尖吻蝮蛇类凝血酶基因的克隆及生物信息学分析

为了获得蛇毒类凝血酶基因,本研究根据不同蛇毒类凝血酶cDNA 5′和3′保守性序列设计了引物;通过RT-PCR从尖吻蝮蛇毒腺总RNA中扩增到1个808bp特异性片段,将该cDNA重组到pMD18-T载体中,利用生物信息学的方法对测序结果进行了分析.结果表明:该特异性片段中有一个783 bp的开放阅读框架,其编码蛋白质序列与蛇的类凝血酶序列有98.5%的同源性,也具有蛇毒类凝血酶的典型特征.结论:本实验获得了一个新的尖吻蝮蛇类凝血酶基因.

蛇毒类凝血酶对动脉粥样硬化家兔抗凝和纤溶系统的影响

蛇毒类凝血酶的研究进展

目的 介绍蛇毒类凝血酶的研究进展,提示医务人员正确使用各种类凝血酶制剂.方法 查阅国内外文献进行分析和总结.结果 不同蛇种来源的类凝血酶组分、结构、对血液系统的作用都存在不同程度的差异,有些具有促凝作用,有些凝血活性短暂,终表现为降纤、抗凝作用.结论 目前部分蛇毒类凝血酶名称及其制剂名称较为混乱,应用时应对各种类凝血酶制剂加以区别,正确使用.

尖吻蝮蛇类凝血酶的研究现状

尖吻蝮蛇类凝血酶是我国正在研究的一种新止血药,其结构与以往的类凝血酶完全不同.目前的研究表明,该凝血酶具有良好的止血效果及广阔的临床应用前景.

国产降纤酶治疗急性脑梗死的疗效观察

急性脑梗死病死率及病残率均较高,而血浆纤维蛋白原水平的升高与脑血管病的不良预后有关.降纤酶是一种哺乳动物凝血及纤溶系统的蛋白质,目前蛇毒类凝血酶已成为防治血栓栓塞性疾病的有效药物.我们采用国家卫生部脑血管病防治办公室提供的降纤酶治疗急性脑梗死,以期观察降纤酶治疗急性脑梗死的有效性及安全性.

蛇毒类抗血栓蛋白酶的研究进展

血栓栓塞性疾病严重威胁人类健康,研究具有优势的抗栓药物是当代医学的重点和热点之一.蛇毒中存在3类具有抗栓作用的蛋白酶,分别为蛇毒类凝血酶、纤维蛋白(原)溶解酶、纤溶酶原激活剂.对这3类抗血栓蛋白酶进行了综述,分别介绍了各类酶的分布、结构、生化性质以及作用机制,并结合其性质及机制分析在抗栓方面存在的优点和不足.另外,还介绍了蛇毒类抗血栓蛋白酶的研究现状,临床应用情况,以及临床常用的一些成熟药物.

注射用尖吻蝮蛇血凝酶引起过敏性休克1例

蛇毒类凝血酶作为一种动物来源的蛋白酶类止血药,由于其毒性低、起效快、药效持久且不引起血管内栓塞等优点,近年来已经引起了人们的极大关注[1].尖吻蝮蛇血凝酶(Haemocoagulase Agkistrodon,HCA,商品名苏灵)是一种从尖吻蝮蛇毒液中提取分离出的蛇毒类凝血酶,该类凝血酶具有良好的止血作用[2],用于各种出血、血友病血肿、血小板减少性疾病伴出血症的辅助治疗.

蛇毒类凝血酶测定血浆纤维蛋白原

利用从白眉蝮蛇毒(agkistrodon halys brevicaudus stejnegeri venom)中分离出的类凝血酶(thrombin like enzyme,TLE)[1]具有对纤维蛋白原(fibrinogen,Fg)水解的高度专一性、不被肝素抑制及活性稳定的特点,以TLE作试剂建立了测定Fg的方法,并对实验条件进行了探讨.

蛇毒类凝血酶基因工程的研究进展

蛇毒类凝血酶(Thrombin-like enzyme,TLE)是蛇毒中与血浆凝血酶性质相似的一类丝氨酸蛋白酶,所不同的是在蛇毒类凝血酶结构中已经没有纤维蛋白稳定因子激活组分.由于蛇毒类凝血酶在新药研究中扮演重要角色,比如来自Bothrops jararaca和Bothrops atrox蛇毒的立芷雪、来自东北白眉蝮蛇毒的邦停和来自尖吻蝮蛇毒的苏灵,它们是具有止血作用的新药；来自Gloydius shedaoensis和Gloydius ussuriensis蛇毒的东菱克栓酶、来自白眉蝮蛇和尖吻蝮蛇毒的降纤酶、来自Calloselasma rhodostoma蛇毒的安克洛酶和来自Crotalus adamanteus蛇毒的Crotalase,它们是具有溶栓作用的新药.这些药用蛋白质的来源和产量因有限的蛇毒原料而有很大限制,通过基因克隆可解决资源问题.文章综述了蛇毒类凝血酶的基因结构、糖基化特点和各种重组表达体系,为大量制备供临床和基础研究使用奠定基础.

