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桂郁金多糖对H2O2致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及机制
目的:通过体外实验研究不同质量浓度桂郁金多糖对过氧化氢(H2O2)致人脐静脉内皮细胞损伤的的保护作用及机制.方法:对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)进行体外培养,用不同浓度H2O2损伤HUVECs,采用细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK-8),确定H2O2佳损伤浓度为500 μmol·L-1.然后给予不同浓度的桂郁金多糖对损伤的HUVECs进行保护,用CCK-8,确定62.5,125,250 mg·L-作为桂郁金多糖的低、中、高质量浓度组.采用CCK-8法检测桂郁金多糖对H2O2损伤HUVECs细胞活力的影响;采用试剂盒测定乳酸脱氢酶(LDH),超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),丙二醛(MDA);通过酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)的含量表达.采用Hoechst 33258荧光染色法对细胞凋亡情况进行观察;并采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3) mRNA的表达情况.结果:CCK-8检测结果表明,给药时间24 h后,桂郁金多糖在15.625 ～500 mg·L-1,能够促进细胞增殖,而浓度增大后,桂郁金多糖则对细胞有一定的抑制作用.与模型组比较,桂郁金多糖能够使LDH,MDA,IL-6,TNF-α水平明显减少(P ＜0.05,P＜0.01),使SOD和GSH-Px的含量明显增加(P＜0.05,P＜0.01).Hoechst 33258荧光染色结果表明,与空白组比较,模型组HUVECs细胞核呈亮蓝色荧光,细胞质内可见浓染致密的颗粒块状荧光,细胞密度降低;与模型组比较,桂郁金多糖给药组的蓝色荧光强度降低,细胞凋亡典型形态减少.Real-time PCR实验结果显示,与空白组比较,模型组减少Bcl-2 mRNA的表达,增加Bax,Caspase-3 mRNA的表达(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,桂郁金多糖给药组能够增加Bcl-2 mRNA的表达(P ＜0.05,P＜0.01),减少Bax,Caspase-3 mRNA的表达(P＜0.05,P＜0.01).结论:桂郁金多糖通过抗氧化和抑制细胞凋亡等途径对H2O2损伤的人脐静脉内皮细胞进行保护.
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补阳还五汤含药血清对Toll样受体4信号转导通路及氧化低密度脂蛋白受体-1表达的影响
目的:从补阳还五汤含药血清对脂多糖( lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs) Toll样受体4(toll-like receptor4,TLR4)信号转导通路及血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)的影响,研究补阳还五汤防治动脉粥样硬化( atherosclerosis,AS)的机制.方法:含药血清的制备:选择新西兰大耳白兔20只,随机分为正常组、补阳还五汤高、中、低浓度组,每组5只.中药组分别以13.2,6.6,3.3 g·kg-1补阳还五汤ig,正常组以同等量的生理盐水ig,连续ig7 d.在末次ig给药2h后,心脏采血,离心后分离血清,获得3种不同浓度药物血清;体外培养人脐静脉内皮细胞,用脂多糖(LPS)(1 mg·L-1)刺激后,分别加入含10％高、中、低浓度补阳还五汤药物血清干预,24 h后收集细胞,用荧光定量PCR方法测定TLR4,MyD88,TRAF-6,TRAM,TRIF,NF-κB及LOX-1的基因表达,用Western blotting法测定TLR4,MyD88,TRAF-6,LOX-1的蛋白表达.结果:用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,引起TLR4,MyD88,TRAF-6,TRAM,TRIF,NF-κB及LOX-1的高表达(与空白对照组比较P＜0.01),用补阳还五汤含药血清干预后显著抑制TLR4,MyD88,TRAF-6,NF-κB及LOX-1的高表达(与模型组比较P＜0.05),而对TRAM和TRIF与模型组比较无明显抑制作用.结论:补阳还五汤可抑制TLR4和MYD88依赖性信号转导通路及LOX-1的表达,这可能是其治疗各种免疫炎症性疾病及防治动脉粥样硬化作用的机制之一.
