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糖网明目颗粒提取物对缺氧/高糖状态下血管内皮细胞肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1α表达的影响
目的 观察糖网明目颗粒提取物对缺氧/高糖状态下血管内皮细胞EA.hy926炎症相关因子的影响,并探讨其作用机制.方法 以CoCl2和高浓度葡萄糖干预人脐静脉内皮细胞EA.hy926复制缺氧和高糖模型,MTT法检测细胞增殖能力,半定量RT-PCR检测炎症相关基因表达,ELISA检测炎症相关蛋白表达.结果 缺氧和高糖均能促进EA.hy926细胞增殖,显著上调肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1α(IL-1α)基因和蛋白表达(P<0.05).药物干预后,细胞增殖能力降低,TNF-α、IL-1α基因和蛋白表达水平显著降低(P<0.05).结论 糖网明目颗粒提取物可能通过调控缺氧/高糖状态下内皮细胞 TNF-α、IL-1α等炎症相关因子的 mRNA和蛋白表达从而达到防治糖尿病视网膜病变的目的.
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痰瘀同治方药物血清对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的影响
目的：观察痰瘀同治方对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的影响,探讨其促血管生成作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞模型,大鼠连续5 d灌胃不同剂量的痰瘀同治方(78.0、39.0、19.5 g/kg)制备各剂量药物血清,采用MTT法检测细胞活力来反应其增殖能力,用细胞划痕实验观察给药后细胞迁移能力。结果与正常组比较,490 nm处吸光度痰瘀同治方高、中剂量组内皮细胞增殖能力明显增强(P＜0.01),增殖率分别为49.78%、33.92%；内皮细胞迁移能力也有提高,划痕区相对距离明显减少(P＜0.01),细胞迁移率分别增加11.36%、11.62%。结论痰瘀同治方对人脐静脉内皮细胞有促进增殖和迁移的作用。
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金氏痔疮膏对人脐静脉内皮细胞的抑制作用
目的观察金氏痔疮膏精提液对人脐静脉内皮细胞(ECV-304)增殖的影响,探讨其可能的治痔作用机制.方法采用MTT法检测不同浓度的金氏痔疮膏精提液和组方中单味中药对ECV-304细胞增殖的影响.结果不同浓度的金氏痔疮膏精提液对ECV-304细胞增殖均有抑制作用,且呈剂量依赖性;高、中、低浓度的大黄煎液和高浓度的姜黄对ECV-304细胞增殖有抑制作用.结论金氏痔疮膏具有抑制人脐静脉内皮细胞增殖的作用;大黄是金氏痔疮膏中发挥抑制血管内皮细胞作用的主药,姜黄亦起了一定作用.
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清开灵对白细胞-血管内皮细胞粘附的影响
目的:研究清开灵对白细胞与血管内皮细胞粘附的作用.方法:以TNF处理体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为实验模型,用不同浓度的清开灵作用HUVEC 2、1 2h后,用虎红染色法检测人外周血中性粒细胞(PMN)、淋巴细胞与HUVEC粘附的情况;并用Cell-ELISA检测HUVEC表面粘附分子E-selectin的表达.结果:TNF作用HUVEC 2、1 2h后,能明显增强PMN、淋巴细胞与HUVEC的粘附,不同浓度的清开灵能降低PMN、淋巴细胞与HUVEC的粘附;TNF作用HUVEC 2h后,能促进HUVEC表面E-selectin的表达,清开灵能抑制E-selectin的表达,TNF作用HUVEC 1 2h后,不能促进HUVEC表面E-selectin的表达,不同浓度的清开灵对E-selectin的表达没有作用.结论:清开灵能降低白细胞与HUVEC的粘附,抑制E-selectin的表达是其抗白细胞粘附的分子机制之一.
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土茯苓对白细胞介素-1诱导的血管细胞粘附分子-1表达的影响
目的探讨土茯苓对白介素-1(IL-1)诱导的血管内皮细胞表面的血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)表达升高的保护作用.方法以原代培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为研究对象,采用中药血清药理学方法、免疫荧光染色、流式细胞仪等技术,以平均荧光强度代表细胞VCAM-1水平.结果IL-1刺激后可升高HUVECs的平均荧光强度(P＜0.001),土茯苓含药血清组的平均荧光强度明显低于空白血清组(P＜0.05或P＜0.01).结论土茯苓可抑制HUVECs表达VCAM-1.
