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小干扰RNA沉默基质金属蛋白酶-2基因对卵巢癌细胞恶性行为的影响
目的 探讨靶向基质全属蛋白酶-2( MMP-2)基因的RNA干扰(RNAi)技术对卵巢癌OVCAR-3细胞MMP-2的沉默作用,以及沉默MMP-2基因对OVCAR-3细胞生长、黏附、侵袭和迁移能力的影响.方法 合成特异性靶向MMP-2基因的小干扰RNA(siRNA)并转染卵巢癌OVCAR-3细胞,以非特异性序列转染细胞作为阴性对照组,以培养液代替siRNA转染细胞作为空白对照组,采用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测转染后24、48和72 h MMP-2 mRNA和蛋白的表达水平,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线,利用Transwell、划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力.结果 与阴性对照组相比,OVCAR-3细胞在转染siRNA-MMP-2后24、48和72 h MMP-2 mRNA表达量分别下降了73.8％、78.8％和78.4％(均P＜0.05),蛋白表达量分别下降了72.6％、81.2％和76.4％(均P＜0.05),以48h作用强；细胞生长曲线显示细胞生长无明显变化(P＞0.05)；60 min和90 min时的黏附抑制率分别为55.0％和44.8％(均P＜0.05)；细胞的侵袭和迁移能力分别下降29.7％和35.8％(均P＜ 0.05).结论 siRNA介导的MMP-2基因沉默能明显抑制OVCAR-3细胞的黏附、侵袭和迁移能力,而对其生长无明显影响,MMP-2基因有可能成为卵巢癌基因治疗的重要靶点.
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基质金属蛋白酶-2及其抑制剂TIMP-2在卵巢浆液性肿瘤中表达的临床意义
目的 探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其抑制剂(TIMP-2)的表达与卵巢浆液性肿瘤侵袭和转移的关系.方法 应用流式细胞术(FCM)定量检测MMP-2和TIMP-2在45例卵巢浆液性肿瘤中的表达.结果 MMP-2和TIMP-2在卵巢浆液性癌中的表达明显高于卵巢浆液性囊腺瘤,差异有统计学意义(P<0.05),且与卵巢浆液性癌组织分级和临床分期密切相关(P<0.05).MMP-2和TIMP-2在卵巢浆液性癌中的表达密切相关(P<0.05).结论 MMP-2和TIMP-2的高表达促进了卵巢浆液性癌的侵 袭和转移,MMP-2和TIMP-2的表达有相关性.提示二者共同检测可作为诊断和预后的参考指标.
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MMP-2、MMP-9在胃癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨基质金属蛋白酶(MMP)中,MMP-2、MMP-9在胃癌组织中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学SP法检测96例胃癌组织及癌旁正常组织中MMP-2、MMP-9的表达.结果 胃癌组织中MMP-2、MMP-9阳性表达率分别为72.9%(70/96)及66.7%(64/96),均明显高于癌旁正常组织(30.2%和31.3%)(P值均<0.001);两者的表达均与肿瘤发生部位、浸润深度、临床分期及淋巴结转移呈明显的正相关(P值均<0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤大小和分化程度无显著相关性(P值均>0.05).结论 MMP-2、MMP-9高表达与胃癌的临床病理特点和转移、预后密切相关,可作为判定胃癌生物学行为和预后的重要指标.
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人类乳腺癌组织中血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶-2的表达
目的 探讨人乳腺癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达及临床意义.方法 应用免疫组织化学SP法检测51份乳腺癌手术切除标本和10份正常乳腺组织标本中VEGF和MMP-2表达情况.结果 51份乳腺癌组织中VEGF和MMP-2表达分别为37份(72.55%)和31份(60.78%).10份正常乳腺组织均未见阳性表达.VEGF和MMP-2阳性表达在组织学Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级之间差异有统计学意义(P＜0.05),有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组(P＜0.05).而VEGF和MMP-2表达与乳腺癌患者年龄、激素受体状态无明显相关性(P＞0.05).结论 VEGF和MMP-2可能在乳腺癌的发生、发展中发挥作用,二者之间存在某种调控关系,协同参与了乳腺癌的浸润及转移.
