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固有免疫实验检测研究进展
固有免疫(innate immunity)也称天然免疫,是机体与生俱来的对"外来入侵物质"发生即时反应的一种免疫应答,属于免疫系统的第一道防线."外来入侵物质"包括免疫系统识别的内源性物质.固有免疫研究已经历120多年,但长期以来,多数研究只停留在现象探讨,如皮肤或黏膜的屏障作用、体液的杀菌作用、单核巨噬细胞及粒细胞的吞噬作用、自然杀伤(NK)细胞的杀伤作用、炎性因子的炎症作用等.
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热疗联合MMC诱导LoVo细胞凋亡和bcl-2表达
近年来许多学者逐渐认识到凋亡与肿瘤关系是当今肿瘤研究的热点[1-10],因为恶性肿瘤的产生和发展,不但是由于细胞的无限增殖,还由于细胞内部控制细胞死亡通道即凋亡(apoptosis)的机制障碍或二者失去平衡所致[1-3,7].我们应用流式细胞仪、电镜和琼脂糖DNA电泳,研究热疗联合MMC对诱导LoVo细胞凋亡和bcl-2基因表达的作用,并初步探讨其机制
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河豚卵巢提取物对小鼠免疫功能的影响
有关从河豚卵巢提取得到的有效成分对小鼠具有增强免疫功能的效果的研究,我们进行初步的研究和探讨,现报告如下.
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小鼠急性心肌梗死后巨噬细胞吞噬心肌细胞碎片对MAPK信号通路的实验研究
目的:探讨小鼠急性心肌梗死模型巨噬细胞的吞噬功能及丝裂原始化蛋白激酶(MAPK)信号激活情况.方法:对野生型C57BL/6J小鼠进行急性心肌梗死模型,3d时,收取心脏组织进行冰冻切片和免疫荧光F4/80(巨噬细胞标志物)染色检测巨噬细胞的浸润情况;体外分离骨髓来源的巨噬细胞和小鼠心肌细胞,用荧光染料对心肌细胞进行标记之后诱导心肌细胞坏死,用坏死心肌细胞碎片刺激巨噬细胞,免疫荧光和流式细胞术检测巨噬细胞对坏死心肌细胞碎片的吞噬能力;利用western检测巨噬细胞吞噬坏死心肌细胞碎片之后MAPK信号通路激活情况.结果:心肌梗死手术后3d,小鼠心脏部位的巨噬细胞浸润明显增加;利用坏死心肌细胞碎片刺激巨噬细胞1h后,免疫荧光confocal检测发现,巨噬细胞对坏死心肌细胞碎片有吞噬能力.流式细胞术检测显示,相比对照组(77.1±1.3)％的巨噬细胞吞噬了坏死心肌细胞碎片(P＜0.01).western检测结果显示,巨噬细胞吞噬坏死心肌细胞碎片之后MAPK信号通路中的p38,Erk,JNK均发生磷酸化.结论:急性心肌梗死早期,心脏组织部位有巨噬细胞的浸润.巨噬细胞可能通过吞噬坏死心肌细胞碎片,促进MAPK信号通路激活,从而介导心肌梗死后的炎症反应.
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利用噬菌体杀灭巨噬细胞内耻垢分枝杆菌的实验研究
目的探讨噬菌体能否杀灭巨噬细胞内耻垢分枝杆菌,并成为减少细胞内活菌量的手段.方法将体外培养的已感染耻垢分枝杆菌的小鼠腹腔巨噬细胞随机分为4组:生理盐水组,噬菌体高剂量组、中剂量组和低剂量组.分别加入生理盐水0.1 ml、10#噬菌体2.1×107噬菌斑形成单位(PFU)、2.1×106 PFU和2.1×105 PFU.通过洗涤去除细胞外的噬菌体与耻垢分枝杆菌,观察加入噬菌体24 h后巨噬细胞内耻垢分枝杆菌活菌数量变化情况.并在电子显微镜下观察巨噬细胞吞噬噬菌体前后胞内改变情况.结果 24 h后生理盐水组巨噬细胞内活菌数的对数值为5.74±0.18,噬菌体高、中、低剂量组的活菌数对数值分别为4.77±0.08、4.97±0.17、5.33±0.13.生理盐水组的活菌数高于噬菌体高、中、低剂量组,其中生理盐水组与噬菌体高、中剂量组之间比较差异有统计学意义(P<0.01).高、中剂量组间差异无统计学意义(P＞0.05),高、低剂量组间差异有统计学意义(P<0.01).]显微镜显示噬菌体能感染细胞内的耻垢分枝杆菌,合成子代噬菌体.结论感染了分枝杆菌的巨噬细胞可以同时吞噬10#噬菌体,进入细胞内的噬菌体能感染裂解胞内分枝杆菌使活菌量减少,使噬菌体治疗分枝杆菌感染成为可能.
