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海洋放线菌乙酰CoA连接酶的克隆
克隆稀有海洋放线乙酰CoA连接酶合成基因的基因片段.根据Salinispora arenicola CNS-205的核苷酸序列保守区设计两对乙酰CoA连接酶特异性引物,以其总DNA为模板,采用PCR的方法扩增得到了包含乙酰CoA连接酶的完整的基因片段,并将该片段成功插入到克隆载体pUC-18中.将重组质粒进行酶切验证并在检测机构中验证测序结果正确,成功地获得了稀有海洋放线菌Salinispora arenicola的乙酰CoA连接酶合成基因的基因片段,为进一步研究该基因的功能奠定了基础.
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海洋放线菌Streptomyces sp.SCSIO1934中次生代谢产物的分离和鉴定
目的:从1株来源于中国南海沉积环境的海洋链霉菌SCSIO 1934的发酵产物中分离鉴定次生代谢产物.方法:对海洋链霉菌SCSIO 1934的发酵液进行有机溶剂萃取,利用硅胶、凝胶柱色谱等方法分离次生代谢产物,通过核磁数据和理化性质对各单体化合物进行结构鉴定.结果:从菌株Streptomyces sp.SCSIO 1934中分离纯化得到17-脱甲基格尔德霉素(17-O-demethylgeldanamycin,1),lebstatin(2),17-O-demethyllebstatin(3),尼日利亚菌素(nigericin,4),尼日利亚菌素钠盐(nigericin sodium salt,5),abierixin(6).结论:本研究发现了1株能够产生多种抗生素的海洋放线菌Streptomyces sp.SCSIO 1934.
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海洋链霉菌IMB3-202产生的吲哚咔唑生物碱
目的 分离鉴定海洋链霉菌 IMB3-202 产生的抗菌和抗肿瘤活性产物.方法 利用 AntiSMASH 对菌株基因组进行生物信息学分析;运用多种色谱手段分离纯化 IMB3-202 的活性产物;通过波谱学方法鉴定化合物的化学结构;采用微量肉汤稀释法和 MTT 法分别测定化合物的抗菌和细胞毒活性.结果 菌株 IMB3-202 基因组含有一条吲哚咔唑类生物合成基因簇.通过发酵条件优化,从中分离鉴定了 4 个吲哚咔唑类化合物,结构分别确定为星形孢菌素、3'-O-去甲基星形孢菌素、holyrine A 和 K252c.星形孢菌素、3'-O-去甲基星形孢菌素和 holyrine A 对 HeLa 细胞、HCT116 和MCF-7 等肿瘤细胞具有很强的抑制活性,IC50值为 0.75 ~1192.8 nmol/L.星形孢菌素对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌显示出较弱的抗菌活性,低抑菌浓度值为 128 μg/ml.结论 通过基因组序列分析,可以在基因水平上预测产物结构,快速识别特定类型产物.
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海洋放线菌来源的卤代天然产物及其卤代机制
近十年来,伴随着海洋放线菌分类研究的不断发展,越来越多海洋放线菌来源的卤代天然产物被发现.它们中许多都具有良好的生物活性以及区别于陆生放线菌的独特结构.在对这些卤代天然产物生物合成基因簇的研究中,一些化合物独特的卤代机制也引起了研究者的广泛关注.本文主要对近年来海洋放线菌来源的卤代天然产物及其卤代机制做简要介绍.
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基因序列分析指导的海洋糖丝菌中特曲霉素X的发现
一株海洋来源的稀有放线菌(Saccharothrix sp.10-10)发酵液粗提物显示出较强的抗革兰阳性耐药菌活性.对该产生菌中可能参与次级代谢产物生物合成的主要关键酶系基因保守序列的聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)分析,发现其Ⅱ型聚酮合酶基因片段,与特曲霉素生物合成基因簇中的相关序列具有较高的同源性.经活性追踪,利用多种色谱方法从Saccharothrix sp.10-10发酵液中分离纯化得到特曲霉素X(tetracenomycin X,1),同时还得到氧代托马霉素(oxotomaymycin,2),该两种化合物为首次从海洋糖丝菌属放线菌中发现,并利用2D NMR对这两个化合物的13C NMR数据进行了准确归属.体外活性结果表明,化合物1对甲氧西林耐药金葡菌(MRSA)和万古霉素耐药肠球菌(VRE)等耐药菌显示出显著的抗菌活性,低抑菌浓度(MIC)为32～64 μg·mL-1;此外,化合物1还对多株人肿瘤细胞显示出较强的细胞毒活性,IC50值为5.1～18.0μmol·L-1.
