共培养与丝素蛋白支架联合构建组织工程脂肪的体外研究
目的 探讨人脂肪间充质干细胞(hADSCs)与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共培养后,共培养体系与丝素蛋白支架联合构建组织工程脂肪的可行性.方法 从人体正常脂肪组织中提取hADCSs,培养并扩增,行成脂及成骨诱导鉴定hADCSs的多向分化特性;流式细胞术检测hADCSs表面分子CD34、CD44、CD45、CD90,检测HUVEC表面分子CD31及CD34;测定hADCSs与HUVEC增殖曲线,探讨共培养比例;将共培养体系种植于丝素蛋白支架后行电镜扫描;成脂诱导14d后,反转录—聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定成脂基因PPARγ-2的表达.结果 hADSCs可以向脂肪细胞及成骨细胞分化;流式细胞术检测hADSCs结果显示CD34(+)、CD44(+)、CD45(-)、CD90(-),检测HUVEC结果显示CD31(+)、CD34弱阳性;HUVEC增殖速度快于hADSCs,以HUVEC:hADSCs为1∶4比例接种于培养皿培养3d后,细胞融合时两者比例约为1∶1;共培养体系接种于丝素蛋白支架成脂诱导14d后,通过RT-PCR成功测定出PPARγ-2基因的表达.结论 hADSCs与HUVEC共培养,在体外可成功构建出组织工程脂肪.
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甘肃黄芪异黄酮化合物对血管内皮细胞凋亡的影响
目的 观察甘肃黄芪异黄酮化合物对血管内皮细胞凋亡的影响及其可能机制.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),将细胞分为对照组(A组)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)(1μmol/L)组(B组)、AngⅡ(1μmol/L)+毛蕊异黄酮(1μg/mL)组(C组)、AngⅡ(1μmol/L)+2'-OH-3',4'-二甲氧基异黄烷-7-O-β-D-吡喃葡萄糖(1μg/mL)组(D组);荧光显微镜和激光共聚焦显微镜技术观察细胞的形态;Annexin-V/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡率及凋亡相关基因Fas蛋白的表达.结果 B组与A组比较,B组HUVECs凋亡率、Fas蛋白表达率和平均荧光强度增加(P＜0.001),激光共聚焦显微镜可观察到典型的凋亡细胞;C组与B组比较,毛蕊异黄酮抑制了Ang Ⅱ的促HUVECs凋亡作用(P＜0.001),降低了Fas蛋白表达率(P＜0.001);两种黄芪异黄酮单体毛蕊异黄酮和2'-OH-3',4'-二甲氧基异黄烷-7-O-β-D-吡喃葡萄糖的组间比较,HUVECs凋亡率(P=0.195)和Fas蛋白表达率(P=1.000)均无显著性差异.结论 黄芪异黄酮化合物可以抑制AngⅡ所致的体外培养HUVECs的凋亡.
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人参皂苷Rg2抑制同型半胱氨酸诱导内皮细胞凋亡的研究
目的 研究人参皂苷(Rg 2)抑制同型半胱氨酸(Hcy)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的作用及机制.方法 体外培养HUVECs,采用Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率,Realtime PCR检测一氧化氮合酶(eNOS)的mRNA水平,Western Blot检测eNOS的蛋白水平.结果 与对照组和Rg 2处理组相比,Hcy处理组细胞凋亡率明显增加,Rg 2处理后,细胞凋亡率明显减少;与对照组和Rg 2处理组相比,Hcy处理组细胞eNOS mRNA水平表达显著降低(P＜0.05);与Hcy处理组相比,Hcy+ Rg2处理组eNOS mRNA水平表达显著增加(P＜0.05),但仍低于对照组和Rg 2处理组;与对照组和Rg 2处理组相比,Hcy处理组eNOS蛋白水平表达明显降低,与Hcy处理组相比Hcy+ Rg 2处理组eNOS蛋白水平表达增加.结论 人参皂苷Rg 2能够抑制Hcy诱导的HUVECs凋亡,此作用可能与上调血管内皮细胞eNOS水平有关.
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同型半胱氨酸对内皮细胞DNA总甲基化水平的影响
目的 研究同型半胱氨酸(Hcy)对人脐静脉内皮细胞总甲基化水平的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,并经Ⅷ因子法对其进行鉴定,分别用含有0、2、8、32 mmol·L-1 Hcy的RPMI 1640培养液对其作用48 h后,测定基因组总甲基化水平.结果 0、2、8、32 mmol·L-1 Hcy组HUVEC细胞总甲基化水平分别为:(9.25±0.15)％、(8.53±0.49)％、(6.24±0.27)％、(3.79±0.13)％,呈明显的剂量效应关系(P＜0.05).结论 Hcy可下调人脐静脉内皮细胞DNA的总甲基化水平,并可能是Hcy致动脉粥样硬化的重要机制之一.
