首页 > 文献资料
-
小鼠骨髓源树突状细胞的体外培养及鉴定
目的：建立小鼠骨髓源树突状细胞（bone marrow dendritic cell， BMDC）的培养方法并对其表型和功能进行鉴定．方法无菌取BALB/c小鼠股骨、胫骨中的骨髓细胞，以粒-巨噬细胞集落刺激因子体外诱导分化为BMDC，倒置显微镜动态观察BMDC增殖和形态变化情况，流式细胞术分析细胞表型，并检测其抗原吞噬功能．结果小鼠骨髓细胞体外诱导可获得大量未成熟和成熟BMDC，呈现典型的树突状形态．未成熟BMDC的细胞表型为CD11chighCD40lowCD86low MHC-IIlow，具有较强的抗原吞噬能力．未成熟BMDC经细菌脂多糖刺激后可分化为高表达CD11c、CD40、CD86及MHC-II类分子的成熟BMDC．结论体外诱导培养可获得小鼠骨髓来源的未成熟和成熟DC．
-
小鼠可溶性信号调节蛋白α(SIRPα)胞外段蛋白增强巨噬细胞对L1210白血病细胞的吞噬能力
目的 克隆小鼠信号调节蛋白α(SIRPα)胞外段基因(mSIRPα)并构建其原核表达载体,实现蛋白的可溶性表达后,研究mSIRPαext在肿瘤免疫调节中的作用.方法 利用小鼠淋巴结来源的cDNA扩增mSIRPαext基因,并进一步构建pET32a-SIRPαext原核表达载体.在实现含有硫氧还蛋白(Trx)标签的重组Trx-mSIRPα ext融合蛋白可溶性表达后,培养小鼠骨髓来源单核细胞并诱导其向巨噬细胞分化,接着将巨噬细胞与羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)标记的L1210白血病细胞共培养,在共培养体系中添加Trx-mSIRPαext蛋白及Trx对照蛋白,通过免疫荧光细胞化学染色和共聚焦显微镜观察重组蛋白在巨噬细胞吞噬肿瘤细胞中的作用.结果 获得纯化的可溶性Trx-mSIRPαext蛋白,利用体外吞噬实验证明该蛋白可增强巨噬细胞对小鼠L1210白血病细胞的吞噬作用.结论 原核表达的Trx-mSIRPαext蛋白可有效提高巨噬细胞对白血病细胞的吞噬作用,从而发挥抗肿瘤免疫治疗效果.
关键词： 信号调节蛋白α(SIRPα) CD47 原核表达 吞噬作用 巨噬细胞 -
调衡方多糖增强体外培养巨噬细胞的吞噬能力
目的 研究调衡方多糖对巨噬细胞吞噬功能的影响,探讨其多糖对巨噬细胞吞噬作用的免疫调节机制.方法 依照中药多糖的制备方法从调衡方中提取粗多糖;从小鼠腹腔分离提取并培养巨噬细胞;(500、200、10)μg/mL调衡方多糖处理巨噬细胞48 h,光学显微镜下观察活细胞的形态,墨汁吞噬实验以及金黄色葡萄球菌吞噬实验观察巨噬细胞的吞噬能力,酶细胞化学染色观察巨噬细胞胞内酸性磷酸酶的变化.结果 与对照组比较,(500、200、10) μg/mL调衡方多糖处理巨噬细胞后,巨噬细胞体积显著增大,对墨汁和金黄色葡萄球菌的吞噬能力均显著提高,酸性磷酸酶的活性也明显增强,并与多糖浓度呈正相关.结论 调衡方多糖能增强巨噬细胞的吞噬功能,并提高细胞内酸性磷酸酶的活性.
-
骨肉瘤患者血清Zn、Cu、Fe水平及Mф吞噬功能的检测及意义
巨噬细胞(Mф)为抗肿瘤免疫的主要效应细胞，可通过吞噬及ADCC效应，参与杀伤肿瘤细胞。微量元素可通过其在体内的含量及元素氧化状态的变化，存在形式的不同，对肿瘤的发生发展产生影响[1]。近年，有关微量元素与免疫的关系报道较少，因此，我们测定了52例骨肉瘤患者血清中微量元素锌(Zn)，铜(Cu)、和铁(Fe)的含量，以及它们对手术切除肿瘤前、后患者Mф吞噬功能的影响。
-
DAF比色法检测吞噬细胞体外吞噬功能
介绍一种检测吞噬细胞体外吞噬功能的灵敏、快速的比色试验. 以O型人红细胞为吞噬物,利用血红蛋白的拟过氧化物酶活性,特异性地将2,7-二氨基芴( 2,7-diaminoflurorene,DAF)氧化成芴蓝,生成的芴蓝与被吞噬的红细胞量成正比而不受吞噬细胞内髓过氧化物酶的影响.结果还表明,吞噬细胞与红细胞共同孵育90 min时,吞噬作用达峰值.