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吞噬清除微血管栓子机制在缺血性血管病中的作用
缺血性血管病如脑梗死、心肌梗死、肺栓塞、眼底缺血等疾病较为常见,微血管堵塞是缺血性血管病的一种常见的类型.机体通过纤溶系统、血流动力学冲击及其他清除机制保证微血管通畅,我们重点就吞噬清除微血管栓子机制在其中发挥的作用作一综述.
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门静脉高压症脾功能亢进脾巨噬细胞吞噬功能的变化及其与脾亢程度的相关性
目的观察门静脉高压症患者脾功能亢进(脾亢)时,脾脏巨噬细胞(MΦ)吞噬功能及其与外周血细胞计数变化的相关性.方法肝硬化门静脉高压症脾亢患者20例(脾亢组),外伤性脾破裂患者6例(对照组).术前检测患者外周血细胞计数,并收集其手术切除的脾脏,用玻片贴壁法分离培养脾脏MΦ,鸡红细胞吞噬法检测MΦ的吞噬功能.结果脾脏MΦ吞噬率:脾亢组为(12.6±3.0)%,显著高于对照组(6.9±0.5)%,P<0.01;吞噬指数:脾亢组为0.146±0.035,显著高于对照组0.076±0.008,P<0.01.外周血白细胞计数与脾MΦ的吞噬率负相关(r=-0.472,P<0.05),与吞噬指数也呈负相关(r=-0.625,P<0.01);外周血血小板计数与脾MΦ吞噬率负相关(r=-0.485,P<0.05),与吞噬指数负相关(r=-0.523,P<0.05).结论门静脉高压症脾亢脾MΦ吞噬功能增强可能是引起脾亢发生及决定脾亢程度的重要因素.
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蒙古族慢性乙型肝炎患者HLA-DRB1基因多态性与乙型肝炎病毒高复制状态的相关性研究
人类对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)普遍易感,除病毒本身毒力强弱、数量和环境因素外,宿主的遗传因素极有可能是影响乙型肝炎进展和预后的重要因素之一[1-3].HBV感染者的肝细胞损伤并非由病毒本身引起,而是由免疫反应导致.研究发现人类白细胞抗原(human leucocyte antigen, HLA)Ⅱ分子可以增加巨噬细胞对免疫复合物的吞噬作用, 这对于HBV的清除以及引起肝细胞损害具有极为重要的意义,并可能与HBV持续感染的易感性有关[4-5].
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半边旗提取物6F诱导HL-60细胞凋亡
目的:探讨蕨类植物半边旗提取物6F杀伤HL-60细胞的作用机制.方法:应用倒置显微镜观察细胞形态、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞光度术、DNA片段形成率等方法检测细胞凋亡.结果:58～231 nmoL/L 6F作用HL-60细胞12～24h后,呈现典型的凋亡细胞的形态学改变,琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯状条带,流式细胞光度术结果显示有亚倍体(Sub-G1)峰,DNA片段率结果显示6F诱导HL-60细胞凋亡呈时间和剂量效应关系,6F达到29 umol/L时只需作用3 h即可直接使细胞坏死.结论:6F可诱导HL-60细胞凋亡,药物在一定的浓度范围内是其杀伤HL-60细胞的机制之一.