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利用靶向Ⅱ型聚酮合酶的PCR技术从海洋放线菌中发现angucyclinone聚酮类天然产物
Angucyclinones是一类主要由陆地放线菌产生的芳香聚酮类化合物,其生物合成主要是由Ⅱ型聚酮合酶(PKS)催化完成.为了在海洋放线菌中探索此类芳香聚酮类化合物,我们以167株海洋放线菌基因组DNA为模板,对含有Ⅱ型聚酮合酶的菌株进行了PCR筛选,通过对PCR产物测序验证,确定了12株阳性菌株.通过大规模发酵培养和色谱分离、波谱鉴定,从阳日性菌株Streptomyces sp.PKU-MA00218中发现了四个angucyclinone芳香聚酮类化合物,6-deoxy-8-O-methylrabelomycin (1),8-O-methylrabelomycin (2),8-O-methyltetrangulol (3),和angucyclinone C的C环裂解产物(4).化合物4为首次从海洋放线菌中分离得到.Angucyclinone芳香聚酮1-4的发现展示了基于生物合成的基因组挖掘技术在天然产物探索发现中的重要作用.
关键词： Angucyclinone 芳香聚酮 基因组挖掘 海洋放线菌 Ⅱ型聚酮合酶 -
海洋放线菌Streptomyces sp. LZ35中的安莎霉素类化合物
目的 对海洋放线菌Streptomyces sp.LZ35固体发酵提取物的化学成分进行研究.方法 采用Sephadex LH - 20,硅胶等色谱柱及重结晶进行分离纯化,用波谱技术鉴定化合物的结构.结果 从14 L固体发酵提取物中分离得到7个安莎霉素类化合物,分别鉴定为geldanamycin(1),17-O-demethylgeldanamycin(2),herbimycin B(3),reblastatin(4),17-O-demethylreblastatin(5),autolytimycin(6),hygrocin A derivative(7).结论 化合物1～7均为首次从该菌株中分离得到,且首次从一株链霉菌中分离到2种类型的安莎霉素.
关键词： 海洋放线菌 Streptomyces sp. 柱色谱 结构鉴定 安莎霉素 -
海洋放线菌Salinispora pacifica发酵液的化学成分研究
目的 对海洋放线菌Salinispora pacifica 发酵液的醋酸乙酯萃取部分进行化学成分的研究.方法 采用多种常压柱色谱和高效液相色谱分离技术,运用理化和波谱分析方法,对海洋放线菌S.pacifica发酵液中的化学成分进行分离鉴定.结果 从该菌中分离得到12个化合物,包括8个生物碱和4个苯环族类.分别鉴定为N-乙酰色胺(Ⅰ)、3-醛基吲哚生物碱(Ⅱ)、3-醛基-5-羟基吲哚生物碱(Ⅲ)、胸腺嘧啶(Ⅳ)、甲基酪胺(Ⅴ)、4-羟基-N-甲基苯甲酰胺(Ⅵ)、3-羟基苯乙酰胺(Ⅶ)、苯乙酰胺(Ⅷ)、对羟基桂皮酸(Ⅸ)、苯甲酸(Ⅹ)、对羟基苯甲酸(Ⅺ)和对羟基苯甲醛(Ⅻ).结论 化合物Ⅰ～Ⅻ均为首次从本属菌中分离得到.
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不同培养基对海洋放线菌抗微生物活性的影响
①目的 探讨不同培养基条件对于海洋放线菌抗菌活性的影响.②方法 采用纸片法筛选抗菌活性;③结果 在10株海洋放线菌中,大部分菌株的佳抗菌活性培养基为M2+培养基;还发现在某些培养基条件下,海洋放线菌能产生具有选择性地对抗某种微生物的活性.④结论 不同培养基对海洋放线菌的抗菌活性有较大影响,因此在研究中应注意培养基的优化.