-
融合蛋白HSP70-EGFP的表达、纯化及其在树突状细胞内化抗原中的应用
目的:研究树突状细胞(DCs)对热休克蛋白70(HSP70)融合蛋白的内化作用.方法:首先原核表达并分离纯化HSP70和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合蛋白HSP70-EGFP.实验中所用DCs来源于人外周血.内化实验分3组进行:将1,2组DCs分别与融合蛋白HSP70-EGFP和蛋白EGFP孵育30 min;第3组先将DCs与HSP70孵育30 min,再与HSP70-EGFP孵育30 min.之后将3组DCs转至37 ℃孵箱内,培养0.5,1,2和24 h,应用流式细胞仪检测含HSP70-EG-FP或EGFP的DCs数量.应用IL-12 Eli-spot法检测HSP70-EGFP等抗原促进DCs分泌IL-12的效果.结果:①成功获得了重组蛋白HSP70-EGFP,Mr约为97 000,HSP70-EGFP表达量占总蛋白的35.7%.纯化后的融合蛋白HSP70-EGFP溶液经紫外线灯照射时发出鲜绿色的荧光.②流式细胞仪检测结果显示在37 ℃孵育0.5 h后,HSP70-EGFP孵育的DCs组阳性率为63.3%,其余两组为阴性.在37 ℃孵育1,2和24 h后,3组阳性率均大于80.0%.IL-12 Eli-spot检测结果显示,在刺激DCs活化及分泌IL-12的水平上,HSP70-EGFP与脂多糖(LPS)之间的差别无统计学意义(P＞0.05),而HSP70-EG-FP的活化DCs能力明显高于EGFP(P=0.001).结论:①受体介导的吞噬作用在DCs内化HSP70-EGFP的初始阶段起主要作用,随孵育时间的延续,吞饮作用占主要地位.②HSP70-EGFP可促进DCs分泌特征性细胞因子IL-12.
-
光子治疗仪在烧伤患者术后治疗的体会
光子治疗仪是光子照射人体,被人体细胞线粒体强烈吸收,使线粒体的过氧化氢酶活性增加、三磷酸腺苷分解增加、改善血液循环,因而它可以促进肉芽组织生长,加速创面愈合,同时增加白细胞的吞噬作用,从而达到消炎及提高免疫力等作用[1].延安大学附属医院烧伤科自2012年1月开始使用光子治疗仪Carnation-88(双光源)型,研究光子治疗仪在促进烧伤术后创面愈合,减轻愈后瘢痕方面的作用.
-
心肌康对小鼠免疫作用的影响
目的: 初步探讨心肌康对小鼠免疫作用的影响.方法: 测定小鼠胸腺和脾脏指数,观察小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能.结果: 心肌康可显著提高小鼠脾脏指数,明显增强腹腔巨噬细胞吞噬功能,其吞噬指数及吞噬率均提高,且此增强作用明显优于生理盐水组,与生脉冲剂组作用相当.结论: 心肌康具有较强免疫增强作用.
-
微波治疗胃息肉和疣状胃炎的疗效观察
微波消化内镜专用治疗仪是一种通过高能热效应使组织瞬间凝固,使人体组织吸收微波能量后热度增高,产生热效应的治疗仪器.具有损伤小、止血功能大等特点,其热效应使局部组织血管扩张,血循环加速,组织代谢增快,白细胞吞噬作用加强,促进局部病灶代谢产物吸收,产生消炎、消肿的作用;温热作用又可解除肌肉痉挛,消除堆积乳酸而使疼痛缓解.
-
吞噬细胞的吞噬作用实验改革
吞噬细胞(吞噬细胞、嗜中性粒细胞)具有对异物吞噬和消化的功能,当病原微生物侵入机体后,在激发免疫应答以前即可被吞噬细胞吞噬并清除,这在机体非特异性免疫中具有重要意义.
-
地塞米松抑制U937细胞黏附与吞噬功能的作用机制
目的 探讨地塞米松抑制单核细胞U937黏附和吞噬功能的机制. 方法 检测体外培养的U937在佛波脂(phorbol - 12 - myristate - 13 - acetate,PMA)刺激下分别接受地塞米松和法舒地尔作用后,观察人脐静脉内皮细胞( human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)黏附和吞噬能力的变化,并检测ROCK1(rho -associated coiled -coil protein kinase 1,ROCK1)蛋白含量及其活性的变化；同时观察米非司酮和放线菌酮对地塞米松的影响. 结果 地塞米松和法舒地尔均可显著抑制受PMA刺激的U937细胞的黏附率和吞噬效果,并抑制ROCK1活性；米非司酮和放线菌酮并不能影响地塞米松抑制U937细胞的黏附和吞噬作用. 结论 地塞米松能通过抑制U937细胞内ROCK1的活性而干扰其黏附、吞噬功能.
