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60Co-γ辐照对红花药材及醇提取物羟基红花黄色素A的影响
目的 考察60Co-γ射线辐照灭菌效果及对中药红花和红花25％乙醇提取物中有效成分羟基红花黄色素A的影响.方法 选择5、10kGy 2种辐照剂量对红花和红花25％乙醇提取物进行辐照.比较辐照前后杂菌和霉菌总数及其有效成分羟基红花黄色素A的含量.结果 红花药材及红花25％乙醇提取液在经过5kGy的辐照后,都能达到卫生学标准要求.红花药材经过5kGy辐照后,红花所含有效成分羟基红花黄色素A不发生明显的变化,10kGy辐照后,红花所含有效成分羟基红花黄色素A降低34％；而红花25％乙醇提取液经5、10kGy辐照后,羟基红花黄色素A分别降低44％、71％.结论 60Coγ射线辐照灭菌的效果理想,但不是任何药材和制剂都能采用这种灭菌方法.
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跌打活血散HPLC-DAD-ELSD双通道指纹图谱分析
目的:建立跌打活血散双通道指纹图谱分析方法以评价该制剂质量.方法:以C18 (4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,乙腈-0.1％甲酸为流动相梯度洗脱;柱温:30℃;流速:1.0 mL·min-1;蒸发光散射检测器漂移管温度:115℃;氮气流速:2.7L·min-1;进样量:20 μL,采用HPLC-DAD-ELSD联用法建立UV 254 nm与ELSD双通道指纹图谱,对7家生产企业的14批跌打活血散进行相似度评价.结果:在上述色谱条件下,相似度评价结果表明不同企业产品间存在一定差异,经对照品比对确认了指纹图谱中14个色谱峰(儿茶素、表儿茶素、羟基红花黄色素A、阿魏酸、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1/Re、川续断皂苷Ⅵ、血竭素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、11-羰基-β-乙酰乳香酸).结论:建立的跌打活血散HPLC-DAD-ELSD双通道指纹图谱分析方法简便、可靠,可更为全面有效地控制该产品质量.
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羟基红花黄色素A抑制新生血管形成的机制研究
目的从中药中寻找新的血管生成抑制剂,并探讨其抑制新生血管生成的作用机理.方法从红花中提取分离羟基红花黄色素A,利用鸡胚尿囊膜(CAM)实验观察羟基红花黄色素A对新生血管的抑制作用,并通过RT-PCR实验,观察羟基红花黄色素A对CAM组织中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体(VEGF-R)(flt-1) mRNA表达的影响.结果提取出的羟基红花黄色素A纯度达到了98.9%,浓度为0.59 g/L的羟基红花黄色素A能使CAM血管数明显变细减少(P<0.01)并能显著抑制CAM组织中bFGF、VEGF及VEGF-R(flt-1) 的mRNA表达(P<0.05).结论通过本实验我们首次得出羟基红花黄色素A能显著抑制CAM新生血管生成,其作用机制之一是通过抑制bFGF、VEGF及VEGF-R(flt-1)的mRNA表达来实现的,提示羟基红花黄色素A可能是一很有潜力的血管生成抑制剂.
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羟基红花黄色素A抑制PAF诱发的家兔血小板活化的研究
目的观察了红花活血化瘀有效成分羟基红花黄色素A(HSYA)抑制血小板活化因子(PAF)诱发的家兔血小板粘附、5-羟色胺(5-HT)释放及血小板内游离Ca2+浓度升高的作用.方法荧光分光光度法检测PAF激活血小板释放的5-HT,Fura-2荧光分光光度法观察PAF诱发家兔血小板内游离Ca2+浓度的升高及以分光光度法检测PAF所致家兔血小板粘附性的升高.结果 479.6～1918.3 μmol/L的HSYA抑制PAF诱发的家兔血小板粘附呈明显的量效关系; 280～1320 μmol/L的HSYA抑制PAF诱发的家兔血小板5-HT释放呈明显的量效关系; 6.29～201.2 μmol/L的HSYA抑制PAF诱发的家兔血小板内游离Ca2+浓度的升高呈明显的量效关系.结论 HSYA 可明显抑制PAF诱发的家兔血小板粘附、5-HT释放及血小板内游离Ca2+浓度升高.
