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游离脂肪酸和胰岛素及葡萄糖对脐静脉内皮细胞影响的实验研究
目的研究游离脂肪酸(FFA)、胰岛素(Ins)、葡萄糖(G1u)及其共同作用时对血管内皮细胞(VEC)的影响. 方法用MTT法测定经FFA、Ins、Glu处理后脐静脉内皮细胞的活力,用绿色荧光蛋白标记的膜联蛋白V/碘化丙啶(annexin V-GFP/PI)双染色法检测细胞凋亡或死亡率.结果 (1)生理浓度(100μmol/L)的软脂酸(PA)作用于细胞72 h,与空白对照组(对照组)相比,细胞的存活率降低了(18.7±5.8)%,差异有显著意义(P＜0.05).(2)高浓度的Ins(50 U/L)可使细胞生存率增加(36.8±4.6)%,与对照组相比差异有显著意义(P＜0.05).(3)50 U/LIns+400μmol/LPA组细胞的生存率较400 μmol/L PA组增加(28±3.2)%(P＜0.05).(4)22.2 mmol/lGlu+400 μtmol/LPA组细胞生存率较PA组减少了(21±7.2)%(P＜0.05).(5)22.2 mmol/LGlu +400μmol/LPA+50 U/LIns组生存率较22.2 mmol/LGlu+400 μmol/LPA组增加了(17.6±2.3)%(P＜0.05).(6)Glu致VEC的损伤以引起细胞凋亡为主,而FFA以引起细胞非凋亡性的死亡为主. 结论 PA对血管VEC的毒性作用远远大于Glu,Ins本身对血管VEC有保护作用,Glu 可加重PA对VEC的毒性作用.
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高浓度葡萄糖对人脐静脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶活性及其蛋白表达的影响
不同浓度葡萄糖及高浓度葡萄糖(高糖)加胰岛素孵育人脐静脉内皮细胞(HUVECs)不同时间后,高浓度葡萄糖呈浓度和时间依赖性明显抑制内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性,生理浓度的胰岛素可部分地逆转高糖对eNOS活性及其表达的抑制作用.
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牙龈卟啉单胞菌—脂多糖对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响
目的:观察牙龈卟啉单胞菌-脂多糖(P.g-LPS)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和凋亡的影响.方法:在体外将P.g-LPS与HUVEC共培养,根据P.g-LPS浓度分为空白对照组、50 pg/ ml组、100 pg/ml组、1ng/ml组及10 ng/ml组.培养36 h后采用甲基噻唑基四唑(MTT)法及流式细胞仪分别测定细胞增殖活力及凋亡情况,并通过免疫印迹标记法(Western blot)检测caspase-3激活情况.结果:经P.g-LPS处理后,HUVEC增殖活力较空白对照组明显下降(P＜0.01),且随着P.g-LPS浓度增加,HUVEC增殖活力也逐渐下降(P＜0.01),而细胞发生凋亡及caspase-3激活情况却随之增加.结论:P.g-LPS可抑制内皮细胞增殖活力,caspase-3激活从而诱导内皮细胞产生凋亡.
