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蛋白酶活化受体1与4在血小板活化中的作用机制
为了比较蛋白酶活化受体1和4(PAR1, PAR4)合成肽对血小板膜表面糖蛋白GPIbα表达及细胞骨架的影响,揭示蛋白酶活化受体在血小板信号传递中的作用,选择25 μmol/L PAR1与250 μmol/L PAR4两类合成肽分别在不同时间段(0-60分钟)活化血小板,应用流式细胞仪测定血小板膜糖蛋白GPIbα及P-选择蛋白的表达,并结合SDS-PAGE与转移电泳技术比较血小板活化前后细胞骨架GPIbα、肌动蛋白、肌球蛋白的变化,同时对膜骨架成分进行GPIbα免疫沉淀分析. 结果显示,PAR1与PAR4两类合成肽均可促使血小板活化,其P-选择蛋白水平显著升高,GPIbα表达进行性减少又出现逐渐回升的可逆性变化,各时间段引起的GPIbα改变在两者之间都具有显著差异(P<0.05) ,其中PAR1首先发生作用,但PAR4维持时间更长.细胞骨架蛋白分析显示肌动蛋白与肌球蛋白协同GPIbα呈现先增加后减少的动态变化.免疫印迹也表明与GPIbα相连的肌动蛋白及肌球蛋白出现可逆性改变.结论: PAR1与PAR4在血小板信号传递过程中发挥了重要作用,它们能各自独立地介导血小板活化,并导致GPIbα逆转,这与细胞骨架的积极参与相关.PAR1起效较快,PAR4维持作用更长久.
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活性氧在血小板储存损伤引起的GPIbα酶切中的作用研究
目的 活性氧(ROS)在血小板活化和凋亡过程中起重要作用,血小板在发生活化和凋亡时伴随有糖蛋白(GP) Ibα酶切,血小板储存损伤(PSL)主要由血小板活化和凋亡引起.本研究主要探讨ROS在PSL引起的GPIbα酶切中的作用和分子机制.方法 取健康志愿者单采血小板,(22±2)℃震荡,分别在保存的1、3、5d用无菌接管机取一定量血小板,离心得到沉淀和上清,上清用酶标仪检测糖萼蛋白(GC);沉淀用缓冲液重悬,经洗涤2次后得到洗涤血小板;洗涤血小板与不同的检测探针孵育后,用流式细胞仪检测细胞内ROS浓度、线粒体跨膜电位去极化、磷脂酰丝氨酸(PS)外翻和P-选择素表达;Western blot检测p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的磷酸化.结果 随着保存时间的延长,血小板P-选择素表达、PS外翻和线粒体跨膜电位去极化逐渐增多,血小板胞内ROS浓度逐渐增多,p38 MAPK磷酸化逐渐增多、血浆中GC含量逐渐增多;ROS拮抗剂抑制血小板胞内ROS增多、抑制p38 MAPK磷酸化、减少血浆GC含量;p38 MAPK抑制剂抑制p38 MAPK磷酸化和减少血浆GC含量,不抑制ROS浓度增加.结论 ROS在PSL引起的GPIbα酶切过程中起重要作用,ROS可能通过活化p38 MAPK进而引起GPIbα酶切.
关键词： 糖蛋白Ibα p38丝裂原活化蛋白激酶 血小板储存损伤 活性氧 -
中国人血小板膜糖蛋白Ibα基因VNTR多态性与急性冠脉综合征的关系
目的:探讨血小板GPIbα基因VNTR多态性与急性冠脉综合征(ACS)的关系.方法:入选135例经冠状动脉造影及临床诊断为ACS患者,PCR扩增目的DNA,采用SDS-PAGE进行VNTR多态性检测,与对照组比较有无差异.135例中39例住院期间发生心脏缺血事件,比较有事件组和无事件组VNTR多态性.结果:①VNTR多态性存在5种基因型:AB、AC、BB、BC和CC,未发现含D等位基因的个体;②基因型(AB+AC)和BC在ACS组中较对照组多见,但两组间无显著性差异.A等位基因频率在ACS组有较高趋势(OR:1.56),但与对照组无统计学差异.多因素Logistic回归分析发现5种基因型和3种等位基因的OR值无显著性意义;③发生院内缺血事件组AB基因型较无事件组偏多,但两组间无显著性差异.多因素逐步logistic回归分析发现各基因型不是影响缺血事件的独立变量.根据OR值可以发现重复序列数越多的等位基因,其频率在有事件组就越高的趋势(ORc:0.72;ORB:1.33;ORA:1.50),但两组间无统计学差异.结论:血小板GPIbα巨糖肽区域的VNTR基因多态性与ACS间无显著相关性,对中国人ACS患者住院期间联合终点的发生无显著影响.