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阿加曲班对大鼠脑出血后血肿周围基质金属蛋白酶2表达的影响
目的 探讨阿加曲班对大鼠脑出血后血肿周围组织基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的影响. 方法 采用自体血注入法建立大鼠脑出血模型,于脑出血后3 h,颅内原位注入阿加曲班(0.5 μg/ml).分别用Western blot 和免疫组化方法检测血肿周围组织MMP-2的表达,伊文思蓝(EB)测血脑屏障(BBB)通透性,干湿重法测脑组织含水量,并与假手术组相比较. 结果 在脑出血后24 h,同侧基底核MMP-2的表达至高峰,脑出血组、等渗盐水组和阿加曲班干预组的MMP-2阳性细胞数分别为21.8±0.9、3.2±0.4和14.9±1.0;EB含量分别为(20.8±0.9)、(4.6±0.7)和(15.4±0.9)ng/mg;脑组织含水量分别为(84.3±1.1)、(78.7±1.5)和(81.2±1.6)%.脑出血组与等渗盐水组及阿加曲班干预组同侧基底核的MMP-2表达、 EB含量和脑组织含水量比较,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05). 结论 凝血酶可能通过促进MMP-2的表达,诱导脑出血后脑水肿的形成,阿加曲班能明显减轻大鼠脑出血后血 - 脑屏障损伤和血肿周围脑组织的水肿.
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人参皂甙Rg1对脑缺血-再灌注大鼠基质金属蛋白酶2和9表达的影响
目的 探讨人参皂甙Rg1对脑缺血-再灌注大鼠脑组织基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响.方法 取健康雄性SD大鼠60只.将其随机分为假手术组,模型组,尼莫地平组,人参皂甙Rg1 10、20、40 mg/kg组,每组10只.采用线栓法栓塞2 h制作大脑中动脉模型.4个药物组于术前5 d至取材当日,每日清晨于腹腔注射人参皂甙Rg1 (10、20、40 mg/kg)及尼莫地平1 mg/kg(均溶于1.5 ml的等渗盐水中),其余各组于同一时间点注射1.5 ml等渗盐水,1次/d.观察再灌注24 h后神经功能缺损评分;应用免疫组化、免疫印迹法检测海马CA1区MMP-2、MMP-9的表达情况.结果 ①假手术组、模型组,尼莫地平组和人参皂甙Rg1 10、20、40 mg/kg组神经功能缺损评分,分别为0、2.8±0.9、1.5±0.7、2.1±0.9、1.5±0.7及1.3±1.1,差异均有统计学意义(P＜0.05).人参皂甙Rg1 20、40 mg/kg组与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).人参皂甙Rg1 10、20、40 mg/kg组与尼莫地平组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).②免疫组化和免疫印迹结果 显示各组均有MMP-2、MMP-9的表达,其中假手术组仅有少量表达,模型组表达量多.与模型组比较,人参皂甙Rg1 10、20、40 mg/kg组及尼莫地平组MMP-2、MMP-9的表达量减少,差异有统计学意义(P＜0.05);与尼莫地平组比较,人参皂甙Rg1 10 mg/kg组的MMP-2、MMP-9表达量显著增高,40 mg/kg组显著降低(P<0.05),而20 mg/kg组则差异无统计学意义(P>0.05).结论 人参皂甙Rg1防治大鼠脑缺血-再灌注损伤的机制可能与抑制脑组织MMP-2、MMP-9表达有关,且以高剂量组效果较好.