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心肌尔康对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的作用
目的:研究心肌尔康(XJEK)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的作用,并探讨相关的作用机制.方法:体外培养HUVECs细胞,随机分为7组,分别为空白组,AngⅡ(1×10-5 mol· L-1)组,AngⅡ(1×10-5 mol·L-1)+心肌尔康不同质量浓度组(0.1,0.2,0.4,0.8,1.6 g·L-1),噻唑蓝(MTT)比色法检测HUVECs的活性;Griess法测定一氧化氮(NO)含量;流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)的水平;钙成像仪测定细胞胞浆内游离钙离子(Ca2-)浓度;比色法及TBA法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达水平.结果:与空白组比较,AngⅡ组内皮细胞活力,NO释放,eNOS蛋白表达及SOD活力明显降低,MDA,ROS含量和内皮细胞胞浆内Ca2浓度明显升高(P＜0.05,P＜0.01);与AngⅡ组比较,心肌尔康可剂量依赖性提高内皮细胞活力,促进NO释放、增加eNOS蛋白的表达;升高SOD活力,抑制MDA,ROS含量和内皮细胞胞浆内Ca2浓度的升高,各指标差异均具有显著性(P ＜0.05,P＜0.01).结论:心肌尔康对AngⅡ诱导的内皮损伤具有明显的保护作用,其可能机制为抑制细胞内Ca2超载和降低氧化应激水平.
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活血益气方及其拆方药物血清对VEGF165转染脐静脉内皮细胞分泌MMP-9,MMP-2的影响
目的:探讨活血益气方及其拆方含药血清对含有血管内皮生长因子(VEGF) 165的重组质粒pcDNA3.1-VEGF165转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌基质金属蛋白酶(MMP)2,9的影响.方法:构建pcDNA3.1-VEGF165重组质粒,采用Fugene HD将质粒瞬时转染至HUVEC中.制备活血益气方及其拆方含药大鼠血清、生理盐水正常血清,以5％药物血清作用于转染后的HUVEC,Western blot法检测VEGF的表达,ELISA法测定MMP-2,MMP-9的表达.结果:(1)活血益气方组VEGF蛋白表达高于生理盐水组,与之比较有统计学差异(P＜0.01).拆方各组则低于活血益气方组,与之比较有统计学差异(P＜0.01).(2)活血益气方组、活血方组MMP-2含量高于生理盐水组,与之比较有统计学差异(P＜0.05,P＜0.01).拆方各组中仅益气方组MMP-2含量低于活血益气方组,与之比较有统计学差异(P＜0.01).(3)活血益气方及其拆方各组MMP-9含量均高于生理盐水组,仅活血益气方组、活血方组与之比较有统计学差异(P<0.01,P＜0.05).拆方各组MMP-9含量均低于活血益气方组,与之比较具有统计学差异(P＜0.01).结论:活血益气方可以促进转染后HUVEC表达VEGF及分泌MMP-2,MMP-9,活血方药在这方面起主要作用.推测其治疗性血管生成作用机制可能与促进内皮细胞分泌MMP,从而促进内皮细胞迁移,提高血管通透性有关.
关键词： 活血益气方 人脐静脉内皮细胞 血管内皮生长因子165质粒 转染 基质金属蛋白酶 -
当归挥发油对人脐静脉内皮细胞增殖作用的谱效关系
目的:探讨不同产地当归挥发油与人脐静脉内皮细胞增殖作用的相关关系.方法:利用水蒸气蒸馏法提取当归挥发油,采用GC-MS联用分析技术建立44批不同产地当归药材挥发油指纹图谱,质谱检索库及保留指数法鉴定各色谱峰所示化学成分,用噻唑蓝染色(MTT)实验考察不同产地当归挥发油对HUVECs细胞的增值率,再通过线性回归分析方法,建立并分析当归挥发油促HUVECs细胞增殖作用的相关关系.结果:通过线性回归分析得色谱峰X1,X2与细胞增殖率呈负相关的关系,其余色谱峰与细胞增殖率均呈正相关的关系,且其中X3,X6,X7号色谱峰回归系数较大,是当归挥发油促HUVECs细胞增殖的主要化学成分.结论:该方法能快速、有效地建立当归挥发油谱效相关关系,可为当归挥发油化学成分药理性质的研究提供参考依据.
