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脑心通对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响
目的 探讨脑心通对大鼠脑缺血的保护作用.方法 应用线栓法制备大鼠脑缺血模型.将大鼠分为假手术组、模型组、低剂量组和高剂量组,各组分别于术后给予不同剂量脑心通灌胃,术后24、48、72、96h取脑组织进行HE染色、TTC染色及测定bcl-2表达的动态变化.结果 低、高剂量组均能减少大鼠脑梗死体积；提高脑缺血区bcl-2的表达.结论 脑心通对大鼠脑缺血损伤有保护作用.
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制作线栓法大鼠脑缺血再灌注模型的要点及体会
线栓法复制大鼠脑缺血再灌注损伤模型具有无需开颅、缺血时间可控、梗塞部位较明确等优点,被国内外学者广泛用于脑缺血再灌注损伤的研究.我们对常用的线栓法大鼠脑缺血再灌注损伤模型进行了比较研究,本文介绍我们对复制该模型的要点及体会.
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线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的研究及体会
目的 探索用线栓法制作稳定、可重复的大鼠大脑中动脉闭塞脑缺血/再灌注模型.方法 采用数字表法将SD大鼠随机分为两组,组1体重控制为230～249g;组2体重控制为250 ～269g,每组10只.以改良的Longa法使用特定型号栓线制作大鼠大脑中动脉闭塞模型,缺血2h后拔出线栓实现再灌注,并评估两组大鼠的神经功能缺损情况,再灌注24h时取脑行2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色,计算并比较两组大鼠的死亡率,神经功能评分和相对脑梗死体积.结果 两组大鼠的死亡率均为10％,组1神经功能评分相对稳定,个体差异小,显著高于组2(P＜0.05);组2的脑相对梗死体积小于组1,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 238±6g(230 ～ 249g)的SD大鼠采用沙东2636-4A型号的栓线可得到稳定的大鼠大脑中动脉闭塞脑缺血再灌注模型.
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谷红注射液在脑缺血再灌注大鼠体内药动学与抗氧化作用关联性研究
目的 研究谷红注射液中羟基红花黄色素A (HSYA)在脑缺血再灌注大鼠体内的药动学及其与抗氧化作用的关联性.方法 采用平衡透析法测定HSYA及谷红注射液中HSYA的血浆蛋白结合率;SD大鼠制备大脑右侧中动脉局灶性栓塞(MCAO)模型,分为HSYA组(4 mg/kg)及谷红注射液组(10 mL/kg),尾iv给药,采用高效液相(HPLC)法测定不同时间点HSYA的血药浓度,绘制药时曲线;同时采用试剂盒法测定不同时间点血浆中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)活性,绘制效时曲线;进一步进行药动-药效联动分析.结果 HSYA和谷红注射液中HSYA在质量浓度为2.5、10.0、25.0 mg/L时血浆蛋白结合率分别是77.96％、73.54％、76.13％和68.21％、58.22％、63.17％;HSYA的血浆药物质量浓度在0.01～50 mg/L线性关系良好,低、中、高血浆药物浓度平均回收率分别为(99.94±2.82)％、(104.16±1.41)％、(99.74±1.06)％;谷红注射液组与HSYA组比较,曲线下面积(AUC)显著增加,平均驻留时间(MRT0-t)显著减少,表观容积(Vz)显著增加;血浆中GSH-Px活性升高,与血药浓度呈正相关,LDH活性降低,与血药浓度呈负相关.结论 HSYA均具有中等强度的血浆蛋白结合率,且谷红注射液中HSYA血浆蛋白结合率有所降低;谷红注射液在MCAO大鼠中可以增加HSYA的生物利用度,提高药物的效果,增加药物在体内的分布;谷红注射液组与HSYA组比较具有更好的抗氧化作用,对大鼠脑缺血再灌注损伤有明显的保护作用.
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乌司他丁对大鼠脑缺血再灌注后大脑皮质Bcl-2Fas Caspase-3表达的影响
乌司他丁是一种从健康成年男性尿液中分离纯化的尿胰蛋白酶抑制药[1].为糖蛋白,含有143个氨基酸,相对分子质量约67 000,有2个活性功能区,且不完全重叠,能够同时抑制多种蛋白酶,对溶酶体膜有稳定作用.还可抑制细胞因子和炎症介质的释放、清除氧自由基、改善休克时的循环状态.研究显示乌司他丁对脑有保护作用[2].但机制还不够完善.本实验采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,观察乌司他丁处理对缺血再灌注脑组织中Bcl-2、Fas、Caspase-3蛋白表达的影响,进一步探讨乌司他丁的脑保护作用机制.