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动脉粥样硬化相关基因的研究进展
动脉粥样硬化(AS)是缺血性脑血管病的重要病理基础,防治AS是防治缺血性脑血管病的基本措施.近10多年来,关于AS发生机制的研究进展很快.特别是分子生物学理论和技术的发展,对AS病因及病理学的研究起到了巨的大推动作用,使人们对AS形成的机制有了进一步的认识.现将AS形成过程涉及的多种蛋白和基因,其中主要包括脂蛋白受体、黏附分子、生长因子、细胞因子、基质金属蛋白酶和吞噬作用相关基因研究进展综述如下.
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黑素小体转运机制的研究进展
色素的生物合成过程已基本明确,但黑素小体从黑素细胞转运至邻近的角质形成细胞的机制尚未完全明了.目前认为许多分子和信号转导途径参与此过程,如KGF、PAR-2、外源凝集素、拟糖蛋白、Rab-27a、肌球蛋白Va、Rho、Ca2+、cAMP/PK等,另外紫外线照射也影响黑素小体转运.了解黑素小体转运机制对于治疗色素异常疾病及开发美白产品有重要意义.
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豚鼠发育过程前庭上皮细胞增殖和凋亡的关系
目的研究豚鼠胚胎正常发育过程中前庭上皮细胞增殖和细胞凋亡的变化，探讨两者之间的关系及在前庭终器发育中的作用。方法选用不同发育期正常豚鼠20只，取前庭上皮组织切片, 用免疫组化法检测增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen, PCNA), 以末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物dUTP缺口末端标记技术(TdT-mediated deoxyuridine triphosphate-biotin nick end labelling, TUNEL)和透射电镜观察细胞凋亡。结果 PCNA阳性细胞为支持细胞, 毛细胞无阳性反应, 随年龄增加，阳性细胞数逐渐减少。TUNEL阳性反应可发生于毛细胞和支持细胞, 随年龄增加，阳性细胞数逐渐减少；出生后壶腹嵴阳性毛细胞位于其顶部。电镜下胚胎期毛细胞和支持细胞均可发生凋亡。结论发育过程中，豚鼠内耳前庭上皮细胞增殖与细胞凋亡数目均逐渐减少，凋亡和增殖同时存在，自动调节正常细胞数目，与保证器官正常形态的发育相关。
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MerTK及其配体在视网膜色素变性中的研究进展
视网膜色素变性是一种遗传性致盲眼病,与吞噬相关的基因在人类和大鼠中为MerTk,在小鼠中为Mer.该基因编码的蛋白Mer是受体酪氨酸激酶亚家族中的一员,其配体为蛋白S和Gas6.当该基因功能缺陷时,视网膜发生类似视网膜色素变性的病理性改变,而基因治疗可以恢复视网膜色素上皮吞噬外节盘膜的能力.在吞噬过程中,两个配体均参与吞噬过程,但具体机制目前仍不清楚,尚需进一步深入研究.
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视网膜色素上皮细胞吞噬功能与信号转导系统的关系
视网膜色素变性(RP)是一种严重的致盲性眼病,其确切病因不明.除了遗传因素外,近年的研究表明,视网膜色素上皮(RPE)细胞吞噬功能异常是导致视觉功能障碍的主要原因.本文简单介绍视网膜色素上皮细胞特异性吞噬功能,详细分析了IP3、PKC、cAMP、cGMP、PTK及Ca2+对RPE细胞吞噬的调节作用,综述了RP发病机制中涉及RPE细胞吞噬功能与信号转导系统的研究进展.
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视网膜色素上皮细胞特异性吞噬功能的研究
视网膜色素上皮细胞(RPE)特异性吞噬感光细胞脱落的外节膜盘(OS)是一个由多受体介导的复杂的生理生化过程,此过程主要分为三个阶段:结合、内吞和消化.本文介绍了参与特异性吞噬的主要受体,包括甘露糖受体、毒蕈碱能受体、CD36、αVβ5整合素受体和MertK酪氨酸蛋白激酶受体.还介绍了病理状态下以及视网膜移植时,RPE吞噬功能的改变.