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羟基红花黄色素A对肿瘤上清诱导的人脐静脉内皮细胞周期及凋亡的影响
目的 研究羟基红花黄色素A(HSYA)对人肝癌细胞株HepG2培养上清液诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞周期及凋亡的影响.方法 原代培养HUVEC,传至第3～6代进行实验.用流式细胞术检测HSYA作用下HepG2培养上清液刺激后异常增殖的内皮细胞细胞周期及凋亡情况的改变,并以ELISA法检测与凋亡有关的细胞因子TNF-α仅表达情况.结果 HUVEC经肿瘤上清液刺激后G0/G1期细胞比例明显减少(P<0.05),S期细胞的比例明显增加(P<0.01),凋亡细胞的比例明显减少(P<0.05).经HSYA作用后,细胞周期各期细胞所占比例与模型组比较无显著性差异,凋亡细胞比例明显增多(P<0.05).同时,TNF-α在肿瘤上清液刺激后表达明显减少(P<0.05),经HSYA作用后又明显升高(P<0.05).结论 HSYA可以有效促进肿瘤上清液刺激后的人脐静脉内皮细胞的凋亡,其机制之一是通过提高凋亡相关因子TNF-α的表达来实现的.
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羟基红花黄色素A对裸鼠人胃腺癌BGC-823移植瘤抑制作用的研究
目的 从整体水平研究羟基红花黄色素A(HSYA)对抗人胃腺癌细胞株BGC-823裸鼠皮下移植瘤的作用机制.方法 培养人胃腺癌细胞株BGC-823,细胞活力和数量符合接种要求时,接种至30只裸鼠右前肢腋部皮下,建立裸鼠人癌移植瘤模型.随机分为模型组,环磷酰胺对照组,HSYA大、中、小剂量组(1.40、0.70、0.35 mg/kg).给药20 d剥离肿瘤,光镜及透射电镜观察瘤组织的病理及超微结构改变,流式细胞术检测瘤细胞的凋亡及细胞周期.结果 模型组移植瘤生长明显较HSYA 小剂量组、环磷酰胺对照组快;模型组瘤重亦明显高于此2组(P<0.05);HSYA 小剂量组可导致瘤细胞凋亡,其凋亡率与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.01),但对细胞周期无明显影响;HSYA小剂量组光镜下可见瘤组织病理恶化程度低于模型组,电镜下可观察到瘤细胞出现凋亡小体.结论 适当浓度的HSYA对肿瘤有一定的抑制作用,诱导肿瘤细胞的凋亡可能是其抗肿瘤作用的机制之一.
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羟基红花黄色素A通过抑制微小RNA-1表达对H9c2心肌细胞氧化损伤的保护作用
目的 研究羟基红花黄色素A(HSYA)对H2 O2诱导的心肌细胞氧化损伤的保护作用,进一步观察该作用与微小RNA-1(miR-1)之间的关系.方法 以细胞存活率为指标筛选HSYA的适浓度.将细胞分为空白组、模型组、羟基红花黄色素A干预组,荧光显微镜检测活性氧(ROS)水平、流式细胞仪检测凋亡率、实时荧光PCR法检测miR-1表达水平,研究HSYA对H2 O2氧化损伤的心肌细胞的保护作用.在此基础上,研究miR-1模拟物转染心肌细胞情况下H2 O2诱导损伤后miR-1与ROS水平,及HSYA对细胞损伤的保护作用.结果 与空白组比较,模型组ROS水平升高,凋亡率增加,miR-1表达上调,差异有统计学意义.与模型组比较,羟基红花黄色素A干预组ROS水平降低,凋亡率降低,miR-1表达下调,差异有统计学意义.H9c2细胞被转染miR-1模拟物后,miR-1水平升高,ROS生成增多,与H2 O2诱导的miR-1水平升高和ROS生成增多呈叠加效应,而HSYA对其叠加升高的miR-1及ROS水平有下调作用.结论 HSYA能够降低H2 O2诱导的H9 c2细胞ROS生成和细胞凋亡率,对心肌细胞氧化损伤起保护作用,其机制可能与下调miR-1表达水平有关.