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小鼠脑缺血再灌注模型方法及中药的药理作用
近年来众多学者对小鼠脑缺血再灌注模型的制备方法及中药的防治作用进行了研究.模型多采用可逆性阻断双侧颈总动脉为主造成小鼠短暂性全脑缺血再灌注模型;或采用线栓法阻断局部血流造成小鼠局灶性脑缺血再灌注模型.中药成分及其复方通过清除氧自由基、减轻Ca2+超载及兴奋性氨基酸的神经毒作用、抑制神经细胞凋亡、改善血液流变学等作用来减轻小鼠脑缺血再灌注损伤.
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插线法制作大鼠大脑中动脉闭塞局灶性脑缺血再灌注模型
目的:比较两种大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,寻找一种更加理想、稳定和可靠的模型.方法:选用Ethicon缝线(直径0.16 mm)和Takeno钓鱼线(直径0.20 mm),按Koizumi和Longa插线法制作局灶性脑缺血再灌注模型.缺血2 h再灌注4 h和22 h神经病学评分计算有效率和死亡率.TTC染色计算梗死面积百分比.结果:Koizumi模型再灌注4 h有效率和22 h梗死面积百分比较Longa法为高,而再灌注4 h死亡率较低.结论:大鼠MCAO局灶性脑缺血再灌注模型采用Koizumi法优于Longa法.理想的大鼠插线模型受插线直径、插线头端形态、插入深度和大鼠体重等因素影响.
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开窍醒脑汤对脑缺血再灌注大鼠脑内热休克蛋白70表达的影响
健康雄性Wistar大鼠30只,分为空白对照组、造模组、中药治疗组,每组10只.空白对照组与造模组室温下常规饲养,中药组按5 g/(kg·d)生药量,每日灌服1 ml中药开窍醒脑汤制剂,共10 d.取相关组织制作免疫组化及普通病理标本对照观察.结果 对照组大鼠脑内镜下神经元形态正常,脑内未见HSP70免疫反应阳性细胞;造模组大鼠海马区散在出现受损神经元,发现少量HSP70免疫反应阳性神经元;中药组大鼠海马区零星分布受损神经元,与造模组比较,免疫组化染色阳性强度增强,阳性细胞数增多.认为中药开窍醒脑汤可增强脑缺血再灌注损伤大鼠脑内热休克蛋白的表达,对神经元功能的恢复具有良性作用.
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小鼠脑缺血再灌注模型的建立
缺血再灌注损伤(ischem ia reperfusion injury,IR I)是指遭受一定时间缺血的组织恢复血供后,组织损伤程度加重的病理现象.近年来众多学者对小鼠脑缺血模型的制备方法进行了研究.模型多采用可逆性阻断双侧颈总动脉为主造成小鼠短暂性全脑缺血再灌注模型;或采用线栓法阻断局部血流造成小鼠局灶性脑缺血再灌注模型[1,2].
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立体定向移植骨髓间充质干细胞对脑缺血再灌注模型大鼠的治疗作用
目的 探讨立体定向途径移植骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)对脑梗死的疗效及作用机制.方法 全骨髓贴壁法分离、培养BMSCs,及应用流式细胞术鉴定;线栓法制作大鼠MCAO模型;粘附实验、改良神经功能损伤评分(modified neurological severity score,mNSS)和体质量评估大鼠的神经功能改善及体能恢复;免疫荧光法检测Brdu标记的BMSCs;免疫组织化学检测大鼠脑组织中Ki-67、Nogo-A、NSE、GFAP、SYN及VEGF的阳性细胞;Bielshowsky's-Luxol Fast Blue 双染检测大脑内神经纤维的增生情况.结果 BMSCs低表达CD34、CD45和CD11b,中表达CD106,高表达CD90、CD29.BMSCs组与对照组比较:大鼠的行为学功能(粘附实验和mNSS评分)显著好转(P<0.05);梗死侧脑组织SYN、Ki-67、GFAP和VEGF阳性细胞数显著增多(P<0.05),Nogo-A显著降低(P<0.05),NSE未见显著变化(P>0.05);梗死侧神经纤维再生增强.结论 立体定向途径移植BMSCs能促进脑梗塞受损的神经功能的恢复,并可能是通过增强内源性细胞增殖、突触重建、神经纤维修复和星形胶质细胞保护作用等机制发挥其疗效.
