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电针对酸敏感离子通道3基因敲除小鼠心肌缺血后损伤的影响
目的:观察电针对小鼠心肌缺血后损伤的影响,探讨酸敏感离子通道3(ASIC3)在其中的作用.方法:选用C57BL/6与ASIC3基因敲除(ASIC3-/-)小鼠建立心肌缺血模型,检测针刺前后心电图.结果:针刺后,与造模后比较,两种小鼠电针组ST段和T波降低(P＜0.01);与ASIC3-/-小鼠比较,C57BL/6小鼠ST段和T波降低更加明显.结论:电针内关穴可改善心肌缺血后损伤,机制之一可能是通过激活传入纤维末梢的ASIC3受体通道,抑制交感神经,治疗心肌缺血.
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苦杏仁苷对Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠关节滑膜ASIC3表达的影响
目的 类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)病程中由于炎症导致关节局部组织酸化,酸敏感离子通道(acid-sensitive ion channels,ASICs)表达与大鼠关节软骨的破坏密切相关.本研究从多途径观察苦杏仁苷对胶原诱导性关节炎(typeⅡcollagen induced arthritis,CIA)大鼠关节滑膜的免疫应答调节,探讨苦杏仁苷抗RA的作用机制.方法 选取45只Wistar雌性大鼠,随机抽取8只为空白对照组.35只造模成功的CIA大鼠又随机分为模型组5只,雷公藤多甙组(即阳性对照药组)、苦杏仁苷高剂量组、苦杏仁苷低剂量组各10只.空白对照组和CIA模型组予以0.9％生理盐水,雷公藤多甙组予以雷公藤多甙1 mg/(kg·d),苦杏仁苷高剂量组予以120 mg/(kg·d),苦杏仁苷低剂量组予以60 mg/(kg·d),1次/d连续灌胃给药28 d.经腹腔麻醉,股动脉采血,常规分离血清用于IL-1β、sICAM-1检测;分离左膝关节滑膜组织用40 g/L多聚甲醛固定作为HE染色标本;分离右膝关节滑膜组织-80℃中保存用于Western blot ASIC3蛋白检测.同时提取脑组织于-80℃中保存作为阳性对照.结果 HE染色显示CIA模型组滑膜细胞排列疏散、紊乱、增生,大量的炎细胞浸润;苦杏仁苷高剂量组、低剂量组和雷公藤多甙组滑膜轻度增生,炎性细胞浸润明显减少,外周血中IL-1β、sICAM-1水平均有明显下降,滑膜中ASIC3蛋白表达也明显下降,与CIA模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);与空白组比较,差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 苦杏仁苷能有效通过抑制CIA大鼠外周血中炎性细胞因子IL-1β、sICAM-1的表达水平,以及下调滑膜ASIC3蛋白的表达,干扰对关节滑膜的损伤,起到抗炎和免疫抑制作用,可能是苦杏仁苷的抗炎镇痛和保护软骨作用的机制之一.
关键词： 苦杏仁苷 Ⅱ型胶原诱导性关节炎 关节滑膜 酸敏感离子通道3 -
酸敏感离子通道3参与NERD内脏高敏感机制的研究进展
非糜烂性反流病(Non-erosive reflux disase,NERD)的发病机制目前尚不明确,可能与内脏高敏感相关.内脏高敏感的外周致敏和中枢致敏形成过程中,酸敏感离子通道(Acid-sensing ion channels,ASICs)均起到重要作用.其中酸敏感离子通道3(Acid-sensing ion channel 3,ASIC3)作为与NERD内脏高敏感性关联强的ASICs,其可在酸性环境下活化,并受炎症介质等多种物质调控表达水平和空间结构.NERD患者酸暴露时多脑区激活,ASIC3在中枢致敏环节的研究对于内脏高敏感机制的完善是不可或缺的一部分.
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舒芬太尼预先给药对浸水束缚应激大鼠胃组织ASIC3表达的影响
目的 观察舒芬太尼与APETx2预先给药对浸水束缚应激(WIRS)大鼠胃组织酸敏感离子通道3(ASIC3)表达及胃黏膜损伤的影响.方法 40只雄性Wistar大鼠随机等分为对照组(C组)、应激组(W组)、舒芬太尼预先给药组(S组,腹腔内注射舒芬太尼25 μg/kg)及ASIC3特异性拮抗剂APETx2预先给药组(A组,腹腔内注射APETx2 25 μg/kg).采用WIRS法复制应激性胃黏膜损伤模型,于应激6h后留取标本测定溃疡指数(UI);黄嘌呤氧化酶法测定胃组织超氧化物歧化酶(SOD)活力与硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量;免疫组化和免疫印迹法测定胃组织ASIC3蛋白表达.结果 与C组比较,W组、S组及A组的UI值显著升高(P均＜0.01),SOD值显著下降(P均＜0.01),MDA值显著升高(P均＜0.01),胃组织ASIC3蛋白表达显著上调(P均＜0.01).与W组比较,S组及A组的UI值显著下降(P均＜0.01),SOD值显著升高(P均＜0.01),MDA值显著下降(P均＜0.01);A组的ASIC3蛋白表达显著下调(P＜0.01),S组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 APETx2调控胃组织ASIC3蛋白表达,逆转氧自由基代谢失衡起胃黏膜保护作用;舒芬太尼同样通过逆转氧自由基代谢失衡起胃黏膜保护作用,但其作用机制并非通过调控ASIC3完成.
