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腺病毒介导HSP70-HBsAg嵌合基因转染树突状细胞及生物学特性分析
目的 分析携带热休克蛋白70(HSP70)和乙肝表面抗原(HBsAg)嵌合基因的腺病毒表达载体感染人外周血诱导培养树突状细胞(DC)后其生物学特性的改变.方法 从正常人外周血中分离单个核细胞,经Ad-HSP70-HBsAg感染刺激后.在含细胞因子粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的培养液体中体外诱导培养DC;采用荧光倒置显微镜、RT-PCR、流式细胞仪(FACS)和混合淋巴细胞反应(MLR)试验对人外周血来源的DC进行生物学特性分析.结果 Ad-HSP70-HBsAg感染后的DC能够有效表达示踪蛋白GFP和转录基因HSP70-HBsAg,病毒感染组和对照组的DC在细胞形态、DC细胞表面分子表达和刺激同种异体的人外周血幼稚型T细胞增殖能力的方面无明显差别.结论 Ad-HSP70-HBsAg可有效转染DC,感染后的病毒对DC的生长和生物学特性无显著影响.
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Survivin反义RNA/HSP70双基因表达载体的构建及鉴定
目的:构建Survivin 反义RNA/HSP70双基因表达载体,为后期转染肿瘤细胞,抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡以及激发机体有效的特异性抗肿瘤免疫应答提供重要的实验材料.方法:应用RT-PCR从Jurkat细胞中获得Survivin cDNA片段,反向插入pIRES2-DsRed2质粒载体中,经酶切和测序鉴定所构建的Survivin 反义RNA表达载体是否成功;应用RT-PCR从HepG2细胞中获得的HSP70 cDNA片段,定向插入到pIRES2-DsRed2质粒载体中;经菌落PCR、酶切和测序鉴定所构建的HSP70表达载体是否正确.结果:经酶切和测序鉴定证明Survivin 反义RNA表达载体已成功构建;经菌落PCR、限制性酶切和测序鉴定证明HSP70表达载体已成功构建.结论:本实验已成功构建了Survivin 反义RNA/HSP70双基因表达载体,为进一步研究提供了实验基础.
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低温复苏对大鼠失血性休克肝损伤的影响
目的：探讨低温复苏对大鼠失血性休克肝损伤的保护作用及其机制。方法24只成年雄性Wistar大鼠随机平均分为3组，对照组（S）、常温复苏组（N）（37～38℃）和低温复苏组（H）（33～34℃）。S组只进行外科插管操作，不建立失血性休克模型及复苏，N组和H组在建立失血性休克模型后分别在预定温度下进行复苏。Real-time PCR法检测复苏240 min肝组织PPAR-γ、HSP70和TNF-α mRNA表达变化。ELISA法检测血清TNF-α浓度变化。生化法检测血清ALT和AST浓度变化。结果（1）休克复苏240 min大鼠血清TNF-α浓度为S组（8.53±1.90）ng/ml，N组（74.08±8.81）ng/ml，H组（32.13±5.82）ng/ml，两个实验组差异具有统计学意义（P＜0.05）；（2）休克复苏240 min大鼠血清ALT和AST浓度分别为是S组（61±11）U/L、（47±9）U/L，N组（187±20） U/L、（139±15）U/L，H组（141±11）U/L、（97±11）U/L，两个实验组差异有统计学意义（P＜0.05）；（3）与S组比较，休克复苏240 min N组肝组织PPAR-γ mRNA表达量为0.50±0.11，H组PPAR-γmRNA表达量为2.01±0.48（P＜0.05）；（4）与S组比较，休克复苏240 min N组肝组织HSP70 mRNA表达量为4.12±1.36，H组HSP70 mRNA表达量为11.69±3.88（P＜0.05）；（5）与S组比较，休克复苏后240 min N组肝组织TNF-α mRNA表达量为15.10±4.99，H组TNF-α mRNA表达量为10.10±2.95（P＜0.05）。结论失血性休克后的低温复苏能够上调大鼠肝组织内PPAR-γ和HSP70基因的表达，同时抑制TNF-α基因表达，降低血清中TNF-α、ALT和AST的浓度，减轻肝脏损伤，利于休克的复苏。
