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丹红注射液多元指纹图谱及多成分定量分析研究
目的 采用HPLC-UV-MS法建立丹红注射液多元指纹图谱,并对其中9种主要药效成分同时定量分析.方法 采用Atiantis T3色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.05％甲酸水溶液-50％乙腈水溶液,梯度洗脱;质谱检测采用负离子选择离子(SIM)模式.结果 该多元指纹图谱较全面地体现了制剂中2味处方药材丹参与红花的化学信息,11批制剂指纹图谱相似度均在0.988以上.5-羟甲基糠醛、丹参素钠、原儿茶醛、香豆酸、丹酚酸D、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A、山柰酚-3-O-芸香糖苷9种成分在各自质量浓度范围内呈良好线性关系,r≥0.999 0;9种化合物的平均加样回收率分别为(99.0±1.4)％、(102.0±1.7)％、(99.3±1.6)％、(97.6±1.6)％、(100.0±1.8)％、(97.9±1.6)％、(100.5±4.4)％、(100.6±2.0)％、(106.0±4.7)％(n=9);方法重复性的RSD均小于1.45％;测定的11批制剂中9种成分总量在2.61～3.06mg/mL.结论 该方法简单、准确、重复性好,多元指纹图谱结合定量测定能更全面地反映丹红注射液的质量,可用于制剂的质量控制.
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HPLC-MS/MS法同时测定脑复清胶囊中11种成分
目的 建立一种高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)分析方法,可同时测定脑复清胶囊中刺五加苷E、2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(二苯乙烯苷)、异嗪皮啶、迷迭香酸、三七皂苷R1、丹酚酸B、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd和大黄素共11种成分的含量.方法 采用Agilent Poroshell 120 EC-C18 (75 mm×4.6 mm,2.7μm)色谱柱,以0.1％甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,体积流量0.4 mL/min,柱温35℃.质谱采用负离子多反应监测模式进行检测.结果 11个成分在各自浓度范围内线性关系良好(r＞0.996),刺五加苷E、二苯乙烯苷、异嗪皮啶、迷迭香酸、三七皂苷R1、丹酚酸B、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、大黄素的加样回收率分别为106.4％、104.2％、99.9％、102.3％、104.1％、98.3％、108.9％、103.6％、105.8％、101.9％、104.2％;11种成分在10批样品中的质量分数分别为0.274～0.310 mg/g、1.579～1.642 mg/g、0.093～0.099 mg/g、0.331～0.352 mg/g、1.115～1.229 mg/g、1.663～1.870 mg/g、4.884～5.173 mg/g、0.691～0.762 mg/g、2.974～3.358 mg/g、1.053～1.493 mg/g、0.100～0.115 mg/g.结论 所建立的方法灵敏度高,稳定快速,适用于同时测定脑复清胶囊中11个成分的含量,可以用于该产品质量控制.
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香青兰有效成分提取工艺考察及不同产地香青兰中有效成分量的比较
目的 研究香青兰有效成分的提取工艺并比较不同产地香青兰中有效成分的量.方法 采用HPLC法测定香青兰中木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷(Ⅰ)、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷(Ⅱ)、迷迭香酸、香叶木素-7-O-葡萄糖醛酸苷(Ⅲ)、田蓟苷和刺槐素-7-O-葡萄糖醛酸苷(Ⅳ)的量.在单因素试验的基础上,采用正交试验考察提取溶媒、乙醇用量和提取时间对提取工艺的影响,确定佳提取工艺.根据佳提取工艺,比较不同产地香青兰中Ⅰ、Ⅱ、迷迭香酸、Ⅲ、田蓟苷和Ⅳ的量.结果 佳提取条件为加30倍量的40％乙醇水溶液,提取1次,5h.新疆吉木萨尔产的香青兰中Ⅰ、Ⅱ、迷迭香酸、Ⅲ、田蓟苷和Ⅳ的量较高.结论 该提取工艺合理、稳定、可行;不同产地的香青兰药材中Ⅰ、Ⅱ、迷迭香酸、Ⅲ、田蓟苷和Ⅳ的量存在一定的差异.
