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腹腔联合注射氯胺酮及可乐定对CCI模型大鼠的镇痛效应
目的:研究氯胺酮及可乐定对慢性神经病理性疼痛模型大鼠的镇痛作用,并探讨其可能机制.方法:雄性SD大鼠60只,体重180～220g,随机分为假手术组(S组)、生理盐水组(NS组)、可乐定组(CL组)、氯胺酮组(K组)及氯胺酮+可乐定(KC组)组,每组12只.采用坐骨神经慢性压迫法(CCI)制备大鼠神经病理性痛模型,S组仅暴露坐骨神经,不结扎.K组、CL组和KC组于术后3～14d每天分别腹腔注射氯胺酮(10mg/kg)、可乐定(1m/kg)、氯胺酮(5mg/kg)+可乐定(0.5m/kg),S组和NS组腹腔注射等容量生理盐水.各组分别于术前、术后3、7、14d测定机械痛阈和热痛阈值,术后3、7、14d测定痛阈值后每组随机取4只大鼠断头处死,取腰段脊髓(L4～L6)背根神经节(DRG),采用逆转录PCR法(RT-PCR)检测GAP-43mRNA的表达水平.结果:与S组比较,NS组、K组、CL组和KC组术后机械痛阈和热痛阈降低,NS组、K组和CL组DRG中GAP-43mRNA表达上调,KC组仅在术后3d DRG中GAP-43mRNA表达上调(P＜0.05);与C组比较,K组、CL组和KC组术后机械痛阈和热痛阈升高,DRG中GAP-43mRNA表达下调(P＜0.05);与K组和CL组比较,KC组术后7、14d时机械痛阈和热痛阈升高,DRG中GAP-43mRNA表达下调(P＜0.05).结论:氯胺酮与一定剂量的可乐定联合应用能抑制神经病理性疼痛大鼠机械性触诱发痛和热痛觉过敏的形成,减少大鼠脊髓DRG中GAP-43mRNA的表达,具有显著的协同镇痛作用.
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Nav1.8在足底切口痛模型大鼠背根神经节中 表达的研究
目的:观察足底切口痛模型大鼠术后行为学改变及背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)中Nav1.8表达的动态变化,探讨Nav1.8与术后痛觉敏化的关系.方法:雄性SD大鼠36只随机分为足底切口痛组(n=30)和对照组(n=6),分别于术前、术后2 h、1 d、2 d、3 d、5 d测定大鼠的机械性痛阈和热痛阈;测痛后取同侧L4-L6节段背根神经节,运用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹检测大鼠背根神经节中Nav1.8的表达.结果:切口痛组大鼠术后痛阈下降,术后2 h机械性痛阈和热痛阈降至低(P<0.05),Nav1.8表达量高(P<0.05);术后1 d热痛阈和机械性痛阈开始恢复,Nav1.8表达也逐渐下降.结论:切口痛术后痛觉敏化与Nav1.8表达的动态变化趋势基本一致,Nav1.8参与急性术后痛觉敏化的形成与维持过程,在急性术后疼痛中发挥重要作用.
关键词： 电压门控钠通道Nav1.8 脊髓背根神经节 切口痛 痛觉敏化 -
Mrgs受体及配体在疼痛中的作用
近年来人们在研究伤害感受信号传递途径时,发现了一类新的与疼痛调节有关的受体-Mrgs.编码这些受体的基因与Mas原癌基因具有较高的同源性,故被称作Mrgs(Mas-related genes)~([1]).这些受体选择性地高表达在与痛觉产生和传导密切相关的脊髓背根神经节和三叉神经节的小直径伤害感受神经元上,故又被称作感觉神经元特异性受体SNSRs(sensory neuron-specific receptor)~([2]).