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CEA启动子驱动下表达Hsp70基因的重组腺病毒的构建及鉴定
目的 构建癌胚抗原(CEA)启动子驱动下靶向表达热休克蛋白70 (Hsp70)基因的重组腺病毒。方法 通过RT-PCR和PCR的方法分别扩增人Hsp70基因和CEA启动子，构建穿梭质粒pDC316-pCEA-Hsp70。将所得的穿梭质粒与腺病毒骨架质粒共转染293细胞获得重组腺病毒Ad5-pCEA-Hsp70。通过梯度离心纯化病毒，采用半数细胞培养物感染量测定病毒滴度。分别以重组的腺病毒感染CEA阳性的人胰腺癌BxPC3细胞和CEA阴性的SW1990细胞，通过RT-PCR和ELISA法检测Hsp70 mRNA和蛋白的表达。结果 酶切和测序证实Hsp70基因和CEA启动子成功插入PDC316质粒。与骨架质粒共转染293细胞获得的病毒经PCR扩增证实重组腺病毒构建成功。终获得的病毒颗粒数达2.2 ×1011 vp/ml，滴度为1.5×1010 PFU/ml。重组腺病毒感染CEA阳性表达的BxPC3细胞后，可显著增加Hsp70 mRNA和蛋白的表达，而感染CEA阴性的SW1990细胞，Hsp70 mRNA和蛋白的表达无变化。结论 成功构建了能够在CEA阳性细胞中靶向表达Hsp70基因的重组腺病毒Ad5-pCEA-Hsp70，为进一步研究奠定了基础。
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健康中老年人和老年脑梗死患者热休克蛋白70的研究
目的 测定健康中老年人及老年脑梗死患者外周血淋巴细胞热休克蛋白70(Hsp70)的表达水平,分析其随年龄而变化的规律和Hsp70变化程度、规律与脑梗死患者神经功能缺损程度的关系.方法 选择102例年龄在40～79岁的健康中老年人(健康组)和92例老年脑梗死患者(分轻型脑梗死组30例、中型脑梗死组31例和重型脑梗死组31例),Westerm blot法检测健康组及脑梗死患者起病后第1、15和30天Hsp70水平,并对脑梗死患者行神经功能缺损程度评分.结果 (1)健康组Hsp70水平呈现40岁以后随年龄增长而逐渐降低趋势,与年龄的增长呈负相关(r=-4.06,P<0.01).Hsp70的表达与性别不相关(r=-14.45,P=0.36).(2)轻、中、重型脑梗死组在起病后第1天Hsp70水平达高峰,明显高于健康组,差异显著(P<0.01);轻型脑梗死组Hsp70水平在第1、15天较重型脑梗死组高,与神经功能缺损程度评分均呈显著负相关(分别为r=-0.53,P<0.01;r=-0.54,P<0.01);随病程延长,Hsp70表达逐渐下降,轻型脑梗死组下降幅度较大(P<0.01);起病后第30天,重型脑梗死组Hsp70水平高于轻型脑梗死组(P<0.01),与神经功能缺损程度评分呈正相关(r=0.49,P<0.01).结论 健康中老年人Hsp70水平与年龄及年龄增长相关;Hsp70水平动态变化与缺血性脑梗死病情的轻重密切相关.
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肢体缺血预处理诱导大鼠缺血再灌注海马HSP70表达
目的探讨肢体缺血预处理(limb ischemic preconditioning,LIP)对大鼠缺血再灌注海马HSP70表达的影响.方法将66只凝闲椎动脉大鼠随机分为假手术组、脑缺血组和LIP+脑缺血组,后两组根据脑缺血后再灌流时间不同进一步分为1、6、24、72和120h组.采用免疫组织化学方法检测海马HSP 70的变化.结果假手术组海马各区未见明显的HSP70表达.脑缺血组海马CA1区未见明显着色,但在CA3区及齿状回颗粒细胞中可见HSP70着色,以再灌注后24h明显.在LIP+脑缺血组,海马CA1区于再灌注1 h未见明显的HSP70表达;再灌注6 h HSP70表达明显增强,与假手术组和脑缺血6 h组比较,阳性细胞数明显增加(P＜0.01);再灌注24h HSP70表达达高峰;再灌注72 h HSP70表达有所下降;至再灌注120h HSP70表达明显下降.结论损伤性脑缺血前给予LIP,可明显增加CA1区HSP70的阳性表达,诱导CA1区锥体细胞耐受缺血损伤.