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冠心舒通胶囊HPLC指纹图谱研究
目的 建立冠心舒通胶囊的HPLC指纹图谱,为其质量评价提供依据.方法 采用Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,在280 nm波长下,以0.05％磷酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,柱温为30℃,体积流量为1.0 mL/min.测定10批冠心舒通胶囊样品,应用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2009版)建立冠心舒通胶囊HPLC指纹图谱,并通过对照品对共有峰进行指认.结果 通过10批样品的测定,建立冠心舒通胶囊HPLC指纹图谱,相似度均在0.95以上,共标定45个共有色谱峰,34个共有峰归属到各药材,其中5个共有峰来源于广枣,23个共有峰来源于丹参,7个共有峰来源于丁香(其中1号峰为广枣和丁香共有),并通过对照品比较指认了其中13个色谱峰,分别为没食子酸(1号峰)、丹参素(3号峰)、原儿茶酸(5号峰)、原儿茶醛(6号峰)、鞣花酸(10号峰)、迷迭香酸(16号峰)、丹酚酸B(19号峰)、丹酚酸A(23号峰)、丁香酚(24号峰)、二氢丹参酮Ⅰ(30号峰)、隐丹参酮(34号峰)、丹参酮Ⅰ(35号峰)、丹参酮ⅡA (39号峰).结论 此方法专属性强、准确可靠、重复性好,可为冠心舒通胶囊的质量控制提供依据.
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HPLC法测定心可舒胶囊中丹酚酸B
心可舒胶囊由山楂、丹参、葛根、三七、木香5味中药组成,收载于<中华人民共和国卫生部药品标准>中药成方制剂第15册,有活血化瘀、行气止痛,主要用于气滞血瘀型冠心病引起的胸闷、心绞痛、高血压、头晕、头痛、颈项疼痛及心律失常、高血脂等症.方中丹参具有活血祛瘀、舒心降压、扩张冠脉、降低胆固醇的作用,为方中主药.丹参水溶性酚酸类包括丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、迷迭香酸、丹参素、原儿茶醛等,其中丹酚酸B是质量分数高的活性成分,因此本实验用HPLC法对丹参中所含丹酚酸B进行测定,以提高其标准,用于该制剂的质量控制.
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大孔吸附树脂纯化丹参总酚酸的工艺研究
丹参为唇型科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bunge的干燥根及根茎,活血调经、凉血消痈、安神,在临床得到了广泛应用,并且是许多制剂的原料.其中的酚酸类成分是水溶性主要有效部位,具有明显的抑制血小板聚集、抗凝、溶纤及抗脂质过氧化的作用[1],是丹参活血化瘀的主要活性成分.该类化合物主要有原儿茶醛、原儿茶酸、丹参素、丹酚酸A,B,C、迷迭香酸等[2～4].以往的精制主要采用水提醇沉法,总酚酸的量低;也有报道用大孔树脂分离丹参中的水溶性成分[5],但只是用原儿茶醛和丹参素为指标,缺乏对总成分和分离条件的系统研究.本实验采用大孔吸附树脂纯化该有效部位,并研究分离的工艺条件和参数.
