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HPLC同时测定痛经灵颗粒中3种有效成分含量
目的：建立高效液相色谱法同时测定痛经灵颗粒中丹酚酸 B、芍药苷和羟基红花黄色素 A 含量的方法，为有效控制其质量提供可靠的方法。方法采用Welchrom C18色谱柱，以乙腈（A）-0.1%磷酸（B）为流动相梯度洗脱，流速1.0 mL/min，检测波长为230 nm。结果丹酚酸B在0.197～1.316μg范围内呈良好的线性关系（r＝0.9996），平均回收率为98.72%，RSD＝1.49%；芍药苷在0.158～1.051μg范围内呈良好的线性关系（r＝0.9998），平均回收率为99.01%，RSD＝0.92%；羟基红花黄色素A在0.053～0.353μg范围内呈良好的线性关系（r＝0.9994），平均回收率为98.34%，RSD＝1.60%。结论该方法简便、灵敏、准确、重复性好，可用于痛经灵颗粒的质量控制。
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HPLC同时测定红花药材中4种化学成分含量
目的 建立HPLC同时测定红花药材中羟基红花黄色素A、芦丁、槲皮素、山柰素4种化学成分含量的方法.方法采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),DAD检测器,以0.5%磷酸溶液(A)-甲醇(B)进行梯度洗脱,柱温为30℃,流速为0.8 mL/min,进样量为10μL,检测波长为360 nm.结果羟基红花黄色素A在0.0776~0.7760μg(r=0.9999)、芦丁在0.0460~0.4600μg(r=0.9996)、槲皮素在0.0064~0.0640μg(r=0.9999)、山柰素在0.0128~0.1280μg(r=0.9997)范围内呈良好线性关系.羟基红花黄色素A、芦丁、槲皮素、山柰素的平均回收率分别为99.68%、99.78%、102.03%、97.03%,RSD(n=6)分别为2.29%、1.52%、1.02%、2.05%.结论该法简便、准确,灵敏度高,稳定性和重复性好,可用于红花药材的质量控制.
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肤痒颗粒的质量控制研究
目的 建立肤痒颗粒的定性定量检测方法.方法 采用薄层色谱法鉴别肤痒颗粒中地肤子、白英,高效液相色谱法测定红花中羟基红花黄色素A的含量.使用C18色谱柱,流动相为甲醇-乙腈-0.7%磷酸(24∶6∶70),检测波长为403 nm.结果 定性方法能够检出地肤子、白英;羟基红花黄色素A在0.128～1.024 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,r＝0.999 8,平均回收率为99.52%,RSD＝1.97%(n＝5).结论 该方法可作为肤痒颗粒的定性、定量检测方法.
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羟基红花黄色素A双罐组式逆流提取工艺研究
目的:研究以红花药材为原料,采用罐组式逆流提取技术提取羟基红花黄色素A(HSYA)的优工艺条件.方法:考察了阶段提取时间、提取温度、乙醇浓度、料液比(g·mL~(-1))等因素对提取效果的影响,选用L_9(3~4)正交试验法对提取工艺进行优化研究,并与传统浸提法和药典所述方法进行了比较.结果:阶段提取时间和料液比两个因素对HSYA提取率有显著性影响,佳提取工艺为用10倍药材质量的30%乙醇,在室温下每个阶段提取120 min.在此佳工艺条件下,HSYA提取率为1.56%,浸出物中HSYA纯度为6.06%.与传统浸提法和药典中所述的超声提取法相比,提取率分别提高6.12%和9.09%,纯度分别提高42.9%和27.0%.结论:罐组式逆流提取技术具有操作简便、溶剂用量少、提取率和纯度较高等优点,具有很大的工业化应用价值.