关键词： 土茯苓 人脐静脉内皮细胞 血管细胞粘附分子-1 -
左旋四氢巴马汀对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞黏附分子表达的影响
目的:观察左旋四氢巴马汀(l-THP)对脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和E选择素(E-selectin)表达的影响,探讨l-THP的抗炎作用.方法:分离纯化人脐静脉内皮细胞,与LPS或LPS加不同浓度l-THP共育,用流式细胞仪检测细胞表面黏附分子表达的变化. 结果: l-THP (250 mg·L-1)显著降低LPS诱导的ICAM-1和E-selectin表达(P<0. 05).l-THP(50 mg·L-1)抑制E-selectin表达(P<0. 05), 然而对ICAM-1的表达无明显影响(P>0. 05).l-THP (10 mg·L-1)对2种黏附分子表达均无明显影响(P>0. 05).50 mg·L-1地塞米松(DXM)完全抑制LPS诱导上述2种黏附分子的表达(P<0. 05).结论:左旋四氢巴马汀能减少LPS诱导的ICAM-1和E-selectin表达,提示l-THP可开发成炎症治疗药物.
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丹参脂溶性成分抑制体外血管新生及机制研究
该研究利用人脐静脉内皮细胞模型研究丹参脂溶性成分对血管新生的调节作用,并探讨其可能的作用机制.通过建立的细胞模型,确定丹参脂溶性成分对内皮细胞增殖活性和迁移能力的影响;随后利用实时荧光定量PCR技术检测药物作用后血管新生相关细胞因子VEGF-A,VEGF-C和MMP-9的基因表达变化.结果表明,5 mg· L-1的丹参脂溶性成分抑制内皮细胞的增殖和迁移,同时VEGF-A,VEGF-C和MMP-9基因的表达被抑制.表明丹参脂溶性成分可能通过抑制VEGF-A和MMP-9基因的表达来抑制内皮细胞的增殖和迁移,从而达到抑制血管新生的作用.
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侧柏炭不同溶剂提取物对LPS诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用
目的:研究侧柏炭各溶剂提取物对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用,探讨侧柏炭保护血管内皮细胞的有效提取物及其可能作用物质.方法:体外培养HUVECs,采用LPS诱导制备人脐静脉内皮细胞损伤模型.采用MTT比色法测定细胞活力、黄嘌呤氧化酶法测定细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)活力、TBA法测定丙二醛(MDA)含量、硝酸还原酶法测定一氧化氮(NO)含量,UPLC/Q-TOF-MS法分析侧柏炭各溶剂提取物中黄酮类成分的差异.结果:与模型组比较,正丁醇提取物(100 mg·L-1)及乙酸乙酯提取物(100,50 mg·L-1)可显著提高细胞活力(P＜0.05),显著降低MDA,NO含量,提高SOD活性(P＜0.05).4个溶剂提取物中,乙酸乙酯提取物中的黄酮总量含量高,水提取物中黄酮总量含量低,正丁醇提取物中的黄酮总量与石油醚提取物相当,只是其所含的槲皮苷、杨梅苷含量仅次于乙酸乙酯提取物中的槲皮苷、杨梅苷含量.结论:侧柏炭乙酸乙酯提取物可显著拮抗LPS对HUVECs的损伤,为侧柏炭保护血管内皮细胞的有效提取物,其所含的槲皮苷、杨梅苷或者多种黄酮类成分可能为其保护血管内皮细胞作用的活性物质,其机制可能与其能减少NO的产生,抑制细胞内脂质过氧化有关.
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桃红四物汤含药血清对过氧化氢损伤的人脐静脉内皮细胞的保护作用
目的:研究桃红四物汤含药血清对过氧化氢损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用.方法:SD大鼠灌胃给予桃红四物汤提取液(生药1.75 g·mL-1),每天2次,按10 mL·kg-1连续给药3d后,制备桃红四物汤含药血清.MTT法考察桃红四物汤含药血清(终浓度为5％,10％,15％)预处理对H2O2诱导细胞活力减少的作用；显微镜观察细胞形态学变化；以丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及AO/EB染色考察桃红四物汤含药血清对HUVECs凋亡及抗氧化能力的影响；Western blot法检测细胞Caspase-3的表达.结果:与空白血清对照组比较,经400 μmol·L-1H2O2刺激后细胞活性显著降低,含药血清组可显著提高SOD活力、降低MDA和LDH含量,并抑制Caspase-3表达.AO/EB染色及相差倒置显微镜也观察到桃红四物汤含药血清能降低H2O2诱导的细胞凋亡.结论:桃红四物汤含药血清对H2O2诱导的HUVECs损伤有显著地保护作用.