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人脑胶质瘤转录激活因子3、maspin和基质金属蛋白酶2蛋白表达及意义
目的 探讨人脑胶质瘤中转录激活因子3(ATF3)、乳腺丝氨酸蛋白酶抑制因子(maspin)和基质金属蛋白酶2(MMP2)的蛋白表达情况及其与胶质瘤发展的相关性.方法 采用免疫组织化学染色法、Western blot法检测100例脑胶质瘤患者和13例健康脑组织中ATF3、maspin和MMP2的蛋白表达相对量.结果 ATF3在胶质瘤中的表达(72.0%)明显高于健康脑组织(15.4%)(P<0.05),MMP2在胶质瘤中的表达(76.0%)明显高于健康脑组织(7.7%)(P<0.05),maspin在胶质瘤中的表达(53.0%)明显低于健康脑组织(100.0%)(P<0.05).随胶质瘤病理级别的增高,ATF3和MMP2的表达量逐级增高,而maspin表达量逐级递减.ATF3蛋白表达与maspin蛋白表达呈负相关(r=-0.457,P<0.01),ATF3蛋白表达与MMP2蛋白表达呈正相关(r=0.553,P<0.01),maspin蛋白表达与MMP2蛋白表达呈负相关(r=-0.551,P<0.01).结论 ATF3、maspin和MMP2三者间的表达有相关性,ATF3、MMP2高表达及maspin低表达与胶质瘤的发生密切相关,它们可能在胶质瘤发生发展、侵袭转移过程中发挥重要作用.
关键词： 转录激活因子3 乳腺丝氨酸蛋白酶抑制因子 基质金属蛋白酶2 胶质瘤 -
基质金属蛋白酶2及血管内皮生长因子皮肤鳞状细胞癌中的表达及其临床意义
目的 探讨皮肤鳞状细胞癌(简称鳞癌)中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达及其与肿瘤分化和淋巴结转移的关系.方法 用ABC免疫组化技术检测50例皮肤鳞癌标本(其中高分化鳞癌34例,低分化鳞癌16例,伴有淋巴结转移14例)中MMP-2、VEGF表达.结果 MMP-2、VEGF主要表达在癌巢中心,表达阳性率分别为76%、72%;二者在低分化鳞癌中的表达明显高于高分化者(P<0.05),且其表达越高,淋巴结转移率越高(P<0.05).结论 皮肤鳞癌中MMP-2和VEGF表达与其分化程度及淋巴结转移有关.
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MMP-2及VEGF在尖锐湿疣组织中的表达
目的 探讨基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA在尖锐湿疣组织中表达及其意义.方法 采用荧光定量聚合酶链反应法测定24例尖锐湿疣患者皮损和19例健康对照者皮肤(包皮)中MMP-2 mRNA和VEGFmRNA的定量表达及其临床意义.结果 尖锐湿疣患者皮损中MMP-2 mRNA和VEGFmRNA的表达明显高于健康对照者皮肤的表述(均P＜0.01).尖锐湿疣患者皮损中MMP-2 mRNA的表达与VEGF mRNA的表达呈显著相关性(r=0.592 63,P＜0.01).结论 MMP-2 mRNA和VEGF mRNA的表达上调可能与尖锐湿疣发生、发展有关.
关键词： 尖锐湿疣 基质金属蛋白酶2 血管内皮生长因子 荧光定量聚合酶链反应 -
基质金属蛋白酶及组织金属蛋白酶抑制剂在鼻腔鳞状细胞癌中的表达及意义
目的 研究基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)2、MMP-9及组织金属蛋白酶抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP)1、TIMP-2在鼻腔鳞状细胞癌中的表达及意义.方法 应用免疫组化S-P法检测50例鼻腔鳞状细胞癌和50例中鼻甲或下鼻甲组织中MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的表达,并分析它们的表达与临床病理结果间的关系.以SPSS 12.0软件对数据进行统计学分析.结果 鼻腔鳞状细胞癌组织和中鼻甲或下鼻甲组织中MMP-2阳性表达检出率分别为52.0%(26/50)、28.0%(14/50),差异有统计学意义(x2=6.00,P＜0.05);MMP-9阳性表达检出率分别为58.0%(29/50)、10.0%(5/50),差异有统计学意义(x2=12.80,P＜0.05);TIMP-1阳性表达检出率分别为74.0%(37/50)、56.0%(28/50),差异无统计学意义(x2=0.51,P＞0.05);TIMP-2阳性表达检出率分别为26.0%(13/50)、20.0%(10/50),差异无统计学意义(x2=3.35,P＞0.05).结论 鼻腔鳞状细胞癌的发生、发展与MMP-2、MMP-9表达有关系,MMP与TIMP比例失衡在判断鼻腔鳞状细胞癌侵袭性及预后中可能有一定意义.