-
新生儿中性粒细胞胞外诱捕网形成研究进展
中性粒细胞是人体先天免疫系统的重要效应细胞.目前已知,中性粒细胞通过细胞吞噬作用( phagocytosis)与胞外诱捕网 (neutrophil extracellular traps,NETs)介导的杀灭途径参与病原体感染的免疫应答反应[1].中性粒细胞的免疫功能对于新生儿,尤其对于早产新生儿特别重要.新生儿中性粒细胞功能低下或障碍与新生儿感染性疾病发病率高有关[2].近,Yost等[3]与Marcos等[4]研究发现,新生儿中性粒细胞形成NETs的能力与新生儿中性粒细胞抗菌功能缺陷有关.
-
静滴丙种球蛋白在新生儿临床的应用
近10年来,国外应用静滴免疫球蛋白(IVIG)疗法在国内临床得到重视并不断推广,新生儿临床也在积极尝试采用IVIG防治某些疾患,并取得了可喜进展.现将IVIG在国内外新生儿临床的应用情况综述如下.一、IVIG的适应症国产IVIG制品是以低温乙醇法为主体工艺,经过再加工从广泛健康人群混合血浆分离制备的Ig冻干制品.它可以提供广谱Ig抗体,且能对免疫系统的调节发挥重要作用.因此,目前新生儿临床也主要应用IVIG防治感染和免疫性疾患.1.新生儿感染目前,新生儿败血症等重症感染的发病率和病死率仍然很高,IVIG的应用无疑为新生儿感染的防治提供了新的治疗手段.动物研究证实,IVIG包含具保护作用的特异性调节性抗体.同时,临床研究也显示,IVIG应用于早产儿和极低出生体重儿(VLBWI),不仅可以提高血IgG水平,而且可提高CD4细胞数和CD4/CD8的比值,增强免疫效果(1).Fujiwara等(2)报道,早产儿应用IVIG后体内吞噬作用明显增强.
-
胆红素对新生儿脐血单核细胞吞噬功能的影响
目的 探讨胆红素对脐血单核细胞(CBMC)吞噬功能的影响.方法 采用纤维连接蛋白结合法分离新生儿CBMC,在含有不同浓度胆红素(102.6 μmol/L、153.9 μmol/L、220.6μmol/L和307.μmol/L)的牛血清白蛋白溶液中孵育1 h,再给予脂多糖(LPS,1μg/m1)刺激48 h,收集细胞.通过荧光标记的葡聚糖吞噬试验检测细胞的吞噬功能.结果 LPS单独作用可以增强CBMC的吞噬功能;低浓度胆红素单独作用亦可增强CBMC的吞噬功能.先经过低浓度(102.6μmol/L)胆红素孵育,再接受LPS的刺激,CBMC的吞噬功能增强,而较高浓度和高浓度胆红素(153.9、220.6、307.8 μmol/L)对CBMC的吞噬功能则起抑制作用.结论 较高浓度和高浓度胆红素可以明显抑制CBMC的吞噬功能,此种抑制作用可能与胆红素抑制细胞表面分子的表达和胆红素引起细胞凋亡的增多有关.
-
一种新的抗肿瘤靶点-CD47
肿瘤细胞可以通过多种途径逃避机体免疫系统的识别和清除,如诱导免疫抑制的肿瘤微环境,降低肿瘤细胞的免疫原性等;其中,肿瘤细胞逃避天然免疫系统如巨噬细胞等吞噬细胞清除的机制之一是上调细胞表面“别吃我”(don't eat me)信号的表达.整合素相关蛋白(IAP,即CD47)便是一种重要的自我信号,它通过与巨噬细胞上的配体信号调节蛋白α(SIRPα)结合,进而抑制巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬;此外,在天然免疫细胞如树突状细胞等向适应性免疫T细胞提呈抗原的过程中,CD47也发挥着抑制作用.因此,CD47在肿瘤免疫中发挥着重要的调节作用,靶向CD47是一个潜在的抗肿瘤方向.本文对CD47的抗肿瘤作用进行了详述,包括分子结构、信号转导、调节吞噬与促凋亡作用及成药性考虑等.