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人视网膜色素上皮细胞吞噬过程中MERTK基因mRNA表达水平与蛋白激酶C关系的研究
目的 探讨人视网膜色素上皮(hRPE)细胞吞噬过程中MERTK基因mRNA表达水平与蛋白激酶C(PKC)的相互作用.方法 对照实验研究.采用1×1010个/L视细胞外节膜盘(ROS),于37℃下孵育体外培养的正常hRPE细胞,在孵育的不同时间终止吞噬反应.用双重荧光标记法,检测hRPE细胞的吞噬能力.用液闪记数γ-32P放射活性法,检测不同吞噬时间点的PKC活性.以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,检测MERTK基因的mRNA水平变化情况.以PKC激活剂和拮抗剂处理hRPE细胞后,再行MERTK基因mRNA表达水平检测.采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析,实验组与对照组hRPE细胞吞噬ROS能力、PKC活性比较采用Student't检验,MERTK基因mRNA表达水平比较采用单因素方差分析.结果 ROS孵育后的hRPE细胞结合及吞入ROS的数量逐渐增多,至24 h时,hRPE细胞吞噬ROS的数量达到高峰,为(2.85±0.11)×106个,与对照组(0.00±0.00)×106个比较,差异有统计学意义(t=47.64,P＜0.05).ROS孵育后的hRPE细胞胞质PKC活性降低,至24 h时,PKC活性降至低,细胞质的PKC活性为(151.13±17.67)nmol·g-1·min-1,细胞膜的PKC活性为(152.45±64.83)nmol·g-1·min-1;对照组细胞质的PKC活性为(329.63±14.26)nmol·g-1·min-1,细胞膜的PKC活性为(467.67±68.87)nmol·g-1·min-1;两组间PKC活性比较,差异有统计学意义(细胞质:t=89.66,P＜0.05;细胞膜t=10.31,P＜0.05).在hRPE细胞与ROS不同时段的孵育过程中,MERTK基因mRNA均呈现出高表达状态,孵育至90 min时,MERTK基因mRNA表达灰度值为1.8853±0.0077,与对照组灰度值0.7246±0.0062相比,差异有统计学意义(F=16 060.2167,P＜0.05);孵育至24 h时,MERTK基因mRNA表达灰度值为0.5946±0.0082,与对照组灰度值0.3343±0.0064比较,差异有统计学意义(F=919.8421,P＜0.05).上调hRPE细胞的PKC活性后,再行不同时段的ROS孵育,短时与长时孵育的MERTK基因mRNA表达灰度值均低于对照组(短时孵育:F=17 142.2331,长时孵育:F=1886.4614;P＜0.05).拮抗hRPE细胞的PKC活性后,再行不同时段的ROS孵育,30 min内MERTK基因mRNA表达灰度值为4.4670±0.0092至5.7034±0.0095范围,均高于对照组灰度值0. 9117±0.0021(F=199 012.9138,P＜0.05).结论 PKC的低活性和MERTK基因mRNA的高表达可促进hRPE细胞吞噬ROS的过程.PKC活性和MERTK基因mRNA表达水平作为上游调控信号,通过两条不同的信号通路,以负相关的方式调节hRPE细胞吞噬ROS的功能.