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环氧合酶1抑制剂对大鼠术后机械痛敏及ASIC3表达的影响
目的 观察环氧合酶(COX)l抑制剂对术后痛大鼠机械痛敏及背根神经节(DRG)酸敏感离子通道3(ASIC3)表达的影响,探讨ASIC3在术后急性疼痛中的作用.方法 SPF级雄性SD大鼠48只,其中18只按Brennan法建立术后痛模型,随机均分为二甲基亚砜(DMSO)+ SC560组(S组)、DMSO组(D组)和对照组(C组).其中S组和D组造模前分别鞘内给予用10μl DMSO溶解后的SC560 100μg和单纯DMSO 10μl,C组不作处理.于术后2、4、12、24、48 h测定三组大鼠机械痛阈(MWT),观察痛时点.另30只大鼠随机均分为相同三组,采用Western blotting法测定痛时间点三组大鼠L3～L5 DRG ASIC3表达水平.结果 D组和C组大鼠术后各时点MWT差异无统计学意义.C组大鼠术后24 h MWT明显低于其他时间点(P＜0.05).术后24 hS组大鼠MWT明显高于C组和D组(P＜0.05),DRG ASIC3蛋白表达灰度值明显低于C组和D组(P＜0.01).C组和D组大鼠MWT和ASIC3蛋白表达灰度值差异无统计学意义.结论 术后24 h大鼠机械痛敏强,DRG ASIC3表达增高.给予SC560可抑制ASIC3表达,减轻痛敏.
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鞘内应用阿米洛利对皮肤癌痛小鼠ASIC-3表达及痛行为影响的实验研究
目的 研究经鞘内阿米洛利给药对皮肤癌痛小鼠酸敏感离子通道3 (ASIC-3)表达及痛行为的影响.方法 Balb/c小鼠随机分为正常组(N组)、皮肤癌痛组(C组)、生理盐水组(S组)和阿米洛利组(A组),每组10只.除N组外,其余3组小鼠足趾皮下接种肿瘤细胞建立皮肤癌痛模型;N组、C组不予干预措施,S组、A组分别经鞘内注射10 μl生理盐水和1.5 μg/μl阿米洛利溶液.应用热痛刺激仅分别检测各组给药前和给药后30、60、120、180 min小鼠热痛爪回缩潜伏期(TWL)值,并提取小鼠脊髓背角组织,采用Western blotting检测ASIC-3蛋白的表达.结果 肿瘤细胞接种前,4组小鼠的TWL值差异无统计学意义(P＞0.05).接种后2周,C、S和A组小鼠TWL值分别由(9.66±0.54)s、(9.96±0.39)s和(10.15±0.40)s缩短为(4.32±0.25)s、(4.16±0.33)s和(4.26±0.24)s,差异有统计学意义(P＜0.05).C、S组于小鼠鞘内注射给药后60、120、180 min小鼠TWL值分别为(4.05±0.37)s、(3.91±0.48)s、(3.89±0.32)s和(4.73±0.17)s、(4.29±0.25)s、(4.50±0.21)s,均低于A组的(6.03±0.23)s、(7.09±0.24)s、(6.49±0.19)s,差异均有统计学意义(P＜0.05).A组脊髓ASIC-3蛋白的相对表达量为1.88±0.11,低于C组的2.23±0.32和S组的2.43±0.24,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 阿米洛利对皮肤癌痛小鼠脊髓背角ASIC-3表达有抑制作用并参与痛觉形成.
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ASIC3-shRNA干扰慢病毒质粒的构建及其效率的鉴定
目的:构建酸敏感离子通道3(acid-sensing ion channels 3,ASIC3)干扰慢病毒质粒并进行效率鉴定.方法:利用GenBank获取ASIC3基因序列并合成相应干扰序列,通过T4 DNA连接酶将ASIC3基因片段连接至环状Plko.1-Puro载体,将重组质粒转染293T细胞获取慢病毒,用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测病毒滴度;将包装之后的慢病毒感染PC12、BV2、N2a细胞,分别分为ASIC3-shRNA组和EGFP-shRNA组(阴性对照),经慢病毒感染后用qRT-PCR和免疫印迹技术分别检测ASIC3 mRNA和蛋白表达.结果:合成的ASIC3干扰序列成功连接至Pl-ko.1-Puro载体;qRT-PCR及DNA测序鉴定结果证实,ASIC3-shRNA质粒构建成功;qRT-PCR与免疫印迹结果表明,在PC12、BV2、N2a细胞中,与EGFP-shRNA组相比,ASIC3-shRNA组ASIC3 mRNA和蛋白表达量均明显下调(P<0.05).病毒滴度约为1×109 IU/mL.结论:ASIC3-shRNA干扰慢病毒质粒构建成功.
