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氢气饱和生理盐水抑制大鼠腹主动脉瘤形成的研究
目的 研究氢气饱和生理盐水对大鼠腹主动脉瘤(AAA)形成的作用,探讨其抑制AAA的机制.方法 对20只雄性SD大鼠行氯化钙孵育肾下腹主动脉制成AAA模型,随机分为2组:实验组10只腹腔内注射氢气饱和生理盐水(5 ml· kg-1·d-1),对照组10只注射生理盐水.28 d后观察两组主动脉扩张情况,并用HE染色及醛品红溶液染色检测主动脉壁内炎性细胞浸润及中膜弹力纤维破坏情况,ELISA检测瘤壁IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度,免疫组化观察动脉瘤组织基质金属蛋白酶2、9(MMP-2、9)的蛋白表达,real-time PCR测定MMP-2、9的基因表达.结果 实验组与对照组腹主动脉大直径为(2.2 ±0.3)mm和(3.4±0.5)mm,瘤壁IL-1β浓度为(81±29) ng/L和(165 ±51)ng/L,TNF-α浓度为(109 ±46)ng/L和(360 ±51)ng/L,MMP-2 mRNA相对表达量为2.4±1.0和11.8±2.9,MMP-9 mRNA相对表达量为2.9 ±0.6和6.7±1.0,差异有统计学意义(t=4.055 ～ 10.406,P均＜0.05).实验组动脉壁弹力纤维未见明显受损,仅有少量炎性细胞浸润及MMP-2、9弱阳性表达.对照组动脉壁弹力纤维严重受损,可见明显炎性细胞浸润,MMP-2、9强阳性表达.结论 氢气饱和生理盐水可能通过改善炎性细胞浸润、减少炎性介质释放,降低MMP-2、9的mRNA表达、蛋白合成,从而抑制大鼠腹主动脉中膜弹力纤维的降解和退变,终抑制AAA的形成.
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SATB1及wnt/β-catenin信号通路相关分子在子痫前期胎盘组织中的表达及意义
目的：探讨富含AT序列的特异性结合蛋白1（SATB1）及蛋白（wnt）/β连环蛋白（β-catenin）信号通路相关分子在调控滋养细胞侵袭以及在子痫前期发病中的作用。方法收集2013年3月—2014年3月在重庆医科大学附属第一医院行人工流产术的20例孕8~10周孕妇的绒毛组织（早孕组）；同期在妇产科住院行水囊引产的18例中孕期（孕18~20周）孕妇的胎盘组织（中孕组）；同期行择期剖宫产术的20例健康足月妊娠孕妇的胎盘组织（正常足月组）；同期住院行选择性剖宫产术分娩的20例子痫前期孕妇（孕33~38周）的胎盘组织（子痫前期组）。采用免疫组化SP法检测各组绒毛或胎盘组织中SATB1及β-catenin的蛋白表达定位；采用蛋白印迹法检测各组绒毛或胎盘组织中SATB1及β-catenin的蛋白表达水平；采用细胞免疫荧光法检测SATB1及β-catenin在滋养细胞株HTR8/SVneo细胞中的定位表达，并对细胞中SATB1及β-catenin蛋白表达水平进行检测；采用免疫共沉淀法检测子痫前期组胎盘组织和缺氧/复氧组HTR8/SVneo细胞中的SATB1与β-catenin的相互关系；采用明胶酶谱法检测子痫前期组和缺氧/复氧组细胞中基质金属蛋白酶（MMP）2、9的活性水平。结果（1）正常足月组胎盘组织合体滋养细胞结节和纤维素样坏死很少见，毛细血管数目丰富；子痫前期组胎盘组织可见合体滋养细胞胞核空泡化明显，有较多纤维素样坏死，绒毛内微血管数目减少。（2）各组绒毛或胎盘组织中均可见SATB1棕黄色染色颗粒，子痫前期组胎盘组织中SATB1阳性染色强度较正常足月组明显减弱。（3）各组绒毛或胎盘组织中均可见β-catenin蛋白的表达，子痫前期组胎盘组织中β-catenin阳性染色强度较正常足月组减弱。（4）早孕组、中孕组、正常足月组及子痫前期组中SATB1蛋白表达水平分别为0.300±0.009、0.271±0.015、0.238±0.018及0.153±0.007；β-catenin蛋白表达水平分别为0.743±0.041、0.648±0.021、0.549±0.069及0.269±0.047。子痫前期组SATB1及β-catenin蛋白表达水平均较早孕组、中孕组、正常足月组明显下降，分别比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。（5）常氧组及缺氧/复氧组SATB1蛋白定位于细胞滋养细胞的胞核中，缺氧/复氧组细胞的荧光强度较常氧组细胞明显减弱；常氧组及缺氧/复氧组β-catenin蛋白定位于细胞滋养细胞的胞核及胞质中，缺氧/复氧组细胞的荧光强度较常氧组细胞明显减弱。（6）常氧组细胞SATB1及β-catenin蛋白表达水平分别为0.213±0.005和0.797±0.081，而缺氧/复氧组分别为0.083±0.021和0.543±0.131。两组分别比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。（7）子痫前期组胎盘组织中和缺氧/复氧组细胞中经SATB1抗体免疫共沉淀后的蛋白复合物中，均可检测到β-catenin蛋白的表达；同样，经β-catenin抗体免疫共沉淀后的蛋白复合物中，也均可检测到SATB1蛋白的表达。