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周围神经减压术对糖尿病神经卡压大鼠细胞因子表达的影响
目的 探讨周围神经减压术对DPN大鼠模型脊髓背根神经节中细胞因子表达的影响.方法 50只SD大鼠以STZ诱导糖尿病模型.2周后,筛选造模成功的大鼠32只随机分为糖尿病对照组(DM组,n=8)、糖尿病神经卡压组(DPN组,n=12)及糖尿病神经卡压+外周神经减压组(DPND组,n=12).DM组不予任何干预,DPN及DPND组制作坐骨神经卡压模型.6周后,DPND组予神经减压术,DPN组予假神经减压手术.于神经卡压前后及减压手术前后不同时间(术前、术后2周、术后6周)分别以Von Frey单丝测定各组机械痛阈.术后6周,观察各组脊髓背根神经节病理,并通过酶联免疫法测定背根神经节中TNF-α、环氧酶2(COX-2)、VEGF及神经生长相关蛋白-43(GAP-43)的表达.结果 DPND组行神经减压术6周后机械痛阈较减压手术前及DPN组改善(P＜0.05);脊髓背根神经节炎性反应及水肿现象轻于DPN组,且背根神经节中TNF-α及COX-2表达较DPN组降低,其中COX-2改变差异有统计学意义(P＜0.05).DPND组VEGF及GAP-43的表达较DPN组有增高趋势,但差异无统计学意义. 结论 神经减压术可改善周围神经卡压造成的糖尿病大鼠机械痛阈升高现象,这可能与其调节脊髓背根神经节中相关细胞因子的表达有关.
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一种大鼠脊髓背根神经节细胞培养模型的建立
神经细胞形态万千、功能各异,而要研究其在整体中的功能,单靠简单的胚胎及新生动物的原代神经元或传代的杂交神经胶质瘤细胞是行不通的.脊髓背根神经节(dorsal root ganglion, DRG)是躯体和内脏感觉信号中枢途径的第一站,其初级感觉神经元是伤害性感觉信息从外周到中枢的重要传导站,该部位的受体、递质及离子通道现已成为痛觉研究和新型镇痛药开发的重要靶位[1].而DRG小细胞上河豚毒素(tetrodotoxin, TTX)不敏感钠通道在慢性痛中的改变及其离体后的可检测性的发现,实现了人们能够用离体单细胞的离子通道来研究痛觉的长久梦想[2].
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中药脊髓I号对脊髓损伤大鼠背根神经节一氧化氮合酶表达的影响
为研究中药合剂脊髓I号(SCI)促进脊髓修复再生效应的机制,用NADPH-d染色法和图像分析技术观察了脊髓损伤大鼠灌服SCI后,背根节(DRG)细胞一氧化氮合酶(NOS)的表达.结果表明:大鼠脊髓损伤后及时灌服SCI与对照组大鼠比较,脊髓损伤侧首、尾向各2个DRG内NOS的表达明显和持续性上调(神经节细胞NOS表达强阳性率可达40%以上).提示 NOS表达程度与脊髓损伤和修复再生的情况相关;而SCI可能通过对NOS基因表达的调节,促进损伤脊髓组织的修复再生.
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Edaravone对脊髓神经细胞体外存活的作用
目的探讨Edaravone对脊髓神经细胞体外存活的作用和对谷氨酸兴奋性神经细胞毒性的影响.方法分离培养脊髓背根神经节(DRG),加入谷氨酸并使用Edaravone进行干预,倒置显微镜下观测细胞在不同培养条件下存活;流式细胞仪观测分析神经细胞凋亡.结果谷氨酸可诱导体外培养的DRG细胞凋亡,Edaravone抑制谷氨酸的神经细胞损伤作用,且浓度更高作用明显.结论 Edaravone对谷氨酸的兴奋性神经细胞毒性具有浓度依赖性保护作用,其作用机制可能与其抗自由基导致的细胞凋亡有关.
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丝裂原活化蛋白激酶在糖尿病神经病理性疼痛中枢敏化和外周敏化中作用的研究进展
丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)是一组包括细胞外信号调节激酶1/2、c-Jun氨基端激酶1/2/3、p38亚型(α,β,γ和δ)和细胞外信号调节激酶5的丝/苏氨酸蛋白激酶,能够介导增殖、分化、凋亡、免疫、炎症等一系列细胞活动.痛觉敏化是一种中枢和外周伤害性感受器的重塑机制.大量研究显示,MAPKs在糖尿病动物模型的脊髓和背根神经节中广泛激活,在糖尿病神经病理性疼痛(DNP)中枢敏化和外周敏化中发挥了重要的作用.此外,一些药物也可通过抑制中枢和外周神经系统中MAPKs的激活来缓解DNP.本文主要总结了MAPKs在DNP中枢和外周敏化中作用的研究进展.