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银杏叶提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤热休克蛋白70表达的影响
目的 探讨银杏叶提取物对大鼠缺血再灌注损伤热休克蛋白70表达的影响.方法 42只大鼠随机分为3组:假手术组、单纯缺血再灌注组、缺血再灌注+银杏叶提取物组,每组14只.通过免疫组织化学方法和原位末端标记法(TUNEL)检测热休克蛋白70表达及凋亡细胞数,TTC染色观察梗死体积.结果 3组均可检测到热休克蛋白70的表达,单纯缺血再灌注组热休克蛋白70的表达较假手术组增强(P＜0.01),缺血再灌注+银杏叶提取物组较缺血再灌注组表达增强(P＜0.05).缺血再灌注+银杏叶提取物组梗死体积及凋亡细胞数明显少于缺血再灌注组(P＜0.01).结论 银杏叶提取物可能通过上调缺血缺氧后热休克蛋白70的表达减少神经细胞凋亡.
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热休克蛋白70 mRNA在膀胱癌中的表达及与细胞凋亡的关系
目的探讨热休克蛋白70(HSP 70)mRNA在膀胱移行细胞癌中的表达及与细胞凋亡的关系.方法应用原位杂交法对60例膀胱癌组织中HSP 70 mRNA进行检测,原位DNA末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡情况. 结果60例标本中,HSP 70 mRNA阳性表达率为56.7%(34/60).HSP 70 mRNA表达随肿瘤分级增高而增加(P＜0.05);G1,G2和G3各级间两两比较,HSP 70mRNA表达差异也有显著性意义(P＜0.05).随着肿瘤分期增高,HSP 70 mRNA表达随之增加(P＜0.05);Ⅰ,Ⅱ和Ⅲ各期间两两比较,差异有显著性意义(P＜0.05).肿瘤细胞凋亡指数(AIs)随恶性程度的增高显著降低(P＜0.05);HSP 70 mRNA表达率和AIs呈负相关(r =-0.685,P＜0.05).结论HSP 70 mRNA表达随膀胱癌恶性程度增加显著增高,细胞凋亡则显著降低,提示HSP 70表达能够抑制膀胱癌细胞的凋亡.
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慢性前列腺炎患者精浆中热休克蛋白的表达及临床意义
目的探讨慢性前列腺炎患者精浆中热休克蛋白70(HSP 70)的表达及临床意义.方法采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)对10例慢性细菌性前列腺炎(Ⅱ型)、10例炎症型慢性非细菌性前列腺炎即炎症型慢性骨盆疼痛综合征(ⅢA型)、10例非炎症型慢性非细菌性前列腺炎即非炎症型慢性骨盆疼痛综合征(ⅢB型)患者及6例健康志愿者精浆中HSP 70含量进行测定,并与慢性前列腺炎症状评分(修订版)进行相关性研究.结果Ⅱ型、ⅢA型、ⅢB型慢性前列腺炎患者及正常对照组精浆HSP 70含量分别为(10.74±4.02)ng/ml、(2.58±0.96)ng/ml、(2.78±1.12)ng/ml及(6.57±2.72)ng/ml.Ⅱ型患者精浆HSP 70含量显著高于正常对照组,P＜0.01,差异有显著性意义.ⅢA型与ⅢB型患者HSP 70含量均显著低于正常对照组,P＜0.01,差异有显著性意义.而ⅢA型与ⅢB型患者HSP 70含量间差异无显著性意义,P＞0.05.各组精浆HSP 70含量与慢性前列腺炎症状评分间均呈显著的负相关关系(P＜0.01).结论测定精浆中HSP 70的表达对各种类型慢性前列腺炎诊断有一定的临床应用价值,并可作为评价慢性前列腺炎病情程度的分子生物学指标.HSP70在慢性前列腺炎的治疗方面也具有广阔的应用前景.