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阿托伐他汀通过SIRT1/NADPH氧化酶对抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞的氧化损伤作用
目的：探讨阿托伐他汀(atorvastatin, Atv)通过SIRT2沉默信息调节因子家族成员之一的SIRT1/还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶对高糖环境下人脐静脉内皮细胞（HUVECs）氧化损伤的作用。
方法：人脐静脉内皮细胞株低糖（5.6 mmol/L）培养贴壁后随机分为正常组、渗透压对照组、高糖组、高糖+（0.1、1.0、10.0μmol/L）阿托伐他汀组、高糖+SIRT1抑制剂（sirtinol）组及高糖+NOX4抑制剂（apocynin）组，继续培养24 h后应用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）的水平，蛋白免疫印迹法检测细胞中SIRTl及NADPH氧化酶4（NOX4）的蛋白水平。
结果：①与正常组相比，高糖各组细胞增殖减低，阿托伐他汀组均可改善高糖对HUVECs增值的抑制作用，呈浓度依赖性。②高糖环境下，细胞内ROS水平显著增加，NADPH氧化酶4的蛋白表达显著上调，SIRTl的蛋白表达明显降低。③阿托伐他汀可以上调高糖环境下SIRTl的表达，降低ROS、NADPH氧化酶4的表达，具有浓度依赖性。④高糖环境下，SIRTl抑制剂sirtinol可以降低SIRTl的表达，增加NADPH氧化酶4的表达，NADPH氧化酶4抑制剂apocynin可降低NADPH氧化酶4的表达，但对SIRT1的表达无明显影响。
结论：阿托伐他汀可以对抗高糖诱导的HUVECs的氧化损伤，其可能的机制与升高内皮细胞SIRT1的表达有关，且SIRT1在NADPH氧化酶的上游发挥对抗高糖诱导的氧化损伤作用。 -
高脂血症中人脐静脉内皮细胞HSP 22的表达
目的：观察高脂环境热休克蛋白22（HSP22）基因真核过表达载体pEGFP-N1转染对人脐静脉内皮细胞HSP22表达水平的影响。
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炎症因子对内皮细胞中长链非编码RNA TUG1、MEG3的表达影响
目的：动脉粥样硬化（AS）是冠心病的主要病理机制。研究认为，冠状动脉局部或全身炎症反应在动脉粥样硬化发生发展及其所致并发症中发挥重要作用。长链非编码RNA （lncRNA）是一类转录本长度超过200 nt的非编码RNA，参与基因表达等多种生理调控过程。研究显示lncRNA可能参与了心血管疾病的发生机制。本研究主要探讨炎症因子TNF-α、IFN-γ、LPS对人脐静脉内皮细胞中lncRNA TUG1和MEG3水平及细胞增殖和凋亡的影响。
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凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1甲基化在同型半胱氨酸作用下对人内皮细胞存活的影响
目的:探讨凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)对动脉粥样硬化过程中降低内皮细胞存活率的作用机制研究.方法:按不同浓度的Hcy对人脐静脉内皮细胞作用分组:对照组 (0μM Hcy)、50μM Hcy组、100μM Hcy组、200μM Hcy组和500μM Hcy组;②100μM Hcy+30μM维生素B12+ 30μM叶酸组(拮抗剂组),各组(n =5)培养液孵育 72 h后,采用3-( 4,5)-双甲基-2 -噻唑-(2,5) -2苯基溴化四氮唑蓝试验检测Hcy对内皮细胞活性的影响;用分光光度比色法检测各组细胞中过氧化氢;酶免法检测氧化低密度脂蛋白、甲基转移酶-1(DNMT-1)含量; 荧光定量聚合酶链式反应(PCR)测LOX-1和DNMT-1 mRNA的表达; 蛋白免疫印迹法测LOX-1蛋白的表达;巢式降落式PCR法测LOX-1基因甲基化的改变.结果:同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞存活率的影响:拮抗剂组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).100、200、500μMHcy组与对照组比较:氧化低密度脂蛋白和过氧化氢的含量、LOX-1信使核糖核酸(mRNA)相对甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)表达量及LOX-1 蛋白相对β-肌动蛋白表达量均增加;DNMT-1的含量和mRNA表达、LOX-1基因甲基化程度均降低,差异均有统计学意义(P<0.001).结论:LOX-1低甲基化可能是Hcy致内皮细胞损伤的重要机制之一,其中过氧化氢、氧化低密度脂蛋白和DNMT-1可能起了重要的作用.
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差异显示法研究氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞基因差异表达
目的:研究血管内皮细胞在致动脉粥样硬化因子作用下,差异表达基因的结构与功能.方法:氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导培养的人脐静脉内皮细胞,用差异显示-多聚酶链式反应(DDRT-PCR)技术,克隆表达水平有明显差异的基因片段,并用Northen印迹法证实阳性结果.结果:发现OX-LDL诱导培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)出现一些上、下调节的基因片段.已知的上调基因包括人的胸腺素(Thymosin)β4、细胞间粘附因子(ICAM)-1、FK506结合蛋白、ERp72;下调的基因有细胞色素B561、Restin.用Northern印迹证实了DDRT-PCR的结果,不同的上、下调节基因表达水平变化在30%～200%之间不等.结论:本研究首次用DDRT-PCR的方法证实在体外OX-LDL可诱导HUVEC许多基因表达水平的变化.细胞中细胞间粘附因子的高表达,进一步说明细胞间粘附因子是参与动脉粥样硬化过程重要的粘附分子.胸腺素β4基因的上调表达与OX-LDL诱导细胞肌动蛋白张力纤维的生成增加有关,可能影响内皮细胞的增殖.