（8）子痫前期组胎盘组织中MMP-2、9活性水平分别为2.251±0.310、1.447±0.102，正常足月组分别为7.098±0.451、5.502±0.197，两组分别比较，差异有统计学意义（P<0.05）。缺氧/复氧组细胞中MMP-2、9活性水平分别为0.471±0.104、0.297±0.103，常氧组分别为0.842±0.209、0.595±0.100，缺氧/复氧组细胞明显低于常氧组，分别比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论子痫前期胎盘组织中SATB1表达水平下降，可能是通过调控wnt/β-catenin信号通路而影响MMP-2、9的活性水平改变，使滋养细胞的侵袭力减弱，终导致子痫前期的发生。
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微小RNA-106b靶向调控基质金属蛋白酶2对滋养细胞侵袭和增殖的影响
目的 探讨子痫前期孕妇的胎盘组织中微小RNA-106b(miR-106b)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达及miR-106b靶向调控MMP-2的表达对滋养细胞侵袭和增殖的影响.方法 共纳入30例轻度子痫前期(mPE)、30例重度子痫前期(sPE)和40例正常孕妇,分别为mPE组、sPE组及对照组,收集其胎盘组织;将绒毛膜癌细胞系JAR细胞和JEG3细胞各分为4组(miR-106b模拟物组、模拟物对照组、miR-106b抑制物组、抑制物对照组).采用荧光素酶报告基因活性检测法验证miR-106b对其靶基因MMP-2基因表达的调控作用;采用实时荧光定量PCR技术、蛋白印迹法检测3组孕妇的胎盘组织和各组细胞中miR-106b和MMP-2 mRNA、蛋白的表达水平;并采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞的相对增殖率,采用体外侵袭实验检测各组细胞的侵袭力.结果 (1)荧光素酶报告基因活性检测法显示,含miR-106b的质粒和含MMP-2基因的重组质粒共同转染JAR细胞和JEG3细胞后,与模拟物对照比较,其荧光素酶水平下降(P＜0.01).(2)实时荧光定量PCR技术显示:①mPE组、sPE组及对照组孕妇的胎盘组织中,miR-106b和MMP-2 mRNA的表达水平分别为2.89±0.04、1.96±0.03、1.01±0.03,1.87±0.05、0.69±0.03、2.78±0.03,3组分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).②4组JAR细胞和4组JEG3细胞(miR-106b模拟物组、模拟物对照组、miR-106b抑制物、抑制物对照组)的miR-106b的表达水平分别为2.39±0.03、1.03±0.04、0.73±0.03、1.11±0.04,2.17±0.04、1.18±0.04、0.61±0.03、1.22±0.03,JAR、JEG3细胞4组间分别比较,差异有统计学意义(P＜0.05).③4组JAR细胞和4组JEG3细胞的MMP-2 mRNA的表达水平分别为0.45±0.15、1.02±0.03、2.28±0.03、1.11±0.03,0.58±0.03、1.25±0.15、2.25±0.03、1.21±0.03,JAR、JEG3细胞的4组间分别比较,差异有统计学意义(P＜0.05).(3)蛋白印迹法显示:①3组孕妇胎盘组织中MMP-2蛋白的表达水平分别为1.63±0.04、0.55±0.03、2.82±0.03,3组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).②4组JAR细胞的MMP-2蛋白表达水平分别为0.41±0.03、0.97±0.03、2.25±0.03、1.01±0.03,4组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).③4组JEG3细胞的MMP-2蛋白表达水平分别为0.53±0.03、1.20±0.03、2.31±0.04、1.19±0.03,差异有统计学意义(P＜0.05).(4)MTT法检测显示:JAR细胞和JEG3细胞经miR-106b模拟物转染后(即miR-106b模拟物组)细胞增殖率均明显低于相应模拟物对照组,差异有统计学意义(P均＜0.05);经miR-106b抑制物转染后(即miR-106b抑制物组)细胞增殖率均明显高于相应的抑制物对照组,差异有统计学意义(P均＜0.05).(5)体外侵袭实验显示:①4组JAR细胞的穿膜细胞数分别为(61±15)、(79±13)、(134±13)、(80±12)个,差异有统计学意义(P＜0.05);②4组JEG3细胞的穿膜细胞数分别为(57±12)、(71±15)、(128±15)、(70±14)个,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-106b能够通过靶向调控MMP-2的表达抑制JAR细胞和JEG3细胞的侵袭、增殖,与子痫前期的发病相关.