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RNA干扰沉默Aurora-A基因抑制喉癌Hep-2细胞生长的实验研究
目的 研究RNA干扰沉默Aurora-A基因后对喉癌Hep-2细胞体外体内生长的抑制作用.方法 构建靶向Aurora-A的小干扰RNA(siRNA)表达质粒并转染喉鳞癌Hep-2细胞株,采用CCK-8实验、Transwell实验、软琼脂克隆形成实验和裸鼠体内接种观察Aurora-A沉默后Hep-2细胞的增殖、侵袭和克隆形成能力以及体内肿瘤生长情况,Western blot和免疫组化检测参与细胞黏附侵袭的重要因子黏着斑激酶和基质金属蛋白酶-2的表达情况.结果 Hep-2细胞转染Aurora-A siRNA 后,siRNA-3实验组的Aurora-A蛋白的表达下降了52％,CCK-8实验中siRNA-3组细胞的平均(x±s)吸光度值为(3.268±0.106),低于Hep-2细胞组的(3.722 ±0.152),差异有统计学意义(F=17.634,P＜0.01)；Transwell实验显示,siRNA-3组每个视野的平均侵袭细胞数目为(110.0±18.0)个,较Hep-2组的(236.0 ±26.0)个减少,两组差异有统计学意义(F=26.462,P＜0.01)；克隆形成实验中,siRNA-3组平均集落数目(31.0±6.6)个,低于Hep-2组平均细胞集落数目(104.0±14.0)个(F=75.321,P＜0.001).接种后,体内移植瘤生长受到抑制,siRNA-3组的肿瘤平均体积为(127.77±174.83) mm3,低于Hep-2组的肿瘤平均体积(837.26±101.80) mm3(F=28.187,P＜0.001).在体外和体内黏着斑激酶和基质金属蛋白酶-2的表达也下降.结论 抑制Aurora-A基因后,通过降低黏着斑激酶和基质金属蛋白酶-2的表达,抑制Hep-2细胞的生长,减弱肿瘤细胞的恶性侵袭性,Aurora-A可以成为喉鳞癌治疗良好的干预靶点.
关键词： 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 喉肿瘤 癌 鳞状细胞 RNA 小分子干扰 粘着斑蛋白酪氨酸激酶类 基质金属蛋白酶2 -
基质金属蛋白酶2和9在不同部位的中耳胆脂瘤的表达
目的 探讨基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)2和9在不同部位的中耳胆脂瘤的表达差异及其骨破坏作用.方法 采用免疫组化方法 检测上鼓室胆脂瘤18例、鼓室窦胆脂瘤16例、胆脂瘤患者外耳道皮肤10例、正常外耳道皮肤10例中MMP-2和MMP-9的表达.结果 MMP-2、MMP-9在上鼓室胆脂瘤和鼓室窦胆脂瘤上皮各层细胞中均有表达,基底层表达强;鼓室窦胆脂瘤较上鼓室胆脂瘤染色深.正常外耳道皮肤和胆脂瘤患者外耳道皮肤有非常浅的表达,主要分布在基底层细胞的胞质中.MMP-2、MMP-9在正常外耳道皮肤和胆脂瘤患者外耳道皮肤的表达差异无统计学意义(P值均<0.05);上鼓室胆脂瘤和鼓室窦胆脂瘤中MMP-2、MMP-9的表达均高于正常外耳道皮肤和胆脂瘤患者外耳道皮肤,差异有统计学意义(P值均<0.05);鼓室窦胆脂瘤中MMP-2、MMP-9的表达高于上鼓室胆脂瘤,差异具有统计学意义(P值均>0.05).胆脂瘤上皮中MMP-2和MMP-9的表达呈显著正相关(r=0.974,P<0.01),MMP-2的表达高于MMP-9.MMP-2和MMP-9的表达与听小骨的破坏程度呈正相关(r=0.789及0.803,P值均<0.01).结论 胆脂瘤型中耳炎骨质破坏过程中MMP起重要作用.鼓室窦胆脂瘤的骨质破坏程度较上鼓室胆脂瘤重,更具侵袭性,更容易产生颅内外并发症.
