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miR-328对高糖诱导HUVECs上皮间质转换的调控及信号机制
目的 探讨miR-328对高糖诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)上皮间质转换的调控作用及机制.方法 培养HUVECs,构建携带miR-328基因的重组慢病毒,转染HUVECs.细胞分7组:正常葡萄糖、甘露醇、高浓度葡萄糖、miR-328、miR-328病毒阴性对照、高浓度葡萄糖+U0126、miR-328+U0126.免疫荧光双染色鉴定HUVECs间质转分化;RT-qPCR检测miR-328表达;Western blot检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白,MEK1/2、p-MEK1/2、ERK1/2、p-ERK1/2表达.结果 1)经高糖处理HUVECs呈CD31、α-SMA染色双阳性;2)与对照组比较,高糖组miR-328表达增高(P<0.05);与高糖及miR-328组比较,U0126处理后miR-328表达降低(P<0.05);3)与对照组比较,高糖及miR-328组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达增多(P<0.05);与高糖及miR-328组比较,U0126处理后Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达减少(P<0.05);4)与对照组比较,高糖及miR-328处理后p-MEK1/2、p-ERK1/2表达增高(P<0.05);而U0126处理则能抑制这一现象(P<0.05).结论 高糖可诱导HUVECs上皮间质转换,同时miR-328表达增高;miR-328可诱导HUVECs上皮间质转换;HUVECs上皮间质转换与MEK1/2-ERK1/2信号通路有关.
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miR-328通过C/EBPα表达上调抑制K562细胞增殖
目的:本研究旨在探讨miR-328(microRNA-328)对慢性髓系白血病(CML)急变期细胞株K562增殖的影响及C/EBP α的介导作用.方法:构建miR-328靶向基因及抑制基因的真核表达载体hsa-miR-328及hsa-miR-328-inhibitor,并分别通过脂质体lipofectamineTM2000介导转染至K562细胞;通过荧光显微镜观察细胞转染情况;通过实时荧光定量RT-PCR检测miR-328、C/EBP mRNA的表达水平;Western-Blot方法测定C/EBP α蛋白的表达;CCK-8检测细胞增殖的情况.结果:本研究通过成功构建重组真核表达载体hsa-miR-328、hsa-miR-328-inhibitor;将载体转染K562细胞,24h后在荧光显微镜下可见荧光细胞,表明载体成功转入K562细胞,48 h和72 h后可见荧光细胞数逐渐增多.实时荧光定量RT-PCR证实miR-328在K562细胞中成功表达,而miR-328对细胞C/EBP αmRNA表达无明显影响;通过Western blot检测发现miR-328恢复C/EBP α蛋白表达;细胞活力检测提示miR-328抑制K562细胞的增殖.结论:成功构建并转染miR-328基因至K562细胞,miR-328通过恢复C/EBP α的表达抑制K562细胞的增殖.
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miR-328对高糖诱导人脐静脉内皮细胞间质转化调控作用的研究
目的 探讨miR-328对高糖诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)间质转化的调控作用.方法 构建miR-328和antagomiR-328慢病毒,培养HUVECs分为正常对照组(NC)、甘露醇对照组(M T)、高浓度葡萄糖组(HG),miR-328、miR-328阴性组、高浓度葡萄糖+antagomiR-328组、高浓度葡萄糖+antagomiR-328阴性组共7组.免疫荧光鉴定HUVECs间质转化;qRT-PCR检测miR-328;Western blot检测Ⅰ 、Ⅲ型胶原蛋白.结果 高糖处理HUVECs呈CD31、α-SMA双阳性;HG组较NC组miR-328表达增高[(2.800±0.175)vs 1,P<0.05];HG组及miR-328组Ⅰ 、Ⅲ型胶原蛋白较NC组表达增加[(0.414±0.014)v s(0.403±0.016)v s(0.175±0.025),(0.501±0.014)v s(0.474±0.016)v s(0.185±0.014),P<0.05];antagomiR-328组Ⅰ 、Ⅲ型胶原蛋白较HG组表达减少[(0.227±0.012)vs(0.414±0.014),(0.222±0.015)vs(0.501±0.014),P<0.05].结论 高糖诱导HUVECs间质转化,miR-328表达增加;过表达miR-328诱导HUVECs间质转化,并具有相应分泌功能,而过表达antagomiR-328可抑制这一现象.