关键词： 色素上皮 眼 吞噬作用 蛋白激酶C 受体蛋白质酪氨酸激酶类 -
白细胞介素-1α对培养的人眼小梁细胞吞噬功能的影响
目的 观察白细胞介素-1α(IL-1α)对体外培养的人眼小梁细胞(HTM)吞噬功能的影响.方法 取人眼小梁组织进行小梁细胞体外培养,取传3～5代的人眼小梁细胞,加入不同浓度的IL-1α的DMEM-F12培养液,用倒置相差显微镜、光镜、电镜观察细胞吞噬功能的变化.结果 小梁细胞吞噬乳胶微球数与IL-1α浓度(F=3.603,P=0.046)和作用时间(F=15.846,P=0.005)均有相关性(F=18.069,P=0.000).结论 IL-1α可以直接损害体外培养的人眼小梁细胞吞噬功能,其吞噬程度与IL-1α作用时间和浓度相关.(中华眼科杂志,2006,42:977-979)
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人视网膜色素上皮细胞吞噬过程中环磷酸腺苷及蛋白激酶C的改变
目的研究人视网膜色素上皮(HRPE)细胞特异性及非特异性吞噬过程中环磷酸腺苷(cAMP)浓度及蛋白激酶C(PKC)活性的变化,探讨cAMP及PKC在HRPE的吞噬功能中所起的作用.方法用1×107 个/ml视杆细胞外节膜盘(ROS)及乳胶微球(LB)于37℃孵育培养的正常HRPE细胞,在孵育的不同时间(5 min至48 h)终止吞噬反应.用双重荧光标记法检测HRPE细胞吞噬动力学.用扫描及透射电镜证明HRPE细胞对LB及ROS的结合与吞噬作用.分别用125I-cAMP放射免疫试剂盒及液闪记数γ-32P放射活性法检测相应时间点的HRPE细胞特异性及非特异性吞噬时的cAMP浓度及PKC活性. 结果 HRPE细胞特异性吞噬过程中,孵育15 min时ROS结合于HRPE细胞表面,此时cAMP浓度开始降低;胞质及胞膜PKC活性的降低早于cAMP,发生在孵育5 min时,但二者均在孵育24 h达到低值.在非特异性吞噬过程中,HRPE细胞结合LB发生在孵育90 min,在孵育的12 h内cAMP浓度无明显变化(P>0.05),12～48 h cAMP浓度降低;胞质及胞膜PKC活性在孵育的5 min至48 h时间内,与对照组比较,差异均无显著意义(P>0.05).结论 cAMP及PKC对HRPE细胞特异性吞噬吞入过程的维持十分重要,但不参与非特异性吞噬的直接调节.并且,HRPE细胞特异性吞噬过程伴随着cAMP浓度及PKC活性的降低. (中华眼科杂志,2004,40:178-182)
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梯度热打击对大鼠肝库普弗细胞吞噬功能的影响
目的 研究梯度热打击对体外培养大鼠肝库普弗细胞吞噬功能及分泌功能的影响.方法 设置培养库普弗细胞的热打击温度梯度(37、39、41、43℃),使用PI及Hochest33342染色细胞检测热打击后细胞受损情况,采用CCK-8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测库普弗细胞对溶菌酶吞噬能力的改变.结果 与正常对照组相比,热打击各组均出现不同程度的细胞损伤,且随热打击程度加深而加重(P<0.05).细胞增殖实验显示,与正常对照组相比,热打击后6h,41℃和43℃组增殖率明显下降(P<0.01),12h时仅43℃组增殖率明显下降(P<0.001),至24h,各热打击组与正常对照组差异无统计学意义.流式细胞术显示,1h热打击结束后,与正常对照组相比,各热打击组细胞均呈现吞噬功能的下降,以43℃组为明显(P<0.05).结论 热打击可导致大鼠肝库普弗细胞吞噬功能受到抑制,可能与热打击对细胞的直接细胞毒作用有关.热打击对于肝库普弗细胞影响的进一步研究将有助于了解热射病的发病机制.
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激活素A促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性
目的:探讨激活素A对巨噬细胞吞噬活性的调节作用.方法:ELISA法检测IL-1β,中性红实验检测巨噬细胞吞饮作用,鸡红细胞法检测吞噬活性,流式细胞术检测MHCⅠ、Ⅱ类分子表达.结果:激活素A不仅明显促进小鼠腹腔巨噬细胞分泌IL-1β,还能促进巨噬细胞吞饮及吞噬活性,但对MHCⅠ、Ⅱ类分子表达没有影响.结论:激活素A可以促进巨噬细胞分泌IL-1β和吞噬活性,但对巨噬细胞抗原提呈作用无影响.