注射用蛇毒类凝血酶的Ⅰ期临床耐受性试验研究

注射用蛇毒类凝血酶为生物制品,经国家食品药品监督管理局批准同意对该药物进行临床研究(批件号2003L02190),临床研究方案经伦理委员会审查批准同意后实施.本研究以同类产品reptilase为对照药品,评价注射用蛇毒类凝血酶对正常人体血液学指标的影响,以探索止血的有效剂量和安全性,为Ⅱ期临床试验用于止血的给药方案提供依据.

一种来自于尖吻蝮蛇毒的新类凝血酶对血液止血机制的研究

目的:研究尖吻蝮蛇蛇毒止血酶Agacutase的止血机制.方法:水蛭素、肝素、苯甲基磺酰氟(PMSF)、钙离子或尿素等分别与Agacutase酶混合,在体外研究它们对酶凝结活性的影响.新西兰白兔静脉注射Agacutase,观察新西兰白兔的血凝和纤溶指标.结果:水蛭素和肝素对该酶没有影响,PMSF和尿素明显抑制酶的凝结活性,而钙离子激活酶凝结活性.静脉注射Agacutase 0.03～ 0.12 U/kg剂量后,各组全血凝固时间与给药前相比均有不同程度的缩短,给药后2h药效达高峰,药效持续24h.与给药前比较,各组兔血纤维蛋白原含量和血黏度在给药后有不同程度的降低,这与血液凝固时间缩短一致,对活化部分凝血活酶时间(APTT)无影响.结论:Agacutase在血管内引起较高浓度的可溶性纤维蛋白,但不激活凝血因子Ⅱ和ⅩⅢ,在伤口部位加速止血.在正常的血管内,不会造成血栓形成.所有实验结果显示,Agacutase是一个有效的潜在止血剂.

超声雾化吸入尖吻蝮蛇血凝酶和凝血酶治疗咯血临床观察

咯血是支气管和肺部疾病的常见症状,也是呼吸科常见的急症之一.肺结核血管破损和空洞内血管瘤破裂,支气管扩张、肺癌、肺囊肿均可出现大咯血,特别是支气管动脉因压力高,或患者伴有肺动脉高压的情况下,一旦出血,咯血量大且来势凶猛,及时控制大咯血,是减少死亡的关键[1-2].咯血的治疗以静脉注射止血药和血管扩张剂为主,必要时进行手术治疗[3-4].尖吻蝮蛇血凝酶(HCA)是一种从尖吻蝮蛇毒液中提取分离出的蛇毒类凝血酶,蛇毒类凝血酶作为一种动物来源的蛋白酶类止血药,由于其止血效果确切,且止血作用不受肝素干扰等,近年来在临床中已被广泛应用[5].凝血酶是临床常用的治疗出血的药物[6].本院采用超声雾化吸人尖吻蝮蛇血凝酶和凝血酶治疗咯血,现报告如下.

降纤酶治疗不稳定型心绞痛58例护理体会

降纤酶(defibrase)是治疗心血管栓塞性疾病的蛇毒酶制剂.主要成分为蛇毒类凝血酶(thrombin-like enzyme).它具有诱发组织纤维蛋白溶酶原活性物(t-PA)释放作用,能够降低血黏度,抑制血小板凝集,抑制红细胞沉降,从而抑制血栓形成,并有扩张血管,改善微循环作用.我院心内科于1997年5月至1998年1月采用降纤酶治疗不稳定型心绞痛病人58例,临床效果满意,现将护理体会报告如下.

蛇毒中的抗血栓物质

蛇毒是含有多种蛋白质和多肽混含物,其中含有许多种影响血液系统功能的活性组分,本文从分布蛇毒的结构特点、活性和作用机制三个方面对蛇毒类凝血酶、蛇毒纤溶酶和蛇毒纤溶酶原激活剂等抗血栓成分加以综述.

3种蛇毒类凝血酶制剂在外科手术的止血作用和经济学研究

目的:探讨3种蛇毒类凝血酶制剂在外科手术的止血有效性,并进行经济学分析,为临床选择佳止血方案提供依据.方法:回顾性抽取2015年1月-2016年1月在某院骨科腰椎手术及四肢骨折内固定术选用单一止血药注射用白眉蛇毒血凝酶(邦亭)、蛇毒血凝酶注射液(速乐涓)和注射用矛头蛇毒血凝酶(巴曲亭)的手术病例303例进行临床疗效和经济学研究.结果:邦亭、速乐涓和巴曲亭在腰椎手术及四肢骨折内固定术的止血临床有效率分别为76.31％,81.08％,75.00％和72.13％,76.92％,73.33％,两两比较均无统计学差异(P＞0.05).不良反应发生率比较,差异性无统计学意义(P＞0.05).采用小成本分析法进行经济学分析,3组患者除蛇毒血凝酶制剂费用和处理不良反应费用外的所有费用基本相等.邦亭组、速.乐涓组和巴曲亭组及处理不良反应的费用在腰椎手术及四肢骨折内固定术分别为384.7,451,1 189.1,443,506.1,1 223.4元,两两比较结果显示,邦亭组与速乐涓组比较均无显著性差异(P＞0.05),巴曲亭组分别与邦亭组与速乐涓组比较均存在显著性差异(P＜0.05).结论:注射用白眉蛇毒血凝酶(邦亭)和蛇毒血凝酶注射液(速乐涓)用于腰椎手术及四肢骨折内固定术术中止血的经济性明显优于注射用矛头蛇毒血凝酶(巴曲亭).

