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UPLC-MS/MS同时测定谷红注射液中7种有效成分
目的:建立同时测定谷红注射液中乙酰谷酰胺,羟基红花黄色素A,芦丁,紫丁香苷,山柰素,山柰酚,槲皮素含量的方法.方法:采用超高效液相色谱-串联质谱法.Phenomenex Kinetex C18色谱柱(2.1 mm ×50 mm,5μm),流动相乙腈-0.1％甲酸水溶液,梯度洗脱,流速0.5 mL·min-1;质谱采用正负离子同时监测,多反应监测模式(MRM),进样量5μL.结果:谷红注射液中乙酰谷酰胺,羟基红花黄色素A,芦丁,紫丁香苷,山柰素,山柰酚,槲皮素质量浓度线性范围分别在10.36～663.0,0.500 0 ～ 32.00,0.047 8 ～3.059,0.200 0 ～ 12.80,0.032 4 ～2.074,0.675 0 ～43.20,0.142 5 ～9.120 μg·L-1线性关系良好;平均加样回收率分别为97.0％ ～ 99.2％,RSD ＜3.4％ (n =6);7种成分在3批样品中的质量浓度依次为乙酰谷酰胺28.5 ～32.4 g·L-1,羟基红花黄色素A 1.02～1.23 g·L-1,芦丁14.3 ～ 17.6 mg·L-1,紫丁香苷101 ～ 123 mg·L-1,山柰素12.1 ～14.9 μg·L-1,山柰酚0.138 ～0.155 mg·L-1,槲皮素73.4 ～95.6μg·L-1.结论:该方法简、快速、高效、准确、可靠,适用于同时测定乙酰谷酰胺,羟基红花黄色素A,芦丁,紫丁香苷,山柰素,山柰酚,槲皮素7种有效成分,为该制剂建立更全面的质量控制方法提供依据.
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正交试验法优选骨愈搽剂的提取工艺
目的:优选骨愈搽剂的提取工艺.方法:以羟基红花黄色素A含量为指标,采用HPLC测定,通过L9(34)正交试验法考察乙醇体积分数、提取次数、溶剂用量、提取时间对骨愈搽剂提取工艺的影响.结果:佳提取工艺为加12倍量70％乙醇回流提取2次,每次1.5h.结论:优选的提取工艺稳定可行,且羟基红花黄色素A含量较高.
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骨愈方中羟基红花黄色素A的体外透皮性能考察
目的:研究骨愈方中羟基红花黄色素A的体外透皮释药情况.方法:采用垂直式Franz扩散池进行小鼠离体皮肤透皮吸收试验,以羟基红花黄色素A(HSYA)含量为指标,考察乙醇体积分数和药物浓度对HSYA透皮性能的影响.结果:药液质量浓度和乙醇体积分数的增加均有利于HSYA透过皮肤；选择生药质量浓度1 g·mL-1,乙醇体积分数70％.结论:70％乙醇可显著促进HSYA的皮肤透过作用,为骨愈搽剂的制备提供参考.
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大孔树脂纯化红花中羟基红花黄色素A的产业化探索
目的:优选D101大孔树脂纯化红花中羟基红花黄色素A的工业化放大工艺.方法:采用HPLC测定羟基红花黄色素A含量,通过单因素试验考察上样液pH、洗脱剂体积分数和用量、药材-树脂质量比对纯化工艺的影响,通过中试及工业化生产验证优选的纯化工艺.结果:优选的纯化工艺条件为上样液pH 4.0,药材-树脂质量比1∶6,加4 BV水以3 BVh-1·的流速洗脱除杂,用5％乙醇6 BV以3 BV·h-1的流速洗脱,收集洗脱液.结论:该工艺简单可行、分离效果好,适用于羟基红花黄色素A的大生产.