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龙血通络胶囊对氧化低密度脂蛋白损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用
该文为观察龙血通络胶囊对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)致人脐静脉内皮细胞(EAhy.926细胞)损伤的保护作用.采用氧化低密度脂蛋白(100 mg·L-1)损伤建立体外人脐静脉内皮细胞损伤模型方法,MTT法检测龙血通络胶囊对正常细胞生长影响及对损伤细胞的保护作用,酶联免疫吸附法检测龙血通络胶囊对内皮细胞损伤后乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(N0)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的影响,蛋白质印迹(WB)法检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1),血管细胞黏附分子-1 (VCAM-1),p65,p-p65,IKB,p-IKB的表达水平.结果显示,与正常对照组比较,ox-LDL损伤后EAhy.926细胞活力显著降低,细胞LDH漏出量增加(P＜0.01),NO含量、SOD活力均显著降低(P ＜0.01,P＜0.05),细胞中MDA含量升高(P＜0.05),ICAM-1,VCAM-1,p-p65/p65,p-IKB/IKB等蛋白的表达量均显著升高(P＜0.01);与模型对照组比较,龙血通络胶囊(1,2 mg·L-1)对正常细胞生长无显著影响,可促进ox-LDL损伤的血管内皮细胞增殖(P ＜0.05,P＜0.01),降低胞内MDA含量、减少细胞LDH释放量(P＜0.05),提高SOD活力及NO含量(P＜0.01,P＜0.05);可降低ICAM-1,VCAM-1,p-p65/p65,p-IKB/IKB的表达(P＜0.01).结果提示龙血通络胶囊对ox-LDL所致的人脐静脉内皮细胞损伤具有明显的保护作用,说明龙血通络胶囊对动脉粥样硬化具有一定治疗作用.
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梓葛冻干粉对人脐静脉内皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
目的:研究中药单体组方梓葛冻干粉对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)缺氧／复氧损伤的保护作用.方法:体外培养HUVECs.采用Krebs液建立缺氧／复氧损伤模型.用梓葛冻干粉干预后,采用MTT比色法测定细胞活力、黄嘌呤氧化酶法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、硫代巴比妥酸显色法测定丙二醛(MDA)含量、硝酸还原酶法测定一氧化氮(NO)含量、2,4-二硝基苯肼显色法测定细胞外乳酸脱氢酶(LDH)释放量;Western blot法分析细胞凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax,Caspase-3 的表达.结果:与模型组相比,梓葛冻干粉12.5 nmg·L-1显著提高细胞活力(P＜0.05);梓葛冻干粉49.0,24.5,12.5 mg·L-1 均显著提高缺氧／复氧后细胞SOD活性(P＜0.05);梓葛冻干粉24.5,12.5 mg·L-1能显著减少LDH的释放量及降低MDA和NO的含量(P＜0.05),并上调细胞Bcl-2蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01);梓葛冻干粉49.0,24.5,12.5 mg·L-1显著降低Bax的表达并上调Bcl-2/Bax(P＜0.05,P＜0.01),且梓葛冻干粉49.0,24.5 mg·L-1显著降低Caspase-3的表达(P＜0.01).结论:梓葛冻干粉可显著拮抗缺氧／复氧对HUVECs的损伤,可能与其抑制细胞过氧化损伤,增强细胞抗氧化和抗凋亡能力有关.
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补肾清肝中药配伍对间歇性低氧诱导人脐静脉内皮细胞损伤模型p38MAPK/NF-κB信号通路的干预效应研究
研究补肾清肝中药配伍对间歇性低氧致人脐静脉内皮细胞损伤模型p38MAPK/NF-κB信号通路的干预效应.实验采用改良的间歇性低氧诱导人脐静脉内皮细胞建立体外细胞损伤模型,以补肾清肝中药有效成分配伍(异钩藤碱、桃叶珊瑚苷及川芎嗪)作为干预药物,首先进行中药优配伍浓度体外筛选,然后选择优配伍浓度作为干预剂量,观察其对模型p38MAPK/NF-κB信号通路的干预效应.结果显示异钩藤碱、桃叶珊瑚苷及川芎嗪在0.01 mg·L“时具有佳的体外抗炎效应.间歇性低氧组NF-κB p65入核量及p-IκB较对照组与其他各组均显著增加,同时免疫荧光染色NF-κB p65可见间歇性低氧组出现明显NF-κB p65核移位表现,内皮细胞黏附程度明显增加;与间歇性低氧组相比,p38MAPK抑制剂组及补肾清肝中药配伍组p-p38MAPK,NF-κB p65入核量及p-IκB表达量均明显较少,内皮细胞黏附明显被抑制.该研究表明,补肾清肝中药优浓度配伍通过将抑制p38MAPK的磷酸化作为起始,继而阻断了NF-κB的核移位行为,抑制其转录功能,实现对间歇性低氧诱导血管内皮细胞损伤模型的保护效应.