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加减大黄蛰虫丸抑制视网膜色素上皮细胞增殖、移行及其机制研究
目的 观察加减大黄蛰虫丸对人视网膜色素上皮(RPE)细胞(CRL-2302)增殖、移行以及表达血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)的影响,了解其干预RPE细胞参与脉络膜新生血管(CNV)形成的途径及初步机制.方法 MTS比色法观察加减大黄蛰虫丸对VEGF诱导的CRL-2302细胞增殖的影响;Trranswell小室检测加减大黄蛰虫丸对CRL-2302细胞移行的影响;Western Blot和实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,分别检测加减大黄蛰虫丸对CRL-2302细胞表达VEGF、基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白和mRNA的影响.结果 MTS法显示,0.05、0.1和0.2g/ml浓度的加减大黄蛰虫丸时VEGF诱导的CRL-2302细胞增殖具有抑制作用;Transwell小室实验显示,加减大黄蛰虫丸浓度为0、12.5、25和50mg/ml时CRL-2302细胞移行数分别为198.33±19.86、121.67±14.05、62.33±11.24和18.67±4.51;50、100mg/ml浓度的加减大黄蛰虫丸具有抑制CRL-2302细胞VEGF、MMP-2蛋白和mRNA表达的作用,200mg/ml浓度的加减大黄蛰虫丸具有抑制CRL-2302细胞VEGF、MMP-2蛋白和MMP-2 mRNA表达的作用.结论 加减大黄蛰虫丸可能通过抑制CRL-2302细胞增殖、移行的途径抑制其参与CNV形成,其机理可能与抑制CRL-2302细胞VEGF、MMP-2的表达有关.
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羟基磷灰石表面改性人工角膜支架植入兔角膜后基质金属蛋白酶-2及胶原纤维的表达
目的 探讨经羟基磷灰石(HA)表面改性的三襻式人工角膜钛支架植入兔角膜板层后基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及胶原纤维的表达,评价其生物相容性.方法 实验研究.24只新西兰白兔采用单纯随机抽样方法随机分为3个组,HA-Ti支架组(9只)及Ti支架组(9只)分别于右眼角膜板层植入HA表面改性后的三襻式人工角膜钛支架(HA-Ti)及人工角膜钛支架(Ti),6只仅制备囊袋不植入支架作为对照组.观察人工角膜支架的生物相容性及新生血管生长情况,并分别于术后2周、4周、16周取材,角膜组织行苏木素-伊红染色、并用免疫组织化学方法检测各组角膜基质中MMP-2的表达并进行半定量分析；用苦味酸天狼猩红苏木素染色的方法观察支架植入后对胶原的影响.多组间比较应用单因素方差分析,组间两两比较应用SNK-q检验.结果 观察期间Ti-HA支架组及Ti支架组均未见角膜感染、溶解、支架排出.早期实验组角膜有水肿及新生血管长入,HA-Ti支架组新生血管明显多于Ti支架组.组织学观察术后2周,植入HA-Ti支架组角膜基质内2周可见少量炎性细胞(中性粒细胞及噬酸细胞为主),此后逐渐减少.支架周围2周时可看到较多成纤维细胞,16周时成纤维细胞减少,粉染的胶原纤维增多.