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人巨细胞病毒感染对宿主细胞周期素依赖性蛋白激酶2的影响
目的 观察HCMV感染细胞周期素依赖性蛋白激酶2(Cdk2)的亚细胞定位,研究HCMV感染对Cdk2蛋白水平及对细胞周期蛋白E(CyclinE)/Cdk2激酶活性的影响.方法 通过密度抑制使细胞同步化于G0/G1期,用HCMV AD169毒株感染人胚肺成纤维细胞(HEL),用免疫细胞化学技术分别测定HCMV感染前及感染后24 h Cdk2亚细胞定位;Western Blot法测定HCMV Cdk2蛋白丰度;用免疫沉淀,激酶活性分析法检测HCMV感染细胞内Cdk2的活性.结果 接触抑制阻止在G0期细胞Cdk2游离在细胞质,HCMV感染24 h内导致Cdk2从细胞质移位到细胞核.同时HCMV感染可引起cyclinE/Cdk2激酶的强烈激活,但HCMV感染并不诱导Cdk2蛋白丰度增加.结论 HCMV感染G0/G1细胞,在24 h内导致Cdk2从细胞质移位到细胞核,使之与细胞核内的调节亚单位CyclinE结合,激活CyclinE/Cdk2激酶,使细胞周期越过G1/S限制点,进展至晚G1期.
关键词： 巨细胞病毒感染 细胞周期蛋白质依赖激酶 细胞周期蛋白类 -
晚期糖基化终产物对心肌细胞p57、p27、p21及hhLIM蛋白表达的影响
目的探讨晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)对体外培养乳鼠心肌细胞p577、p27、p21及hhLIM蛋白表达的影响.方法采用酶消化法体外培养乳鼠心肌细胞,实验前换用含1%胎牛血清的DMEM培养液饥饿培养24 h.应用Western蛋白印迹法检测不同浓度AGEs(50 mg/L、100mg/L)对心肌细胞刺激12、24、48 h后细胞中p57、p27、p21及hhLIM蛋白表达情况.结果不同浓度的AGEs刺激心肌细胞12 h均可使p27蛋白表达增加,以50 mg/L浓度作用更为明显,刺激24、48h无影响.AGEs对p57蛋白的表达呈动态变化:刺激12 h时表达下降,24、48 h呈增加趋势.p21蛋白在心肌细胞表达较弱,AGEs对其表达无显著影响.AGEs增加hhLIM蛋白的表达,以50 mg/L浓度作用12 h为显著.结论AGEs通过增加心肌细胞细胞周期素依赖性激酶抑制因子p57和p27蛋白及hhLIM蛋白的表达,参与心室重塑的发生和发展.
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去卵巢骨质疏松大鼠成骨细胞G_1期调节蛋白的改变
背景:G_1期调节蛋白对调控增殖细胞的增殖周期具有重要作用,目前关于成骨细胞G_1期调节蛋白的研究甚少,绝经后骨质疏松与成骨细胞G_1期调节蛋白的关系更未被阐明.目的:观察去卵巢大鼠骨质疏松发病过程中成骨细胞G_1期调节蛋白的改变,探讨绝经后骨质疏松症的发病机制.方法:100只6月龄SD雌性大鼠,随机分成假手术组和模型组各50只,模型组进行双侧卵巢结扎切除术,假手术组除未行卵巢结扎切除外,其余步骤与手术组相同.所有大鼠于术后4,8,12,18,24周分批取材,每批每组各处死10只,取大鼠腰椎.运用免疫组织化学方法检测骨组织中成骨细胞G_1期调节蛋白Cyclin D1、CDK4、p21蛋白表达.结果与结论:Cyclin D1、CDK4蛋白阳性表达主要定位于骨小梁表面的成骨细胞.假手术组有Cyclin D1、CDK4蛋白阳性表达,模型组表达强于假手术组.p21蛋白阳性表达部位与Cyclin D1相似,假手术组和模型组均有明显阳性表达,但模型组的表达维持在较高水平,在各时期均明显高于同期假手术组(P<0.01).结果证实,去卵巢骨质疏松模型大鼠发病过程中,成骨细胞Cyclin D1、CDK4、p21蛋白出现明显高表达.提示成骨细胞增殖加快,同时成骨细胞周期受阻滞亦增多,成骨细胞数量相对不足,骨形成低于骨吸收,导致骨质疏松的发生.