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羟基红花黄色素A对裸鼠人胃腺癌BGC-823移植瘤血管及VEGF,bFGF mRNA表达的影响
目的:研究羟基红花黄色素A(HSYA)对人癌裸鼠皮下移植瘤血管生长、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)mRNA表达的影响.方法:运用BALB/C nu/nu裸小鼠接种人胃腺癌细胞株BGC-823于右前肢腋部皮下建立裸鼠人癌移植瘤模型,随机分为模型组、阳性药对照组、HSYA高、低剂量组,模型组给予生理盐水腹腔注射,HSYA两组分别给予0.056,0.028 g·L~(-1)HSYA溶液腹腔注射,此3组均每只每日注射2次,间隔4～6 h,每次0.2 mL;阳性药对照组给予2 g·L~(-1)环磷酰胺(cytoxan,CTX)每只腹腔注射0.2 mL,每2天1次.20 d后,检测各组肿瘤体积、重量,光镜观察瘤组织病理改变,实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RT-qPCR)检测瘤组织VEGF和bFGF mRNA的表达.结果:HSYA 0.028 g·L~(-1)组移植瘤体积(607.42±252.96)mm~3、质量(0.88±0.14)g,VEGF mRNA表达0.49±0.13,bFGF mRNA表达0.60±0.48均较模型组低(P＜0.05或P＜0.01);给药组较模型组瘤组织血管生成明显减少.结论:一定浓度的HSYA有抑制肿瘤生长的作用,其机制可能与抑制肿瘤血管生成有关.
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羟基红花黄色素A对LPS所致内皮细胞损伤的保护作用
目的:观察羟基红花黄色素A(HSYA)对脂多糖(LPS)诱导内皮细胞损伤的保护作用.方法:建立内皮细胞损伤模型,光镜观察内皮细胞形态的改变,RT-PCR法检测ICAM-1,VCAM-1,TNF-α,IL-6 mRNA的表达水平,免疫荧光染色法观察NF-kB的活化.结果:HSYA可显著抑制LPS诱导的内皮细胞内ICAM-1,VCAM-1,TNF-α,IL-6 mRNA的表达,抑制NF-kB的激活和核转运.结论:HSYA可缓解LPS所致的血管内皮细胞的炎症损伤.
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红花及复方脑得生片中羟基红花黄色素A在大鼠体内的药动学研究
目的:利用反相高效液相色谱法测定大鼠血浆中羟基红花黄色素A的浓度,分别比较红花提取物及复方脑得生片中羟基红花黄色素A的药代动力学参数差别,探讨复方配伍对羟基红花黄色素A在大鼠体内药动学的影响.方法:以相同剂量的羟基红花黄色素A(50 mg·kg-1)对大鼠分别灌胃给予红花药材提取物和复方脑得生片,采用反相高效液相色谱法测定不同时间点血浆中羟基红花黄色素A的含量,利用3P97软件处理数据,进行药动学模型拟合并计算二者的药代动力学参数.结果:羟基红花黄色素A血浆浓度在0.03～2.56 mg·L-线性关系良好,血浆中低检测限和低定量限分别为10,30μg·L-1.高、中、低浓度样品平均回收率分别为(99.3±1.4)％,(92.8±1.8)％,(98.4±2.0)％.大鼠灌胃给予红花提取物和脑得生片后的药-时曲线均符合二房室模型,主要药动学参数AUC0-t,AUC0-∞,Cmax和tmax在红花提取物和脑得生片各组间均有显著性统计学意义.结论:本实验建立的反相高效液相色谱测定法专属、准确、灵敏,适用于羟基红花黄色素A在大鼠体内的药动学研究.脑得生片中其他配伍药材可以促进羟基红花黄色素A的吸收,提高羟基红花黄色素A的生物利用度.
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红花注射液制备过程关键环节中间体生物活性及羟基红花黄色素A含量变化规律
为了探讨红花注射液各生产工艺环节对红花注射液品质的影响,该研究以测定活化部分凝血活酶时间(APTr)和二磷酸腺苷(ADP)诱导的体外抑制血小板聚集率为指标,评价了红花注射液生产过程中的提取、浓缩、2次醇沉、水沉、2次灭菌等关键环节中间体的生物活性,并运用HPLC测定了主要化学成分的含量.结果表明,随着红花注射液的制备工艺流程进展,各中间体的体外抑制血小板聚集率逐渐降低,延长APTT活性变化趋势为先降低然后又升高.此外,羟基红花黄色素A(HSYA)的含量逐渐降低,对羟基肉桂酸的含量升高,并且产生了新的化学成分对羟基苯甲醛.以上结果说明在红花注射液生产制备关键环节中,灭菌环节对红花注射液的生物活性和HSYA的含量影响较大.