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FKN浓度对人脐静脉内皮细胞中CX3CR1表达的影响
目的 以不规则趋化因子(Fractalkine,FKN)不同浓度作用于人脐静脉内皮细胞株(EAhy.926),探讨FKN对内皮细胞上趋化因子受体CX3CR1表达的影响.方法 通过MTT法挑选出内皮细胞的FKN佳药物作用浓度;根据Western-blot(WB)方法检测内皮细胞CX3CR1蛋白表达情况,确定FKN的佳作用浓度;在不同时间给予FKN刺激内皮细胞,qRT-PCR检测内皮细胞中CX3CR1 mRNA表达水平;WB方法检测内皮细胞中CX3CR1蛋白表达水平.结果 MTT法筛选出FKN的佳药物作用浓度为25 ng/mL.FKN(25 ng/mL)能明显提高内皮细胞中CX3CR1蛋白表达(P＜0.05);佳作用浓度FKN刺激内皮细胞8h明显增加CX3CR1mRNA的表达量(P＜0.05);同样浓度FKN刺激内皮细胞2h,明显增加CX3CR1蛋白的表达量(P＜0.05),持续刺激内皮细胞24 h,CX3CR1蛋白的表达量高.结论 内皮细胞CX3CR1的表达受FKN影响,从而促进内皮细胞炎症反应,为研究动脉粥样硬化的发病机制提供新的切入点.
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榅桲总黄酮对过氧化氢诱导人脐静脉血管内皮细胞氧化损伤的保护作用研究
目的：研究榅桲总黄酮（TFCOM）对过氧化氢（H2 O2）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）氧化损伤和凋亡的保护作用及机制。方法体外培养 HUVEC，分为正常对照组、H2 O2模型组（10μmol／L）和TFCOM低浓度（10μg／mL）、中浓度（20μg／mL）、高浓度（40μg／mL）干预组。在建立 H2 O2氧化损伤模型的基础上，采用MTT法检测 HUVEC活力，流式细胞仪和 Hochest33258荧光染色法检测细胞凋亡率，观察 HUVEC的周期变化。结果榅桲总黄酮干预组细胞形态介于正常对照组与 H2 O2模型组，并随着药物浓度的增高，细胞形态改善更加明显，与 H2 O2模型组比较，细胞间隙缩小，细胞间连接增加，边界较清楚。TFCOM能对抗 H2 O2诱导引起的细胞凋亡，能促进 HUVEC增殖分化，TFCOM低浓度组变化与 H2 O2模型组比较差异无统计学意义，但中、高浓度组细胞存活率逐渐增高，差异有统计学意义（P ＜0．01）。榅桲总黄酮低、中、高浓度能够促进细胞 DNA 合成，与H2 O2模型组比较差异有统计学意义（P ＜0．01）。正常对照组细胞的早期凋亡率为3．4％，H2 O2模型组细胞的早期凋亡率为19．2％，与正常对照组比较差异有统计学意义（P ＜0．05）；TFCOM低、中、高浓度组的早期凋亡率为16．7％、12．6％、6．1％，与 H2 O2模型组比较差异均有统计学意义（P ＜0．05）。结论 TFCOM可抑制 H2 O2诱导的内皮细胞凋亡，减轻 H2 O2对内皮细胞的损伤作用，可明显降低 H2 O2对血管内皮细胞的氧化损伤。
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人脐静脉内皮细胞原代培养及鉴定
目的：建立一个详细、易于重复的人脐静脉内皮细胞原代培养操作流程。方法采用胶原酶消化法分离人脐静脉内皮细胞；用倒置显微镜观察细胞形态，免疫荧光法检测内皮细胞标志分子，Western blotting检测内皮细胞标志酶———一氧化氮合酶的含量。结果0．2％胶原酶Ⅰ在37℃条件下消化5～13 min可得到高纯度（95％）人脐静脉内皮细胞；在倒置显微镜下，人脐静脉内皮细胞呈典型的鹅卵石样，细胞核明显；Ⅷ因子和CD31的免疫荧光检测呈阳性；Western blotting结果显示，分离到的人脐静脉内皮细胞中有一氧化氮合酶持续合成。结论建立的人脐静脉内皮细胞原代培养和鉴定的操作流程简单易学，且在形态、标志分子和关键性标志酶3个方面提供细胞鉴定的方法和参考数据。
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碱性成纤维细胞生长因子促进人内皮细胞αv整合素及MMP-1表达的研究
创伤修复是体内多种因子和细胞参与的复杂过程,碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)可影响创伤修复的整个过程,深入了解其作用机制有重要意义.笔者通过研究经bFGF刺激后人脐静脉内皮细胞(HUVEC)αv整合素表达及基质金属蛋白酶-1(MMP-1)分泌的情况,从而分析bFGF促进内皮细胞迁移、血管新生的可能机制,为进一步研究bFGF促进创伤修复作用提供依据.
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普纳替尼对人血管内皮细胞功能的影响
目的 观察普纳替尼(Ponatinib)对人血管内皮细胞的增殖、迁移、血管形成及NO合成释放的影响,从细胞水平评价Ponatinib血栓不良反应形成机制.方法 采用CCK-8法、体外划痕法、Matrigel基底膜成管法及NO检测试剂盒分别考察Ponatinib对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的细胞毒作用、迁移能力、血管形成能力及细胞NO释放水平的影响.结果 研究表明Ponatinib对HUVECs细胞半数抑制浓度(IC50)为(0.69±0.05) μmol/L.非毒性剂量的Ponatinib能够不同程度抑制HUVECs细胞的迁移、血管形成及NO的释放(P＜0.05).结论 Ponatinib通过影响人血管内皮细胞增殖、迁移、血管形成等正常功能而造成血管内皮损伤,可能为其诱发血栓的原因之一.