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血小板活化因子对卵巢癌细胞侵袭的影响及其相关机制
目的 探讨血小板活化因子(PAF)对卵巢癌细胞侵袭的影响及其相关机制,为卵巢癌的治疗提供新的靶点.方法 (1)以100 nmol/L的PAF分别处理卵巢浆液性癌细胞株OVCA429细胞及卵巢黏液性癌细胞株RMUG-L细胞,均以仅加入二甲基亚砜(DMSO)为对照,采用体外侵袭实验检测其穿膜细胞数.(2)以不同浓度(分别为0、0.1、1、10、100、1000 nmol/L)的PAF处理后检测OVCA429细胞中环腺苷酸应答元件结合蛋白(CREB)、磷酸化CREB(p-CREB)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白的表达水平；以100 nmol/L的PAF处理不同时间(分别为0、5min、10 min、30 min、1h及12 h)后检测OVCA429细胞中有丝分裂原活化蛋白激酶p38蛋白(p38 MAPK)、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、CREB及p-CREB蛋白的表达水平,上述各蛋白的表达水平均采用蛋白印迹法检测.(3) OVCA429细胞在加入PAF( 100 nmol/L)的基础上,分别加入各蛋白的抑制剂,即PAF受体(PAFR)抑制剂-WEB2076(50 μmol/L)、p-p38 MAPK抑制剂-SB203580(10 μmol/L)、CREB结合蛋白(CBP)-CREB相互作用抑制剂-217505(25 μmol/L).实验分为6组:PAF组、PAF+WEB2076组、PAF+ SB203580组、PAF+ 217505组、PAF+ SB203580 +217505组及空白对照组,采用蛋白印迹法检测各组细胞中p-p38 MAPK、p-CREB、MMP-2蛋白的表达强度.结果 (1)体外侵袭实验显示,予PAF处理后,OVCA429细胞的穿膜细胞数[(118±23)个]明显多于其对照细胞[(36±8)个,P＜0.01],而RMUG-L细胞的穿膜细胞数[(45±13)个]与其对照细胞[(53±9)个]比较无明显变化(P＞0.05).(2)不同浓度的PAF处理后,OVCA429细胞中p-CREB、MMP-2蛋白的表达水平呈明显的剂量依赖性(P＜0.01),0.1 nmol/L的PAF即可引起p-CREB、MMP-2蛋白表达水平明显升高,至100 nmol/L时达高峰；而CREB蛋白的表达无明显变化.100nmoL/L的PAF处理不同时间后,OVCA429细胞中p38 MAPK、CREB蛋白表达无明显变化；而p-p38 MAPK、p-CREB蛋白表达水平明显升高(P＜0.01),至处理10 min时达高峰,随后逐渐降低.(3)与空白对照组比较,PAF组细胞中p-p38 MAPK、p-CREB及MMP-2蛋白的表达强度明显增强.与PAF组比较,PAF+ WEB2076组、PAF+SB203580组、PAF+ SB203580+ 217505组细胞中p-p38 MAPK、p-CREB及MMP-2蛋白的表达强度明显减弱,但PAF+ SB203580+ 217505组与PAF+ WEB2076组及PAF+ SB203580组相比无明显差异；PAF +217505组细胞中p-p38 MAPK、p-CREB蛋白的表达强度无明显变化,但其MMP-2蛋白的表达强度明显减弱.结论 PAF可促进卵巢浆液性癌OVCA429细胞的侵袭,这一作用可能是通过p38MAPK激活转录因子CREB,进一步上调MMP-2蛋白的表达而实现的.
关键词： 卵巢肿瘤 肿瘤浸润 血小板活化因子 cAMP反应元件结合蛋白质 基质金属蛋白酶2 -
微血管密度与基质金属蛋白酶2在鼻咽癌中的表达及其放疗敏感性与转移风险的相关性研究
目的 探讨微血管密度(MVD)与基质金属蛋白酶2(MMP-2)在鼻咽癌(NPC)中的表达及其放疗敏感性与转移风险的相关性.方法 选取112例NPC患者为研究组,另选取同期收治的110例慢性鼻咽炎患者为对照组.检测两组患者黏膜组织中MVD及MMP-2的表达情况,统计分析研究组MMP-2及MVD与放疗敏感性的关系.随访2年后,统计分析研究组MMP-2及MVD与转移风险的相关性.结果 研究组MVD及MMP-2表达水平均明显高于对照组(P﹤0.01);MMP-2与V50/V0、V70、V6m肿瘤体积缩小百分比呈负相关(r1=-0.441,r2=-0.406,r3=-0.403,P﹤0.05);MVD与V50/V0、V70、V6m肿瘤体积缩小百分比呈负相关(r1=-0.217,r2=-0.336,r3=-0.246,P﹤0.05);远处转移组MVD及MMP-2表达水平均明显高于未远处转移组(P﹤0.01).结论 NPC患者MVD及MMP-2呈高表达状态,且与放疗敏感性、转移风险具有密切相关性.
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胰腺癌组织MMP-2和PCNA表达相关性及其临床意义的探讨
目的:研究基质金属蛋白酶2(MMP-2)在胰腺癌组织中表达及其与增殖细胞核抗原(PCNA)的相关性.方法:应用组织芯片制作仪构建胰腺癌组织芯片,在连续的芯片切片上使用免疫组化法检测MMP-2和PCNA蛋白表达情况,分析MMP-2与胰腺癌临床病理因素之间的关系以及与PCNA表达的相关性.结果:MMP-2在胰腺癌组织中表达的阳性率为66.7%(28/42),明显高于正常胰腺组织的10.3%(4/39),P<0.05.MMP-2表达与胰腺癌的分化程度、淋巴结转移以及分期相关(P<0.05),并且与PCNA的表达存在显著的相关性(P<0.01).结论:MMP-2蛋白在增殖能力强的胰腺癌细胞中表达明显增加,与胰腺癌的转移有着密切关系.