术后2周,HA-Ti支架组、Ti支架组及对照组MMP-2阳性细胞IOD值分别为103.729±15.112、84.439±13.699、69.310±13.078,组间比较差异有统计学意义(F =6.083,P＜0.05),但Ti支架组和对照组差异无统计学意义(F=3.209,P＞0.05)；4周时3个组MMP-2阳性细胞IOD值逐渐降低,分别为88.963±9.017、53.005±4.605、49.326±4.443,组间比较差异有统计学意义(F=47.074,P＜0.01)；16周时3个组MMP-2阳性细胞IOD值分别为72.176±12.815、50.014±8.813、46.734±11.670,组间比较差异有统计学意义(F=6.079,P＜0.05).偏光镜下观察见角膜组织内4周有大量绿色的Ⅲ型胶原纤维及黄红色Ⅰ型胶原纤维,16周时角膜内主要为鲜红色的Ⅰ型胶原纤维,仍有少量的Ⅲ型胶原纤维.结论 兔角膜植入HA-Ti支架引起MMP-2活化,持续高表达并未造成对角膜的溶解；其影响周围角膜细胞外基质中Ⅲ型胶原纤维向Ⅰ型胶原纤维的转化,利于支架稳定,HA-Ti支架具有较好的生物相容性.
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泪腺腺样囊性癌中基质金属蛋白酶-2,9的表达及其意义
目的 探讨泪腺腺样囊性癌(ACC)组织中基质金属蛋白酶(MMP)-2及MMP-9的表达与泪腺ACC生物学行为之间的相关性.方法 实验研究.1991年1月至2011年6月天津医科大学第二医院眼科病理室共保存泪腺ACC手术标本60例,男性25例,女性35例,年龄29 ～ 62岁,中位年龄38岁.其中腺样-管状型36例,实体型24例.初发瘤45例,复发瘤(二次或多次复发)15例.另外选择同期行手术切除的10例多形性腺瘤患者的瘤旁正常泪腺组织作为对照组.应用免疫组织化学SP法检测各组织中CD105、MMP-2及MMP-9的表达情况.采用CD105免疫组织化学染色标记微血管内皮,计数肿瘤微血管密度(MVD).分别采用方差分析、x2检验和Spearman等级相关性检验对研究数据进行分析.结果 泪腺ACC组织中MVD值[(17.71 ±5.63)个/100倍视野]、MMP-2(45.0％,27/60)、MMP-9(55.0％,33/60)阳性表达率均明显高于正常对照组[MVD值为(0.70±0.95)个/100倍视野,MMP-2及MMP-9无阳性表达](t'=2.039,P＜0.05;x2 =5.550,P＜0.05；x2=8.315,P＜0.01).实体型肿瘤的MVD值[(26.12 ±5.32)个/100倍视野]、MMP-2(62.5％,15/24)、MMP-9(79.2％,19/24)阳性表达率均明显高于筛管型肿瘤(t'=2.060,x2=4.950,x2=9.439,P值均＜0.05),复发瘤均明显高于初发瘤(t'=2.129,x2=9.899,x2=8.103;P值均＜0.05).Spearman相关性分析结果显示,MVD值与MMP-2、MMP-9阳性表达率均有相关性(rs=0.636、0.524,P值均＜0.05).结论 MVD值及MMP-2、MMP-9在泪腺ACC组织中的阳性表达率较高,且与病理类型及复发相关.检测MVD值及MMP-2、MMP-9的表达情况对于判断泪腺ACC恶性程度、复发与转移行为有指导意义.
