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参附注射液药理作用研究
参附注射液源于参附汤,有效成份是人参皂甙、乌头原碱等.近些年来人们研究发现参附注射液有心肌保护和改善微循环功能.动物实验证实:人参存在使附子类似受体兴奋剂的正性频率作用失去,保留正性肌力作用[1].有结果显示参附注射液明显改善慢性心力衰竭患者的心功能,减少室性心律失常的发生.还有研究发现参附注射液对肺缺血/再灌注保护、内毒素致肺损伤的保护、循环功能的稳定、增强机体非特异性抵抗力均有疗效.现就有关报道做一简单阐述.
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逐步再灌注对肺再灌注损伤的影响
肺缺血-再灌注损伤多见于肺栓塞溶栓和介入治疗、肺动脉血栓内膜剥脱术、肺移植及体外循环后.本组实验对球囊阻塞法进行了改良,建立了犬肺缺血-再灌注损伤动物模型.并在此模型上应用逐步再灌注,以探索其对肺再灌注损伤的影响.
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血红素氧合酶-1与肺缺血再灌注损伤的关系
血红素氧合酶(hemeoxygenase,HO)是哺乳动物组织细胞微粒体的一种蛋白酶,是降解血红素为一氧化碳(carbonmonoxide,CO)、铁(Fe)和胆红素的起始酶和限速酶,有3种同功酶[1]:HO-1、HO-2和HO-3.
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体外循环术后肺损伤机制的研究进展
体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)术后肺不同程度的损伤,临床多表现为肺水肿、肺不张等肺功能障碍,严重者有呼吸衰竭,甚至多脏器衰竭.CPB术后死亡的病例中,很大一部分是死于多脏器衰竭.围手术期保护肺功能已迫在眉睫,但是,目前肺损伤的机制尚不十分明确,大多数学者认为其机制主要有补体的激活,细胞因子的释放,中性粒细胞在肺内积聚与激活,蛋白酶,血小板的激活聚集,肺缺血/再灌注损伤等.现对其机制作一综述.
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山莨菪碱对肺缺血-再灌注损伤的保护机制
引言山莨菪碱(anisodamine)是我国西南地区茄科植物唐古特山莨菪根中提取的一种生物碱,化学结构为托品酸-6β-羟基-3α-脱品酯,通称654,天然品称为654-1,其人工合成品称为654-2,临床常用的是合成的消旋山莨菪碱,属于毒覃碱型(M型)乙酰胆碱受体竞争性阻断剂.近年来发现山莨菪碱在对抗脑、肝、肾、心等器官的缺血-再灌注 (ischemia reperfusion, I/ R)损伤上有良好的保护作用[1].山莨菪碱对肺I/R损伤保护作用的动物实验和临床研究也取得一些进展,具有重要的临床意义.
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右美托咪啶对肺癌单肺通气患者肺缺血-再灌注的影响
目的：观察右美托咪啶( Dexmedetomidine)对肺癌单肺通气( OLV)患者肺缺血-再灌注的影响。方法58例肺癌OLV患者随机分为两组,A组( n=28例)麻醉诱导前静注Dex,B组( n=30例)麻醉诱导前静注相同容量生理盐水。分别在麻醉诱导前(T0)、OLV前即刻(T1)、OLV60min(T2)、OLV120min(T3)、膨肺后1 h (T4)、术后24 h(T5)时检测中性粒细胞(PMN)数量,采用 ELISA 法检测血清黄嘌呤氧化酶( XOD)和髓过氧化物酶( MPO)表达水平,详细记录各种麻醉药物用量、手术时间、OLV时间、停药后苏醒时间、术中失血量、尿量和补液量。结果两组患者在性别、年龄、体质量、ASA分级、OLV时间及手术时间等方面比较无显著差异性(P>0．05)；两组PMN计数和血清MPO、XOD表达水平在T2-T5时均较T0时明显升高(P<0．05),且A组PMN计数和血清MPO、XOD表达水平较B组明显减少(P<0．05)；A组异丙酚用量和瑞芬太尼用量明显低于B组( P<0．05),而苏醒时间较B组明显延长( P<0．05)。结论 Dex可降低肺癌OLV患者血清XOD、MPO表达水平和PMN计数,对肺组织缺血-再灌注损伤具有一定的保护作用。
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后处理对肺缺血再灌注丙二醛和谷胱甘肽的影响
目的 研究缺血后处理对离体大鼠肺缺血再灌注丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)的影响并分析其可能的作用机制.方法 建立离体大鼠肺缺血再灌注损伤模型.12只SD大鼠随机分为2组,每组6只.缺血再灌注(IR)组缺血2 h后以Krebs-Henseleit Buffer(KHB)液再灌注1 h,后处理(IPostC)组缺血2 h后给予重复一次的5 min灌注和5 min缺血的后处理,即以KHB液行再灌注1 h.持续监测及记录肺动脉压(PAP),缺血前及再灌注末分别留取3 ml的灌流液,缺血前、再灌注始及再灌注末分别切取约20 mg肺组织制作10%的组织匀浆,灌流液及肺组织匀浆用于测定MDA及GSH的含量,再灌注结束测定肺湿/干重比(W/D).结果 IPostC组MDA、GSH及W/D较IR组明显降低(P<0.05).结论 缺血后处理能明显减轻离体大鼠肺缺血再灌注损伤.