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补肾方骨青颗粒对佐剂性关节炎大鼠的干预和影响软骨表达酸敏感离子通道3的实验研究
目的:观察补肾方骨青颗粒对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠的干预作用及对软骨酸敏感离子通道3(acid-sensitive ion channel 3,ASIC3)表达的影响.方法:将大鼠随机分成空白对照组、AA模型组、阳性对照药组(阿司匹林50mg/kg)、骨青颗粒治疗剂量组(8.4g生药/kg)、骨青颗粒高剂量组(16.8g生药/kg).除空白对照组外其余各组大鼠左后足趾皮内注射完全弗氏佐剂(complete Freund's adjuvant,CFA)诱导AA,致炎后第10天起各组灌胃给予相应药物,连续给药10d.记录大鼠体重足趾容积和关节炎评分,实验结束后,光学显微镜观察大鼠踝关节病理变化,用RT-PCR和Western blot分析大鼠膝关节软骨细胞中ASIC3 mRNA及蛋白表达.结果:经治疗后,骨青颗粒能明显抑制AA大鼠踝关节的肿胀,显著降低AA大鼠关节软骨细胞ASIC3 mRNA及蛋白的表达,效果与阳性对照药物阿司匹林无显著性差异.结论:骨青颗粒可减轻佐剂性关节炎大鼠的关节炎症,保护关节软骨,并能下调软骨ASIC3的表达.
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酸敏感离子通道3在胃食管反流大鼠中的表达和意义
目的 检测酸敏感离子通道3(ASIC3)在胃食管反流大鼠食管黏膜及背根神经节(DRG)中的表达变化,探讨其在胃食管反流病(GERD)发病中的作用.方法 将Sprague-Dawley雄性大鼠随机分为实验组(G组)和对照组(S组).实验组采用限制幽门及结扎胃底方法建立GERD大鼠模型.于造模后15 d处死两组大鼠,通过HE染色对大鼠食管黏膜进行组织病理学检测,通过蛋白质印迹法(Western blotting)和实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠食管黏膜及DRG中ASIC3蛋白及mRNA表达变化.结果 HE染色显示G组大鼠食管黏膜慢性炎症改变,S组大鼠食管黏膜无异常;Western blotting显示G组大鼠DRG中ASIC3蛋白表达高于S组(6.75 ±0.74 vs 5.07 ±0.72) (P ＜0.05),食管黏膜中ASIC3蛋白表达高于S组(8.04 ±0.67vs 7.31 ±0.740) (P＜0.05);RT-PCR同样显示,G组大鼠DRG中ASIC3 mRNA表达高于S组(0.00030±0.00003vs 0.00013±0.00002)(P＜0.05),食管黏膜中ASIC3 mRNA表达高于S组(0.01073 ±0.00231 vs 0.00088±0.0007)(P＜0.05).结论 ASIC3在DRG及食管黏膜上表达上调可能是导致GERD食管内脏高敏感的原因之一.
关键词： 胃食管反流病 食管内脏高敏感 酸敏感离子通道3 蛋白质印迹 实时定量聚合酶链反应 -
APETx2对应激性胃黏膜损伤大鼠脊髓背根神经节酸敏感离子通道3表达的影响
目的：观察酸敏感离子通道3（ASIC3）特异性拮抗剂APETx2对应激性胃黏膜损伤大鼠脊髓背根神经节（DRG）神经元上ASIC3表达的影响。方法：24只雄性Wistar大鼠随机等分为对照组（NC组）、应激模型组（WIRS组）及APETx2处理组（AT组，腹腔内注射APETx225μg／kg）。采用浸水束缚应激（WIRS）法复制应激性胃黏膜损伤模型，于应激6 h 后留取标本测定胃液 pH 值；HE 染色观察胃组织病理学改变；免疫组化和实时定量PCR法测定DRG神经元上ASIC3蛋白及mRNA表达。结果：与NC组比较，WIRS组胃pH值明显降低（P ＜0．05），胃黏膜损伤程度严重，DRG 神经元上 ASIC3表达明显上调（P ＜0．05）；与 WIRS 组比较，AT组胃液pH值明显升高（P ＜0．05），胃黏膜损伤程度减轻，DRG神经元上ASIC3表达明显减少（P ＜0．05）。结论：浸水束缚应激所致胃黏膜损伤大鼠DRG神经元上ASIC3被激活，与胃液pH下降、胃黏膜损伤严重程度密切相关，APETx2可特异性拮抗ASIC3表达，对应激性胃黏膜损伤可能起保护作用。