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改良钛支架人工角膜植入术后基质金属蛋白酶及其组织抑制物在兔角膜组织的表达
目的 探讨改良钛支架人工角膜植入兔眼术后,角膜组织基质金属蛋白酶( MMP-2)及其抑制物(TIMP-2)的表达与角膜溶解的关系.方法 实验研究.人工角膜支架改良:钛支架表面喷砂后用羟基磷灰石涂层(HA/SB-Ti).将20只正常新西兰白兔分3组每组6只,其中A组、B组右眼角膜板层分别植入改良支架和对照支架(SB-Ti),C组仅做角膜板层切口,余2只为D组做空白对照.同样方法分组20只兔碱烧伤角膜模型,分别为E、F、G、H组.1个月、3个月后取材行免疫组织化学检测MMP-2、TIMP-2在不同组别的表达；为去除碱烧伤因素影响,另取24只正常动物模型改良支架植入后按时间分组,分别为2周组、1月组、3月组、5月组,每组6只,2只正常动物为空白对照组,用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹法(Western blot)检测MMP-2、TIMP-2mRNA及蛋白的表达.5月组动物及2只碱烧伤模型动物,支架植入3个月后植入镜柱.实验数据采用t检验进行统计学分析.结果 F组有一例出现角膜溶解的并发症.免疫组织化学检查结果:A与B及E与F比较MMP-2表达有统计学意义(t=12.05,2.93,12.00,3.78；P＜0.05).于2周、1个月、3个月、5个月取材后,做RT-PCR、Western blot检测,MMP-2 mRNA及MMP-2蛋白表达从支架植入开始升高,1个月达到高峰,然后下降,仅2周与3个月MMP-2蛋白表达比较无统计学意义(t=2.104,P＞0.05).而TIMP-2 mRNA及TIMP-2蛋白表达在支架植入后有波动,然后逐渐升高,TIMP-2 mRNA除1个月与正常角膜组比较无统计学意义(t=1.878,P=0.0972).结论 改良后的人工角膜由于生物活性提高抑制了MMP-2的过度表达,MMP-2、TIMP-2表达随时间的变化规律可能为临床治疗并发症提供新的方法.
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健康青年正常牙本质中基质金属蛋白酶2的定量检测初探
目的 定量检测青年人群正常牙本质中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的含量及分布情况.方法 选择离体前磨牙30颗和第三磨牙27颗(患者年龄20 ～ 30岁),纵切成1.5 mm厚的牙本质片,磨除釉质后将冠部牙本质分成浅层和深层两部分,分别制备成牙本质粉,脱矿、提取蛋白后利用液相芯片技术定量检测MMP-2含量.结果 青年人群前磨牙牙本质浅层和深层MMP-2分别为(0.022±0.006)和(2.087±0.090) ng/mg,磨牙牙本质浅层和深层MMP-2含量分别为(0.336±0.037)和(3.312±0.308) ng/mg;各牙位深层牙本质MMP-2含量均显著高于浅层,磨牙同层次牙本质MMP-2含量均显著高于前磨牙(P＜0.05).结论 健康青年正常牙本质中含MMP-2,不同牙位及牙本质层次MMP-2含量不同.