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乳腺癌组织SPARC和MMP-2表达相关性研究
目的 探讨富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and rich in cysteine,SPARC)和基质金属蛋白酶2 (matrix matalloproteinase-2,MMP-2)在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理因素的关系.方法 采用免疫组织化学法检测2013-01-01-2013-11-20潍坊市人民医院收治的70例乳腺浸润性导管癌和20例乳腺纤维腺瘤组织中SPARC和MMP-2的表达及其相关性.结果 SPARC在乳腺癌间质细胞的表达率为68.6％(48/70),高于肿瘤细胞的37.1％(26/70),x2=13.874,P＜0.001;也高于乳腺纤维腺瘤间质细胞的40.0％(8/20),x2=5.402,P=0.020.MMP-2在乳腺癌肿瘤细胞的表达率为64.3％(45/70),高于间质细胞的17.1％(12/70),x2=32.226,P＜0.001;也高于乳腺纤维腺瘤肿瘤细胞的35.0％(7/20),x2=5.469,P=0.019.乳腺癌肿瘤细胞SPARC和MMP-2的表达均与淋巴结转移和TNM分期有关,并且MMP-2还与HER-2有关,x2=12.036,P=0.001.乳腺癌组织SPARC与MMP-2呈正相关,x2 =3.993,P=0.046.结论:乳腺癌组织SPARC和MMP-2的高表达与乳腺癌的发生、发展、侵袭和转移有关,两者可能起协同作用.
关键词： 乳腺肿瘤 富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白 基质金属蛋白酶2 免疫组织化学 -
Bufalin抑制食管癌TE13细胞迁移机制探讨
目的 蟾蜍灵(Bufalin)是中医抗癌药物蟾酥的有效成分之一,但其抗肿瘤的机制并不十分清楚.本研究通过分析不同浓度Bufalin对食管癌TE13细胞株迁移距离、MEK1/2及其活化形式P-MEK1/2和基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP)表达的影响,初步探讨Bufalin抑制食管癌TE13细胞迁移能力的作用机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝[3-(4,5-dimethyhhiazol-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT]法测定细胞药物毒性,细胞划痕实验分别测量不同浓度(0、10、25、50和100 nmol/L)Bufalin处理组食管癌TE13细胞的迁移距离.蛋白质印迹法及免疫细胞化学法检测MEK1/2和P-MEK1/2蛋白的表达.逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测MMP-2、MMP-9 mRNA的表达情况.结果 MTT法结果显示,Bufalin药物大无毒浓度(TC0)为100 nmol/L.细胞划痕实验结果显示,不同浓度Bufalin处理组在划痕36 h后与对照组相比迁移的距离不同,随着Bufalin浓度的增加,细胞迁移距离下降,100 nmol/L迁移距离小(F=243.163,P＜0.01),Bufalin能有效抑制食管癌细胞迁移距离.蛋白质印迹法及免疫细胞化学检测结果显示,Bufalin对MEK1/2蛋白的表达无影响,但能显著抑制其活化形式P-MEK1/2的表达,并呈剂量依赖性,随Bufalin浓度的升高(0、10、25、50和100 nmol/L),P-MEK1/2相对表达量逐渐下降,分别为0.710±0.006、0.676±0.010、0.656±0.010、0.599±0.020和0.521±0.021,F=76.369,P＜0.01.P-MEK1/2阳性细胞数随着Bufalin浓度的升高而减少,分别为(80.330±1.905)％、(68.407±2.219)％、(67.297±1.797)％、(52.617±2.368)％和(26.97±2.912)％,F=243.348,P＜0.01.RT-PCR结果显示,随着Bufalin药物浓度的升高,MMP-2 mRNA相对表达量分别为0.772±0.010、0.725±0.019、0.663±0.015、0.582±0.019和0.519±0.019,F=112.990,P＜0.01;MMP-9 mRNA相对表达量分别为0.783±0.013、0.740±0.010、0.703±-0.006、0.601±0.017和0.531±0.010,均低于对照组,F=179.417,P＜0.01.结论 Bufalin可能通过下调MEK1/2的活性,从而抑制食管癌TE13细胞的迁移能力.
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重组人血管内皮抑制素联合顺铂对小鼠腹水瘤抑制作用及其机制探讨
目的 研究重组人血管内皮抑制素(恩度)联合顺铂治疗小鼠S180腹水瘤的有效性和安全性,并探索其相关作用机制.方法 应用小鼠S180细胞株建立腹水瘤动物模型.120只造模后的ICR小鼠随机分为对照组(0.9％ NaCl,d1～d10)、恩度组(恩度8 mg/kg,d1～d5,d7～d10;0.9％ NaCl,d6)、顺铂组(顺铂0.04 mg/kg,d6;0.9％ NaCl d1～d5,d7～d10)和恩度联合顺铂组(恩度8mg/kg,d1～d5,d7～d10;顺铂0.04 mg/kg,d6).记录各组小鼠体质量、腹水体积、腹水中肿瘤细胞、红细胞数以及生存期;检测各组小鼠的腹膜渗透性和肝肾功能;流式细胞仪检测腹水肿瘤细胞的凋亡率;ELISA方法检测腹水中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases 2,MMP-2)的表达.结果 恩度联合顺铂组小鼠的腹水体积为(2.1±1.0) mL,肿瘤细胞数为(10.6±2.5)×107 mL-1,红细胞数为(12.0±3.1)×107 mL-1,上述各指标均低于对照组、恩度组和顺铂组.联合组的中位存活期为24.1d,明显长于对照组(12.7 d)、恩度组(16.8 d)和顺铂组(18.9 d).顺铂组小鼠腹水中肿瘤细胞的凋亡率为(68.9±5.4)％,明显高于对照组(12.4±2.3)％和恩度组(11.0±3.8)％.恩度组小鼠的腹膜渗透性为(2.03±0.05) ng/mL,VEGF浓度为(23.7±3.0) ng/mL,MMP-2为(10.3±1.1) ng/mL,显著低于对照组和顺铂组.各组小鼠的肝肾功能未发现明显异常.结论 恩度联合顺铂治疗S180腹水瘤疗效显著,安全性好;其机制可能与恩度下调VEGF和MMP-2的表达及顺铂促进肿瘤细胞的凋亡有关.