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海洋放线菌KSC2-1次级代谢产物化学成分的分离与鉴定
目的 研究海洋放线菌KSC2-1次级代谢产物,以期得到有活性的先导化合物.方法 利用硅胶柱色谱,凝胶柱色谱( Sephadex LH-20),制备高效液相色谱(PRE-HPLC)等手段进行分离纯化,通过理化性质和光谱数据对化合物进行了结构鉴定.结果 从海洋放线菌KSC2-1的发酵液的正丁醇萃取物中分离得到10个化合物,分别鉴定为:3-(α-羟丙酰基)-1H-吲哚(3 -(α-hydroxypropionyl)- 1H-indole,1)、3-乙酰基-1H-吲哚(3-acetyl-1 H-indole,2)、1H-吲哚-3-醛(1H-indole-3-carbaldehyde,3)、1H-吲哚-3-羧酸(1H-indole-3 -carboxylic acid,4)、2-( 1H-吲哚-3-基)乙醇(2-(1H-indol-3-y1)ethanol,5)、3-乙基-3-羟基-1-甲基吲哚啉-2-酮(3-ethyl-3-hydroxy-1 -methylindolin-2-one,6)、2-羟基- 1-(4-羟苯基)乙酮(2-hydroxy-1-( 4-hydroxyphenyl) ethanone,7)、4-羟基苯乙醇(4-( 2-hydroxyethyl)phenol,8)、胸腺嘧啶脱氧核糖核苷(thymine nucleoside deoxyribose,9)、尿嘧啶核糖核苷( uracil nucleoside,10).结论 化合物1-10均为首次从海洋放线菌KSC2-1次级代谢产物中分离得到.
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海洋微生物抗肿瘤活性物质的研究进展
海洋微生物具有产生新型生物活性物质的研究及报道日渐增多,海洋微生物的特性已成为海洋研究工作者和药物研究工作者的研究热点.20世纪70年代以来,研究者从海洋微生物中已分离提取到许多结构新颖作用独特的抗肿瘤活性物质.本文对来自海洋放线菌、海洋真菌及海洋细菌中的抗肿瘤活性物质的新研究进行综述,对其发展前景进行展望.
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海洋拟诺卡菌SCSIO 11492中次生代谢产物的分离及其抗肿瘤活性研究
目的：探索海洋来源的拟诺卡菌（Nocardiopsis sp ．） SCSIO 11492的抗肿瘤活性次生代谢产物。方法采用硅胶、凝胶、ODS等色谱分离方法对海洋来源的拟诺卡菌SCSIO 11492的发酵粗提物进行分离、纯化，根据次生代谢产物的核磁数据及相关的理化性质确定化合物的结构，后利用活性测试发现活性成分。结果从海洋拟诺卡菌SCSIO 11492中分离纯化得到5个化合物，经鉴定分别为2′-脱氧腺苷（2′-deoxyadenosine ，1）、2′-脱氧胸腺嘧啶核苷（2′-deoxythymidine ，2）、2′-脱氧尿苷（2′-deoxyuidine ，3）、尿嘧啶核苷（uridine ，4）、1-O-棕榈酰基-3-O-β-D-半乳糖基甘油酯（1-O-hexadecanoyl-3-O-β-D-ga-lactopyranosylglycerol ，5）。活性测试结果表明化合物5对RAW264．7显示出较好的生长抑制活性（IC50＝10．9μmol／L）。结论从海洋拟诺卡菌SCSIO 11492中分离得到5个化合物，均为首次从该属中分离得到。其中化合物5可能是该菌抗肿瘤的活性成分。
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一株海洋放线菌次级代谢产物抗真菌活性的研究
随着真菌感染的发病率及抗药性的逐年上升,筛选新的抗真菌活性物质已成为临床治疗系统性真菌感染的迫切需要.以双层琼脂扩散法测定抗真菌活性,研究10株海洋放线菌的发酵液及其菌体甲醇提取液对白色念珠菌的抑制作用.结果筛选到一株胞内含有抗真菌活性物质的海洋放线菌Actinomycete A9,经10 L发酵罐发酵,将菌体甲醇提取物及发酵液乙酸乙酯萃取液浓缩合并,利用硅胶柱层析、葡聚糖凝胶柱层析Sephadex LH-20等分离纯化手段,终获得1 mg浅黄色针状晶体的单一化合物,纯度为99.9％.同时,以ConA、LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖为模型,发现Actinomycete A9经硅胶柱层析分离后的抗真菌组分(10 μg/mL)能够抑制ConA、LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖,表明海洋放线菌Actinomycete A9的胞内活性物质具有抗真菌及免疫抑制活性,为后续研究奠定了基础.