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苏木对红花中羟基红花黄色素A的药代动力学影响
目的:研究苏木对红花中羟基红花黄色素A(HSYA)的药代动力学的影响.方法:RP-HPLC测定红花单煎液和红花-苏木配伍液灌胃后正常大鼠血浆中HSYA的血药浓度,DAS 2.0药动学软件计算药动学参数.结果:红花单独给药、红花-苏木配伍给药,HSYA在体内代谢动力学模型均为二室开放模型；配伍后,HSYA的分布半衰期t1、2α、吸收半衰期t1/2Ka、表观分布容积VL/F显著减小,达峰时间tmax有所提前.结论:苏木可加快HSYA在体内的吸收和分布,加快HSYA在体内的代谢过程,减少HSYA在体内的蓄积.
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原儿茶醛与羟基红花黄色素A单用与合用在高脂血症大鼠体内的药动学-药效学相关性研究
探讨原儿茶醛以及羟基红花黄色素A单用与合用在高脂血症大鼠体内的药动学及药效学相关性研究.该实验建立高脂血症大鼠模型,尾静脉注射液原儿茶醛(20 mg·kg-1)及羟基红花黄色素A(12 mg·kg-1),采用HPLC-DAD测定不同时间内原儿茶醛和羟基红花黄色素A的血药浓度,并绘制药-时曲线;同时测定各时间点血浆中血小板活化因子(PAF),血浆a颗粒膜蛋白(GMP-140)含量,绘制时间-效应曲线;采用DAS 3.2.6软件处理并进行相关性分析,比较分析单用及合用后原儿茶醛与羟基红花黄色素A在模型大鼠体内的药动学差异以及药效学指标的变化,评价原儿茶醛、羟基红花黄色素A在高脂血症大鼠体内的影响作用.结果原儿茶醛、羟基红花黄色素A在高脂血症大鼠体内单用及合用后,均符合三房室模型,模型组血浆中PAF及GMP-140明显升高,给予药物后在一定时间内降低PAF及GMP-140在体内的含量.原儿茶醛与羟基红花黄色素A抗药效指标的作用可能与其在体内的水平高低有关,并且其血药浓度与血浆中PAF及GMP-140的含量呈正相关.在高脂血症大鼠体内原儿茶醛和羟基红花黄色素A具有一定的互为影响作用,并且合用后药效学指标更好,同时也反映了原儿茶醛、羟基红花黄色素A合用在临床用药的合理性.
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HPLC测定蒙药德都红花七味丸中羟基红花黄色素A的含量
目的:建立蒙药德都红花七味丸中羟基红花黄色素A的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法；应用Diamonsil C18(4.6 mm ×250 mm,5 μm)色谱柱；以甲醇-乙腈-0.7％磷酸溶液(26∶2∶72)为流动相；流速为1.0mL·min-1;检测波长403 nm；柱温30℃.结果:羟基红花黄色素A在0.068～0.408 μg,与峰面积具有良好的线性关系.羟基红花黄色素A的平均回收率97.66％,RSD 1.7％ (n =6).结论:3批样品中羟基红花黄色素A的平均质量分数为1.50％,可作为蒙药德都红花七味丸的质量控制标准.该方法精密度高,分离度好,可用于蒙药德都红花七味丸中羟基红花黄色素A的含量测定.
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红花提取物对激素性股骨头缺血坏死兔股骨头组织ERK、JNK和P38蛋白表达的影响
目的 探讨红花提取物对激素性股骨头缺血坏死的可能作用机制.方法 将40只成年新西兰大白兔随机分为正常对照组、模型对照组、髓芯减压组、生理盐水+髓芯减压组、红花提取物+髓芯减压组,每组8只.除正常对照组外,其余各组建立激素性股骨头坏死模型.造模成功后,正常对照组和模型对照组不予处理,髓芯减压组仅行髓芯减压术,生理盐水+髓芯减压组采用髓芯减压术配合髓腔内注射生理盐水,红花提取物+髓芯减压组采用髓芯减压术配合髓腔内注射羟基红花黄色素A(7.2 mg/kg).1周后处死兔,取出患侧股骨头,采用免疫印迹法检测组织中ERK、JNK和P38蛋白表达. 结果 与正常对照组比较,模型对照组ERK1和ERK2表达明显降低,JNK和P38表达明显升高(P＜0.05);与模型对照组比较,髓芯减压组、生理盐水+髓芯减压组和红花提取物+髓芯减压组ERK1和ERK2表达明显升高,JNK和P38表达明显降低(P＜0.05);与髓芯减压组比较,红花提取物+髓芯减压组ERK1和ERK2表达升高明显,JNK和P38表达降低明显(P＜0.05).结论 红花提取物可通过激活丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)相关通路,增高ERK的磷酸化水平,降低JNK和P38的磷酸化水平,促进股骨头髓腔内细胞增殖、分化,抑制其凋亡,从而减轻激素导致股骨头缺血坏死的损伤,促进坏死股骨头的修复.