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血塞通调节miRNA-146影响内皮细胞凋亡的干预作用
目的:探讨血塞通(XST)对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)凋亡的影响及作用机制.方法:体外培养HUVEC,H2O2作为氧化剂作用于HUVEC制作氧化应激模型.通过血塞通干预,观察H2O2诱导的HUVEC细胞凋亡的变化,从表观遗传学微小RNA(microRNA,miRNA)角度探讨血塞通对HUVEC的保护作用及其作用机制.将体外培养的HUVEC分为空白组,H2O2模型组,H2O2模型+XST(30 mg·L-1,处理24 h)组.通过细胞计数试剂盒-8(CCK8)法检测细胞活力,Annexin V/碘化丙啶(PI)测定细胞凋亡,实时荧光定量核酸扩增检测系统(Real-time PCR detecting system,Real-time PCR)检测miRNA-146和miRNA-199表达水平.结果:HUVEC经过i00 μmol·L-1 H2O2处理之后,细胞晚期凋亡和早期凋亡都有明显升高(P＜0.05).用质量浓度从1 ～ 100 mg·L-1XST HUVEC细胞进行预处理后,发现用10 mg·L-1XST预处理可以明显地改善细胞增殖情况.Annexin V/PI双染细胞凋亡检测发现HUVEC经过100 μmol·L-1H2O2处理之后,细胞PI阳性率R3(晚期凋亡)和Annexin V阳性率R5(早期凋亡)都有明显升高(P＜0.05).H2O2模型经过30 mg·L-1XST处理之后,可以明显降低细胞PI阳性率R3(晚期凋亡)和Annexin V阳性率R5(早期凋亡)(P＜0.05).100 μmol-1·L-1H2O2处理可以明显升高hsa-miR-146b-5p和hsa-miR-199a-5p表达(P＜0.05).与单纯的H2O2处理比较,经过30 mg·L-1的血塞通处理之后,可以明显降低hsa-miR-146b-5p表达(P＜0.05).结论:血塞通可以明显抵抗H2O2诱导的HUVEC细胞氧化损伤,可能是通过抑制hsa-miR-146b-5p的升高发挥保护作用.
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食管癌EC9706细胞启膈散与六君子汤条件培养基对脐静脉内皮细胞的影响
目的:比较研究启膈散与六君子汤对食管癌血管生成的影响.方法:制备药物条件培养基,MTT法检测启膈散和六君子汤条件培养基对人脐静脉内皮细胞(HUVECS)增殖、迁移和小管形成的影响.ELISA法检测HUVECS培养基上清液血管内皮生长因子(VEGF)和白细胞介素-6(IL-6)含量.结果:启膈散和六君子汤可明显抑制肿瘤条件培养基引起的内皮细胞的增殖(P＜0.05);抑制HUVECS小管形成(P＜0.05);六君子汤组HUVECS迁移较肿瘤条件培养基组有抑制作用(P＜0.05).启膈散和六君子汤可明显抑制HUVECS细胞分泌VEGF和IL-6 (P＜0.01),六君子汤组优于启膈散组(P＜0.05).结论:六君子汤和启膈散均可显著抑制内皮细胞增殖、内皮细胞迁移和小管形成,但六君子汤抑制细胞分泌VEGF和IL-6作用更强.
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健脾解毒方对HUVECs细胞增殖、侵袭、转移和管腔形成能力的影响
目的:探讨健脾解毒方对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞增殖、侵袭、转移和管腔形成能力的影响.方法:以伴有或不伴有血管内皮生长因子(VEGF) (4ng/mL)及不同浓度的健脾解毒方作用HUVECs细胞,采用CCK-8检测不同浓度的健脾解毒方对HUVECs细胞增殖的影响;划痕实验检测转移能力;Transwell实验检测侵袭能力;Matrigel实验检测管腔形成能力;Western blot检测血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)蛋白及其磷酸化水平.结果:健脾解毒方能够抑制HUVECs细胞的增殖,对VEGF诱导的HUVECs细胞增殖的抑制作用更为敏感.健脾解毒方能够以剂量依赖性方式抑制VEGF诱导的HUVECs细胞的侵袭、转移和管腔形成能力(P＜0.01).健脾解毒方能够显著下调VEGF诱导的HUVECs细胞VEGFR2蛋白的磷酸化水平(P＜0.01).结论:健脾解毒方抑制HUVECs细胞增殖、侵袭、转移和管腔形成能力的机制可能与其下调VEGFR2蛋白磷酸化水平有关.