新重组蛇毒类凝血酶r-agkihpin-1的抗血栓活性

目的 探讨重组agkihpin将来作为抗血栓药物的可能性,为将来把重组agkihpin做成抗血栓药物提供实验依据.方法 用肽指纹图谱验证重组agkihpin分子;以天然agkihpin?生理盐水(NS)或肝素为对照,分别用TAME水解?纤维蛋白平板?SDS-PAGE和纤维蛋白原凝集法检测r-agkihpin-1的精氨酸酯酶?纤溶活性?纤维蛋白原溶解和类凝血酶等生物学活性;以NS或粗毒为对照,用剪尾法和皮下注射法检测r-agkihpin-1的出血活性.结果 r-agkihpin-1中38.7%序列?8个肽段与GenBank中agkihpin氨基酸序列是一致的.r-agkihpin-1体外水解TAME的比活性为8.74 U/mg.4~16μg/mL剂量r-agkihpin-1可形成纤维蛋白溶圈面积0.50~1.10 cm2,NS组不形成溶圈,差异有统计学意义(P<0.01);16μg/mL剂量r-agkihpin-1可使90%α链和70%γ链分解,而NS组中纤维蛋白原不被消化,差异有统计学意义(P<0.01).4~16μg/mL剂量r-agkihpin-1可形成凝块体积0.07~0.23 mm3,高于NS组的0.01 mm3,差异有统计学意义(P<0.05).体内4~16 mg/kg体重剂量的r-agkihpin-1形成血栓干重28.01~22.46 mg/kg体重,低于NS组的35.92 mg/kg体重,差异有统计学意义(P<0.01).上述活性均稍低于相同剂量的天然agkihpin,差异有统计学意义(P<0.05).剪尾法?皮下注射法显示4~16 mg/kg?4~32 mg/kg体重剂量的r-agkihpin-1在小鼠中出血时间和出血活性分别为1.81~11.32 min和0.00~0.01,显著低于1 mg/kg体重剂量粗毒的30.00 min(P<0.01)和7.85(P<0.01).结论 r-agkihpin-1就是agkihpin的重组蛋白,r-agkihpin-1将来有望成为一种新的抗血栓药物.

蛇毒类凝血酶的研究进展

蛇毒类凝血酶(TLE)属胰蛋白酶家族中的丝氨酸蛋白酶,在序列上与胰蛋白酶有更多的保守序列.具有精氨酸酯酶活性,能直接作用于纤维蛋白原,催化纤维蛋白原分子的特定部位Arg Gly肽键的裂解,释放血纤肽A(FPA)或B(FPB),导致纤维蛋白的单体首尾聚合而凝固,故被称为类凝血酶.

重组突变巴曲酶酶动力学及活性分析研究

目的 对重组突变巴曲酶进行酶动力学初步研究,并建立一种蛇毒类凝血酶活性测定方法 .方法使用可控温(37℃)紫外分光光度计,采用酶动力学测定法,测定重组突变巴曲酶的米氏常数,优化活性测定方法的反应时间和线性范围,验证此方法精密度,并用发色底物法与血浆凝集法同时测定不同蛇种来源的类凝血酶活性.结果 重组突变巴曲酶的米氏常数(37℃)Km值为256.28μmol/L、Vm值为0.005077μmol/min.该法呈现相应的剂量关系曲线,反应时间优选为0～20 min,线性范围优选为1～16.8 nmol/L,拟合度R2≥0.99,方法精密度的变异系数≤5.0％.两种不同方法测定不同蛇种来源类凝血酶的活性单位比例范围为3.3～3.7(发色底物法/血浆凝集法),比例关系一致.结论 建立的蛇毒类凝血酶活性测定方法拟合度优,精密度高,可测定不同来源的类凝血酶活性,并可替代传统血浆凝集活性测定法.

蛇毒类凝血酶的基因工程研究进展

自1936年Klobusitzki和Konig首次从美洲矛头蝮蛇(Bothrops jararaca)毒中获得部分纯化的类凝血酶以来,迄今已发现30多种蛇毒中含有类凝血酶组份,并有20多种先后得到分离和纯化.尤其近年来基于有关蛇毒类凝血酶分子结构及酶学性质的研究成果,部分蛇毒类凝血酶已经作为治疗药物而广泛应用于临床,如国外的Ancrod和Batroxobin蛇毒抗凝剂,国内的五步蛇毒去纤酶、东北白眉蝮蛇抗栓酶(清栓酶)、江浙蝮蛇抗栓酶等已广泛用于临床治疗脑血栓形成、脉管炎、冠心病、心肌梗死,也有用于治疗癌痛综合症[1].