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脊髓背根神经节内BKCa参与感染后肠易激综合征内脏高敏感形成机制的研究进展
持续存在的消化道黏膜低度炎症是感染后肠易激综合征(PI-IBS)发病的主要病理生理学基础,而内脏高敏感是PI-IBS症状产生的核心机制.脊髓传入神经通路神经元兴奋性增高所致感觉易化是内脏伤害性感受异常的关键动因,但其机制未明.综合新近研究提示,慢性炎症状态下,脊髓传入神经背根神经节(DRG)神经元细胞膜处的大电导Ca2激活K+通道(BKCa)可通过改变神经元兴奋性而参与胃肠内脏感觉的调控,在PI-IBS内脏高敏感反应机制中发挥重要作用.
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腺相关病毒介导KLF7对小鼠坐骨神经缺损后感觉功能的作用
[目的]探讨腺相关病毒2 (AAV2)介导核转录因子KLF7对脱细胞异体神经支架(ANA)修复小鼠坐骨神经缺损后感觉轴突再生和感觉功能恢复的作用.[方法]成年C57 BL/6小鼠随机分为正常组、ANA+AAV2对照组和ANA+AAV2-KLF组,术后4周RT-PCR和免疫荧光染色检测神经支架内KLF7 mRNA和蛋白表达,免疫荧光染色检测神经支架内NF和S100蛋白表达,霍乱毒素亚单位B结合荧光素TRITC(CTB-TRITC)逆行示踪L2～5脊髓背根神经节神经元(DRG)标记感觉轴突再生,Hargreaves法和电生理检测感觉功能的恢复.[结果]与对照组比较,ANA+ AAV2-KLF组神经支架内KLF7mRNA和蛋白表达显著增高,NF和S100蛋白表达增加,CTB阳性标记DRG感觉神经元数量增加,Hargreaves热缩足反射潜伏期降低,电生理神经传导速度增加,潜伏时缩短,动作电位波幅增大(P＜0.05).[结论]KLF7可促进小鼠坐骨神经缺损后感觉轴突再生和髓鞘形成,促进感觉功能的恢复.
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多巴胺对大鼠脊髓背根神经节神经元ATP-激活电流的调制作用
目的: 研究多巴胺(DA)对ATP-激活电流(IATP)的调制作用.方法: 在大鼠新鲜分离的DRG神经元标本上应用全细胞膜片钳技术,记录DA对IATP的影响.结果: 大部分受检细胞(89.5%,77/86)对ATP敏感,10-6～10-3 mol/L ATP可引起剂量依赖性呈明显去敏感的内向电流.在此77个细胞中,预加DA对IATP的影响如下:在50.6%(39/77)的细胞产生抑制作用,28.6%(22/77)的细胞产生增强作用,其余的无明显作用(20.8%,16/77).在浓度10-7～10-3 mol/L范围DA对IATP的抑制或增强作用依赖于多巴胺的浓度.胞内透析GDP-β-s上述抑制或增强作用可完全被取消.结论: DA对IATP的抑制作用可能是由于多巴胺受体激活后经G蛋白偶联使ATP(P2X)受体磷酸化所致.
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鞘注神经生长因子促进大鼠胫骨骨折愈合的实验研究
目的 研究鞘注神经生长因子(NGF)对大鼠胫骨骨折愈合的影响,以及相应脊髓背根神经节(DRG)与胫骨骨痂中的降钙素基因相关肽、P物质的表达变化. 方法 成年雄性SD大鼠48只随机分为两组.实验组予NGF 1μg/d连续鞘注14 d,对照组予等量生理盐水.术后7、14、21、28 d分批处死动物,行骨痂X线评分、骨痂/骨干比值测量.免疫组织化学法测定相应节段DRG与胫骨骨痂中的CGRP、SP表达.结果 术后21 d,NGF组X线评分低于对照组,21 d、28 d骨痂/骨干比值低于对照组.HE染色显示各时期NGF组软骨内成骨过程增强,骨痂成熟度高于对照组,骨痂改建过程提前且更为完全.CGRP、SP在DRG及胫骨骨痂中表达的平均光密度(OD)值高于同期对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).相关性分析显示DRG神经肽表达OD值与骨痂OD值明显正相关. 结论 鞘注神经生长因子可促进DRG与骨折骨痂中的神经肽表达,促进成骨细胞增殖与软骨内骨化,减小骨痂体积并加速骨折的愈合及塑形改建过程.推测神经生长因子与DRG神经肽参与了中枢神经调控外周成骨活动的过程.