关键词： 健脾解毒方 人脐静脉内皮细胞 血管新生 血管内皮生长因子受体2 -
益肺清化颗粒对人脐静脉内皮细胞增殖的影响
目的:研究不同浓度益肺清化颗粒及益肺清化颗粒与吉非替尼联用对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的作用.方法:以不同浓度益肺清化颗粒含药血清及益肺清化颗粒与吉非替尼联用干扰HUVEC.结果:高剂量益肺清化颗粒对HUVEC的增殖有抑制作用(P＜0.05,P＜0.01);10-80μ mol/L剂量的吉非替尼对HUVEC细胞增殖有明显的抑制作用(P＜0.05,P＜0.01),且呈一定的线性量效关系;30、60μmol/L吉非替尼联合益肺清化颗粒高剂量含药血清对HUVEC增殖具有抑制作用.结论:高剂量益肺清化颗粒对HUVEC增殖具有抑制作用,且与吉非替尼在30或60μmol/L剂量联用下,具有明显的增效作用.
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芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞中Ang-2及其受体Tie-2表达的影响
目的:探讨芎芍胶囊对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)促血管生成素-2(Ang-2)及其受体Tie-2的分泌和mRNA表达的影响,以阐明其促进血管新生的可能机制.方法:芎芍胶囊高、中、低剂量含药血清处理HUVEC,倒置相差显微镜观察细胞生长状态；流式细胞术和MTT法观测HUVEC的增殖情况；ELISA法检测HUVEC分泌Ang-2和Tie-2的水平；RT-PCR法检测Ang-2及Tie-2的mRNA表达.结果:芎芍胶囊高、中、低剂量含药血清均有促进HUVEC增殖和Ang-2及Tie-20表达,以及增加S期细胞比例作用.结论:芎芍胶囊含药血清能促进HUVEC的增殖及Ang-2、Tie-2的表达,可能是其促进血管新生的机制之一.
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熊胆粉对人脐静脉内皮细胞增殖与迁移作用的实验研究
目的:确定熊胆粉(BBP)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及迁移能力的影响.方法:MTT法检测BBP干预下HUVEC增殖活力的影响;划痕实验分析BBP对HUVEC迁移能力的影响.结果:BBP干预24h后,HUVEC的增殖活力受到抑制,尤其到72h时,各药物浓度下HUVEC增殖活力受到显著抑制(P＜0.05,P＜0.01),以药物浓度0.3、0.6、0.9mg/mL分别干预24、48、72h后,表现出时间与药物浓度依赖的特征,HUVEC的迁移能力也受到明显抑制.结论:BBP对HUVEC的增殖与迁移能力有显著的抑制作用,表现出潜在的抑制血管生成的活性.
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山核桃叶黄酮抑制TNF-α诱导的HUVECs与THP-1的黏附作用
目的:研究从山核桃叶中提取分离出来的黄酮单体2’,6’-二羟基-4’-甲氧基查耳酮对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)与人单核细胞白血病细胞(THP-1)的黏附作用.方法:采用荧光标记检测经肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激的HUVECs及THP-1之间黏附作用;采用荧光定量PCR及流式细胞技术,检测2’,6’-二羟基-4'-甲氧基查耳酮对HUVECs表面细胞黏附分子(VCAM-1)和细胞间黏附分子(ICAM-1)表达的影响.结果:2’,6'-二羟基-4’-甲氧基查耳酮能够明显减少TNF-α诱导的HUVECs与THP-1之间的黏附数量;能够抑制HUVECs表面黏附分子VCAM-1和ICAM-1的表达.结论:2’,6’-二羟基-4’-甲氧基查耳酮能够明显抑制TNF-α诱导的HUVECs与THP-1之间的黏附作用.降低HUVECs表面黏附因子VCAM-1、ICAM-1的表达可能是其抑制黏附作用的机制之一.
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芍药苷对模拟缺血再灌注后人脐静脉内皮细胞胆碱能抗炎通路及相关因子的影响
目的:研究芍药苷预处理在模拟缺血再灌注损伤条件下对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞间黏附分子(ICAM-1)、血管细胞间黏附分子(VCAM-1)蛋白和p-p38 MAPK表达的影响,探寻其对缺血再灌注损伤保护性作用的发生机制.方法:采集、培养原代HUVECs并分为5组,即正常对照组,模型组,芍药苷低、中、高剂量组(0.078、0.156、0.312mg/mL芍药苷预处理);以ELISA法及Western blot法检测不同浓度芍药苷预处理对ICAM-1、VCAM-1和p-p38 MAPK表达水平的影响.结果:正常培养的HUVECs可以表达ICAM-1、VCAM-1和p-p38MAPK,而模拟缺血再灌注后其表达明显增多,加入芍药苷药液后可有效减少其表达(P＜0.01,P＜0.05).结论:芍药苷预处理可通过抑制ICAM-1、VCAM-1、p-p38 MAPK蛋白表达发挥对缺血再灌注损伤组织的保护性作用.