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子宫内膜样腺癌组织肿瘤相关巨噬细胞分布临床意义的初步探讨
肿瘤边缘的TAMs与ER(或PR)的表达均未发现相关性,P>0.05.结论:TAMs参与了子宫内膜样腺癌侵袭转移过程;尽早明确TAMs与子宫内膜样腺癌性激素受体表达之间的关系,有助于为子宫内膜癌患者探索出另一条治疗途径.
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RECK基因和基质金属蛋白酶2在食管鳞癌中的表达及其临床病理意义
目的 探讨RECK基因和基质金属蛋白酶2(MMP-2)在食管鳞癌发生、发展中的作用.方法 收集河南省肿瘤医院食管鳞癌标本57例,同时取患者相应的癌旁正常食管黏膜组织作为对照.应用组织芯片法与免疫组织化学法,检测每例食管鳞痛标本和正常食管黏膜组织中RECK和MMP-2的表达情况.结果 RECK在食管鳞癌组织中的表达率为36.8%(21/57),在正常食管黏膜组织中的表达率为61.4%(35/57),两组间差异有统计学意义(χ2=6.879,P＜0.05);RECK的表达与患者的年龄、性别、肿瘤组织学分级、淋巴结转移无关(均P＞0.05),但与临床病理分期有关(P＜0.05).MMP-2在食管鳞癌组织中的阳性表达率为42.1%(24/57),在正常食管黏膜组织中的阳性表达率为19.3%(11/57),两组间差异有统计学意义(χ2=6.968,P＜0.05);MMP-2的表达与患者的年龄、性别、肿瘤组织学分级无关(均P＞0.05),但与肿瘤临床病理分期和肿瘤淋巴结转移有关(P＜0.05).此外,RECK和MMP-2在食管鳞癌中阳性表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 RECK和MMP-2的异常表达在食管鳞癌的发生中有重要作用,RECK的低表达和MMP-2的高表达与食管鳞癌临床病理进展有关.
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Twist1和基质金属蛋白酶2在子宫内膜样腺癌组织中的表达及意义
目的 探讨Twist1和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白在子宫内膜样腺癌组织中的表达及其相互关系.方法 建立组织微阵列平台,应用免疫组织化学方法检测70例子宫内膜样腺癌组织中Twist1和MMP-2蛋白的表达情况.结果 Twist1蛋白主要定位于肿瘤细胞核,而MMP-2蛋白主要定位于肿瘤细胞质.70例子宫内膜样腺癌组织中,Twist1的高表达率为65.7％,MMP-2的阳性率为67.1％.Twist1表达与临床分期、肿瘤子宫肌层浸润和卵巢转移有关(均P＜0.05),MMP-2表达与临床分期、肿瘤分级和肿瘤子宫肌层浸润有关(均P ＜0.05).相关性分析显示,Twist1表达与MMP-2表达呈显著正相关(r=0.328,P＜0.01).Twist1高表达患者的总生存率(80.4％)和无复发生存率(78.3％)均低于Twist1低表达患者(均100.0％,均P＜0.05).多因素分析显示,临床分期和淋巴结转移是影响子宫内膜样腺癌患者预后的独立危险因素(均P ＜0.05),而Twist1和MMP-2表达与子宫内膜样腺癌患者的预后无关(均P＞0.05).结论 子宫内膜样腺癌中Twist1和MMP-2的表达与肿瘤侵袭和转移有密切关系；MMP-2表达可能在一定水平上受到Twist1的调控.
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贝伐单抗对人肺癌A549细胞增殖和侵袭力的影响
目的：体外观察血管内皮生长因子（ VEGF）单克隆抗体贝伐单抗对人肺癌A549细胞增殖和侵袭力的影响，并初步探讨其可能的机制。方法以贝伐单抗处理A549细胞，采用细胞计数试剂盒8（ CCK?8）和Transwell法检测A549细胞增殖活性及侵袭能力，实时荧光定量PCR和Western blot检测A549细胞中基质金属蛋白酶2（ MMP?2）、基质金属蛋白酶9（ MMP?9）和肝细胞生长因子受体（ c?Met） mRNA和蛋白的表达水平。结果 CCK?8检测结果显示，贝伐单抗对A549细胞增殖活性的影响有双向作用。10μg／ml贝伐单抗处理A549细胞48 h和72 h的吸光度（A）值分别为0．79±0．10和0．90±0．18，对A549细胞增殖有抑制作用。100μg／ml贝伐单抗处理A549细胞48 h和72 h的A值分别为1．77±0．13和2．07±0．14，对A549细胞增殖有促进作用。侵袭实验显示，50μg／ml贝伐单抗组对A549细胞侵袭力的抑制作用强，其穿过膜细胞数为（16406．19±5674．23）个，明显低于对照组的（36108．68±6263．83）个，差异有统计学意义（P＜0．05）。实时荧光定量PCR检测显示，贝伐单抗处理A549细胞48 h对MMP?2、MMP?9和c?Met mRNA的表达均有双向调节作用。