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先天性心脏病患儿血浆内皮素-1变化及其临床意义的研究
目的：研究先天性心脏病(CHD)患儿血浆内皮素-1(ET-1)浓度的变化，分析各种因素对ET-1浓度的影响，探讨CHD患儿血浆ET-1水平变化的机制和意义。方法：对照组：30例。观察组：97例CHD患儿，其中肺充血组69例，肺缺血组28例；肺充血伴肺动脉高压(肺高压，PH)50例，不伴PHl9例。用放免法直接测定每例静脉血中ET-1含量。结果：①左向右分流的CHD患儿血浆ET-1浓度明显增加，达正常对照约2.5倍，在PH形成之前ET-1浓度已经升高，达正常对照约1.5倍；②PH病人ET-l含量增高且随肺动脉压的升高而增高；③心脏扩大对血浆ET-1浓度无影响；④前列腺素E1(20～40ng·kg-1.min-1)可降低肺高压患儿血浆ET-1水平。结论：肺血流量增加是ET-1生成增多的主要原因；ET-1可引起肺高压，肺高压可促进ET-1的产生，PGE1可延缓PH的形成和发展。
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异丙酚对 CO2 气腹后大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用及机制
目的 观察异丙酚对CO2 气腹后大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用,并探讨其作用机制. 方法 选择雄性大鼠48只,随机分为A、B、C、D组,每组12只. A、B、C组经尾静脉泵注生理盐水、D组经尾静脉泵注异丙酚.A组不做其他处理,B组经CO2 气腹建立大鼠肺缺血模型,C、D组经CO2 气腹建立大鼠肺血再灌注模型. 各组造模后处死大鼠,取肺组织检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD),计算肺湿干质量比(W/D),采用免疫组化法、Real-time PCR法、Western blotting法分别检测肺组织中HO-1阳性细胞数、蛋白表达及mRNA水平. 结果 B、C组SOD、MDA、W/D与A组比较差异有统计学意义(P均<0.05),D组SOD、MDA、W/D与A组比较差异无统计学意义(P均>0.05). D组肺组织中HO-1蛋白表达阳性细胞数、蛋白相对表达量、mRNA相对表达量高于其他三组(P均<0.01). 结论 异丙酚在CO2 气腹后大鼠肺脏血再灌注损伤中具有保护作用,其机制可能与HO-1表达增加有关.