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人巨细胞病毒对培养人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨人巨细胞病毒(CMV)在动脉粥样硬化发生和发展中的作用.方法:采用流式细胞计数仪观察了人 CMV对离体培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和凋亡的影响.本实验分为5组,分别为正常对照组,肿瘤坏死因子细胞凋亡组,无血清培养细胞凋亡组,CMV感染+肿瘤坏死因子细胞凋亡组,CMV感染+无血清培养细胞凋亡组.结果:实验发现无血清培养和肿瘤坏死因子诱导的细胞凋亡率较正常对照组升高,而CMV感染的细胞凋亡率明显降低;细胞计数的结果表明CMV感染后3天的HUVEC细胞数是未感染的5倍.流式细胞仪的检测结果表明:CMV感染细胞的增殖指数明显高于正常对照组,CMV可使细胞耐受无血清培养条件,保持细胞增殖.结论:人CMV感染HUVEC后能够改变HUVEC的细胞增殖过程,抑制细胞凋亡,HUVEC的过度增生及HUVEC感染引起的炎性反应可能影响内皮细胞的功能,甚至破坏内皮细胞,导致血栓形成、脂质代谢紊乱,终形成动脉粥样硬化.
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卡托普利对高压力培养的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响
目的观察大气压、中压力、高压力培养对离体人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)凋亡的影响,及血管紧张素转换酶抑制剂卡托普利(Captopril,Cap)对HUVECs凋亡的作用.方法采用改良的Jaffe's法,取4～6代HUVECs制成单细胞悬液.采用大气压(0mmHg)、中压力(120mmHg)、高压力(180mmHg)三种条件培养,分别用形态学、DNA凝胶电泳、流式细胞仪等观察各组培养16h、24h、48h HUVECs凋亡情况.结果与大气压培养比较,中压力培养未见HUVECs凋亡,高压力培养凋亡百分率增加,48h达到高(P＜0.001).两种浓度Cap均能抑制高压力培养对HUVECs的促凋亡作用.结论高压力培养能诱导HUVECs凋亡,并呈时间依赖性.而Cap能减轻高压力培养对HUVECs的促凋亡作用.
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锌离子对人脐静脉内皮细胞的影响
目的 探究氯化锌(ZnCl2)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的影响.方法 体外培养HUVECs,氯化锌浓度6~34μM分别处理细胞,MTS检测生长活性,筛选促细胞增殖的佳浓度作为实验组浓度.实验组和对照组(未处理)流式细胞术检测HUVECs凋亡情况;鬼笔环肽-异硫氰酸荧光素(FITC)染色检测HUVECs骨架重构;Transwell小室检测HUVECs迁移和侵袭;Real-time PCR检测细胞迁移相关蛋白基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA相对表达水平;明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9的活性;ELISA法检测HUVECs上清液MMP-2、MMP-9水平.结果 与对照组相比,浓度范围在10~22μM内ZnCl2处理的细胞,其相对增殖率升高,差异具有统计学意义(P均<0.05).选取促进HUVECs增殖的佳浓度14μM作为实验组浓度.实验组的HUVECs凋亡率为(12.02±0.84)%,高于对照组的(4.05±0.52)%,差异有统计学意义(P<0.01).实验组HUVECs细胞迁移个数为(112.20±10.83)个,高于对照组的(94.80±9.50)个,差异有统计学意义(P<0.05).实验组HUVECs细胞侵袭个数高于对照组,[(36.20±3.22)个vs.(32.80±1.07)个],差异有统计学意义(P<0.05).实验组HUVECs细胞迁移相关蛋白MMP-2和MMP-9的mRNA相对表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05).实验组细胞迁移相关蛋白MMP-2的光密度值显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);实验组细胞MMP-9的光密度值高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).实验组细胞上清液中MMP-2和MMP-9的吸光度值高于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05).结论 14μM氯化锌处理HUVECs,使其处于增殖和凋亡平衡的生长活跃状态,并且促进HUVECs骨架重塑和细胞迁移.