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羟基红花黄色素A抑制H22小鼠肝癌移植瘤血管生成及减少MMP-3的表达
目的：研究红花组分羟基红花黄色素A（ HSYA）对H22小鼠肝癌移植瘤组织新血管生成的抑制作用及对基质金属蛋白酶-3（ MMP-3）的影响。方法建立H22小鼠肝癌移植瘤模型，第2天将小鼠随机分为对照组、索拉非尼组及HSYA组（1.125和2.25 mg／kg），HE观察肝癌移植瘤组织病理；用免疫组织化学法检测肿瘤组织中CD34的表达，计数微血管密度（ MVD）；免疫组化和Western blot分别检测瘤组织中MMP-3的表达。结果与对照组相比， HSYA组（1.125和2.25 mg／kg）的MVD显著降低（P＜0.01），MMP-3蛋白在移植瘤组织中的表达明显减少（P＜0.01），以HSYA组（2.25 mg／kg）效果为显著，但不及索拉非尼组。结论 HSYA在一定浓度范围内抑制H22小鼠肝癌移植瘤血管生成，其作用可能与降低基质金属蛋白酶-3的蛋白表达有关。
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红花组分抗肿瘤作用机制研究进展
恶性肿瘤逐渐成为危害人类生命健康的重要疾病之一。传统化疗、放疗副作用较大，手术治疗容易复发等，因此从天然物质中寻找安全有效、副作用小的抗癌药物成为近年来的研究热点。研究发现，中药红花具有活血通经、祛瘀止痛的作用，其抗肿瘤主要成分为红花黄色素、羟基红花黄色素A 及红花多糖等，本文就红花组分抗肿瘤作用机制综述如下。
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羟基红花黄色素A对实验性大鼠肝纤维化TGF-β1-CTGF的影响
目的：探讨羟基红花黄色素 A （ HYSA ）抗四氯化碳所致肝纤维化的作用及对TGF-β1/CTGF表达的影响，为探索HYSA抗肝纤维化治疗的应用提供实验依据。方法将SD大鼠36只随机分为对照组、模型组和HYSA组（每组12只），以四氯化碳制备大鼠肝纤维化模型，HYSA组给予10 mg/kg HYSA治疗，8周后通过HE染色和Masson染色对肝纤维化程度进行评分；免疫组织化学观察TGF-β1、CTGF表达。结果 HYSA组与模型组相比，在纤维沉积面积[（2.168±0.160）%vs.（3.984±0.398）%]、纤维化评分（9.250±4.126 vs.19.333±3.448）、TGF-β1表达（0.184±0.018 vs.0.287±0.019）及CTGF表达（0.082±0.011 vs.0.129±0.015）差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论 HYSA 可明显减轻四氯化碳所致的肝纤维化的程度，HYSA 可能通过抑制 TGF-β1和 CTGF的表达发挥抗肝纤维化的作用。
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红花黄色素及羟基红花黄色素A对Pindolol-β受体结合力的影响
目的:观察红花黄色素(SY)和羟基红花黄色素A(HSYA)对B受体结合力的影响.方法:以放射配基受体结合实验观察SY及HSYA拮抗[125I]-s-(-)-Pindolol与大鼠心室肌细胞膜β受体特异性结合的作用.结果:SY及HSYA抑制[125I]-s-(-)-Pindolol与大鼠心室肌细胞膜β受体的特异性结合具量效关系,SY的IC50为(17.5±1.3)g/L,KiSY值为12.9g/L;HSYA的IC50为(35.6±1.4)mmol/L,KiHSYA值为26.4 mmol/L.结论:SY及HSYA对Pindolol-β受体结合力有一定的影响.