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右美托咪定预处理对小鼠肺缺血-再灌注损伤时微小RNA-210表达的影响
目的 观察右美托咪定(Dex)预处理对小鼠肺缺血/再灌注损伤(PIRI)时微小RNA(miRNA,miR)-210表达的影响.方法 采用C57BL/6J小鼠在体单侧原位PIRI模型.按照随机数字表法将小鼠45只随机分为3组,每组15只:假手术组(Sham组)、缺血-再灌注组(I/R组)和Dex预处理组(Dex组).Dex组于缺血前30 min经腹腔注射Dex 25 μg/kg,Sham组和I/R组分别经腹腔注射等量生理盐水.各组实验结束后处死小鼠,留取左肺,分别检测肺组织湿/干重比(W/D)和总肺水含量(TLW),光镜观察肺组织形态学并测定肺泡损伤率(IAR),电镜观察肺组织超微结构改变,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测肺组织miR-210表达,原位缺口末端标记法(TUNEL)检测肺组织细胞凋亡指数(AI).结果 与Sham组[4.34 ±0.25、3.33 ±0.24、(5.73±1.96)％、(4.86±0.97)％]比较,I/R小鼠组肺组织W/D (5.95 ±0.43)、TLW (4.68±0.42)、IAR[(40.47±5.93)％]和AI[(35.36±5.93)％]均升高(P＜0.05),肺组织miR-210表达(4.73±0.78比1.07 ±0.38)上调(P＜0.05),肺组织形态学结构及超微结构均发生损伤.与I/R组比较,Dex组肺组织W/D (5.36 ±0.14)、TLW (4.25 ±0.18)、IAR[(14.72±3.57)％]和AI[(16.49±2.51)％]均降低(P＜0.05),肺组织miR-210表达(1.53 ±0.45比4.73 ±0.78)下调(P＜0.05),肺组织形态学结构及超微结构损伤均减轻.结论 Dex预处理可能通过下调肺组织miR-210的表达,减少肺组织细胞凋亡,从而减轻小鼠I/R所致的急性肺损伤.
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Kelch样ECH相关蛋白1-核因子E2相关因子2-抗氧化反应元件信号通路在七氟烷减轻大鼠缺血再灌注肺损伤中的作用
目的 观察Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)-核因子E2相关因子2(Nrt2)-抗氧化反应元件(ARE)信号通路在七氟烷减轻大鼠缺血再灌注肺损伤中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠24只,体质量200 ～240 g,随机分为4组(n=6):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、七氟烷组(Sev组)和七氟烷+Nrf2小干扰RNA (siRNA)质粒组(SNS组).阻断右肺门60 min后再灌注120 min制备大鼠肺缺血再灌注模型,Sev组和SNS组气管插管成功后吸入七氟烷,SNS组进行模型制备前5d,采用腺病毒包装的Nrf2-siRNA液小鼠吸入3次(1次/天).右肺门再灌注120 min时处死大鼠,取肺组织,测定肺湿干重比(W/D)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量、Nrf2和血红素氧合酶-1(HO-1)的表达.结果 与S组比较,I/R组和Sev组肺组织W/D值(6.18±0.42、5.21 ±0.27)及MDA含量[(1.792 ±0.309)、(1.585±0.256) mmol/mg蛋白]明显增加,SOD活性[(297±41)、(344±47) U/mg蛋白]下降,Nrf2 (80.8±10.2、122.3±16.9)和HO-1 (98.1±10.0、121.8±15.6)表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,Sev组肺组织W/D值(5.21±0.27)及MDA含量[(1.585±0.256) mmol/mg蛋白]降低,SOD活性[(344±47) U/mg蛋白]上升,Nrf2(122.3 ±16.9)和HO-1 (121.8±15.6)表达上调(P＜0.05);与Sev组比较,SNS组肺组织W/D值(5.77±0.30)及MDA含量[(1.606 ±0.287) mmol/mg蛋白]明显增加,SOD活性[(266±38) U/mg蛋白]下降,Nrf2 (28.0±5.3)和HO-1 (81.4±9.7)表达下调(P＜0.05).结论 Keap1-Nrf2-ARE信号通路参与了七氟烷减轻大鼠肺组织缺血再灌注损伤.