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蛋白激酶C-胞外信号调节激酶1/2信号通路在尼古丁诱导的血管内皮细胞表达纤维溶解酶原激活物抑制物-1中的作用
目的 探讨蛋白激酶C(PKC)-胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号通路在尼古丁诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达纤维溶解酶原激活物抑制物-1(PAI-1)中的作用.方法 体外培养HUVECs,采用不同实验条件尼古丁进行干预,ELISA法测定细胞上清液中PAI-1的浓度,观察尼古丁作用的佳浓度和时间.进一步分别用PKC的抑制剂星型胞菌素staurosporine (STS)和ERK的抑制剂PD98059干预HUVECs,观察PKC或ERK被阻断后对尼古丁诱导的HUVECs 表达PAI-1的影响,ELISA测定各组细胞上清液中PAI-1蛋白的表达水平,RT-PCR检测各组细胞PAI-1 mRNA的表达.结果 100 μmol/L尼古丁组PAI-1蛋白水平[(22.6 ± 1.1)μg/L]明显高于对照组[(14.2± 2.8)μg/L,q=5.64,P＜0.05];以100 μmol/L 尼古丁分别与HUVECs孵育0、4、6、8、12及24 h,各组PAI-1蛋白表达呈时间依赖性升高,并在12 h达到高峰(F=32.063,P＜0.05);尼古丁组PAI-1 mRNA及蛋白含量[(1.32±0.20),(21.08±0.83)μg/L]明显高于对照组[(0.73±0.10),(13.39± 0.93)μg/L,q=8.43、11.97,均P＜0.05];尼古丁+STS组PAI-1 mRNA及蛋白含量[(1.07±0.10),(16.19±2.15)μg/L]较尼古丁组降低(q=5.61、7.61,均P＜0.05),但仍高于对照组(q=7.84、4.36,均P＜0.05);尼古丁+ PD98059组PAI-1 mRNA及蛋白表达[(1.12±0.11),(17.52±1.72)μg/L]低于尼古丁组(q=4.68、5.54,均P＜0.05),仍高于对照组(q=8.77、6.43,均P＜0.05).结论 PKC-ERK1/2信号通路在尼古丁诱导的血管内皮细胞PAI-1表达上调中发挥一定作用.
关键词： 尼古丁 蛋白激酶C 细胞外信号调节MAP激酶类 人脐静脉内皮细胞 -
姜黄素在内脂素诱导内皮细胞炎症损伤中的作用机制
目的 观察姜黄素(Cur)对内脂素(visfatin)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎症损伤过程的影响,探讨Cur改善内皮功能的信号传导机制.方法 将HUVECs随机分组,根据前期实验结果,给予1×10-5 mol/L的visfatin进行诱导,加入Cur后MTT法检测内皮细胞活力变化.通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、E选择素(E-selectin)的含量变化,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞黏附分子-1(ICAM-1)、需肌醇激酶/核酸内切酶1(IRE1)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达.结果 MTT检测结果表明,正常HUVECs加入Cur后,不影响内皮细胞活力;而与正常对照组相比,给予1×10-5 mol/L visfatin处理后,MCP-1和E-selectin含量明显增加,ICAM-1、IRE1及GRP78的表达增加,差异有统计学意义(P<0.05).与visfatin组相比,给予不同浓度Cur处理后,可显著降低MCP-1和E-selectin的含量,同时ICAM-1、IRE1及GRP78的表达也显著降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 Cur可能通过抑制内质网应激(ESR)来拮抗visfatin诱导HUVECs炎症损伤.
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拉西地平对内皮细胞一氧化氮和细胞间黏附分子-1表达的影响
研究发现拉西地平具有显著的抗动脉粥样硬化作用,但机制还不十分清楚.本研究旨在探讨拉西地平对培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)株一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响,以进一步阐明拉西地平抗动脉粥样硬化的作用机制.
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不同间歇低氧频率对血管内皮细胞的炎性损伤
我们于2005年7月采用人脐静脉内皮细胞可传代细胞株ECV304建立了不同间歇低氧频率对血管内皮炎性损伤的细胞模型,并应用此模型探讨了内皮细胞在不同低氧频率时肿瘤坏死因子α(TNFα)水平的变化.