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多指标加权评分法优选润肤止痒脂质体凝胶提取工艺
目的:优选润肤止痒脂质体凝胶的提取工艺条件.方法:以苦参碱、羟基红花黄色素A含量及浸膏得率为综合评价指标,在单因素试验基础上,采用正交试验法考察浸泡时间、提取时间、加水倍数对提取工艺的影响.结果:佳提取工艺为加12,10倍量水浸泡0.5h,分别提取2.0,1.5h.结论:优选的工艺稳定可行,为润肤止痒脂质体凝胶的进一步开发提供实验依据.
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响应面法优化红花乙醇减压辅助提取工艺
目的:优化红花减压辅助提取的工艺参数,为该工艺的推广与应用提供参考.方法:以羟基红花黄色素A得率为指标,采用响应面分析法对乙醇体积分数、沸腾温度、提取次数、提取时间等参数进行考察,结合扫描电镜微观分析不同处理方式药材表面的微观形态.结果:佳提取工艺为加20倍量50％乙醇于65℃提取2次,每次42 min.羟基红花黄色素A得率1.51％.结论:优选的减压提取工艺稳定可靠,羟基红花黄色素A得率显著高于传统回流提取法,提示减压提取法适合中药材中热敏性成分的提取.
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麝香舒活灵的渗漉提取工艺优选
目的:优选麝香舒活灵的渗漉提取工艺,为该制剂的工业化生产工艺改进提供参考.方法:在单因素试验基础上,以梓醇转移率及含固量为综合评价指标,乙醇体积分数、乙醇用量、渗漉速度、药材浸渍时间为考察因素,采用L9(34)正交试验优选麝香舒活灵的渗漉提取工艺.结果:佳提取工艺条件为加15倍量50％乙醇浸渍6h,流速0.25 mL· min-.羟基红花黄色素A和梓醇的转移率分别为97.50％,102.07％,RSD分别为5.4％,3.5％.结论:该工艺提取率及有效成分转移率高,简单易行,适合麝香舒活灵的工业化大生产.
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高效液相色谱法测定红花散瘀胶囊中羟基红花黄色素A的含量
目的:对红花散瘀胶囊中羟基红花黄色素A进行含量测定.方法:高效液相色谱法,样品用25%甲醇超声提取;0DS柱;以甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(26∶2∶72)为流动相;检测波长403 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:25 ℃.结果:羟基红花黄色素A获良好分离,在0.16～1.60 μg范围内呈现良好的线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率为99.45%,RSD为2.10%.结论:本法简单、准确、重复性好,可用于红花散瘀胶囊中羟基红花黄色素A含量测定.
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红花标准汤剂的质量评价
目的:建立红花标准汤剂的质量控制方法.方法:收集有代表性的14批红花,制备红花标准汤剂,计算出膏率、指标成分转移率和溶液pH等参数,评价工艺的稳定性;建立指标成分含量测定和指纹图谱方法,采用UPLC-Q-TOF/MS对主要色谱峰进行结构确认,明确红花标准汤剂中的主要化学成分.结果:标准汤剂出膏率32.6％,羟基红花黄色素A的转移率61.2％,pH 4.1;标准汤剂中羟基红花黄色素A平均质量浓度3.6 g·L-1,指纹图谱相似度均＞0.9,标准汤剂的主要成分为黄酮类.结论:建立了系统评价红花标准汤剂的质量评价方法,为所有源于红花水煎液的制剂的质量标准制定提供参考,所得红花标准汤剂的指标成分转移率高、质量均一性良好.
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红花水提物中羟基红花黄色素A和脱水红花黄色素B在大鼠体内的药代动力学研究
目的:探讨红花水提物中羟基红花黄色素A(HSYA)和脱水红花黄色素B(AHSYB)在大鼠体内的药代动力学特征.方法:红花水提物大鼠灌胃给药后,HPLC测定血浆中HSYA和AHSYB的含量,运用非房室模型经WinNonlin 5.2软件求取药动学参数.结果:HSYA和AHSYB在大鼠体内的主要药动学参数Cmax、Tmax、t1/2z、 AUC0→t和AUC0→∞分别为(4.14±0.42)和(1.87±0.29) μg/mL、30和20min、(96.78±9.32)和(83.46±7.53) min、(512.18±74.15)和(221.95±22.34)μ g·min·mL-1、(584.78±86.58)和(242.42±23.27)μg·min·mL-1.结论:Cl、t1/2x等数据比较表明红花水提物中HSYA与AHSYB的药代动力学类似,两者在大鼠体内的吸收均较快,代谢也均较慢.