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血管内皮生长因子165基因对真皮替代物血管化影响的实验研究
目的 研究血管内皮生长因子165(VEGF 165)基因对真皮替代物体内管化的影响.方法 采用含体积分数10％ FBS的M199培养基(简称完全培养基)培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC).(1)按随机数字表法将HUVEC分为3组,每组6孔:未转染组,不行转染；空载质粒组,转染pIRES2-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)质粒；VEGF质粒组,转染pIRES2-EGFP-血管内皮生长因子(VEGF)质粒. 转染后24 h,倒置相差荧光显微镜下观察各组细胞中绿包荧光蛋白(GFP)表达情况,流式细胞仪检测各组细胞中GFP的表达率；未转染组行相同检测.以新霉素筛选出空载质粒组和VEGF质粒组稳转细胞进行实验.分别采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法、ELISA法检测3组细胞中VEGF 165 mRNA和蛋白表达以及细胞培养上清液中VEGF 165的蛋白含量. (2)按随机数字表法将48只雄性裸鼠分为4组,毎组12只:生理盐水组,背部两侧(部位下同)埋植经生理盐水培养2 d的真皮替代物；培养基组,埋植经完全培养基培养2 d的真皮替代物；未转染细胞组,埋植经含未转染HUVEC的完全培养基培养2 d的真皮替代物；转染细胞组,埋植经含VEGF质粒稳转HUVEC的完全培养基培养2 d的真皮替代物.埋植术后3、7、14和21 d取出各组真皮替代物,行免疫组织化学染色,观察其上微血管和HUVEC分布,计数术后14 d微血管数量；蛋白质印迹法检测真皮替代物中VEGF 165蛋白表达.各项检测及观察均重复进行3次,数据采用单因素方差分析和LSD法处理.结果 (1)转染后24h,仅在2个转染组细胞中观察到明显绿色荧光.细胞中GFP表达率:未转染组为0,空载质粒组(85 2±3.2)％,VEGF质粒组(93.1±2.4)％.未转染组、空载质粒组、VEGF质粒组细胞中VEGF 165 mRNA相对表达量分别为1、1.05 ±0.09、3.02 ±0.13(F＝5.28,P＜0.05),VEGF165蛋白相对表达量分别为0.78 ±0.16、0.76±0.13、1.92±0.18(F＝7.62,P＜0.05)；细胞上清液中VEGF 165蛋白含量分别为(62.4 ±2.7)、(73.1±3 8)、(117.5 ±3.1)pg/mL(F＝15.08,P＜0.05).VEGF质粒组各项指标水平均显著高于其余2组,P值均小于0.05.(2)术后14 d起转染细胞组真皮替代物中HUVEC明显多于其他3组.术后14 d,各组真皮替代物中每200倍视野中微血管数量:生理盐水组(4.2±1.1)个、培养基组(5.2 ± 1.1)个、未转染细胞组(6.6±0.9)个、转染细胞组(13.8±0.8)个,4组间比较,差异有统计学意义,F＝17.96,P＜0.01;转染细胞组微血管数量明显多于其余3组(P值均小于0.05).真皮替代物上VEGF 165蛋白相对表达量比值:术后7 d起,转染细胞组显著高于生理盐水组(P＜0.05)；术后14、21 d未转染细胞组(1 652±0.086、2.152 ±0.062)与转染细胞组(2.403 ±0.091、2.879±0.047)均显著高于生理盐水组(1.299±0.027、1.362±0.103,P值均小于0.05),且转染细胞组明显高于未转染细胞组(P值均小于0.05).各组真皮替代物中VEGF 165蛋白含量均随术后时间延长而增加. 结论 VEGF 165基因转染使HUVEC持续高表达VEGF 165蛋白,可有效促进真皮替代物体内血管化.
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罗格列酮对高糖环境下人脐静脉内皮细胞作用的研究
目的：研究罗格列酮对高糖环境下人脐静脉内皮细胞促血管生成功能的影响及其机制。方法通过MTT检测法、细胞划痕实验,探讨罗格列酮在高糖环境下对人脐静脉内皮细胞( HUVEC)的增殖与迁移能力的影响,并用ELISA方法检测经罗格列酮作用后高糖培养基上清中VEGF、SDF-1的含量,进行统计分析。结果经罗格列酮药物处理后的HUVEC增殖和迁移能力明显高于高糖组,且培养基中VEGF和SDF-1的含量也有显著升高。 AKT阻断剂可以阻断罗格列酮对HUVEC增殖、迁移和分泌功能的促进作用。结论罗格列酮在高糖环境下可显著促进HUVEC的增殖、迁移和分泌功能,AKT信号通路在这一过程中发挥着重要的作用。