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脑心通对H2O2诱导的大鼠内皮细胞凋亡的影响
现代的观点认为动脉粥样硬化的始动环节为血管内皮完整性的破坏,其中内皮细胞凋亡与增生的不平衡是极为重要的因素.吸烟、高脂血症、高血糖、氧化应激等均可导致内皮细胞过度凋亡、血管内膜解剖结构的破坏及血管功能的紊乱.目前,对细胞凋亡及抗凋亡机制的研究较多,抗氧化、抑制氧自由基是研究的热点.脑心通为中药复方制剂,我们于2010年10月至2011年7月,采用H2O2制备人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡模型,并通过血清药理学方法观察含脑心通血清对细胞凋亡的影响.
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氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞细胞黏附分子-1及一氧化氮表达的影响
一氧化氮(NO)作为一种作用广泛的信息分子,具有抑制血小板和单核巨噬细胞的黏附,内皮细胞和平滑肌细胞增殖的作用,与动脉粥样硬化(AS)关系密切.
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利拉鲁肽通过抑制核因子κB p65磷酸化调控人脐静脉内皮细胞一氧化氮合酶的表达
目的 探讨利拉鲁肽在高糖环境下对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)功能的影响及其可能机制.方法 高糖环境下(25 mmol/L葡萄糖)培养人脐静脉内皮细胞,分别给予10、100、1 000 μg/L利拉鲁肽进行干预,采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting法分别检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)以及核因子κB p65 (NF-κB p65)的mRNA、蛋白表达水平;应用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)干预利拉鲁肽处理后的HUVECs,观察eNOS、iNOS、NF-κB p65的mRNA、蛋白表达水平的变化.研究结果多组间采用单因素方差分析,两组间比较采用SLD分析.结果 与普通培养基(7 mmol/L葡萄糖)组相比,高糖环境下HUVECs的eNOS mRNA和蛋白表达均降低,iNOS mRNA和蛋白表达及磷酸化NF-κB p65蛋白表达均增高(t=2.79、5.75、4.32、4.85、7.12,均P＜0.05).与0μg/L组相比,1 000μg/L利拉鲁肽干预组HUVECs的eNOS mRNA、eNOS蛋白表达均上调,iNOS mRNA、iNOS蛋白表达及NF-κB p65磷酸化蛋白表达均下调(t=5.12、9.34、6.70、5.50、8.94,均P＜0.05).与单独使用利拉鲁肽组相比,TNF-α联合利拉鲁肽组HUVECs的eNOSmRNA和蛋白表达均下调,iNOS mRNA和蛋白表达及磷酸化NF-κB p65蛋白表达均上调(t=3.33～7.87,均P＜0.05).结论 利拉鲁肽可通过抑制NF-κB p65磷酸化在转录和翻译水平上增加eNOS表达、降低iNOS的表达,从而改善内皮细胞功能,预防糖尿病动脉粥样硬化.
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护骨素对软脂酸诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响
目的 探讨护骨素(OPG)对软脂酸诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响及可能机制.方法 将HUVECs细胞分为3组:正常对照组:以0.4％牛血清白蛋白处理；软脂酸组:以0.4 mmol/L软脂酸处理；OPG组:以不同浓度OPG预处理24 h,再加入0.4 mmol/L软脂酸(OPG浓度分别为50、100、200、400 μg/L),以上各组细胞培养24h,流式细胞术及Hoechst 33258核染色检测细胞凋亡.将HUVECs细胞分为5组:正常对照组:以0.4％牛血清白蛋白处理；软脂酸组:以0.4 mmol/L软脂酸处理；OPG组:以400 μg/L OPG预处理24 h,再加入0.4 mmol/L软脂酸；软脂酸± OPG±雷帕霉素组:以10 μg/L雷帕霉素预处理24 h,再给予400 μg/L OPG处理24 h,后加入0.4 mmol/L软脂酸；软脂酸±雷帕霉素组:以10 μg/L雷帕霉素预处理24 h,再加入0.4 mmol/L软脂酸.以Western blotting法分析各组HUVECs细胞马铃薯球蛋白(tuberin)、磷酸化马铃薯球蛋白(P-tuberin)、核糖体蛋白S6激酶(S6K)、磷酸化核糖体蛋白S6激酶(P-S6K)、Bcl-2、Bax以及caspase 3蛋白表达水平.