关键词： 七氟烷 肺缺血 再灌注损伤 核因子E2相关因子2 -
兔急性肺栓塞期肢体缺血处理对溶栓后肺缺血/再灌注损伤的保护作用
目的 观察兔急性肺栓塞期肢体缺血处理对兔急性肺血栓栓塞(APTE)溶栓后肺缺血/再灌注损伤的保护作用.方法 将24只普通级日本大耳白兔随机分为4组(n=6):空白组(S组)、肺栓塞组(PE组)、尿激酶组(UK组)、尿激酶±肢体缺血处理组(UK+ LPerC组).各组分别监测并记录栓塞前、栓塞后1、2、4h右心室收缩压;实验结束后测定肺组织湿/干比值(W/D);测定肺组织中丙二醛(MDA)、白细胞介素-6(IL-6)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化;观察肺组织病理学变化,并进行病理学肺损伤评分.结果 兔右心室收缩压于栓塞后1h,PE、UK、UK+ PerC组分别为(21.34±1.03)、(21.65±1.22)、(20.98±1.50) mmHg(1mmHg=0.133 kPa),较S组(11.02±0.82) mmHg明显升高(P＜0.05);栓塞后4h,UK、UK+ PerC组分别为(17.50±1.52)、(17.00±1.10) mmHg,较PE组(20.33±1.37) mmHg显著降低(P＜0.05).UK+ PerC组与UK组比较,W/D比值降低(4.96±0.06比5.29±0.25)、MDA含量降低[(6.31 ±0.42) nmol/mg比(8.75±0.91) nmol/mg]、IL-6含量降低[(0.11±0.04) ng/mg比(0.14±0.04) ng/mg],早期预测急性肺损伤(ALI)评分降低[(9.38 ±0.76)分比(13.83±0.75)分],SOD活性升高[(148.93±14.53) U/mg比(78.69±7.25) U/mg,P＜0.05].结论 兔APTE溶栓后存在肺缺血再灌注损伤现象;缺血期肢体缺血处理对兔急性肺血栓溶栓后缺血/再灌注损伤有保护作用.
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大鼠肺缺血期肢体缺血处理对肺缺血/再灌注损伤的保护作用
目的 观察大鼠肺缺血期双后肢缺血处理对肺缺血/再灌注损伤的影响.方法 将24只SD大鼠随机分为3组(n=8):缺血再灌注组(I/R组)、肺缺血期肢体缺血处理组(LIPER组)和假手术组(S组).I/R组开胸后左侧肺门阻断45 min,再灌注120 min.LIPER组左侧肺门阻断45 min,再灌注120 min,左侧肺门阻断5 min时阻断双后肢血供5 min,再灌注5 min,反复4次处理.S组开胸后旷置观察165 min.再灌注120 min时采动脉血样作血气分析;再灌注120 min后处死大鼠,取左肺组织,测定超氧化物歧化酶(SOD)、髓过氧化物酶(MPO)活性及丙二醛(MDA)含量;计算湿干比(W/D);肺组织行病理切片,苏木素-伊红(HE)染色,观察病理形态改变,并进行肺损伤评分.结果 I/R组和LIPER组血氧分压(PaO2)值分别为(58.5±3.1)和(71.0±3.5)mmHg(1 mmHg =0.133 kPa,P＜0.05)、W/D值分别为6.20±0.32和5.39 ±0.29(P ＜0.05)、SOD活性分别为(14.21±1.14)和(33.78 ±2.06) U/mg(P＜0.05)、MDA含量分别为(1.32±0.09)和(0.81±0.05) nmol/mg(P＜0.05)、MPO活性分别为(4.30 ±0.22)和(2.01 ±0.17) U/g(P＜0.05)、急性肺损伤评分值分别为(12.13±1.13)和(6.75±0.71)分(P＜0.05).结论 肺缺血期双后肢缺血处理具有减轻肺缺血/再灌注损伤的作用.