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羟基红花黄色素A对脑缺血再灌注大鼠MMP-9和claudin-5蛋白水平的影响
目的 探讨羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)减轻大鼠脑缺血引起的血脑脊液屏障通透性增加的分子机制.方法 本研究利用大鼠脑缺血再灌注模型,研究HSYA对脑缺血后半影区和核心区基质金属蛋白酶-9(metalloproteinase-9,MMP-9)和紧密连接蛋白claudin-5水平的变化.结果 HSYA处理可以减少半影区MMP-9蛋白水平,而MMP-9的下游底物claudin-5的蛋白水平则显著增加.HSYA并不显著改变缺血核心区MMP-9和claudin-5蛋白水平.结论 本研究证明,活血化瘀中药HSYA可能通过减少半影区MMP-9蛋白水平,提高claudin-5的水平,从而减少半影区血脑脊液屏障损伤,为深入研究HSYA保护血脑脊液屏障的机制提供了参考.
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羟基红花黄色素A对胶质瘤U251细胞增殖、迁移与侵袭的影响
目的 研究羟基红花黄色素A(HSYA)对人脑胶质瘤U251细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其作用机制.方法 体外培养人脑胶质瘤U251细胞,经不同浓度(25、100、400 μmol/L)HSYA处理后分别采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)、划痕试验和Transwell试验观察HSYA对U251细胞增殖、迁移和侵袭的影响,采用Western blot方法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的蛋白表达水平.结果 与空白对照组比较,HSYA能降低U251细胞存活率,缩短细胞迁移距离,减少U251细胞穿膜数,差异均有统计学意义(P＜ 0.01或P＜0.05),同时,HSYA能下调MMP-2、MMP-9的蛋白表达.结论 HSYA对脑胶质瘤U251细胞增殖、迁移及侵袭等具有抑制作用,其作用机制可能与下调MMP-2、MMP-9表达有关.
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红花水提工艺影响因素研究
目的 对红花水提工艺的影响因素进行研究.方法 采用高效液相色谱法,以羟基红花黄色素A 为评价指标,采用正交实验设计考察红花水提工艺中的影响因素.结果 提取时间和提取次数对红花水提具有显著影响.结论 选定的红花水提工艺为:室温浸提3 次;第1、2 次加15 倍水提取4h,第三次加10 倍水浸提2h.
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红花黄色素在呼吸系统相关疾病中的药理作用研究进展
红花是传统中药,具有活血化瘀功效.红花黄色素(SY)属查耳酮类化合物,是红花发挥治疗疾病作用的主要成分.羟基红花黄色素A (HSYA)为SY中含量高的黄酮类成分.现代研究证实其对呼吸系统相关疾病都有明确的缓解和保护作用.SY及其主要单体成分HSYA有多种药理作用,本文对SY在呼吸系统肺部疾病中的一些药理作用进行综述.
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羟基红花黄色素A脑保护作用的研究进展
羟基红花黄色素A (HSYA)是中药红花中含量高的水溶性成分,是红花黄色素的主要药理活性成分,已经广泛用于心脑血管疾病的治疗中.HSYA的脑保护作用机制多而复杂,对不同脑组织所产生的保护作用也不同,主要作用于神经元、神经胶质细胞、脑血管内皮细胞、血脑屏障等大脑构成组分.本文对HSYA的脑保护作用、脑保护作用靶点及机制研究作简要综述,以期为HSYA的进一步研究及临床应用提供参考和依据.