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祛痰、化瘀和祛痰化瘀方对氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞增殖及凋亡功能的影响
目的:观察祛痰、化瘀和祛痰化瘀方对ox-LDL损伤HUVEC增殖及凋亡功能的影响.方法:建立HUVEC ox-LDL损伤模型,采用MTT检测法、AnnexinV-FITC/P1双染结合流式细胞术和Western blot检测法,观察方药对HUVEC增殖率、凋亡率及与增殖、凋亡相关蛋白VEGFR、P66、P53、Bcl-2、BAX表达的影响.结果:在细胞增殖方面,祛痰化瘀方能增加HUVEC吸光度,祛痰方、祛痰化瘀方可上调HUVEC VEGFR的表达水平,ox-LDL作用下4种方剂均可增加HUVEC吸光度并上调VEGFR表达水平.在细胞凋亡方面,祛痰方、化瘀方和祛痰化瘀方均能降低P66的表达水平;ox-LDL作用下,HUVEC Bcl-2表达降低,BAX、P66表达升高;祛痰化瘀方等4种方剂对早期、晚期及总凋亡率都有极大改善,且均可降低BAX的表达水平;祛痰方组、化瘀方组和祛痰化瘀方可降低P66的表达水平,祛痰化瘀方可提高Bcl-2的表达水平,Ox-LDL及4种方剂均对P53的表达水平无明显影响.结论:祛痰、化瘀和祛痰化瘀方及基础方均可在不同程度上通过促进增殖、抗凋亡达到对抗HUVEC氧化损伤的作用,其中祛痰化瘀方的效果显著.
关键词： 祛痰方、化瘀方和祛痰化瘀方 人脐静脉内皮细胞 氧化低密度脂蛋白 增殖 凋亡 -
益气活血法对缺氧损伤血管内皮细胞保护作用的研究
目的:观察以黄芪注射液和盐酸川芎嗪注射液联合用药为代表的益气活血法对缺氧损伤的血管内皮细胞的保护作用.方法:建立人脐静脉内皮细胞缺氧损伤模型,实验设对照组、模型组、黄芪组、川芎嗪组及联合用药组.采用MTT检测法、AnnexinV-FITC/PI双染结合流式细胞术凋亡检测法和ELISA检测法,观察药物对HUVEC增殖、凋亡和功能(分泌NO和ET)的影响.结果:与模型组比较,黄芪组和川芎嗪组及联合用药组均可不同程度地减轻缺氧对HUVEC的损伤,提高其生存率,降低其凋亡率,促进NO的分泌,抑制ET的分泌,两药联用比单用效果好.结论:益气活血法可通过促进增殖、抗凋亡及改善细胞分泌功能,有效减轻缺氧后血管内皮细胞的损伤.
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双氢青蒿素含药血清抗血管生成活性的研究
目的:研究不同剂量组双氢青蒿素对人脐静脉内皮细胞的增殖、迁移抑制作用和作用机制.方法:制备空白对照组、双氢青蒿素15 mg/kg组、30 mg/kg组和60 mg/kg组4个剂量组合药血清,以贝伐单抗为对照药作用于人脐静脉内皮细胞,噻唑蓝法检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移能力,RT-qPCR法检测细胞VEGF表达,放射配体受体结合分析法检测细胞VEGFR大结合容量和解离常数.结果:相对于空白对照组,双氢青蒿素30 mg/kg组和60 mg/kg组可明显抑制人脐静脉内皮细胞增殖且能降低细胞的迁移能力;RT-qPCR结果显示,这2个剂量组的VEGF表达出现明显降低;VEGFR大结合容量出现明显降低,解离常数明显升高,结果均具有显著性意义.结论:30 mg/kg剂量以上的双氢青蒿素含药血清可显著抑制人脐静脉内皮细胞增殖和迁移,作用机制可能与抑制血管内皮生长因子表达并阻断其与受体的结合相关.