50μg／ml贝伐单抗对A549细胞中MMP?2和MMP?9 mRNA 表达的抑制作用强，其表达水平分别为0．13±0．08和0．13±0．06。10μg／ml贝伐单抗对A549细胞中c?Met mRNA表达的抑制作用强，其表达水平为0．18±0．04，明显低于对照组（ P＜0．01）。100μg／ml贝伐单抗对A549细胞中MMP?2、MMP?9和c?Met mRNA表达有促进作用，其表达水平分别为1．82±0．31、1．60±0．25和2．63±0．48，明显高于对照组（ P＜0．05）。10μg／ml 贝伐单抗对A549细胞中MMP?2和MMP?9 mRNA的抑制作用呈时间依赖性。 Western blot检测显示，贝伐单抗对A549细胞中MMP?2和c?Met蛋白表达有双向调节作用。100μg／ml贝伐单抗对A549细胞中MMP?2和c?Met蛋白表达有促进作用，其表达水平分别为1．07±0．09和0．98±0．06，明显高于对照组（P＜0．05）。50μg／ml贝伐单抗对MMP?2蛋白表达的抑制作用强，其表达量为0．11±0．04，明显低于对照组（ P＜0．01）。10μg／ml贝伐单抗对c?Met蛋白表达的抑制作用强，其表达水平为0．38±0．01，明显低于对照组（P＜0．01）。不同浓度贝伐单抗对A549细胞中MMP?9蛋白的表达影响均无统计学意义（ P＞0．05）。10μg／ml 贝伐单抗对A549细胞中MMP?2、MMP?9和c?Met蛋白表达的抑制作用随时间变化逐渐增强。结论一定浓度的贝伐单抗对A549细胞的增殖及侵袭力有明显的抑制作用，但较高浓度（100μg／ml）的贝伐单抗对A549细胞侵袭的抑制作用减弱，甚至对细胞增殖表现出促进作用，这可能与贝伐单抗对MMP?2和c?Met蛋白的非浓度依赖性抑制有关。
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ZR30蛋白靶向胶质瘤不同亚群细胞胞外信号蛋白发挥抑癌作用
目的 探讨人工合成的EFEMP1源性抑癌蛋白ZR30与表皮生长因子受体(EGFR)、Notch-1、Akt、基质金属蛋白酶2(MMP-2)的相关性及其对胶质瘤细胞生长、侵袭、血管生成和干性维持的影响,阐明ZR30的抑癌作用机制.方法 使用小麦胚芽无细胞系统合成体外蛋白ZR30.采用明胶酶谱法检测ZR30处理2～3 d后的U87和U251细胞中MMP-2的活性,Western blot检测ZR30处理2～3 d后的胶质瘤亚群细胞U251和U251NS中EGFR、p-Akt、Akt和Notch-1的表达.分别以10和50 ng／ml的ZR30处理U251细胞,以10、50和200 ng／ml的ZR30处理U251NS细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测ZR30对 U251和 U251NS细胞增殖的影响.将 U251-GFP 和 U251NS-RFP 细胞混合(1 ∶ 9)后,注入裸鼠颅内,分别于10和21 d后瘤内注射ZR30或磷酸盐缓冲液(PBS).提取各组裸鼠右侧大脑的 DNA,采用荧光定量聚合酶链反应( CQ-PCR)检测人类基因 hSPAG16、鼠基因mSpag16、GFP和RFP的拷贝数.观察各组裸鼠的生存情况,进行生存分析.结果 10、50 和100 ng／ml ZR30处理2 d后,U87和U251细胞培养液中的活性MMP-2水平均低于对照组. Western blot检测显示,ZR30能抑制U251细胞中EGFR、Notch-1和p-Akt蛋白的表达,以及U251NS细胞中Notch-1和p-Akt蛋白的表达,并可降低U251细胞对表皮生长因子刺激的响应. MTT检测结果 显示,ZR30处理U251和U251NS细胞2 d后,能抑制细胞增殖. CQ-PCR结果 显示,PBS组、180 ng ZR30组、700 ng ZR30组和1 800 ng ZR30组裸鼠的hSPAG16／mSpag16比值分别为3.67±2.82、1.18±0.97、1.75±1.55和1.38±1.17,180 ng ZR30组、700 ng ZR30组和1 800 ng ZR30组与PBS组比较均降低(均P＜0.05);GFP／RFP比值分别为1.97±0.80、1.97±0.85、1.48±0.71和1.73±0.77,各组间差异均无统计学意义(均P＞0.05). U251-GFP与U251NS-RFP细胞混合液移植后10 d治疗,PBS组和ZR30组裸鼠的中位生存时间分别为40.5和59.0 d;移植后21 d治疗,PBS组和ZR30组裸鼠的中位生存时间分别为57.0和74.5 d. ZR30治疗组裸鼠生存时间均显著延长(均P＜0.05).结论 ZR30通过抑制胶质瘤细胞中活性MMP-2、EGFR、p-Akt／Akt和Notch-1的表达,抑制胶质瘤细胞的生长、侵袭、血管生成和干性维持,显著延长胶质瘤原位移植瘤裸鼠的生存时间,对胶质瘤有治疗潜能.