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HPLC法测定骨伤一号中羟基红花黄色素A的含量
目的 建立高效液相色谱法测定骨伤一号中羟基红花黄色素A的含量测定方法.方法 采用高效液相色谱法,使用C18色谱柱,流动相为甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶(24:2:74); 流速为1.0 ml min-1,检测波长为403nm.理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000.结果 在0.0525μ g～0.4201μ g 范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率为103.16%,R S D为1.50%.结论 本方法简便可靠、分离度较好、结果稳定,可用于骨伤一号的质量控制.
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冰片及石菖蒲促进羟基红花黄色素A透过血脑屏障的实验研究
目的 考察芳香开窍药冰片及石菖蒲对羟基红花黄色素A(HSYA)血脑屏障(BBB)通透性的影响.方法 ig给予大鼠20.00 mg/kg HSYA混悬液,分别配伍冰片及石菖蒲水提液,给药后采集大鼠血浆及脑组织.HPLC测定大鼠血浆及脑组织内HSYA浓度,以各组HSYA的AUC脑/AUC血为评价指标,进行冰片及石菖蒲对BBB通透性影响的评价.结果 HSYA、HYSA+冰片、HYSA+石菖蒲组HSYA在大鼠血浆及脑匀浆中的AUC0～8h分别为(77228.764±2 873.19)、(81 949.044±2283.11)、(28479.634±2431.71)ng·mL-1·min及(55 925.0±2 434.28)、(82 768.53±3 277.00)、(70 914.29±2 900.71)ng·mL-1min,各组AUC脑/AUC血分别为0.72、1.01、2.49.结论 HSYA配伍冰片及石菖蒲后,AUC脑/AUC血均显著升高(P<0.05).冰片及石菖蒲均对BBB有开启作用,且石菖蒲可影响HSYA在大鼠体内的分布.
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丹红注射液中主要有效成分在脑缺血大鼠体内药动学研究
目的 建立同时测定给予丹红注射液主要组分后脑缺血再灌注损伤大鼠血浆中丹参素、原儿茶酸、香草酸、丹酚酸B和羟基红花黄色素A (HYSA)质量浓度的HPLC-DAD方法,为其药动学研究提供准确可靠的方法.方法 制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,iv丹红注射液主要有效成分丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B和HYSA后,收集血样,采用EclipseXDB-C18 (150 mm×4.6 mm,5μtm)色谱柱,以乙腈-0.4％磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长280 nm用于检测丹参素、原儿茶酸、香草酸和丹酚酸B,403 nm用于检测HYSA,柱温为30℃,内标法定量.结果 原儿茶醛在MCAO大鼠体内迅速被代谢,3 min即可检测到其代谢产物原儿茶酸和香草酸.丹参素、原儿茶酸、香草酸、丹酚酸B和HYSA的进样浓度分别在0.35～140 mg/L (R2=0.999 8)、0.15～60 mg/L(R2=0.999 0)、0.05～20 mg/L (R2=0.998 8)、0.25～100 mg/L(R2=0.999 6)、0.075～30 mg/L(R2=0.998 5)呈良好线性关系,平均回收率均在80％～120％,日内、日间RSD均小于10％,稳定性符合体内药物分析要求.大鼠iv给予丹红注射液主要有效成分后丹参素、原儿茶酸、香草酸、丹酚酸B和HYSA的主要药动学参数:AUC0～∞分别为(1143.862±230.840)、(427.024±59.293)、(135.785±47.631)、(418.631±66.242)、(288.788±87.809)mg.min/L, t1/2z分别为(71.496±29.067)、(82.379±26.279)、(40.331±6.006)、(125.164±59.709)、(177.577±112.836) min.结论 所建立的HPLC-DAD分析方法专属性强,各成分分离度好,分析时长适宜,操作简单快速,可用于MCAO大鼠体内丹参素、原儿茶酸、香草酸、丹酚酸B、HYSA的同时测定及复方丹红注射液的药动学研究.