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舒芬太尼预处理对大鼠急性胃粘膜病变的保护作用及与酸敏感离子通道的关系
目的 观察舒芬太尼预处理对急性胃粘膜病变大鼠胃粘膜的保护作用及其对胸段脊髓背根神经节(DRG)神经元中酸敏感离子通道(ASIC3)表达的影响,探讨其保护机制与ASIC3的关系.方法 选取雄性Wistar大鼠,分3组:正常组、浸水束缚应激模型组和舒芬太尼预处理组.采用浸水束缚应激(WIRS)法复制急性胃粘膜病变模型,于应激6h后观察大体胃粘膜损伤程度及溃疡指数,并采用免疫荧光法观察ASIC3在DRG神经元中的表达,采用RT-PCR法进行实时定量研究.结果 与正常组比较,WIRS明显损伤胃粘膜,升高溃疡指数,且胸段DRG神经元上ASIC3广泛表达:舒芬太尼预处理可明显减轻WIRS大鼠的胃粘膜损伤程度.降低溃疡指数,并使ASIC3 mRNA在胸段DRG神经元的表达量明显减少.结论 ASIC3参与了急性胃粘膜病变的发生机制,舒芬太尼预处理对急性胃粘膜病变具有保护作用,其机制与抑制ASIC3的表达有关.
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APETx2对应激性胃黏膜损伤大鼠脊髓背根神经节酸敏感离子通道3表达的影响
目的：观察酸敏感离子通道3（ASIC3）特异性拮抗剂APETx2对应激性胃黏膜损伤大鼠脊髓背根神经节（DRG）神经元上ASIC3表达的影响。方法：24只雄性Wistar大鼠随机等分为对照组（NC组）、应激模型组（WIRS组）及APETx2处理组（AT组，腹腔内注射APETx225μg／kg）。采用浸水束缚应激（WIRS）法复制应激性胃黏膜损伤模型，于应激6 h 后留取标本测定胃液 pH 值；HE 染色观察胃组织病理学改变；免疫组化和实时定量PCR法测定DRG神经元上ASIC3蛋白及mRNA表达。结果：与NC组比较，WIRS组胃pH值明显降低（P ＜0．05），胃黏膜损伤程度严重，DRG 神经元上 ASIC3表达明显上调（P ＜0．05）；与 WIRS 组比较，AT组胃液pH值明显升高（P ＜0．05），胃黏膜损伤程度减轻，DRG神经元上ASIC3表达明显减少（P ＜0．05）。结论：浸水束缚应激所致胃黏膜损伤大鼠DRG神经元上ASIC3被激活，与胃液pH下降、胃黏膜损伤严重程度密切相关，APETx2可特异性拮抗ASIC3表达，对应激性胃黏膜损伤可能起保护作用。
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金荞麦提取物改善肠易激综合征大鼠内脏痛觉过敏的效果及其机制
目的 观察金荞麦提取物(Fag)对肠易激综合征(IBS)大鼠内脏痛觉过敏的影响及其机制.方法 采用腹壁撤退反射(AWR)评分观察Fag(6、24 g·kg-1)口服给药两周后的IBS大鼠模型的内脏痛觉过敏的变化,并用免疫荧光法观察腰骶段脊髓背根神经(DRG)的辣椒素受体亚型TRPV1表达水平;采用细胞膜片钳记录Fag(0.1、0.3、1、3 g·L-1)对辣椒素(CAP)激活大鼠的DRG细胞TRPV1电流(ITRPV1)的影响.结果 Fag 24 g·kg-1在体内可显著降低升高的IBS大鼠AWR评分,IBS大鼠腰骶段DRG的TRPV1表达增高;Fag 6、24 g·kg-1干预后DRG的TRPV1表达下降;体外0.1、0.3、1、3 g·L-1 Fag可浓度依赖地抑制CAP激活的分离DRG神经元ITRPV1,IC50为0.83 g·L-1.结论 Fag可通过下调IBS大鼠TRPV1受体表达改善大鼠痛觉过敏,可抑制DRG神经元ITRPV1峰值,调节痛觉信号传递.