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RNA干扰沉默基质金属蛋白酶2基因对卵巢癌OVCAR-3细胞诱导体外血管形成能力的影响
目的 探讨沉默基质金属蛋白酶2(MMP-2)基因对卵巢癌OVCAR-3细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,以及对细胞诱导的体外血管形成能力的影响.方法 合成特异性靶向基因的小干扰RNA (siRNA)并转染卵巢癌OVCAR-3细胞(MMP-2沉默组),以非特异性序列转染细胞作为阴性对照组,以培养液代替转染siRNA的试剂作为空白对照组；采用实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测转染后48 h MMP-2及VEGF的mRNA和蛋白表达水平,通过体外血管形成实验检测卵巢癌OVCAR-3细胞诱导的体外血管形成能力.结果 与阴性对照组相比,MMP-2沉默组转染48 h,OVCAR-3细胞MMP-2和VEGF mRNA表达量分别下降了78.8％和75.5％(P＜0.05),蛋白表达量分别下降了81.2％和78.3％(P＜0.05)；体外血管形成实验显示,沉默MMP-2基因后卵巢癌OVCAR-3细胞诱导的体外血管形成能力明显降低(P＜0.05).结论 沉默MMP-2基因可抑制卵巢癌细胞VEGF表达,并能够抑制卵巢癌细胞诱导的体外血管形成能力,抑制MMP-2基因有助于抗血管形成,可能成为卵巢癌基因治疗的新靶点.
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基质金属蛋白酶2在中国膀胱癌患者肿瘤组织中表达及其临床意义的Meta分析
目的：研究基质金属蛋白酶2（MMP-2）在中国膀胱癌患者肿瘤中的表达及其临床意义。方法对1998年至2014年国内期刊发表的相关原始文献进行Meta分析，以病例组与对照组的比值比（OR）值为效应指标。然后应用Meta分析软件RevMan 5.0对原始数据进行统计学处理，计算合并OR值及95%可信区间，同时绘制Meta分析森林图。结果有13篇文献纳入研究，总样本量为692例，膀胱癌组织与正常膀胱组织、浅表性膀胱癌组织与浸润性膀胱癌组织、低级别膀胱癌组织与高级别膀胱癌组织的OR值分别为45.83、0.22、0.31。膀胱癌组织MMP-2的阳性率高于正常膀胱组织，浸润性膀胱癌组织高于浅表性膀胱癌组织，高级别膀胱癌组织高于低级别膀胱癌组织（均P＜0.05）。结论 MMP-2的高表达在膀胱癌发生、发展中有一定作用，检测MMP-2的表达有助于了解膀胱癌的生物学特性，为指导临床治疗及评估预后提供帮助。
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基质金属蛋白酶-2和组织金属蛋白酶抑制因子-3在贲门癌中的表达及其临床意义
目的 研究基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及组织金属蛋白酶抑制因子-3(TIMP-3)在贲门癌中的表达及与病理分期间的关系.方法 115例贲门癌患者手术切除标本,以其中40例患者癌旁非肿瘤胃组织(离癌灶边缘>5 cm)为正常对照,二步法免疫组织化学检测MMP-2、TIMP-3的表达,分析二者表达与病理分期之间的关系;并通过Kaplan-Meier寿命表法分析与预后的关系;COX模型多因素分析贲门癌的独立预后因子.结果 MMP-2在贲门癌和癌旁对照组织阳性表达率分别为57.4%(66例)和40.0%(16例)(P<0.05),其表达与肿瘤大小、肿瘤浸润深度、淋巴结转移及病期正相关,与贲门癌患者预后呈负相关(P<0.05).TIMP-3在贲门癌和癌旁对照组织阳性表达率分别为48.7%(56例)和95.0%(38例)(P<0.05),其在贲门癌中的表达与肿瘤大小、肿瘤浸润深度、淋巴结转移及病期负相关,与患者预后正相关.结论 MMP-2表达增加及TIMP-3表达缺失,在贲门癌侵袭、转移中发挥重要作用.联合检测MMP-2与TIMP-3,有助于了解贲门癌的发展和评估贲门癌患者的预后.
关键词： 胃肿瘤 免疫组织化学 基质金属蛋白酶2 金属蛋白酶3组织抑制剂 -
同期放化疗对局部晚期非小细胞肺癌外周血基质金属蛋白酶2和转化生长因子β1的影响及其意义
目的 比较同期放化疗和放化序贯治疗对局部晚期非小细胞肺癌外周血基质金属蛋白酶2(MMP-2)、转化生长因子β1(TGF-β1)的影响.方法 2010年1月至2012年12月64例经病理确诊的ⅡB至ⅢB期的非小细胞肺癌患者通过抽签方法被随机分成放化同期治疗组(A组)和放化序贯治疗组(B组),每组32例患者,A组采用三维适形放疗及同期EP或TC方案化疗,B组接受三维适形放疗后序贯EP或TC方案化疗.在放疗前、后和完成放化疗后采用酶联免疫吸附法(ELISA)法检测MMP-2和TGF-β 1水平,比较两组MMP-2和TGF-β1动态变化情况.结果 A、B两组缓解率分别为90.6％(29/32)和68.8％(22/32)(x2=4.730 0,P=0.029 6);中位肿瘤进展时间(TTP)分别为9.1、8.2个月,差异无统计学意义(P=0.100 3);中位生存时间分别为17.8、15.9个月,1年OS率分别为65.05％、60.24％,2年OS率分别为49.45％、43.07％,两组之间总生存率差异有统计学意义(P=0.048 0).在放疗前,A组和B组的MMP-2分别为(276.5±98.2) μg/ml和(263.9±103.5) μg/ml,差异无统计学意义(t=0.499 6,P=0.619 1),放疗后分别为(242.1±53.2) μg/ml和(298.7±68.4) μg/ml,差异有统计学意义(t=3.694 9,P=0.005 0),治疗结束后分别为(60.5±24.4) μg/ml和(75.2±30.7) μg/ml,差异有统计学意义(t=2.120 5,P=0.038 0);治疗前,TGF-β1分别为(1 624.3±454.2)ng/ml和(1 564.9±517.8)ng/ml,差异无统计学意义(t=0.208 6,P=0.835 4),放疗后分别为(1 383.5±469.3) ng/ml和(1 785.3±412.6)ng/ml,差异有统计学意义(t=3.637 3,P=0.006 0),治疗结束后分别为(610.5±215.4)ng/ml和(750.3±263.7) ng/ml,差异有统计学意义(t=2.322 6,P=0.023 5).结论 同期放化疗能够有效拮抗放射诱导的局部晚期肺癌外周血MMP-2和TGF-β1的升高.