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红花组分HSYA对人胃腺癌BGC-823移植瘤裸鼠VEGF蛋白、KDR与缺氧诱导因子表达的影响
目的:研究红花组分羟基红花黄色素A( HSYA)对人胃腺癌皮下移植瘤裸鼠血管内皮生长因子(VEGF)蛋白、含激酶插入区受体(KDR)和缺氧诱导因子(HIF-1α)mRNA与蛋白表达的影响.方法:采用BALB/C nu/nu裸小鼠接种人胃腺癌细胞株BGC-823于右前肢腋部皮下建立裸鼠人癌移植瘤模型,随机分为模型组、对照组、HSYA高、低剂量组(0.056g/L、0.028g/L),观察抑瘤作用,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测瘤组织VEGF与HIF-1α蛋白以及血清VEGF蛋白表达;蛋白印迹(Western blotting)法测定瘤组织KDR磷酸化蛋白的表达;实时荧光定量PCR( RTFQ-PCR)法检测瘤组织KDR及HIF-lαmRNA表达.结果:HSYA低剂量组抑瘤明显,该组瘤组织及血清VEGF蛋白表达降低,瘤组织KDR磷酸化蛋白表达减弱,与模型组比较差异明显( P＜0.05,P＜0.01);HIF-1 α蛋白表达较模型组瘤组织明显减少(P＜0.01).KDR mRNA表达与模型组相比减弱,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:一定浓度的HSYA抑制肿瘤生长的可能机制与抑制VEGF、HIF-1α蛋白的表达,减弱KDR蛋白磷酸化及其基因表达,从而抑制内皮细胞活化阻碍肿瘤血管新生以及降低肿瘤缺氧微环境对血管生成的诱导有关.
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髓芯减压术联合羟基红花黄色素A对激素性股骨头坏死模兔股骨头微循环的影响
目的:通过观察髓芯减压术联合羟基红花黄色素A(HSYA)对兔激素性股骨头坏死(SANFH)模型的影响,阐明中医活血化瘀法对SANFH的治疗作用.方法:应用马血清+甲强龙静脉注射的方法建立兔SANFH模型,建模成功后随机分为空白组、模型对照组、单纯减压组、联合用药组,单纯减压组和联合用药组行髓芯减压术,且联合用药组在减压后予髓腔内注射HSYA溶液,单纯减压组髓腔内注射同体积0.9％氯化钠溶液.检测各组全血黏度、全血还原黏度以及免疫组化法检测股骨头VEGF表达及MVD.结果:联合用药组血液流变学指标、VEGF表达、MVD均明显高于单纯减压与模型对照组(P＜0.05).结论:HSYA能够改善SANFH模兔血液流变学指标,促进VEGF高表达,促进血管内皮细胞新生,从而促进股骨头内微循环的建立.
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羟基红花黄色素A对体外培养人脐静脉内皮细胞增殖的抑制作用
红花具活血通经,散瘀止痛的功效,其主要水溶性组分为红花黄色素,红花黄色素的主要成分是羟基红花黄色素A[1].临床上红花多用于治疗冠心病、脑血栓、高血脂、肿瘤等.近年来人们对红花黄色素和羟基红花黄色素A的研究多集中在抗心肌缺血,抗血栓等心血管药理活性上[2],对它们在抗肿瘤方面的研究国内外鲜见报道.