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通脉养心丸提取物对大鼠离体肠系膜动脉的舒张作用研究
为研究通脉养心丸提取物(TMYX)对大鼠离体肠系膜动脉的舒张作用并探讨其作用机制,采用在大鼠离体肠系膜动脉血管上观察累积浓度TMYX对基础状态血管、苯肾上腺素(PE,1 ×10-5 mol·L-1)和氯化钾(KCl,60 mmol· L-1)预收缩的血管环的作用,并观察去除血管内皮细胞对TMYX舒张作用的影响.进一步采用一氧化氮合酶抑制剂L-硝基-精氨酸甲酯(L-NAME)和环氧合酶抑制剂吲哚美辛预孵育观察TMYX的舒血管效果.同时在人脐静脉内皮细胞上观察TMYX对细胞NO释放和一氧化氮合酶eNOS磷酸化的影响.结果发现,TMYX在1～750 mg·L-1对基础状态的内皮完整血管张力无明显影响,对KCl预收缩的内皮完整血管也无明显舒缩作用.但TMYX能有效舒张苯肾上腺素收缩的大鼠肠系膜动脉,大舒张率为(64.71±10.03)％.用一氧化氮合酶抑制剂(L-NAME,1×10-4 mol· L-1)预孵育或去除肠系膜动脉血管内皮后,TMYX的大舒张率分别降为(35.77±8.93)％,(25.85±10.84)％,与未加L-NAME组和内皮完整组比较有显著差异(P＜0.01).但吲哚美辛对TMYX的舒张作用没有影响.此外TMYX 50 mg· L-1可以显著增加人脐静脉内皮细胞P-eNOS的蛋白表达,促进NO释放,而L-NAME处理后则下调细胞P-eNOS蛋白表达水平,抑制NO的释放.结果说明TMYX具有内皮依赖性的血管舒张作用,其对苯肾上腺素预收缩的大鼠离体肠系膜动脉的舒张作用与一氧化氮-环磷酸鸟苷(NO-cGMP)通路有关.
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灯盏乙素乙酯对大鼠大脑中动脉结扎所致局灶性脑缺血的保护作用及机制研究
观察灯盏乙素乙酯对大鼠大脑中动脉结扎所致局灶性脑缺血的保护作用,并探讨其作用机制.该实验选用SPF级雄性SD大鼠84只,随机分为7组:假手术组、模型组、阳性药组(尼莫地平组12 mg·kg-1)、灯盏花素片组(48 mg· kg-1)、灯盏乙素乙酯高、中、低剂量组(100,50,25 mg·kg-1).采用线栓法制备大鼠大脑中动脉结扎(MCAO)模型,观察大鼠MCAO时神经功能状态,TTC染色法测脑梗死面积,半自动生化分析仪测定血清中MDA,SOD,NO的变化.分别采用200 mg·L-1Ox-LDL和100 μg·L-1TNF-α作用人脐静脉内皮细胞(HUVECs) 24 h,建立Ox-LDL和TNF-α细胞损伤模型,测定细胞上清液中MDA,SOD,NO,ET,6-keto-PGF1α,TXB2,IL-1,IL-6,IL-8,ICAM-1和PECAM-1水平.结果显示,灯盏乙素乙酯能有效改善MCAO大鼠神经功能,明显减小脑梗死面积.与模型组比较,血清中SOD和NO活性提高,MDA含量降低;细胞上清液中SOD,6-keto-PGF1α和NO活性提高,IL-1,IL-6,IL-8,ICAM-1,PECAM-1,TXB2,ET和MDA含量降低.结果表明,灯盏乙素乙酯对大鼠大脑中动脉结扎所致局灶性脑缺血具有一定的保护作用,其作用机制可能与抗氧化应激,改善血管内皮细胞功能及减轻炎性反应有密切关系.