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热休克蛋白90α在人类肝癌细胞外的表达及其对侵袭、迁移能力的影响
目的 探讨细胞外热休克蛋白90α(HSP90d)参与肝癌细胞转移的可能分子机制.方法 采用免疫印迹法检测HSP90 α在低、高转移性肝癌MHCC97-L和MHCC97-H细胞外的表达.选取高转移潜能MHCC97-H细胞,应用不穿透细胞膜的小分子抑制剂抑制细胞外HSP90α表达,体外侵袭实验观察细胞侵袭、迁移能力的变化,明胶酶谱法分析基质金属蛋白酶2(MMP-2)活性的改变.免疫印迹和免疫共沉淀法检测细胞外辅助分子伴侣HSP70和MMP-2的表达及其与HSP90α的相互作用.利用RNA干扰技术下调细胞HSP70表达,观察细胞外HSP90 α与MMP-2相互作用及其细胞转移潜能的变化.结果 HSP90α在不同转移潜能肝癌细胞内外均表达,且与肝癌细胞转移潜能呈正相关.MHCC97-H细胞经特异性HSP90抑制剂二甲氨基乙氨基-17-去甲氧基格尔德霉素-N-氧化物(DMAG-N-oxide)作用24 h后,穿过上室基底膜的细胞数较未处理组和空白对照组明显下降(P＜0.01),分别为(28.11±3.56)、(80.12±4.16)、(82.24±4.12)个.体外侵袭实验显示,穿过Matrigel人工基底膜的细胞数低于未处理组和空白对照组,分别为(36.54±4.12)、(95.12±3.48)、(101.11±3.36)个,差异有统计学意义(P=0.017),并伴有细胞外MMP-2活性减低.HSP70和MMP-2均可在MHCC97-H细胞外表达,且能与HSP90α相互结合.小分子干扰RNA (siRNA)能有效抑制细胞HSP70表达,MHCC97-H细胞外HSP90α和MMP-2相互作用减弱,MMP-2活性下降,细胞侵袭、迁移能力受抑制.同时联合应用MMP-2抑制剂,具有协同抑制效应.结论 细胞外HSP90α可能通过与HSP70形成伴侣复合体介导MMP-2成熟活化,增强肝癌细胞侵袭、迁移运动,提示其可能是潜在的对肝癌转移实施防治的靶点.
关键词： 癌 肝细胞 HSP90热休克蛋白质类 HSP70热休克蛋白质类 基质金属蛋白酶2 肿瘤转移 -
Rap1 GTP酶激活蛋白1、基质金属蛋白酶2与基质金属蛋白酶9在结直肠癌中的表达及其意义
目的 探讨Rap1 GTP酶激活蛋白1(Rap1GAP)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)与基质金属蛋白酶9(MMP-9)在结直肠癌中的表达及其与临床病理特征的关系.方法 采用免疫组织化学法检测Rap1GAP、MMP-2与MMP-9在结直肠癌、绒毛状腺瘤、管状腺瘤及正常结直肠组织中的表达,分析各组间表达的差异及与临床病理参数的关系.结果 Rap1 GAP在结直肠癌、绒毛状腺瘤、管状腺瘤和正常结直肠组织中的阳性率分别为30.4 ％(14/46)、77.8 ％(14/18)、69.6％(16/23) 、95.2％(20/21),各组间表达差异有统计学意义(x 2=30.659,P=0.000);MMP-2的阳性率分别为71.7％(33/46)、55.6％(10/18)、52.2 ％(12/16)、9.5 ％(2/21),各组间表达差异有统计学意义(x2=22.459,P=0.000);MMP-9的阳性率分别为76.1％(35/46)、61.1％(11/18) 、56.5％(13/23)、14.3 ％(3/21),各组间表达差异有统计学意义(x 2=22.643,P=0.000).在结直肠癌中,Rap1 GAP阳性率与肿瘤分化程度有关(x2=5.275,P=0.022),与患者性别、年龄及淋巴结转移无关(均P＞ 0.05);MMP-2、MMP-9阳性率与淋巴结转移有关(x2=6.661,P=0.010;x2=8.475,P=0.040),与患者性别、年龄、分化程度均无关(均P＞ 0.05).在结直肠癌中,Rap1 GAP的表达与MMP-2及MMP-9呈负相关(r=-0.424,P=0.003;r=-0.294,P=0.048);MMP-2和MMP-9的表达无相关性(r=0.101,P=0.505).结论 Rap 1GAP、MMP-2与MMP-9在结直肠癌的恶性生物学行为中起重要作用.在结直肠癌中,Rap1 GAP与MMP-2和MMP-9的表达呈负相关,三者相互作用影响着结直肠癌的发生、发展.