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房颤射频消融术前后血浆miR-328表达变化及临床意义
目的 探讨血浆miR-328在不同类型房颤患者的射频消融术前后的表达变化,为进一步探讨房颤发病机制提供新方向.方法 选取从2015年3月至2016年1月期间在大连医科大学附属第一医院行射频消融术的心房颤动患者60例作为房颤组,选择同期大连医科大学附属第一医院体检中心的健康体检者20例作为正常对照组.使用实时荧光定量PCR技术检测正常对照组及不同类型房颤组手术前后血浆miR-328表达水平的变化.结果 房颤组血浆miR-328同对照组比较表达上升.血浆miR-328在房颤组射频消融术前后相对表达量分别为2.04±0.31和1.12±0.06,术后同术前比较表达下降,差异均有显著性意义,P＜0.05;血浆miR-328在阵发性房颤、持续性房颤和永久性房颤中相对表达量分别为1.85±0.23、2.13±0.36和2.72±0.93,表达逐渐升高,组间比较差异均有统计学意义,P ＜0.05.结论 miR-328同房颤病情发展密切相关,可能参与调控房颤的发病机制.
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微小核苷酸转基因小鼠导致心脏功能发生改变
本实验室自2006年起,经过3年时间,于2008年成功构建了心肌组织特异表达miR-1、miR-328的转基因模型小鼠,为研究miR-1、miR-328生物学功能及其与心血管疾病发病机制的关系提供了有力的转基因模型.
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血浆miR-328和miR-155在急性冠脉综合征诊断及鉴别诊断中的价值
目的 研究microRNA-328(miR-328)和microRNA-155(miR-155)在急性冠脉综合征(ACS)患者血浆中的水平及其在ACS诊断和鉴别诊断中的价值.方法 收集56例ACS患者[其中24例为不稳定心绞痛(UA),32例为急性心肌梗死(AMI)]和20例体检健康者,分析两组一般临床资料及相关生化指标；用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测两组研究对象血浆miR-328及miR-155的含量,并分析其与心肌肌钙蛋白T(cTnT)的相关性.结果 ACS组与健康对照组血浆miR-328为(8.12±3.81 vs 1.00±0.00),差异有统计学意义(t=7.924,P＜0.05)；AMI亚组与UA亚组血浆miR-328含量为(10.69±2.17 vs 4.26±2.06),差异有统计学意义(t=7.227,P＜0.05).ACS组与健康对照组血浆miR-155含量为(1.00±0.26 vs1.00±0.00),AMI亚组与UA亚组血浆miR-155含量为(1.02±0.28 vs 0.96±0.22),差异均无统计学意义(P＞0.05).血浆miR-328水平与cTnT呈正相关(r=0.434,P＜0.05)；ACS患者血浆miR-155水平与cTnT无相关性(r=-0.233,P＞0.05).结论 miR-328在ACS患者血浆中水平升高,可能作为ACS诊断及鉴别诊断的潜在生物标志物.
关键词： 急性冠脉综合征 miR-328 miR-155 血浆 实时荧光定量聚合酶链反应 -
miR-328、miR-147和miR-22在冠心病患者中的表达变化及临床意义
目的 探讨冠心病患者血浆及外周血单个核细胞(PBMC) miR-328、miR-22、miR-147的表达变化及其临床意义.方法 筛选100例冠心病患者及相对健康对照组,采用实时荧光定量PCR技术检测各组血浆及PBMC中miR-328、miR-147、miR-22的表达水平.结果 冠心病患者血浆中miR-328、miR-22的表达较非冠心病患者明显升高,而miR-147的表达明显降低;在冠心病患者PBMC中,miR-328表达没有明显变化,miR-22表达略微增加,miR-147表达明显下降.在心肌梗死患者中,血浆中miR-328和miR-22表达水平明显增加,而miR-147表达明显下降;心肌梗死患者PBMC中miR-328表达略降低,miR-22表达增加,miR-147表达水平略有下降.结论 miR-328、miR-22及miR-147在冠心病患者中的差异表达,有望作为冠心病疾病中一种新的标记物或基因治疗靶点.
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下调miR-18a和miR-328抑制肺腺癌A549细胞的侵袭和迁移
目的 分析miR-18a和miR-328在肺腺癌A549细胞中的表达,并探讨下调miR-18a或miR-328的表达对其侵袭和迁移能力的影响.方法 用荧光定量PCR检测A549细胞中miR-18a和miR-328的表达;通过转染miR-18a抑制物(miR-18ainhibitor)或miR-328 inhibitor,下调miR-18a或miR-328的表达,采用TranswellTM侵袭、迁移实验分析A549细胞侵袭和迁移能力的变化.结果 A549细胞中miR-18a和miR-328均呈高表达;而转染相应抑制物后miR-18a、miR-328表达下降,A549细胞的侵袭、迁移能力均明显降低.结论 下调A549细胞miR-18a或miR-328水平可有效抑制肿瘤细胞的侵袭、迁移.