组间均数比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK法.结果 与正常对照组比较,软脂酸组早期细胞凋亡率显著增加(18.31％ ±0.51％比6.88％±0.60％,P＜0.05)；OPG组早期凋亡率(12.58％ ±0.19％、9.39％±0.42％、7.55％±0.17％、5.90％±0.14％)明显低于软脂酸组(均P ＜0.05),且呈OPG剂量依赖性；与正常对照组比较,软脂酸组晚期凋亡率显著增加(9.55％±0.22％比5.28％±0.90％,P ＜0.05)；OPG组晚期凋亡率(7.71％±0.17％、6.42％±0.18％、5.24％±0.16％、4.50％±0.16％)明显低于软脂酸组(均P＜0.05),且呈OPG剂量依赖性.与正常对照组比较,软脂酸组P-tuberin/tuberin(2.0942±0.0163比1.1948±0.0541)、P-S6K/S6K(2.0942 ±0.0163比3.2052±0.0051)、Bax/β-actin(0.3868±0.0013比1.2991 ±0.0026)、caspase 3/β-actin(0.2346±0.0009比0.5793±0.0103)表达水平均显著提高,差异均有统计学意义(均P＜0.05),Bcl-2/β-actin表达显著降低(0.2470 ±0.0038比0.0716 ±0.0004,P＜0.05)；OPG组P-tuberin/tuberin(0.8258 ±0.0074)、P-S6K/S6K(2.5073 ±0.1403)、Bax/β-actin(0.7452 ±0.0045)、caspase 3/β-actin(0.4713 ±0.0066)表达水平明显低于软脂酸组(均P＜0.05),Bcl-2/β-actin(0.1909±0.0021)表达明显高于软脂酸组(P＜0.05).结论 OPG对软脂酸诱导的HUVECs凋亡具有保护作用,此作用可能通过下调tuberin/mTOR活性,增加Bcl-2表达、降低Bax及Caspase 3表达实现的.
关键词： 护骨素 软脂酸 人脐静脉内皮细胞 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物 -
内吗啡肽对糖基化终末产物致人脐静脉内皮细胞表达一氧化氮、一氧化氮合酶、内皮素1的影响
目的 探讨内吗啡肽( EMs)对糖基化终末产物(AGEs)培养条件下人脐静脉内皮细胞(HUVEC)合成分泌一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、内皮素1(ET-1)的影响.方法 体外制备AGEs修饰的牛血清白蛋白(AGEs-BSA)；分别用AGEs-BSA、EMs(1×10-5、1×10-6、1×10-7、1×10-8mol/L EM1或EM2)±AGEs-BSA及EMs(1×10-5 mol/L EM1或EM2)±纳洛酮±AGEs-BSA共同干预HUVEC,同时以只加BSA的HUVEC作为阴性对照.噻唑蓝(MTT)法检测各组HUVEC存活率；放射免疫法检测各组NO、eNOS水平；酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定各组ET-1表达量；实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组eNOS、ET-1 mRNA的表达.采用单因素方差分析及t检验进行数据统计.结果 与AGEs-BSA组相比,1×10-5mol/L EM1干预组HUVEC存活率增加,NO分泌量减少[分别为0.89 ±0.05 vs 0.67±0.02和(14.8±1.4)vs(23.0±0.7) μmol/L,t值分别为9.86、13.18,均p＜0.05],ET-1产生及其mRNA表达降低[分别为(0.85±0.01)vs(0.99±0.01)μg/L和10.6±0.7 vs 25.6±1.6,t值分别为31.36、50.18,均P＜0.05],eNOS活性及其mRNA表达增加[分别为(2.53±0.20)vs(0.61 ±0.09) U/ml和0.35 ±0.00 vs 0.05±0.00,t值分别为21.50、16.80,均P＜0.05],EM1其他浓度组和EM2各浓度组上述各指标与AGEs-BSA组比较结果相似,差异亦均有统计学意义(t值为2.24～102.4,均P＜0.05)；纳洛酮组上述指标与AGEs-BSA组差异无统计学意义(t值为0.56～2.05,均P＞0.05),而与各浓度EM1或EM2干预组差异有统计学意义(t值为2.24 ～64.96,均P＜0.05).结论 EMs可提高AGEs-BSA条件下HUVEC的存活率,降低NO、ET-1浓度,提高eNOS浓度；纳洛酮可阻断EMs的上述作用,提示EMs是通过μ阿片受体发挥作用的.