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丹红注射液与羟基红花黄色素A对大鼠脑缺血再灌注后IL-1β、TNF-α和Caspase-3mRNA表达的影响
目的:观察丹红注射液和羟基红花黄色素A(HSYA)对大鼠脑缺血再灌注(I/R)后白细胞介素-1 β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和Caspase-3 mRNA表达的影响.方法:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、丹红注射液治疗组(分高、中、低3个剂量组)、HSYA治疗组.应用线栓法建立大鼠中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型;利用实时荧光定量PCR技术分析I/R组织中IL-1 β、TNF-α和Caspase-3 mRNA表达的变化,以β-actin基因作为内参,采用△△Ct法计算mRNA相对表达水平.结果:与假手术组比较,模型组中IL-1β、TNF-d和Caspase-3 mRNA表达水平显著上调(P＜0.01),而丹红注射液各剂量组对上述基因的表达具有明显抑制作用,且抑制效果随剂量的增大而增加.另外使用HSYA(2mg/kg)治疗同样能明显抑制IL-1 β、TNF-仅和Caspase-3的mRNA表达水平.结论:丹红注射液和HSYA均能明显抑制大鼠I/R脑组织中IL-1β、TNF-α和Caspase-3基因的过度表达.
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羟基红花黄色素A不同给药方式对激素性股骨头缺血坏死模兔ERK1/2、JNK和p38蛋白表达的影响
目的:比较羟基红花黄色素A(HSYA)灌胃、耳缘静脉注射和股骨头髓腔内注射3种不同给药方式对激素性股骨头缺血坏死模兔股骨头细胞ERK1/2、JNK、p38蛋白表达的影响.方法:50只成年新西兰大白兔随机分为正常对照组、模型对照组、灌胃组、耳缘静脉注射组、髓腔内注射组,每组10只.除正常对照组外,其余各组每周2次臀肌注射7.5mg/kg醋酸泼尼松龙,连续6周,建立激素性股骨头缺血坏死模型.造模成功后,正常对照组和模型对照组不作治疗,其余3组分别给予HSYA灌胃、耳缘静脉注射和股骨头髓腔内注射治疗,4周、8周后各组分别处死5只,取出患侧股骨头,电镜观察股骨头细胞的超微结构,Western B lo t检测股骨头细胞内ERK1/2、JNK、p38蛋白的表达.结果:4周后,髓腔内注射组ERK1/2蛋白表达较模型对照组明显升高(P＜0.05),JNK、p38蛋白表达较模型对照组明显降低(P＜0.05);8周后,耳缘静脉注射组、髓腔内注射组ERK 1/2蛋白表达较模型对照组明显升高(P＜0.05),JNK、p38蛋白表达较模型对照组明显降低(P＜0.05).结论:HSYA3种不同给药途径中,股骨头髓腔内注射的方式优于其余两种,可较好发挥药物疗效.
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髓芯减压联合羟基红花黄色素A对兔激素性股骨头坏死骨内压的影响
目的:观察髓芯减压术联合羟基红花黄色素A(HSYA)对兔激素性股骨头坏死(SANFH)的治疗作用.方法:应用马血清+甲强龙静脉注射的方法建立兔SANFH模型,建模成功后随机分为空白组、模型组、单纯减压组、联合用药组,予单纯减压组和联合用药组行髓芯减压术,且联合用药组在减压后予髓腔内注射HSYA溶液,单纯减压组髓腔内注射同体积0.9％氯化钠溶液.检测各组股骨头髓腔内压力、股骨头组织切片HE染色观察.结果:单纯减压组较模型组骨内压降低(P＜0.05),联合用药组较单纯减压组减轻股骨头内压力更为明显(P＜0.05).结论:髓芯减压术联合HSYA髓腔内注射能显著降低股骨头内压力.
