首页 > 文献资料
-
靶向肝癌HepG2细胞VEGF基因的siRNA表达载体构建及体外抑制作用
目的: 构建靶向肝癌HepG2细胞VEGF基因的siRNA表达载体并在体外检测其对VEGF基因表达的抑制作用.方法: 设计合成靶向HepG2细胞VEGF基因的siRNA cDNA序列并与pSUPER载体连接, 构建VEGF siRNA表达载体, 经酶切鉴定和测序确认后, 脂质体2000介导VEGF siRNA转染HepG2细胞. RT-PCR及Western blot检测VEGFsiRNA表达载体转染的HepG2细胞中VEGF基因表达.结果: 通过双酶切鉴定和测序分析, 成功构建了靶向HepG2细胞VEGF基因的siRNA表达载体. RT-PCR和Western blot法检测转染VEGFsiRNA表达载体的HepG2细胞VEGF mRNA及VEGF165表达下调, 其抑制率分别为65%和74%. 实验组中的HepG2中VEGF mRNA表达较阴性对照组、空载体组表达量显著下降(0.304±0.062 vs 0.896±0.061, 0.884±0.074,P<0.05).结论: 成功构建了靶向肝癌HepG2细胞VEGF基因的siRNA表达载体, 且该载体在体外能有效抑制HepG2细胞VEGF基因表达.
关键词： RNA干扰 血管内皮细胞生长因子 肝癌 -
原位种植肝癌新生血管的检测及血管内皮细胞生长因子mRMA的表达
目的:观察大鼠原位种植肝癌模型中的新生血管的生长情况,研究肿瘤血管生长因子基因的表达和肝癌新生血管之间的关系.方法:采用Walker256癌肉瘤接种40只Wistar大鼠制作原位种植肝癌模型,用微血管计数以及免疫组织化学染色法检测平滑肌激动蛋白(α-SMA)的表达来标志肿瘤新生血管.血管内皮细胞生长因子基因的检测采用原位杂交法进行.结果:Walker256癌肉瘤接种后1、2、3 wk肿瘤微血管密度分别为(15±4.3)/Hp、(17±3.6)/HP、(45±7.8)/HP.大血管及正常微血管(毛细血管除外)周围α-SMA呈强阳性染色.在肝癌组织中可见到一些形态不规则的微血管呈弱阳性或阴性染色是肿瘤诱导的新生血管,肝癌组织有大量新生血管形成,新生血管的数量与微血管密度呈正相关,Walkef256癌肉瘤接种后3 wk较前2wk有显著性增加.正常肝脏组织仅有少量VEGF mRNA表达,肝癌组织接种后1wk即有多种细胞表达VEGF.新生血管较密集的肿瘤组织VEGF的表达较多.VEGF的表达与微血管密度和肿瘤组织中新生血管的数量呈正相关.结论:原位接种肝癌中有大量新生血管形成,平滑肌激动蛋白(α-SMA)的表达可以用来标记肿瘤新生血管.肝癌组织中血管内皮细胞生长因子的表达增加可能和肿瘤新生血管的形成有一定的关系.
-
中药扶正抗癌汤抗肿瘤血管形成治疗肝癌的实验研究
目的:探讨扶正抗癌汤对裸鼠肝癌移植瘤的血管生成抑制作用.方法:裸鼠32只,6周龄,随机分为对照组、中药低剂量组、中药高剂量组及阿霉素组,造模后定期测量肿瘤体积,40 d处死裸鼠,取肝癌组织,用免疫组化技术检测肿瘤微血管密度(MVD)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)的表达,并进行组间比较.结果:中药低剂量组、高剂量组和阿霉素组抑瘤率分别为37%,40%和34%,3个治疗组之间抑瘤率比较无显著性差异(P＞0.05).对照组40 d肿瘤体积(mm3)、MVD值及VEGF,b FGF阳性率依次为1 640.25±512.13、16.8±5.2、88%、75%;中药低剂量组1 032.75±570.01、10.6±2.7、38%、25%;高剂量组982.00±443.13、8.4±2.9、25%、25%;阿霉素组1 089.94±250.30、11.5±3.1、62%、50%.各治疗组肿瘤体积与对照组比较差别均有显著性(P＜0.05).中药低剂量组和高剂量组MVD值及VEGF,b FGF表达均明显低于对照组(P＜0.05).结论:扶正抗癌汤对裸鼠肝癌移植瘤有明显的抑制作用,可能通过抑制肿瘤血管内皮生长因子合成而抑制肿瘤血管生成达到抗癌效果.