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糖网明目颗粒不同提取部位对缺氧诱导的血管内皮细胞中相关基因表达的影响
目的：探讨糖网明目颗粒不同提取部位对缺氧诱导的人脐静脉内皮细胞EA.hy926中相关基因表达的作用机制。方法以COCl2干预细胞复制缺氧模型,人脐静脉内皮细胞EA.hy926分为空白组、缺氧模型组、全方组、部位1组(苷类和黄酮类)、部位2组(有机酸和多糖类)和部位3组(生物碱类)。采用半定量RT-PCR检测糖网明目颗粒不同提取部位对缺氧诱导细胞中血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体(VEGFR)1、2和细胞间黏附分子(ICAM)-1、白细胞介素(IL)-1α基因表达的变化。结果缺氧导致EA.hy926细胞VEGF、VEGFR-1、VEGFR-2、ICAM-1、IL-1α基因表达上调(P＜0.05),VEGFR-1/VEGFR-2比值降低。糖网明目颗粒及其不同提取部位干预细胞后,VEGF、VEGFR-1、VEGFR-2、ICAM-1、IL-1α基因表达降低(P＜0.05), VEGFR-1/VEGFR-2比值升高。结论糖网明目颗粒中苷类和黄酮类、生物碱类及有机酸和多糖类调控缺氧诱导的血管内皮细胞基因表达的作用强度依次减弱。
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通络宁心方对人脐静脉内皮细胞保护作用的实验研究
目的 观察通络宁心方对人脐静脉内皮细胞分泌作用的影响.方法 体外培养人脐带静脉内皮细胞;分别制备通络宁心方煎剂、复方丹参滴丸含药动物血清,随机分为正常组、模型组、治疗组(大、中、小剂量)、对照组(大、中、小剂量)8组.除正常组外,其余7组予H2O2造模,治疗组、对照组分别予大、中、小剂量含药血清,分别检测一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、P-选择素(Ps)指标.结果 模型组NO含量显著低于正常组、治疗及对照大、中、小剂量组;模型组ET-1含量显著高于治疗及对照大、中、小剂量组;模型组Ps含量显著高于正常组,治疗中、小剂量组,对照大、中剂量组,与治疗大剂量、对照小剂量组比较,无显著性差异.结论 通络宁心方对血管内皮细胞分泌作用的影响与复方丹参滴丸有同一性,均能对抗H2O2对血管内皮细胞的损伤.
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当归红芪超滤物对过氧化氢致内皮细胞凋亡中热休克蛋白70及内皮型一氧化氮合酶表达的影响
目的：探讨当归红芪超滤物对过氧化氢(H2O2)致内皮细胞凋亡中热休克蛋白70(HSP70)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响。方法 H2O2诱导 ECV-304人脐静脉内皮细胞凋亡制备模型,实验分为正常对照组、模型组、单纯药物组、药物干预组,并给予相应药物干预,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞内 Ca2+浓度,RT-PCR法检测HSP70、eNOS的基因表达,蛋白印迹法检测HSP70的蛋白表达,硝酸还原酶法及分光光度法检测一氧化氮(NO)的含量。结果与正常对照组比较,模型组细胞凋亡率明显增加、细胞内Ca2+浓度明显上升(P＜0.05),细胞HSP70基因和蛋白表达上调、eNOS基因表达下调及NO含量降低(P＜0.05)；与模型组比较,药物干预组细胞凋亡率、细胞内Ca2+浓度明显降低(P＜0.05),细胞HSP70基因和蛋白表达上调、eNOS基因表达上调及NO含量升高(P＜0.05)。结论当归红芪超滤物通过上调HSP70、eNOS的表达及NO含量,降低细胞内钙超载,发挥抗H2O2致ECV-304人脐静脉内皮细胞凋亡的作用。
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四妙勇安汤对缺氧人脐静脉内皮细胞的影响
目的 观察四妙勇安汤对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧损伤模型的影响.方法 实验分为3组,即正常组、模型组、四妙勇安汤组,后2组建立体外细胞缺氧模型,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验观察四妙勇安汤对缺氧内皮细胞存活率的影响,测定四妙勇安汤对缺氧内皮细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量的影响,并用免疫荧光法检测细胞中血管内皮生长因子(VEGF)生成量的表达.结果 四妙勇安汤能显著增加MTT实验中各孔吸光度值,降低LDH漏出量,增加VEGF的生成量.结论 四妙勇安汤具有保护缺氧的HUVEC损伤的作用,其作用机制与增加细胞活性、降低缺氧造成的细胞毒性、增加VEGF的表达、促进血管新生的作用有关.