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高效液相色谱-二极管阵列检测法测定冠心宁注射液中丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、阿魏酸、迷迭香酸和丹酚酸B
目的 建立高效液相色谱-二极管阵列检测法同时测定冠心宁注射液中丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、阿魏酸、迷迭香酸和丹酚酸B 6种水溶性成分.方法 采用Diamonsil~(TM) C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-5%冰醋酸,进行梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;进样体积20μL;柱温30℃;检测波长286 nm.结果 在此色谱条件下6种水溶性成分可完全分离.丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、阿魏酸、迷迭香酸和丹酚酸B的线性范围分别为87.68～438.40 ng(r=0.999 3),29.68～148.40 ng(r=0.999 7),14.03～70.16 ng(r=1.000 0),30.40～152.00 ng(r=0.999 9),103.70～518.40 ng(r=0.999 6),193.20～966.00 ng(r=0.999 6).平均回收率丹参素为98.2%(RSD为0.27%),原儿茶酸为98.4%(RSD为1.2%).原儿茶醛为99.2%(RSD为1.3%),阿魏酸为98.9%(RSD为0.96%),迷迭香酸为98.1%(RSD为0.82%),丹酚酸B为99.3%(RSD为0.31%).结论 该方法简单、准确、重现性好,可用于冠心宁注射液的质量控制.
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RP-HPLC法测定湿毒清片中7种活性成分
目的 建立反相高效液相色谱法同时测定湿毒清片中丹参素、阿魏酸、木犀草苷、迷迭香酸、丹酚酸B、黄芩苷和隐丹参酮.方法 采用Diamonsil TM C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇一1%冰醋酸为流动相进行梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长为250 nm.结果 丹参素、阿魏酸、木犀草苷、迷迭香酸、丹酚酸B、黄芩苷和隐丹参酮的线性范围分别为0.164 2～2.464、0.007 600～0.114 0、0.036 16～0.542 4、0.051 84～0.777 6、0.287 0～4.305、0.240 0～3.600、0.020 85～0.312 8μg,r值分别为0.999 9、0.999 7、1.000 0、0.999 8、0.999 9、0.999 8、1.000 0.丹参素、阿魏酸、木犀草苷、迷迭香酸、丹酚酸B、黄芩苷和隐丹参酮的平均回收率分别为97.1%、96.7%、99.2%、96.4%、98.2%、99.6%、100.2%,RSD分别为1.5%、1.4%、1.3%、1.7%、1.3%、0.68%、0.53%.结论 该方法专属性好、准确度高,可用于综合评价湿毒清片的质量.
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RP-HPLC法测定肿节风饮片中异嗪皮啶和迷迭香酸
目的 建立RP-HPLC法测定肿节风饮片中异嗪皮啶和迷迭香酸的方法 .方法 采用RP-HPLC法,迪马Diamonsil~(TM)(钻石)C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸水溶液(23:77);检测波长:330nm;体积流量:1.0 mL/min;柱温25℃;进样量:10μL.结果 异嗪皮啶在0.015 9～0.796 2 μg线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为100.06%(RSD为1.52%);迷迭香酸在0.031 0～0.621 0 μg线性关系良好(r=0.999 8),平均回收率为99.99%(RSD为2.13%).结论 该定量分析方法 简便、准确、重复性好,在同一色谱条件下可同时测定肿节风饮片中异嗪皮啶和迷迭香酸.
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迷迭香水溶性成分研究
迷迭香Rosmarinus officinalis L.系唇形科(Labiatae)迷迭香属植物,为常绿灌木.具有抗氧化、抗病毒、抗肿瘤等多方面的功效,广泛应用于药品、化妆品和食品等方面.主要成分为二萜酚类、黄酮类、三萜类及精油等,其中二萜酚类成分具有明显的抗氧化、抗肿瘤及抗微生物等活性.水溶性成分迷迭香酸在抗炎、抗血栓等方面有明显作用,已用于临床.鉴于其多方面的活性,该植物已成为全球普遍重视的资源植物之一.