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丹参与红花有效成分配伍对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用
目的 探究丹参与红花有效成分的不同配伍组方对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法 选取成年雄性SD大鼠,通过大脑中动脉线栓法建立脑缺血再灌注模型,随机分成假手术组、模型组、阳性对照组(丹红注射液2 mL/kg)以及采用正交试验法L9(34)对丹参与红花主要有效成分[丹参素、丹酚酸A、丹酚酸B、羟基红花黄色素A(HYSA)]剂量配伍9组.大鼠尾iv给药,每天1次,连续给药3d后进行神经功能缺损评分;实时荧光定量PCR法检测大鼠大脑皮层中葡萄糖调控蛋白78 (GRP-78)、核转录因子-κB p65 (NF-κB p65)、内质网源性转录因子(CHOP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6 (IL-6) mRNA表达;HE染色检测大鼠大脑皮层病理变化;免疫组化法检测大鼠大脑皮层中NF-κB p65蛋白的表达情况.结果 与模型组比较,丹红注射液、丹参与红花主要有效成分配伍可显著降低脑缺血再灌注大鼠的神经功能评分,使大鼠大脑皮层GRP-78 mRNA表达水平升高,NF-κB p65、CHOP、TNF-a、IL-6 mRNA表达水平降低,抑制大脑皮层中NF-κ.B p65蛋白表达.丹参与红花主要有效成分配伍9组中第4组(丹参素30 mg/kg、丹酚酸A2.5 mg/kg、丹酚酸B16mg/kg、HYSA 8 mg/kg)、第6组(丹参素30 mg/kg、丹酚酸A 10 mg/kg、丹酚酸B 8 mg/kg、HYSA4 mg/kg)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用更为显著.结论丹参与红花有效成分各配伍组方均能对脑缺血再灌注损伤大鼠内质网应激、炎症等 方面起良好的保护作用.
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谷红注射液在脑缺血再灌注大鼠体内药动学与抗氧化作用关联性研究
目的 研究谷红注射液中羟基红花黄色素A (HSYA)在脑缺血再灌注大鼠体内的药动学及其与抗氧化作用的关联性.方法 采用平衡透析法测定HSYA及谷红注射液中HSYA的血浆蛋白结合率;SD大鼠制备大脑右侧中动脉局灶性栓塞(MCAO)模型,分为HSYA组(4 mg/kg)及谷红注射液组(10 mL/kg),尾iv给药,采用高效液相(HPLC)法测定不同时间点HSYA的血药浓度,绘制药时曲线;同时采用试剂盒法测定不同时间点血浆中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)活性,绘制效时曲线;进一步进行药动-药效联动分析.结果 HSYA和谷红注射液中HSYA在质量浓度为2.5、10.0、25.0 mg/L时血浆蛋白结合率分别是77.96％、73.54％、76.13％和68.21％、58.22％、63.17％;HSYA的血浆药物质量浓度在0.01～50 mg/L线性关系良好,低、中、高血浆药物浓度平均回收率分别为(99.94±2.82)％、(104.16±1.41)％、(99.74±1.06)％;谷红注射液组与HSYA组比较,曲线下面积(AUC)显著增加,平均驻留时间(MRT0-t)显著减少,表观容积(Vz)显著增加;血浆中GSH-Px活性升高,与血药浓度呈正相关,LDH活性降低,与血药浓度呈负相关.结论 HSYA均具有中等强度的血浆蛋白结合率,且谷红注射液中HSYA血浆蛋白结合率有所降低;谷红注射液在MCAO大鼠中可以增加HSYA的生物利用度,提高药物的效果,增加药物在体内的分布;谷红注射液组与HSYA组比较具有更好的抗氧化作用,对大鼠脑缺血再灌注损伤有明显的保护作用.