-
茜草双酯对小鼠免疫功能的抑制作用
目的：研究茜草双酯对正常小鼠免疫功能的影响．方法：采用免疫药理学常用方法即血清溶菌酶含量的测定，迟发型超敏反应的测定，血清溶血素的测定，[3H]TdR参入的小鼠全血白细胞吞噬能力的测定，鼠脾空斑形成细胞溶血能力的测定，T和B淋巴细胞转化能力的测定．结果：茜草双酯125，500，2000 mg·kg-1·d-1降低血清溶菌酶含量和全血白细胞吞噬功能；使PFC溶血能力和HC50产生减少；抑制DTH反应；体内给药体外测定，抑制[3H]TdR参人的PHA与LPS诱导的淋巴细胞转化．以上作用呈一定的剂量依赖性．结论：茜草双酯对正常小鼠特异和非特异性免疫功能均有不同程度的抑制作用．
-
补充维生素A和D3对大鼠淋巴细胞增殖及单核细胞吞噬活性影响
目的 观察补充一定剂量的维生素A(VA)和维生素D3(VD3)对大鼠淋巴细胞增殖活性和单核细胞吞噬功能的影响.方法 取初断乳Wistar大鼠40只,雌雄各半,随机分为对照组、VA组、VD3组和VA+ VD3组,均给予基础饲料饲养.对照组按大鼠体质量用大豆色拉油(1 mL/kg)灌胃,摄入VA和VD3均为大鼠生理需要量(VA剂量为278 U/(kg·d),VD3剂量为20 U/(kg·d);用大豆色拉油将VA、VD3稀释成不同浓度油剂后按1 mL/kg体质量给予大鼠灌胃:VA组为1390 U/(kg·d)；VD3组为200 U/(kg·d)；VA+VD3组为VA1 390 U/(kg·d)+VD3200 U/(kg·d);实验为4周.采用CCK-8法和CD-14标记单核细胞后用流式细胞术分别检测淋巴细胞增殖活性和单核细胞荧光强度.结果 4周后VD3组大鼠淋巴细胞增殖活性明显增强,与对照组比较,差异有显著性(F=6.72,q=6.04,P＜0.05).VA组、VD3组和VA+VD3组单核细胞吞噬功能与对照组比较明显升高,差异均有显著性(F=5.26,q=3.65～4.90,P＜0.05).结论 补充生理剂量5倍的VA或(和)10倍的VD3可有效地增强大鼠淋巴细胞增殖活性和单核细胞吞噬活性.
-
Rabex-5及其激活物Rab5的研究进展
细胞的吞噬作用是细胞维持正常生理功能的关键,小分子GTP激酶在其中扮演了至关重要的角色.在Ras超家族中,已证实有超过50种小分子GTP激酶,其中Rab家族在调控细胞吞噬和囊泡运输中的作用,近年备受关注.
-
3种化疗药物诱导HL-60细胞凋亡及Fas FasL的表达
目的:观察阿糖胞苷(Ara-c)、柔红霉素(DNR)及长春新碱(VCR)诱导HL-60细胞株凋亡的规律及细胞凋亡中Fas、FasL抗原的变化,探讨凋亡基因在细胞凋亡中的作用.方法:应用流式细胞仪及吖啶橙染色荧光显微镜观察3种化疗药物对HL-60细胞凋亡的影响,及细胞Fas、FasL的表达情况.结果:DNR和Ara-C能诱导HL-60细胞发生凋亡,荧光显微镜观察HL-60细胞可见凋亡小体、核染色质聚集、胞体出芽改变.流式细胞仪检测在G1期前出现sub-G1峰,随着化疗药物浓度的增加及共培养作用时间的延长,HL-60细胞凋亡率逐渐增加.每个实验组细胞凋亡率与对照组相比差异有显著性(P＜0.01,P＜0.05).VCR每个实验组细胞凋亡率与对照组比较差异无显著性(P＞0.05).DNR作用HL-60细胞可使Fas、FasL表达增加;Ara-C可使FasL表达增加,而Fas表达无变化;VCR作用后Fas表达增加,而对FasL表达无影响.结论:DNR和Ara-C可诱导HL-60细胞凋亡,VCR诱导调亡作用不明显.DNR可上调HL-60细胞Fas/FasL表达,Fas/FasL系统参与DNR诱导的细胞凋亡过程.
-
硒螺旋藻增强小鼠免疫功能的实验研究
目的:研究硒螺旋藻对小鼠细胞免疫功能和特异性体液免疫功能的调节作用.方法:实验小鼠分成4组,分别饲喂含不同剂量(高、中、低)硒螺旋藻复合饲料,连续4W,对照组小鼠喂基础饲料.分别于实验第4W、6W检测小鼠细胞免疫功能和特异性体液免疫功能.结果:硒螺旋藻喂养4W:3个剂量组小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数明显高于对照组(P＜0.05);低剂量组小鼠脾淋巴细胞转化试验、小鼠抗体生成细胞和对照组比较均有显著提高(P＜0.05).实验第6W(停喂硒螺旋藻2W):3个剂量组小鼠吞噬百分率和吞噬指数明显高于对照组(P＜0.05);高剂量组小鼠脾淋巴细胞转化试验、小鼠抗体生成细胞和对照组比较明显提高(P＜0.05).结论:提示硒螺旋藻能提高小鼠的非特异性细胞免疫功能和B细胞产生的特异抗体的能力,并表现出剂量依从性.