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愈肾汤总黄酮的成分组成和活性研究
目的:对愈肾汤总黄酮的化学成分和活性进行研究,为处方的活性成分揭示和作用机制阐明奠定基础.方法:采用体外H2O2诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤实验评价愈肾汤总黄酮的活性.并采用硅胶柱、大孔吸附树脂、葡聚糖凝胶色谱和高效液相制备等方法分离纯化愈肾汤总黄酮的化学成分,根据理化性质和波谱数据鉴定其结构.结果:愈肾汤总黄酮具有明显的抗过氧化氢诱导的HUVEC损伤和下调PAI-1表达(P＜0.05)的作用.从愈肾汤总黄酮部位分离得到9个黄酮类化合物分别为毛蕊异黄酮(1)、蒙花苷(2)、3',4'-二羟基-7-O-β-D-葡萄糖苷(3)、3'-羟基-4'-甲氧基-7-O-β-D-葡萄糖苷(4)、槲皮素(5)、山柰酚(6)、芦丁(7)、红车轴草异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(8)、4'-羟基二氢黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(9).结论:愈肾汤总黄酮具有抗HUVEC氧化损伤作用,所分离的9个黄酮化合物均为首次从该方中分离得到,化合物1,3,4,8,9可能来自于黄芪,化合物2,5～7可能来自于小蓟和仙鹤草,其中3,4和9为首次从组方的单味药中分离得到.
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内皮细胞提取和UHPLC-LTQ-Orbitrap法分析筛选苦碟子注射液中的活性成分
应用细胞生物色谱法及UHPLC-LTQ-Orbitrap质谱联用技术快速筛选鉴定苦碟子注射液中可能的活性成分.选择人脐静脉内皮细胞(huma umbilical vein endothelid cells,HUVEC)作为靶细胞,先使苦碟子注射液中的活性成分与靶细胞特异性结合,经细胞靶点脱敏失活后,应用LC-MS快速鉴定与细胞靶向亲和的化学成分,从而筛选得到苦碟子注射液中可能的活性成分.根据获得的精确相对分子质量数据、保留时间以及结合苦碟子注射液中的化学成分进行鉴定归属.终,从细胞裂解液中共筛选鉴定出9个化学成分,其中包括倍半萜内酯类成分4个、有机酸类成分3个以及黄酮类成分2个.应用细胞生物色谱法与UHPLC-LTQ-Orbitrap质谱联用技术快速筛选鉴定苦碟子注射液中可能的活性成分,可为苦碟子注射液药效物质基础研究提供一种快捷、有效的方法学借鉴.
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鬼针草总黄酮对过敏性紫癜患儿血清IgA1诱导血管内皮细胞损伤的保护作用
目的 探讨鬼针草总黄酮(total flavones of Bidens pilosa L.,TFB)对过敏性紫癜(HenochSch(o)nlein purpura,HSP)患儿血清IgA1诱导血管内皮细胞损伤的保护作用及机制.方法 以人脐静脉内皮细胞(human umbilical venous endothelial cells,HUVECs)为研究对象,用正常IgA1和HSP患儿血清IgA1进行干预,同时加入不同浓度TFB,分为空白对照组、正常对照组、HSP IgA1组及TFB(1.0、0.5、0.25 mg/mL)组.ELISA法分别检测各组上清液IL-8和TNF-α水平,硝酸还原酶法检测各组上清液NO水平;荧光定量PCR和Western blot法检测HUVECs中NF-κB和ICAM-1 mRNA和蛋白表达.结果 与正常对照组和空白对照组比较,HSP组IL-8、TNF-α及NO水平均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与HSP组比较,TFB(1.0、0.5 mg/mL)干预后IL-8、TNF-α及NO水平均明显降低,差异有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01).荧光定量PCR和Western blot检测结果均显示:与正常对照组和空白对照组比较,HSP患儿血清IgA1诱导内皮细胞NF-κB与ICAM-1 mRNA和蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01);与HSP组比较,TFB 1.0,0.5、0.25 mg/mL干预下,NF-κB与ICAM-1mRNA和蛋白表达明显下调,差异有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01).结论 TFB可能通过抑制性HSP患儿体内NF-κB高表达、减少血管内皮细胞分泌IL-8、TNF-α、NO而缓解血管损伤发生.