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丹红注射液主要有效成分配伍在脑缺血再灌注大鼠体内的药动学研究
目的 应用总量统计矩法研究丹红注射液主要有效成分丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B和羟基红花黄色素A (HYSA)正交配伍对总量药动学参数的影响,研究复方内在配伍规律.方法 以改良的线栓法复制大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,采用正交试验法L9(34)组成丹红注射液主要有效成分(丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B、HYSA)用量配比不同的9个组方,供大鼠尾静脉iv给药,进行药动学研究.用DAS 3.2.6软件以非房室模型法拟合药动学参数,并进一步运用总量统计矩法计算总量药动学参数.应用正交分析法评价配伍对总量药动学参数的影响.结果 丹红注射液主要有效成分丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B和HYSA正交配伍对总量统计矩各参数影响不一,总量零阶矩AUCt以丹参素水平的影响大,且影响显著(P＜0.05),优组合为A3B3C2D1;总量一阶矩MRTt以HYSA水平影响大,优组合为A1B3C1D1.结论 总量统计矩可整合丹参素、原儿茶酸、香草酸、丹酚酸B、HYSA的药动学参数,表达各组方的整体药动学行为,中药复方多成分药动学可采用总量统计矩法进行研究,可为中药复方内在配伍规律研究提供方法.
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羟基红花黄色素A在Caco-2细胞单层模型的转运研究
目的 研究丹红注射液中主要成分羟基红花黄色素A (HSYA)在Caco-2细胞单层模型的转运特征.方法 MTT法确定HSYA对Caco-2细胞单层模型作用的安全浓度范围;采用Caco-2细胞单层模型考察转运时间、药物质量浓度、温度、pH值以及P-糖蛋白(P-gp)抑制剂维拉帕米和能量代谢抑制剂叠氮化钠对HSYA转运的影响;RT-PCR法检测HSYA及维拉帕米对多药耐药基因(MDR1)表达的影响.结果 从项侧(AP)到底侧(BL) (AP→BL),HSYA的表观渗透系数(Papp)在2×10 6～5×10 6 cm/s,表明其吸收性中等;HSYA的转运与其质量浓度和时间呈正相关,37℃下HSYA的Papp与4、25℃下的Papp有显著差异(P＜0.01),pH值为9.0时的Papp与pH值为5.0、7.4时的Papp值也有明显差异(P＜0.01).维拉帕米能明显下调MDR1基因的表达,但HSYA的转运不受维拉帕米的影响;叠氮化钠影响细胞能量代谢,但HSYA的转运不受能量代谢异常的影响,且Papp(BL-AP)/Papp(AP-BL)在1～1.5,HSYA的吸收过程基本符合被动扩散.结论 HSYA在Caco-2细胞模型的转运方式为被动扩散,且不受P-gp和能量代谢的影响,低温和碱性环境下不利于HSYA的吸收.
关键词： 丹红注射液 羟基红花黄色素A 吸收机制 Caco-2细胞单层模型 被动扩散 -
注射用芪红脉通微滤液的超滤工艺适用性研究
目的 以注射用芪红脉通微滤后药液为研究对象,考察4种不同材质的中空纤维超滤膜对注射用芪红脉通药液体系的适用性.方法 分别选取截留相对分子质量为100 000的聚砜、聚醚砜、聚丙烯、混纺复合4种材质的超滤膜进行超滤,测定不同膜材质超滤过程的膜通量,指标成分黄芪总皂苷、黄芪甲苷、羟基红花黄色素A(hydroxy safflower yellowA,HSYA)透过率,固含物减少率,蛋白质减少率,有关物质及热原检查,筛选适宜本产品的超滤膜.结果 相同截留相对分子质量的4种不同材质超滤膜对同一药液体系的适用性存在差异:聚丙烯、聚醚砜和混纺复合材质的膜纯水通量恢复率均较高,而聚砜材质的膜通量和膜纯水通量恢复率较低;聚丙烯与聚醚砜材质的指标成分透过率较高,聚砜与混纺复合材质的固含物与蛋白质去除率较高；对于本产品,截留相对分子质量为100 000超滤膜可有效去除热原.结论 聚丙烯-100000超滤膜既能有效去除固含物与高分子物质,又能保留有效成分,适用于注射用芪红脉通的精制.