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脑缺血预处理对新生鼠海马CA1区突触素及热休克蛋白70的影响
目的探讨脑缺血预处理对新生Wistar鼠脑CA1区突触素和热休克蛋白70(HSP70)变化的影响.方法通过阻断7日龄新生Wistar大鼠右侧颈总动脉制备脑缺血模型,设置假手术组、缺血再灌注组、预缺血-缺血再灌注组.用免疫组化法检测三组新生鼠不同时点海马CA1区脑组织神经细胞突触素和HSP70的动态变化,并光镜下观察脑组织病理改变.结果突触素:缺血再灌注组和预缺血-缺血再灌注组海马CA1区突触素表达在再灌注后第3天开始增加,分别为10.76±0.99、15.89±0.59,7 d时达高峰,分别为13.14±0.76、18.33±1.11,14 d时分别为12.01±0.71、15.13±1.10,仍高于假手术组(8.31±0.01),三组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);HSP70假手术组海马CA1区有极少量HSP70表达.缺血再灌注组和预缺血-缺血再灌注组海马CA1区HSP70表达在再灌注后6 h开始增高,分别为1.48±0.82、1.90±0.10,24 h达高峰,分别为8.15±0.99、11.32±0.96,3 d时开始下降,分别为3.42±0.21、5.31±0.51,三组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).预缺血组海马CA1区病理改变较缺血再灌注组轻.结论脑缺血预处理对再次脑缺血所致脑神经细胞损伤有保护作用;新生鼠脑缺血后3～14 d海马CA1区神经细胞突触素表达增加可反映受损神经细胞突触再生,说明受损神经细胞具有代偿再生重塑功能;脑缺血6 h后HSP70表达增多可能与神经细胞内源性保护机制有关.
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热休克蛋白70和90α在人胃癌组织中表达及其与胃癌生物学行为的关系
目的:研究热休克蛋白70和90α在人胃癌组织和正常黏膜组织中的表达,探讨其表达与胃癌生物学行为的关系.方法:41例胃癌组织和相应的正常黏膜组织分别行免疫组织化学染色和RT-PCR检测,分析检测结果.结果:热休克蛋白70和90α在胃癌组织中表达分别为75.6%(31/41)和80.5%(33/41),明显高于正常黏膜组织中的表达,在分化较差的肿瘤类型中表达分别为85.2%和88.9%,高于分化较好的肿瘤类型,在淋巴结转移阳性的病例中分别为82.8%和86.2%,高于淋巴结转移阴性的病例,在TNM分期Ⅲ、Ⅳ期的病例中表达分别为80.6%和83.9%,高于其他分期.结论:热休克蛋白70和90α在胃癌组织中明显表达升高,且在晚期的病例中表达高于相对较早期的病例,与胃癌的生物学行为有关.
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肝癌细胞对重组人HSP70联合肝癌组织冻融抗原修饰树突状细胞的免疫应答
目的:研究重组人热休克蛋白70(rhHSP70)联合肝癌组织冻融抗原修饰的树突状细胞(dendritic cell,DC)诱导对肝癌细胞的免疫杀伤效应.方法:外周血单个核细胞经粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素4 (IL-4)诱导生成DC,负载冻融抗原的同时加入rhHSP70,不同分组致敏的DC激活淋巴细胞生成肿瘤抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T cells,CTL),四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及3H-TdR法检测DC刺激淋巴细胞增殖能力, MTT法检测CTL对肝癌细胞的体外杀伤活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞因子的分泌,流式细胞术(FCM)检测DC表型变化.结果:冻融抗原致敏的DC可明显促进淋巴细胞增殖,能有效呈递肝癌冻融抗原,诱导产生抗原特异性CTL,联合rhHSP70能进一步增强CTL对肝癌细胞的杀伤作用.结论:肝癌冻融抗原联合rhHSP70修饰的DC诱导CTL对肝癌细胞能产生高效杀伤作用.
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黄芪多糖对TA2小鼠乳腺癌MA-891移植瘤生长及HSP70表达的影响
目的:在复制津白二号小鼠乳腺癌模型的基础上,应用黄芪多糖干预,观测肿瘤生长免疫情况、热休克蛋白(heat-shock protein,HSP)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及凋亡相关蛋白Bcl-2的表达情况,探讨热休克蛋白在乳腺肿瘤病理生理机制中的作用,了解黄芪多糖对乳腺肿瘤生物学行为的影响,从分子生物学水平探索其作用机制.方法:将对数生长期的乳腺癌细胞MA891接种于TA2小鼠皮下,模型建立后随机分为两组,每组10只,生理盐水组(A组)和黄芪多糖组(B组),黄芪多糖组小鼠自接种后第2天,给予成人用量6倍的黄芪多糖粉针剂溶于生理盐水中皮下注射(200mg/kg),而生理盐水组则给予同等量的生理盐水皮下注射,连续治疗23 d活杀,MTT法检测小鼠淋巴细胞活性,对比肿瘤瘤质量变化,免疫组化法检测HSP70、VEGF和Bcl-2表达.结果:治疗组小鼠瘤质量有所减轻(抑瘤率为13.56%),但两组相比差异无统计学意义(3.32士1.96 vs 2.87±1.65,P＞0.05),而治疗组淋巴细胞活性显著提高(吸光度OD570值分别为1.941±0.025 vs 1.985±0.023,P＜0.05),肿瘤组织HSP70、VEGF和Bcl-2表达均有显著降低(光密度分别为0.28±0.37 vs 0.21士0.22,P＜0.05;0.31±0.41 vs 0.23±0.15,P＜0.05;0.26±0.11 vs 0.22±0.16,P＜0.05).结论:黄芪多糖提高了荷瘤小鼠淋巴细胞免疫活性,并抑制了肿瘤血管生成及细胞凋亡相关因子的表达,体现出一定的抑瘤作用,而热休克蛋白70亦参与了乳腺肿瘤的病理生理过程,并与肿瘤血管生成和细胞凋亡存在密切的关系.