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特女贞苷对血管内皮细胞氧化损伤的作用研究
目的 研究特女贞苷对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)中p66Shc及凋亡相关蛋白表达水平的作用.方法 采用H2 O2诱导EA.hy926形成氧化应激损伤的血管内皮细胞模型,随机分为空白组、模型组(H2O2)、特女贞苷组(H2O2 +5、50、500 μmol/L特女贞苷)、阴性对照组(H2O2 +5、50、500 μmol/L DMSO)、抗坏血酸组(H2O2 +5、50、500 μmol/L抗坏血酸).检测各组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、β3-gal活性;采用Western blot法测定p66Shc、caspaseG活体剪切体、Bax、Bcl-2蛋白含量;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测p66 mRNA含量.结果 与空白组比较,模型组及阴性对照组SOD活性、Bcl-2表达量及Bcl-2/Bax比值下降,MDA含量、β3-gal活性、p66Shc蛋白水平及m RNA含量、capase-3活性剪切体和Bax表达水平升高(均P＜0.05).与模型组比较,特女贞苷组及抗坏血酸组SOD升高,MDA含量(除特女贞苷组浓度500 μm ol/L外)和β-gal活性降低(P＜0.01),抑制p66Shc表达及mRNA水平(P＜0.01);特女贞苷组Bax和capase-3活性剪切体(除浓度500 μmol/L外)表达水平降低,Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值升高(均P＜0.01).与同浓度的抗坏血酸组比较,特女贞苷组对B ax、Bcl-2蛋白水平、Bcl-2/Bax比率、p66 mRNA的调节作用较明显(P＜0.05).结论 特女贞苷可能通过抑制p66Shc削弱血管内皮细胞的氧化损伤及降低凋亡相关蛋白的表达.
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清热消积方对人肺腺癌细胞诱导的人脐静脉内皮细胞迁移、趋化和成管能力的影响
目的 研究清热消积方对人肺腺癌细胞(SPC-A-1)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbili-cal vein endothelial cells,HUVEC)迁移、趋化和成管能力的影响.方法 设终浓度分别为2.5、5.0、10.0、20.0 mg/mL的清热消积方给药组和对照组,运用划痕、Transwell小室、Matrigel胶小管形成等实验方法观察细胞迁移趋化效应及成管能力.结果 2.5、5.0、10.0 mg/mL的清热消积方药液对由SPC-A-1细胞上清培养的HUVEC细胞的迁移运动均有不同程度的抑制作用(P＜0.05),且迁移率随着药物浓度的增加而下降；HUVEC细胞的趋化细胞数明显少于阳性对照组(P＜0.01),趋化抑制率随着药物浓度的增加而上升,且HUVEC细胞趋化数目与药物浓度呈负相关(r=-0.830,P＜ 0.01)；HUVEC细胞小管形成面积明显低于阳性对照组(P＜0.01),小管形成抑制率随着药物浓度的增加而上升,且HUVEC细胞生成小管的面积与药物浓度呈负相关(r=-0.937,P＜0.01).结论 清热消积方抗肿瘤血管生成作用可能与其抑制肿瘤血管内皮细胞的迁移、趋化及成管能力等相关.
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补肾复脉液对缺氧内皮细胞eNOSmRNA和ET-1mRNA影响的研究
目的:探讨中药补肾复脉液对缺氧内皮细胞内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)和内皮素(ET-1)mRNA转录水平的影响及其对缺氧内皮细胞的保护作用.方法:取培养的胎儿脐静脉内皮细胞,随机分为空白组、缺氧组、西药组及中药组,分别给予10%的空白兔血清,10%的空白兔血清,10%的含维生素C兔血清,10%的含补肾复脉液兔血清,除空白组外,同时通入95%N2加5%CO2混合气孵育(缺氧)4h,采用异硫氰酸胍-酚-氯仿法提取各组细胞总RNA,以GAPDH为内对照,将RT-PCR扩增产物用1%的琼脂糖凝胶电泳分离,紫外灯下观察各组细胞eNOSmRNA和ET-1mRNA表达情况,对照凝胶拍照,并对底片条带光密度扫描定量分析.结果:缺氧组ET-1/GAPDHmRNA水平高而eNOS/GAPDHmRNA水平低(P＜0.01),中药组和西药组均能阻抑其异常表达(P＜0.01,P＜0.05),中药组明显优于西药组(P＜0.05).结论:中药补肾复脉液能抑制缺氧内皮细胞ET-1mRNA转录,促进eNOSmRNA转录,维持ET-1mRNA/eNOSmRNA之间的平衡,从而对缺氧内皮细胞有一定的保护作用.
关键词： 缺氧 人脐静脉内皮细胞 内皮素 一氧化氮 内皮型一氧化氮合成酶