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海洋放线菌M324抑菌活性代谢产物的研究初报
M324是从中国江苏连云港沿海海泥中分离出的一株放线菌,能产生广谱抗菌活性物质.文章报道了对该菌株的分子生物学鉴定、其抑菌活性产物的粗提取和部分化学性质的研究结果.发现海洋放线菌M324为灰菌素链霉菌的一个新菌株.归属球孢哑群;抗菌物质具有强极性,易溶于水和二甲基亚砜,微溶于甲醇和乙醇.能够被弱极性大孔树脂所吸附,并能用低浓度甲醇溶液解吸;活性物质中有糖环结构,为一种中性糖苷类抗生素.
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海洋放线菌WBF16的分类鉴定
鉴定抗菌活性放线菌WBF16的分类地位;通过观察其培养特征、生理生化特性,以及对其细胞壁组分和16S rDNA序列的分析,将该菌鉴定到种;该放线菌为链霉菌属假浅灰链霉菌的一个新菌株.
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海洋放线菌M324抗菌物质的发酵优化与性质的初步研究
M324是从中国连云港沿海海泥中分离到的一株能产生较广谱抗菌活性物质的海洋放线菌.文章报道了对该菌株的初步鉴定、发酵条件的优化和产生抗菌活性物质的部分性质的探索性研究结果结果.发现M324为一株具有耐盐作用的链霉菌属白孢类群白孢亚群类似白长链霉菌的海洋放线菌.在28℃、pH为7.0、培养5 d,其产生的抗菌活性物质的活性强.发酵产物对酸碱稳定,呈现强极性,并呈现广谱抗菌活性.海洋放线菌M324能产生极性大的广谱抗菌活性物质,有较好的研究前景.
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海洋放线菌代谢产物蒽环类化合物研究进展
海洋放线菌代谢产物是抗肿瘤活性物质的重要来源.近年来,从海洋放线菌中分离到很多新化合物,其中许多结构新颖的蒽环类代谢产物具有良好的抗菌抗肿瘤活性.文章对近年来从海洋放线菌中分离得到的蒽环类代谢产物进行了归纳,并展望今后海洋天然产物的发展方向.
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源于海洋微生物抗肿瘤活性物质的研究
海洋微生物是抗肿瘤活性物质的重要来源.近十几年来,已从不同的海洋微生物中分离鉴定了许多结构新颖的抗肿瘤活性物质,显示出诱人的研究开发前景.文章就目前国内外海洋微生物抗肿瘤活性物质的研究作一综述,并展望其发展前景.
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海洋放线菌WBF16发酵产物蒽醌类抗菌活性成分的研究
对海洋放线菌WBF16发酵液中的抗菌活性成分进行研究.采用大孔树脂吸附、硅胶柱层析、Sephadex LH20柱层析等方法进行分离纯化抗菌活性成分SR-A,并对其理化性质和生物活性进行初步研究.该成分对金黄色葡萄球菌敏感菌的低抑菌浓度为2μg/m,对乳腺癌细胞MCF-7m和肺癌A549细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为6.60μg/L和9.88μg/L,与阿霉素的抗肿瘤效价相当.该抗菌成分主要由2种极性相近、结构相似的化合物组成,初步确定为蒽醌类物质,具有较强的细胞毒性.
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抗肿瘤海洋放线菌LYG-1的筛选及分类鉴定
从连云港海域海泥中分离得到一株具有抗肿瘤活性海洋放线菌LYG-1,通过对其形态特征、培养特征、生理生化特性的研究以及16S rRNA基因序列分析,将海洋放线菌LYG-1归属为链霉菌属玫瑰孢链霉菌(Streptomyces roseosporus的新的海洋变种.利用MTT法对海洋放线菌LYG-1发酵产物的抗肿瘤活性进行了初步研究,结果表明放线菌LYG-1的发酵原液对HepG2、MCF-7、HCT116以及MDA-MB-231 4种肿瘤细胞具有良好的体外抗肿瘤活性.