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乌司他丁联合维拉帕米在大鼠急性肺缺血再灌注损伤中的保护作用
目的 观察乌司他丁联合维拉帕米在大鼠急性肺缺血再灌注损伤中的保护作用.方法 建立大鼠急性肺缺血再灌注损伤模型,分为对照组、乌司他丁预处理组、维拉帕米预处理组和联合预处理组,再灌注后4h处死大鼠,分别进行肺组织湿干重比(W/D)测定,肺组织丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量和髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)活性测定以及肺组织病理学观察.结果 再灌注4h后,联合预处理组肺组织W/D比值为4.78±0.49,显著低于对照组(7.05 +0.74,t =5.904,P＜0.01),也显著低于乌司他丁预处理组(6.16 ±0.62,t=2.387,P＜0.05)和维拉帕米预处理组(5.91±0.47,t =2.176,P＜0.05);联合预处理组肺组织MDA含量为(1.34±0.10) nmol/mg蛋白,显著低于对照组[(2.08±0.15) nmol/mg蛋白,t=6.324,P＜0.01],也低于乌司他丁预处理组[(1.83±0.11) nmol/mg蛋白,t=2.692,P＜0.05]和维拉帕米预处理组[(1.76±0.17) nmol/mg蛋白,t=3.008,P＜0.05];联合组NO含量为(0.71±0.16) μmol/L,显著高于对照组[(0.43±0.12) μmol/L,t=6.168,P＜ 0.01],也显著高于乌司他丁预处理组[(0.57±0.14)μmol/L,t=3.637,P＜0.05]和维拉帕米预处理组[(0.60±0.17)μmol/L,t=3.243,P＜0.05];联合组MPO活性为(0.72±0.05) U/g,显著低于对照组[(1.03±0.09) U/g,t=5.210,P＜0.0l],也低于乌司他丁预处理组[(0.84 ±0.07) U/g,t=2.315,P＜0.05]和维拉帕米预处理组[(0.86±0.10) U/g,t=2.306,P＜0.05];联合组SOD活性为(51.66±3.97) U/mg蛋白,显著高于对照组[(30.19±3.69) U/mg蛋白,t=5.731,P＜0.01],也显著高于乌司他丁预处理组[(42.07±4.24) U/mg蛋白,t=3.134,P＜0.05]和维拉帕米预处理组[(43.12±4.88) U/mg蛋白,t=3.043,P＜0.05];联合组组织病理学评分为(2.9±1.8)分,与对照组(8.6±3.5)比较差异有统计学意义(t =7.308,P＜0.01),与乌司他丁(5.2±2.7)或维拉帕米(5.4±2.8)处理组比较差异有统计学意义(f=1.927,P＜0.05;t =2.113,P＜0.05).结论 乌司他丁与维拉帕米联用可以明显减轻肺脏缺血再灌注损伤,效果优于单用乌司他丁或维拉帕米.
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姜黄素对大鼠肺缺血再灌注损伤肺泡Ⅱ型细胞的保护作用
目的 探讨姜黄素对大鼠肺缺血再灌注损伤(LIRI)肺泡Ⅱ型细胞(AT Ⅱ)的保护作用及其机制.方法 建立大鼠肺缺血再灌注损伤长期存活模型,研究分为假手术组、缺血再灌注损伤(I/R)组、姜黄素低浓度组和姜黄素高浓度组；分别于开胸后、肺门阻断后0、4h、1、3、7d5个时间点收集血及肺组织标本,检测各组如下指标:血氧分压(Pa02)、肺组织苏木素-伊红(HE)染色、肺组织肺泡表面活性物质C(SP-C)表达及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路中相关蛋白的表达.结果 成功建立大鼠肺缺血再灌注损伤长期存活模型,与I/R组比较,在I/R前(7 d)给予姜黄素(50 mg/kg和200 mg/kg)可以使动脉血氧分压值显著升高(P＜0.05),缓解肺组织损伤,并上调SP-C、磷酸化Akt(p-Akt)及下游增殖相关蛋白磷酸化P70(p-P70)水平,同时下调凋亡蛋白半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3水平,两者差异有统计学意义(P＜0.01)；其中姜黄素高浓度组(200 mg/kg)的保护作用更为明显.结论 姜黄素可缓解LIRI,从而起到保护ATⅡ的作用,且具有剂量依赖性,其保护机制与PI3K/Akt信号通路有关.
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BQ-123对兔急性肺栓塞溶栓后缺血-再灌注损伤的保护作用
目的 观察内皮素-1(ET-1)受体拮抗剂BQ-123对兔急性肺栓塞溶栓后肺缺血-再灌注损伤的保护作用.方法 日本大耳白兔24只,雌雄不限,体质量(3.0±0.5) kg,随机分成4组(每组6只)即:假手术组(SHAM组)、栓塞组(PE组)、尿激酶组(UK组)、尿激酶+BQ-123组(UK+BQ组).各组分别于栓塞前、栓塞后0.5、2、4h监测记录肺动脉平均压并采静脉血检测血浆ET-1浓度,实验结束后测肺组织的湿/干比值(W/D比值)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量变化.结果 栓塞后0.5h,PE组、UK组、UK+ BQ组肺动脉平均压分别为(19.01±0.60) mm Hg(1 mm Hg=n133 kPa)、(20.14±0.85) mmHg、( 19.79±0.78) mmHg与SHAM组(18.92±0.63) mmHg比较肺动脉平均压升高(P＜0.05)；UK+ BQ组(310.77±30.58) ng/L较UK组(371.18±35.43) ng/L在栓塞后4h血浆ET-1浓度下降(P＜0.05)；UK+ BQ组与UK组比较,W/D比值、肺组织MDA含量降低,SOD活性升高(P＜0.05).结论 急性肺栓塞溶栓后早期出现了肺缺血再灌注损伤,ET-1可能是导致损伤的主要因素；急性肺栓塞溶栓前给予ET-1受体拮抗剂BQ-123对急性肺栓塞溶栓后缺血-再灌注损伤有一定的保护作用.