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基于超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱的益心舒片中多种成分定量测定研究
目的 建立基于超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱的益心舒片中多成分(绿原酸、芦丁、咖啡酸、阿魏酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、欧当归内酯A、丹参酮ⅡA)的定量分析方法.方法 采用BEH C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm),以乙腈-0.1％甲酸水为流动相,梯度洗脱,体积流量为0.2 mL/min;质谱采用ESI离子源,平行反应监测(PRM)的扫描方式进行检测.结果 在优化的色谱质谱条件下,绿原酸、芦丁、咖啡酸、阿魏酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、欧当归内酯A、丹参酮ⅡA分别在0.3～3.0、0.000 5～0.005 0、0.01～0.10、0.04～0.40、0.1～1.0、5.0～50.0、0.2～2.0、0.1～1.0、0.1～1.0、0.004～0.040、5.0～50.0μg/mL线性关系良好(r≥0.999 5);精密度、重复性及稳定性良好;加样回收率在99％～102％,RSD均小于3％;本研究所测成分在各批次样品中的质量分数依次为绿原酸217.80～502.25 μg/g、芦丁0.50～0.59 μg/g、咖啡酸8.45～13.54μg/g、阿魏酸2.61～3.56μg/g、迷迭香酸66.70～188.56 μg/g、丹酚酸B 4 002.53～8 793.80 μg/g、丹酚酸A 158.04～321.65 μg/g、丹参酮Ⅰ 127.72～612.48 μg/g、隐丹参酮75.56～285.70 μg/g、欧当归内酯A2.68～3.98 μg/g、丹参酮ⅡA 2 921.86～6 085.88 μg/g.结论 本实验建立的方法灵敏度高且准确性好,方法学考察结果符合测定要求,可用于益心舒片中多种活性成分的快速测定;并为其质量评价提供新的科学依据和参考.
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迷迭香酸对5/6肾切除大鼠尿毒素、尿蛋白及血清丙二醛和超氧化物歧化酶的影响
目的 观察迷迭香酸对5/6肾切除大鼠肾功能以及对大鼠尿蛋白和血清丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的影响.方法 制作大鼠慢性肾功能不全模型,实验分组为正常对照组,模型对照组,迷迭香酸组.根据手术后2周血肌酐值随机分组,每组6只.以迷迭香酸作为干预因素,应用丽春红S法等方法测定迷迭香酸对5/6肾切除大鼠尿蛋白、尿肌酐和血肌酐、血清MDA和S0D影响.结果 (1)与对照组及模型组比较,迷迭香酸组血肌酐及内生肌酐清除率均升高(F=38.912、19.968,P＜0.01,P＜0.05)；(2)迷迭香酸对慢性肾功能不全大鼠的24h尿蛋白有明显改善作用(F=16.288,P＜0.01)；(3)迷迭香酸对大鼠MDA及SOD无明显影响(P均＞0.05).结论 迷迭香酸可以降低尿蛋白量及血肌酐值,提高内生肌酐清除率,延缓肾脏衰竭.但对大鼠MDA及SOD无明显影响.
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HPLC-DAD法测定银屑优化颗粒中芍药苷、甘草苷、落新妇苷、迷迭香酸和甘草酸
目的 建立同时测定银屑优化颗粒中芍药苷、甘草苷、落新妇苷、迷迭香酸和甘草酸5种成分的HPLC-DAD测定方法.方法 采用高效液相色谱波长切换法.Lichrospher C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1％磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长在230、254、290 nm切换;体积流量为1mL/mim柱温为30℃;进样体积10 μL.结果 5种成分的线性关系良好.芍药苷在69.12～691.20 ng线性关系良好,平均加样回收率为97.45％,RSD值为1.54％;甘草苷在39.02～390.20 ng线性关系良好,平均加样回收率为97.10％,RSD值为1.90％;落新妇苷在30.03～300.30ng线性关系良好,平均加样回收率为99.98％,RSD值为1.22％;迷迭香酸在7.82～78.20 ng线性关系良好,平均加样回收率为100.83％,RSD值为1.36％;甘草酸在31.09～310.90 ng线性关系良好,平均加样回收率为97.52％,RSD值为1.49％.结论 本方法具有方法简便、快速、准确等特点,可同时测定银屑优化颗粒中5种活性成分.