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快速蛋白液相色谱系统分离与纯化小鼠结肠癌细胞热休克蛋白70
目的:应用快速蛋白液相色谱(fast protein liquid chromatography, FPLC)系统,建立分离和纯化BALB/c鼠源性结肠癌细胞(CT26)热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)的方法.方法:用经43 ℃热处理12 h的CT26细胞制备裂解液,经DEAE-Sepharose离子交换层析柱和ADP-Agarose亲和层析柱进行连续分离,所得蛋白经不连续SDS-聚丙烯酰胺电泳及Western-blotting进行蛋白相对分子质量及性质鉴定.结果:纯化蛋白经鉴定为相对分子质量70×103的HSP70.结论:通过FPLC系统可分离纯度较高的HSP70.中华肿瘤防治杂志,2007,14(18):1386-1388
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快速眼动睡眠剥夺后大鼠皮质及海马 HSP70表达的研究
目的探讨不同时间的快速眼动(REM)睡眠剥夺对大鼠皮质及海马各区的热休克蛋白70(HSP70)表达的影响及意义.方法60只Wistar大鼠,随机分为睡眠剥夺组(SD)、环境对照组(TC)和空白对照组(CC).其中SD组又分为1d、3d、5d、7d 4个时点.用改良多平台睡眠剥夺法进行REM睡眠剥夺,运用免疫组织化学方法观察REM睡眠剥夺后大鼠额叶、顶叶皮质及海马各区HSP70表达的分布规律及时空变化;同时结合蛋白质免疫印记(Western Blot)实验对额叶皮质及全海马HSP70蛋白作了选择性的半定量分析.结果REM睡眠剥夺后1 d脑内HSP70表达一过性增强,以后逐渐下降.Western Blot实验印证了这一结果.结论REM睡眠剥夺能够引起大鼠皮质及海马神经元内HSP70表达增强,可能是一种自身稳定调节的保护机制.
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HPV16E7-HSP70融合基因原核表达质粒的构建和鉴定
目的构建HPV16E7-HSP70融合基因原核表达质粒,为进一步研究HPV16E7-HSP70融合蛋白抗喉癌免疫活性奠定基础.方法PCR扩增HPV1 6E7、HSP70并分别导入相应酶切位点;HPV16E7采用Nhel和Sacl接入原核表达载体pET28a得到pET28a-HPV16E7中间质粒;HSP70的PCR产物采用TA连接亚克隆到pGEM-Teasy载体;Sall和Notl双酶切后的HSP70片段和pET28a-HPV16E7线性质粒,经连接酶连接,采用PCR、DNA测序鉴定重组质粒;同时,重组质粒转入BL21(DE3)表达,采用IPTG诱导和Western Blot进一步鉴定重组质粒的表达情况.结果重组质粒经PCR、DNA测序证实插入了HPV16E7-HSP70融合基因,且蛋白开放读码框与pET28a的6×His标签一致.通过IPTG诱导表达和Western Blot证实融合蛋白可以在原核细菌中正确表达.结论成功构建pET28a-HPV1 6E7-HSP70重组原核表达质粒.