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金纳多对大鼠离体肺缺血再灌注时肺组织中水通道蛋白1表达的影响
目的 观察金纳多预处理后,水通道蛋白-1( AQP-1)在大鼠离体肺缺血再灌注损伤过程中的表达及其功能.方法 将40只大鼠随机分为供体组和受体组(n=20).供体组再随机分为2组(n=10),低钾右旋糖苷液(LPD)灌注组与LPD+金纳多组；受体组也随机分为2组(n=10).LPD灌注组大鼠左肺设为A组,右肺设为B组,为对照组.LPD+金纳多灌注组左肺设为C组,右肺设为D组,为对照组.建立大鼠离体肺缺血再灌注模型,分组造模后,取肺组织,免疫组织化学法检测肺组织AQP-1的表达；RT-PCR检测肺组织AQP-1 mRNA的表达；免疫印迹法检测肺AQP-1蛋白的表达.结果 A组及C组肺组织中AQP-1蛋白表达的相对灰度值分别为0.65±0.06、0.88±0.11,两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).AQP-1在A组及C组肺组织中的mRNA表达平均相对A值分别为0.30±0.08、0.49 ±0.11,两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 肺移植术前给予金纳多治疗,可减轻供肺的损伤.
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大鼠肺缺血再灌注损伤长期存活模型的建立
目的 建立一种简单、稳定的大鼠肺缺血再灌注损伤(LIRI)长期存活模型.方法 将84只健康SD大鼠随机分为2组:Ⅰ组为假手术组,Ⅱ组为肺缺血再灌注组(每组n=42只).两组分别于开胸后、缺血1 h后再灌注0、2、4h、1、3、7 d取肺组织行髓过氧化物酶(MPO)活性、肺湿干比(W/D ratio)检测和肺泡Ⅱ型细胞(ATⅡ)的电镜超微结构评价;取支气管肺泡灌洗液检测肺通透性指数(LPI).结果 手术成功率达100%.Ⅱ组与Ⅰ组比较,缺血再灌注后2、4 h、1 d的MPO、LPI、W/D比差异均有统计学意义(P<0.01),开胸后、再灌注后0 h、3、7 d两组比较差异无统计学意义(P>0.05).ATⅡ的超微结构显示,再灌注4 h后损伤严重,再灌注1 d即出现明显的修复过程,再灌注7 d基本恢复正常结构水平.结论 本模型简单、可靠,LIRI后相关肺损伤指标和ATⅡ超微结构损伤变化特点吻合.