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128 薰衣草MM细胞生物体中迷迭香酸提取物的精制方法
作者在先前的研究中建立了一种从薰衣草Lavandula vera MM细胞悬浮培养液中提取迷迭香酸的佳条件.在此项实验中作者比较研究了离子交换树脂吸附法和醋酸乙酯萃取法精制迷迭香酸提取物的效果,同时讨论了Ca2+沉淀法用于迷迭香酸提取物精制的可能性.
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HPLC法测定丹参胶囊中丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸及丹酚酸B的含量
目的:建立 HPLC 法测定丹参胶囊中丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸及丹酚酸 B 的含量.方法:采用 waters Symmetry - C18(250 mm × 4. 6 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈为流动相(A)- 0. 1% 三氟乙酸水溶液为流动相(B)进行梯度洗脱,流速 0. 8 ml/ min,柱温为 25 ℃ ,检测波长为 286 nm.结果:丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸 B 的线性范围分别为0. 010 827 ~ 1. 082 7 μg、0. 000 424 6 ~ 0. 042 46 μg、0. 006 755 ~ 0. 675 5 μg 和 0. 109 76 ~ 3. 292 8 μg;丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸及丹酚酸 B 平均回收率分别为 102. 65% 、101. 21% 、101. 13% 和 102. 96% ,RSD 分别为 0. 63% 、1. 56% 、0. 87% 和0. 70% .结论:所建立的 HPLC 法可准确测定丹参胶囊丸中丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸及丹酚酸 B 的含量.
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迷迭香酸对大鼠肾小球系膜细胞增殖及白细胞介素-1β的影响
目的探讨迷迭香酸对原代培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及其产生白细胞介素-1β(IL-1β)的影响.方法用四甲基偶氮唑(MTT)法测定迷迭香酸对系膜细胞增殖的影响,酶联免疫吸附法(ELISA)测定系膜细胞IL-1β蛋白水平.结果迷迭香酸在5～25 mg/L浓度范围能明显抑制血清或脂多糖刺激的系膜细胞增殖(与对照组比较,P＜0.01),在1～25 mg/L范围能明显抑制脂多糖诱导的系膜细胞IL-1β分泌(与对照组比较,P＜0.01).结论迷迭香酸对体外培养的系膜细胞增殖及IL-1β分泌具有抑制作用.
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迷迭香酸对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其机制研究
目的 观察迷迭香酸对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及探讨其可能的作用机制.方法 采用链脲佐菌素(STZ)注射法制作糖尿病大鼠模型,随机分为正常组、糖尿病组、迷迭香酸组.灌胃给药8周后,分别测定血糖、24 h尿蛋白排泄率(UAER)、肾小球滤过率(GFR)、肾组织脂质过氧化物(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)及转化生长因子β1(TGF-β1)、Col-Ⅳ、FN的表达.所采用的技术包括生化、分光光度法、放射免疫、免疫组化、光学显微镜及电镜超微结构等.结果 迷迭香酸组大鼠的24 h UAER、GFR、肾组织MDA均显著低于糖尿病组(P均<0.01),迷迭香酸组大鼠肾组织SOD活性显著高于糖尿病组(P<0.01).迷迭香酸组大鼠肾皮质TGF-β1、FN、Col-Ⅳ的表达均显著低于糖尿病组(P均<0.05).迷迭香酸组大鼠治疗前后血糖比较及与糖尿病组比较均无显著性差异(P均>0.05).结论 迷迭香酸对STZ糖尿病大鼠肾脏有降低UAER、提高肾组织SOD活性、降低肾组织MDA、改善肾小球高滤过状态作用,并可抑制肾皮质TGF-β1表达、抑制细胞外基质增生.其保护机制与改善氧化应激、抗炎及抑制系膜细胞增生有关.