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CXCL12/CXCR4轴在胰腺癌-神经交互作用中的研究
目的 本研究旨在阐述CXCL12/CXCR4轴对胰腺癌神经相互作用的影响,探讨CXCL12/CXCR4在胰腺癌嗜神经过程中的相关分子机制.方法 体外培养胰腺癌Panc-1、Miapaca-2细胞,实验分为空白对照组、外源性CXCL12组及CXCR4受体特异性阻断剂AMD3100组.采用RT-PCR检测胰腺癌细胞CXCR4及CXCL12 mRNA的表达,检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)及人尿激酶型纤溶酶原激活物(human urokinase plasminogen activator,uPA) mRNA的表达;采用Transwell侵袭实验观察各实验组中细胞侵袭性的变化;提取大乳鼠脊髓背根神经节,建立胰腺癌细胞Miapaca-2与脊髓背根神经节(DRG)共培养模型,倒置显微镜成像系统动态观察不同实验组中神经轴突生长差异.结果 胰腺癌细胞Panc-1、Miapaca-2细胞存在CXCR4 mRNA的表达,而CXCL12 mRNA无表达;两种胰腺癌细胞之MMP-2、MMP-9及uPAmRNA在AMD3100组、对照组、CXCL12组中的表达差异具有统计学意义(P＜0.01);Transwell细胞侵袭性实验中,外源性CXCL12明显增强Panc-1、Miapaca-2细胞的侵袭性,而AMD3100有效抑制肿瘤细胞的侵袭能力,组间存在显著差异(P＜0.05).胰腺癌细胞与脊髓背根神经节共培养模型中,外源性CXCL12明显增强神经轴突的生长,促使胰腺癌细胞与神经轴突接触,而AMD3100有效抑制神经轴突生长及与肿瘤细胞接触;细胞共培养144h后各组神经生长轴突数差异有统计学意义(P＜0.01).结论 CXCL12/CXCR4一方面增强胰腺癌细胞的侵袭能力,促进胰腺癌细胞神经浸润;另一方面,神经元与施万细胞等构成神经纤维分泌CXCL12并通过化学趋化作用,诱导表达CXCR4的胰腺癌细胞向神经迁移,导致神经浸润的发生.
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P2X4受体在糖尿病神经病理性疼痛模型中的作用
目的 通过建立糖尿病神经病理性疼痛大鼠(DM)模型,观察P2X4受体在糖尿病神经病理性疼痛大鼠模型中的作用和意义.方法 40只SD大鼠随机分为制模组(DM组,n=30)和正常对照组(C组,n=10).按60mg/kg一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型.于STZ注射前、注射后第7、14、28d分别测定大鼠血糖、体重以及机械性痛阈变化.DM组又均分为制模1周组(DM1组)、制模2周组(DM2组)、制模4周组(DM4组)三个亚组.在制模前及制模后1、2、4周利用von Frey hairs法测定大鼠机械痛阈,并通过real-time法测定每个时间点大鼠脊髓背根神经节(DRG) P2X4R的表达水平.结果 DM组机械痛阈在制模1周后即明显下降,并持续至4周;在制模1周以后脊髓背根神经节内P2X4R表达水平出现显著上调.大鼠P2X4R表达水平变化与机械痛阈的下降存在相关性.结论 糖尿病早期大鼠脊髓背根神经节P2X4R表达即出现上调,并与疼痛相关.这些结果说明P2X4R可能在DM大鼠周围神经疼痛的发生及痛敏的维持阶段起重要作用.