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水飞蓟素对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用
目的 探讨水飞蓟素对大鼠肺缺血再灌注损伤的作用及其可能机制.方法 选择220～250 g的健康雄性SD大鼠36只,随机分为3组(n=12):假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)和水飞蓟素处理组(SM组).S组:仅行左侧开胸,不行缺血再灌注处理;IR组:建立大鼠LIRI模型,夹闭左侧肺门,阻断45 min后,再灌注120min;SM组:动物模型建立前经腹腔注射水飞蓟素250 mg/(kg·d),6d;S组和IR组均注射等剂量生理盐水.实验结束后,留取各组大鼠左肺组织标本.严格按照试剂盒操作步骤检测肺组织丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;原位缺口末端标记法(TUNEL)法测定肺组织细胞凋亡指数(AI);计算肺组织湿/干重之比(W/D).结果 与S组比较,IR组和SM组W/D(6.53±0.65、5.67±0.52比5.14±0.42),MDA[(8.25±0.56)、(6.27±0.40)比(2.28±0.13)nmol/mg蛋白]、核因子(NF)-κB(50.22±1.86、35.41±1.34比10.28±0.49)、TNF-α(251.54±10.16、153.28±7.86比68.32±2.55)、IL-6(4.92±0.42、3.16±0.32比1.70±0.21)、IL-1β(5.42±0.53、4.24±0.62比2.53±0.21)含量增加,AI(16.75±1.83、11.24±1.55比2.58±0.32)增加,SOD[(5.58±1.26)、(9.38±1.76)比(24.32±1.85)U/mg蛋白]活性降低(P＜0.05);与IR组比较,SM组W/D(5.67±0.52比6.53±0.65),MDA[(6.27±0.40)比(8.25±0.56)nmol/mg蛋白]、NF-κB(35.41±1.34比50.22士1.86)、TNF-α(153.28±7.86比251.54±10.16)、IL-6(3.16±0.32比4.92±0.42)、IL-1β(4.24±0.62比5.42±0.53)含量降低,AI(11.24±1.55比16.75±1.83)减少,SOD[(9.38±1.76)比(5.58±1.26)U/mg蛋白]活性增加(P＜0.05).结论 水飞蓟素可减轻大鼠肺缺血再灌注损伤,其肺保护作用的机制可能与其抗氧化应激、抗炎及抗细胞凋亡有关.
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缺氧诱导因子-1α-诱导型一氧化氮合酶-一氧化氮信号通路在肺缺血再灌注损伤中的作用
目的 探讨缺氧诱导因子(HIF)-1α-诱导型一氧化氮合酶(iNOS)-一氧化氮(NO)信号通路在肺缺血再灌注损伤(LIRI)中的作用及其机制.方法 选择200 ～ 250 g的健康雄性SD大鼠40只,随机分为5组(n=8):假手术组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血再灌注加二甲基乙二酰基甘氨酸(DMOG)处理组(DMOG组)、缺血再灌注加诱导型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂1 400W处理组(1 400W组)、缺血再灌注加DMOG和1400W处理组(DW组).C组:仅行左侧开胸,不行缺血再灌注处理;I/R组:建立大鼠LIRI模型,夹闭左侧肺门,阻断60 min后,再灌注120 min;DMOG组和DW组:在动物模型建立前24 h腹腔注射DMOG 40 mg/kg;1 400 W组和DW组在实验开始麻醉后即刻腹腔注射1 400 W 5 mg/kg.实验结束后,留取各组大鼠左肺组织标本.严格按照试剂盒操作步骤检测肺组织HIF-1 α蛋白表达,iNOS、eNOS和SOD活性,NO、丙二醛(MDA)和白细胞介素(IL)-8含量;计算肺组织湿/干重之比(W/D).结果 (1)与C组比较,I/R、DMOG、1 400W和DW组HIF-1α蛋白表达(154.61 ±6.56、138.23±10.81、151.68 ±9.65、136.35±5.78比178.72 ±8.34)增加,eNOS活性[(0.35±0.09)、(0.32 ±0.10)、(0.50 ±0.13)、(0.49±0.15)比(0.58 ±0.12) U/mg·蛋白]降低;I/R组和DMOG组iNOS活性[(0.91±0.27)、(1.15 ±0.32)比(0.41±0.13) U/mg·蛋白]和NO含量[(0.87 ±0.18)、(1.03 ±0.16)比(0.44 ±0.09)μmol/L]增加(P＜0.05).(2)与I/R组比较,DMOG组和DW组HIF-1α蛋白表达(138.23±10.81、136.35±5.78比154.61 ±6.56)增加;1400W组和DW组iNOS活性[(0.39 ±0.11)、(0.42 ±0.12)比(0.91±0.27) U/mg·蛋白]和NO含量[(0.41 ±0.11)、(0.40 ±0.08)比(0.87 ±0.18) μmol/L]降低,eNOS活性[(0.50±0.13)、(0.49 ±0.15)比(0.35 ±0.09) U/mg·蛋白]增加(P＜0.05).结论 HIF-1α-iNOS-NO信号通路参与了LIRI的过程,其可能机制是:缺血再灌注上调HIF-1α蛋白的表达,通过iNOS/NO通路引起肺组织损伤.