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转化生长因子β1/细胞外信号调节激酶/基质金属蛋白酶通路对腺样囊性癌侵袭和迁移的影响
目的 探讨转化生长因子β1/细胞外信号调节激酶/基质金属蛋白酶2(TGF-β1/ERKl/2/MMP-2)通路在腺样囊性癌(ACC)侵袭和迁移过程中的作用及机制.方法 以腺样囊性癌ACC-2细胞株为研究对象.用转化生长因子β1(TGF-β1)以及ERK通路抑制剂UO126处理ACC-2细胞.MTT检测ACC-2细胞的增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力,Westem blot蛋白印迹检测ACC-2细胞中ERKI/2的活化及MMP-2的表达情况,实时荧光定量聚合酶链反应检测ACC-2细胞中MMP-2的mRNA的表达情况.结果 TGF-β1及UO126干预后,ACC-2细胞增殖能力无明显变化;TGF-β1刺激可增强ACC-2细胞迁移、侵袭能力,增加ACC-2细胞p-ERKI/2和MMP-2蛋白以及MMP-2 mRNA的表达.而UO126阻断ERK磷酸化后,抑制了TGF-β1刺激的增强作用,ACC-2细胞的迁移、侵袭能力降低,MMP-2蛋白和mRNA的表达均下降.结论 TGF-β1/ERKl/2/MMP-2通路参与了人唾液腺ACC侵袭和迁移能力的调节.TGF-β1可通过上调ERK1/2,继而上调MMP-2,促进人唾液腺ACC细胞的侵袭和迁移能力,ERKl/2可能成为人唾液腺ACC侵袭防治的新靶点.
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透明质酸钠对颞下颌关节骨关节病患者关节滑液中基质金属蛋白酶2、3的影响
目的 研究颞下颌关节(TMJ)上腔注射透明质酸钠(SH)治疗颞下颌关节骨关节病(TMJOA)前后关节滑液中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-3含量的变化,探讨SH治疗TMJOA的机制.方法 将30例TMJOA患者随机分成关节腔冲洗加SH治疗组和单纯关节腔冲洗组两组,6例志愿者为对照组.观察两种方法治疗前后关节滑液中MMP-2、3含量的变化.结果 冲洗加SH组的临床疗效优于单纯关节腔冲洗组(开口度比较P<0.01,VAS比较P<0.05);无症状志愿者中1例检测出少量的MMP-2(31.12μg/L)和MMP-3(13.32μg/L);治疗后冲洗加SH组比单纯关节腔冲洗组MMP-2、3含量明显降低(P<0.01).结论 SH可能通过降低TMJOA患者关节滑液中的MMP-2、3水平,减缓了关节软骨基质破坏速度,从而发挥对TMJOA的治疗作用.
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沉默c-myc基因对成釉细胞瘤hTERT+-AM永生化细胞株中基质金属蛋白酶表达及侵袭能力的影响
目的 探讨沉默癌基因c-myc对人成釉细胞瘤细胞株hTERT+-AM的基质金属蛋白酶(MMP)表达及细胞侵袭力的影响.方法 利用慢病毒载体Lenti-shc-myc-eGFP/puro稳定转染hTERT-AM细胞,成功构建c-myc沉默稳转细胞株.利用定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中c-myc、MMP-2、MMP-9的mRNA表达情况.蛋白印迹法(Western blot)检测细胞中c-myc、MMP-2、MMP-9的蛋白表达情况,利用Transwell实验检测其迁移侵袭能力的变化.所有数据采用SPSS 13.0统计软件包进行统计学分析.结果 沉默c-myc基因后hTERT+-AM细胞中c-myc的mRNA相对表达量为0.41±0.02,下降约60％ (LSD-t =-0.591,P＜0.001),而其蛋白的表达也下调约50％ (LSD-t =-0.461,P＜0.001),MMP-2、MMP-9的mRNA相对表达量分别为0.79±0.05和0.76±0.01,均下降约20％(LSD-tMMP-2 =-0.206,LSD-tMMP-9 =-0.242,P＜0.001),而MMP-2、MMP-9的蛋白表达均约下调了50％(LSD-tMMP-2=-0.257,LSD-tMMP-9=-0.261,P＜0.001),细胞迁移(-x±s=24.9±4.5,LSD-t=-17.000,P=0.021)、侵袭(-x±s=10.8±4.1,LSD-t =-22.250,P=0.011)能力均下降.结论 c-myc基因参与人成釉细胞瘤AM局部侵袭的调节,沉默c-myc基因后,继而下调MMP-2、MMP-9,抑制AM细胞的迁移和侵袭能力,c-myc可能成为人成釉细胞瘤AM侵袭防治的新靶点.