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喉癌组织中热休克蛋白和人乳头状瘤病毒的相关性
目的探讨喉鳞状细胞癌(简称喉癌)组织中热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)和人乳头状瘤病毒1 6E7(human papiloma-virus 1 6E7,HPV16E7)蛋白的表达及其在喉癌发生和发展过程中的相互关系.方法用免疫组织化学方法检测78例喉癌、24例声带息肉和10例癌周喉组织标本中HSP70和HPV16E7蛋白的表达.结果在喉癌组织、声带息肉和癌周喉组织中HSP70的阳性表达率分别为69.2%,8.3%和0%,HPV16E7蛋白的阳性表达率分别为43.6%,4.2%和0%,HSP70和HPV16E7蛋白的阳性表达在喉癌组织与声带息肉、癌周喉组织之间均有显著性差异(P＜0.05);HPV16E7阳性的喉癌组织中HSP70的阳性表达率为85.3%,HPV16E7阴性的喉癌组织中HSP70的阳性表达率为56.8%,二者之间有显著性差异(P＜0.05).结论HPV16E7可以诱导喉癌组织中HSP70的高表达,二者在喉癌的发生和发展过程中发挥重要作用;检测HSP70和HPV16E7蛋白的表达可用于喉癌恶性程度的评定.
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树突状细胞表面HSP70受体介导的内化作用
目的研究树突状细胞(DCs)表面HSP70受体介导的内化作用.方法实验分为3组:HSP70受体封闭组、非受体封闭组和对照组,采用流式细胞仪检测C57BL/6小鼠骨髓来源DCs内化FITC标记的HSP70阳性细胞率.结果受体封闭组50μg HSP70可使DCs表面受体饱和;受体饱和后随HSP70-FITC用量的升高,HSP70-FITC阳性细胞数呈正比性增高;非受体封闭组应用50μg HSP70-FITC与100μg HSP70-FITC时HSP70-FITC阳性细胞率均达到90%以上且组间差别不大.结论 DCs表面HSP70受体介导的内化作用是DCs摄取抗原的主要途径,且具有饱和性和优先性的特点.当受体饱和后,非受体介导的内化作用可能在DCs内化HSP70过程中起作用并且呈剂量依赖性.
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热应激对小鼠神经元骨架蛋白和热休克蛋白70表达的影响
目的观察不同温度下体外培养的小鼠皮层神经元的形态及骨架蛋白表达变化,以及与热休克蛋白70(HSP70)变化的关系.方法取小鼠胚胎大脑皮层进行神经元原代培养,7天后给予不同温度刺激,应用倒置相差显微镜观察刺激后神经元的形态变化,应用激光共聚焦扫描观察不同温度刺激后神经元中骨架蛋白(β-tubulin)、HSP70的表达变化.结果光镜观察见38℃时漂浮细胞增加,神经网络稀疏;39℃时部分细胞坏死;42℃时大部分细胞出现坏死,胞体碎裂,突起漂浮或消失.激光共聚焦扫描见高温(38～42℃)刺激后β-tubulin荧光强度低于37℃时,且温度愈高荧光强度降低愈明显;HSP70荧光强度呈钟形分布,39℃高,37℃、42℃较低.结论热应激可以导致神经元形态变化,β-tubulin结构紊乱可能是其原因之一,HSP70也可能参与了该病理过程.
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呼吸机所致肺损伤家兔HSP70和NF-κB表达的意义
目的研究呼吸机所致肺损伤(VILI)炎症反应中热休克蛋白70(HSP70)和核因子-κB(NF-κB)表达的意义,以及加用呼气末正压(PEEP)的影响.方法健康成年新西兰白兔30只,实施麻醉和气管切开术后分别接受不同潮气量(VT)的通气(通气时间均为4h).随机分为以下三组:PEEP组(VT=40ml/kg, PEEP=3cmH2O,n=12);ZEEP组(VT=40ml/kg, PEEP=0cmH2O,n=12);对照组(VT=10ml/kg,n＝6),始终以正常条件通气.机械通气开始后4h经颈动脉放血处死动物.在光镜下观察肺组织的病理学改变,Western blot检测家兔肺组织HSP70及NF-κB的表达.结果家兔在致伤机械通气4h后,光镜下可见肺组织有不同程度的损伤;各组肺组织HSP70、NF-κB表达均显著增加,且ZEEP组二者呈负相关.与ZEEP组比较,PEEP组肺组织的病理损伤明显减轻,NF-κB表达明显减少.结论 HSP70可通过抑制NF-κB的活性,保护肺组织避免VILI;在机械通气过程中加用PEEP也可通过减少NF-κB的表达减轻肺组织损伤.