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氧化应激对大鼠肾脏系膜细胞增生的影响及迷迭香酸的干预作用
目的 观察在大鼠肾小球系膜细胞增生过程中氧化与抗氧化系统的改变及迷迭香酸的干预作用.方法 培养大鼠肾小球系膜细胞,以PDGF刺激系膜增生及迷迭香酸干预.实验设正常对照组、增生组、单纯迷迭香酸组和迷迭香酸干预组.利用分光法分别测定培养细胞中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果 在培养的促有丝分裂刺激后肾小球系膜细胞中MDA含量升高,SOD减少;迷迭香酸的干预能降低MDA的产生,促进SOD的产生.结论 氧自由基及其诱发的脂质过氧化参与了系膜细胞的增生,而迷迭香酸则能抑制系膜细胞的上述改变,具有抗氧化活性.
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HPLC 法测定肾石消胶囊中迷迭香酸的含量
目的：建立用反相高效液相色谱法测定肾石消胶囊中迷迭香酸含量的方法。方法采用SHIMADZU VP-ODS 5μm 250×4构．6 mm色谱柱，以甲醇－0．1％三氟乙酸（40：60）为流动相，流速1．0 mL/min，检测波长为330 nm。结果迷迭香酸进样量在0．5015～5．0151μg范围内线性关系良好（ r ＝0．9998）（ n ＝5），平均回收率为99．6％， RSD为0．57％。结论该法结果准确、方法简便、分离度高，可用于该制剂的质量控制。
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甘西鼠尾草总酚酸提取物对嘌呤霉素氨基核苷诱导损伤的足细胞中Toll样受体4表达的影响
目的:探讨SPE及其单体对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)诱导的损伤足细胞中Toll样受体4(TLR4)通路表达的影响.方法:足细胞与含有甘西鼠尾草总酚酸提取物(SPE)、迷迭香酸(RA)、丹酚酸B(SalB)、RA+ SalB混合及他克莫司的完全培养液预先孵育30 min,再加入PAN(100 μg/ml)继续作用24h,观察足细胞骨架结构F-actin变化,western blot及半定量RT-PCR检测足细胞中TLR4、myd88、phosphor-NF-κB (pp65)在蛋白及mRNA水平的表达量变化.结果:(1)PAN作用24h后,足细胞骨架蛋白F-actin明显损伤,微丝解聚、胞体回缩,少数细胞尚存排列紊乱的丝状结构,而提前给予保护药物SPE、SalB、RA、SalB+ RA混合药物及他克莫司组的足细胞损伤明显减弱.(2)western blot数据显示,PAN诱导的损伤足细胞中TLR4、myd88及pp65蛋白的表达与正常组相比均有明显上调(P＜0.05);保护药物组:TLR4蛋白表达较模型组有明显下降(P＜0.05);MyD88蛋白表达除SalB高剂量组及SalB+ RA低剂量组较模型组无显著下降外,其余均能明显下调其表达量(P＜0.05);pp65在保护药物组中的表达均较模型对照组低(P＜0.05).(3)半定量RT-PCR结果显示,模型对照组中TLR4、MyD88及NF-κB的mRNA表达量明显高于正常对照组;保护药物组中:TLR4 mRNA表达量在各药物处理组中均明显低于PAN组(P＜0.05),其中的SPE高、低剂量组,RA高、低剂量组,SalB+ RA高剂量组与正常组相接近(P＞0.05);MyD88 mRNA表达量在SPE及其单体处理后均有明显下调(P＜0.05);NF-κB mRNA表达量除SalB高剂量组中无明显下调外(P＞0.05),其余各保护药物组均下调(P＜0.05).结论:SPE及其活性单体对PAN诱导损伤足细胞的保护作用机制可能部分通过抑制TLR4信号相关蛋白表达来实现;甘西鼠尾草总酚酸提取物中的单体迷迭香酸对TLR4及其下游信号分子MyD88、NF-κB的抑制作用优于丹酚酸B和混合给药组.