关键词： 羟基红花黄色素A 放射配基受体结合实验 -
羟基红花黄色素A缓解脂多糖诱导内皮细胞炎症因子表达升高的研究
[目的]:研究羟基红花黄色素A(HSYA)抑制脂多糖(LPS)诱导的脐静脉血管内皮细胞(Eahy926细胞)炎症因子表达升高的作用.[方法]:采用RT-qPCR法测定Toll样受体4(TLR4)、白介素6(IL-6)、白介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNFα)mRNA表达水平及ELISA法测定IL-6、IL-1β和TNFα蛋白表达水平.[结果]:HSYA浓度为5×10-6mol/L、10×10-6mol/L和20×10-6mol/L时可抑制LPS(终浓度为1μg/mL)诱导的Eahy926细胞IL-6、IL-1β和TNFα mRNA(模型组vs.正常组P值均＜0.01；HSYA干预中高剂量组vs.模型组P值均＜0.01;HSYA干预低剂量组vs.模型组,P值均＜0.05)和TNFα蛋白(模型组vs.正常组,P值均＜0.01；HSYA干预IL-1β表达的中高剂量组vs.模型组,P值＜0.05；HSYA干预TNFα表达的中剂量组vs.模型组,P值＜0.05；高剂量组vs.模型组,P值＜0.01.HSYA干预IL-6表达的低剂量组vs.模型组,P值＜0.05；HSYA干预中高剂量组vs.模型组,P值＜0.01)表达的升高,并随HSYA剂量升高可见药效增强.[结论]:HSYA对LPS诱导的Eahy926细胞TLR4、IL-6、IL-1β、TNFα表达升高有抑制作用.
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羟基红花黄色素A缓解血小板激活因子诱导的内皮细胞炎症因子表达升高作用的研究
目的:观察红花有效成分羟基红花黄色素A(HSYA)缓解血小板激活因子(PAF)诱发的内皮细胞炎症介质表达升高的作用.方法:培养Eahy926脐静脉内皮细胞株,加入HSYA,以PAF刺激后提取总RNA,RT-PCR法检测白细胞介素1-β(IL-1β)、IL-6、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及血管细胞黏附分子-1(VCAM-1) mRNA表达水平的变化.结果:PAF刺激后内皮细胞IL-1β、IL-6、ICAM-1及VCAM-1 mRNA表达水平升高,HSYA可缓解这种变化.结论:HSYA能够缓解PAF诱发的血管内皮细胞炎症介质IL-1 β、IL-6、ICAM-1及VCAM-1 mRNA表达的升高.
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羟基红花黄色素A抑制血小板活化因子诱导的与支气管哮喘相关信号转导的研究
目的:探讨羟基红花黄色素A(HSYA)抑制血小板活化因子(PAF)诱导的与支气管哮喘相关信号转导的研究.方法:体外培养A7r9细胞株,加入HSYA,以10-8mol/L PAF刺激后,采用MTS法检测细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞内游离钙浓度,蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白激酶C(PKC)表达水平和NF-KB p65的核转移.结果:与PAF组相比,PAF+HSYA组在HSYA浓度＞1.5 μmol/L时,可抑制A7r5细胞的增殖(P＜0.05);且可明显抑制PAF所致的细胞内游离Ca2浓度的升高(均P ＜0.001);HSYA浓度＞3μmol/L时,可明显抑制PAF诱发PKC的表达升高和p65的核转移,并呈现出明显的浓度依赖性.结论:HSYA可抑制PAF诱发的A7r5细胞的信号转导.
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大孔树脂-凝胶柱层析法大规模制备纯品羟基红花黄色素A
目的:以大孔树脂-凝胶柱层析法制备羟基红花黄色素A(HSYA).方法:室温浸提法提取红花水提液,大孔树脂柱层析法制备HSYA粗品,Sephadex LH-20凝胶柱层析法制备HSYA纯品,HPLC法分析HSYA纯品纯度,观察该HSYA抑制ADP诱导家兔体外血小板聚集的作用.结果:红花水提液经大孔树脂-凝胶柱层析法获得HSYA的纯度为95.3%,该成分抑制ADP诱发的家兔血小板聚集呈量效关系.结论:大孔树脂-凝胶柱层析法制备HSYA的方法为一简便、有效的技术.