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羟基红花黄色素A对激素性股骨头缺血坏死兔股骨头组织JNK1表达的影响
目的:观察羟基红花黄色素A(HSYA)对激素性股骨头缺血坏死兔股骨头C-Jun氨基末端激酶1(jNK1)表达的影响.方法:48只新西兰兔随机分为空白组(12只)和模型组(36只).臀肌注射醋酸泼尼松龙建立股骨头缺血坏死模型.6周后光、电镜观察股骨头.造模成功后剩余模兔随机分为模型对照组、髓芯减压组、生理盐水+髓芯减压组、HSYA+髓芯减压组,髓芯减压组行髓芯减压术,生理盐水+髓芯减压组、HSYA+髓芯减压组分别行髓芯减压术配合髓腔内注射0.9％氯化钠溶液或HSYA,余组不处理.1周后RT-PCR技术检测兔股骨头JNK1 mRNA表达,免疫组化法检测其蛋白表达.结果:①光、电镜观察:模型组空缺骨陷窝明显增多,髓腔脂肪细胞增多,异染色质部分边聚,与空白组比较,差异显著(P＜0.05).②JNK1表达:与模型对照组比较,其余4组JN K1 mRNA及蛋白表达均显著降低(P＜0.05);与髓芯减压组比较,HSYA+髓芯减压组两者表达明显降低(P＜0.05).结论:HSYA通过降低细胞凋亡相关的JNK1表达,抑制殷骨头髓腔内细胞凋亡,对抗激素所致股骨头缺血坏死的损伤.
关键词： 股骨头缺血性坏死 激素类 羟基红花黄色素A c-Jun氨基末端激酶1 -
羟基红花黄色素A对体外培养人胃癌细胞增殖、凋亡及周期的影响
目的:观察羟基红花黄色素A(HSYA)对人胃癌BGC803细胞培养上清液诱导的人脐静脉内皮细胞株ECV304、原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)异常增殖的抑制作用,探讨HSYA对人胃癌BGC823细胞增殖、凋亡、周期的影响.方法:建立肿瘤细胞上清液刺激下异常增殖血管内皮细胞模型,通过MTT实验筛选肿瘤上清液佳作用浓度,观察不同剂量HSYA在不同时间点对异常增殖血管内皮细胞的作用;并以人胃癌BGC823细胞为研究对象,MTT法检测不同浓度HSYA对其增殖能力的影响,流式细胞仪检测HSYA对BGC823细胞凋亡及周期的影响.结果:一定浓度HSYA能抑制血管内皮细胞的异常增殖,抑制BGC823细胞的增殖,并促进其凋亡引发周期阻滞.结论:HSYA通过抑制血管内皮细胞和肿瘤细胞的增殖、促进肿瘤细胞凋亡发挥抗肿瘤作用.
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三七益肾颗粒质量标准研究
目的:建立三七益肾颗粒的质量标准,为控制该制剂质量提供检验依据.方法:采用TLC法对三七益肾颗粒中的金银花、马鞭草、紫花地丁、甘草4味药材进行定性鉴别,采用HPLC法对三七益肾颗粒中的人参皂苷Rb1、羟基红花黄色素A和丹酚酸B进行定量测定.结果:TLC方法色谱斑点清晰,分离度好,结果明显,并且不同成分的阴性样品没有干扰;人参皂苷Rb1、羟基红花黄色素A和丹酚酸B进样量分别在0.175-16.484μg、0.03007-7.5180μg、0.09264-15.44μ g范围内与峰面积线性关系良好,r＞0.9999,平均加样回收率分别为100.80％、98.27％、100.63％(n=9).结论:该方法操作过程简便,结果准确、可靠,重现性好,可有效控制三七益肾颗粒的质量.
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七味红花殊胜散质量标准研究
目的 建立七味红花殊胜散质量标准.方法 采用薄层色谱法对处方中诃子、獐牙菜进行定性鉴别.采用高效液相色谱法对制剂中羟基红花黄色素A 进行定量测定,光电二极管阵列检测器,色谱柱为CAPCELL PAK MGC18(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.4%磷酸(30:70),流速1.0 mL/min,检测波长为403 nm,柱温为30 ℃.结果 薄层色谱能定性检出诃子、獐牙菜,斑点清晰,且阴性对照无干扰.羟基红花黄色素A 在0.304～2.280 μg 范围内呈良好的线性关系,r ＝0.999 8,加样回收率为97.92%,RSD＝0.94%.结论 本方法操作简便、专属性、重复性好,可有效控制七味红花殊胜散的质量.