-
胃癌组织与血清中VEGF和bFGF的表达意义
目的:研究胃癌患者血清和组织中VEGF,bFGF的表达与胃癌临床特征之间的关系,研究二者的相关性及组织和血清之间的相关性,探讨VEGF,bFGF在胃癌的发生、发展、侵袭和转移中的作用.方法:应用酶联免疫技术(ABC-ELISA方法)检测73例胃癌患者术前血清和20例健康体检者血清中的VEGF, bFGF的表达水平,同时应用免疫组织化学染色方法检测癌组织和癌旁组织中VEGF, bFGF的表达.结果:胃癌患者术前血清VEGF, bFGF表达水平均明显高于健康体检者(VEGF:101.8±53.3 ng/L vs 16.1±22.5 ng/L,P＜0.05;bFGF:152.9±42.7 ng/L vs 25.0±11.4 ng/L,P＜0.05).胃癌患者术前血清VEGF, bFGF的表达水平均随胃癌的浸润深度、TNM分期、淋巴结转移、远处转移而增高(P＜0.05),而与年龄、性别及病理类型无关.胃癌组织VEGF的阳性表达率为71.2%,癌旁组织中VEGF均未见阳性表达,二者之间有显著性差异(x2=32.1,P＜0.05);胃癌组织中bFGF的阳性表达率为63.0%、癌旁组织中bFGF阳性表达率为(10%),二者之间亦有显著性差异(x2=17.7,P＜0.05).胃癌患者组织VEGF,bFGF的表达水平均与胃癌的浸润深度、TNM分期、淋巴结转移、远处转移有关(P＜0.05),而与年龄、性别及病理类型无关.胃癌患者血清VEGF的表达水平与血清bFGF的表达水平呈明显正相关(r=0.439,P＜0.01),胃癌患者组织VEGF的表达水平与组织bFGF的表达水平呈明显正相关(R=0.391,p＜0.01);胃癌患者术前血清VEGF的表达水平与组织VEGF的表达呈正相关(r=0.346,P＜0.01),术前血清bFGF的表达水平与组织bFGF的表达呈正相关(r=0.304,P＜001),均有显著性差异.结论:VEGF,bFGF在胃癌的发生、发展、转移及预后起着重要的作用,有望成为胃癌术前诊断、术后随访、复发转移监测、评价抗血管生成药物疗效和化疗效果判定的新的肿瘤标志物.
关键词： 胃癌 血管内皮细胞生长因子 碱性成纤维细胞生长因子 -
血管内皮细胞生长因子对大肠癌HT-29细胞粘附作用的影响
目的观察血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)诱导大肠癌HT-29细胞转移及其对粘附作用的影响. 方法采用3H-TdR掺入及鼠尾胶粘附实验测定VEGF对大肠癌HT-29细胞同质性和异质性粘附作用以及Bodyen-Chamber观察VEGF诱导大肠癌细胞转移.结果1,5mg/LVEGF诱导HT-29细胞60,90min 3H-TdR掺入实验(cpm)分别为1759±289,1380±329和3124±226,2246±273,10mg/L VEGF诱导HT-29细胞60,90,120min 3H-TdR掺入实验分别为1232±201,2338±333,2237±237,显著低于对照组60,90,120min的2184±336,3560±255,4337±377,(P<0.05或0.01).5,10 mg/L VEGF诱导HT-29细胞60min鼠尾胶粘附实验A值为0.263±0.021,0.238±0.034;1,5,10mg/L VEGF诱导HT-29细胞90,120min鼠尾胶粘附实验A值分别为0.269±0.023,0.373±0.083,0.393±0.081和0.371±0.061,0.390±0.074,0.433±0.122,分别高于对照组的0.130±0.025,0.143±0.036,0.210±0.028,(P<0.05或0.01).用VEGF 1,5,10mg/L培养5 h,下室浸润的肝癌细胞数分别为(5.75±1.00,17.17±2.38,10.33±0.88)×107/L,分别高于对照组(1.58±0.38)×107/L(P<0.05或0.01).结论VEGF可以促进大肠癌HT-29细胞转移,与VEGF增加细胞异质性粘附作用以及降低大肠癌细胞的同质性粘附作用有关细胞.
关键词： 血管内皮细胞生长因子 细胞株 粘附 肿瘤转移 -
P38MAPK信号通路影响血管内皮细胞生长因子诱导肝癌细胞超微结构变化
目的研究p38信号传导通路在血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)诱导肝癌细胞超微结构变化中的作用.方法采用扫描电子显微镜观察VEGF以及预先用SB203580特异性阻断p38MAPK信号传导通路后VEGF诱导肝癌细胞HepG2形态学改变. 结果扫描电镜显示肝癌细胞呈梭形,表面有细而稀疏的突起,VEGF诱导后肝癌细胞成椭圆形,细胞表面伪足增多、变粗.阻断p38MAPK信号通路后,可抑制VEGF诱导的肝癌细胞表面伪足增多、变粗,促进肝癌细胞融合.结论VEGF通过p38MAPK信号通路诱导肝癌细胞伪足增多、变粗,降低细胞间粘附作用.
关键词： 血管内皮细胞生长因子 细胞株 p38-分裂原激活蛋白激酶 肝肿瘤 -
过氧化物酶增殖物活化受体γ在胰腺癌新生血管生成中的调节作用及其可能机制
目的探讨过氧化物酶增殖物活化受体γ(PPARγ)抑制胰腺癌新生血管生成过程中的血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的变化情况,旨在进一步提示PPARγ抑制胰腺癌生长的机制.
-
急性心肌梗死后血管内皮细胞生长因子及碱性成纤维细胞生长因子表达动态变化
目的以急性心肌梗死大鼠为模型,观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在心肌中的表达,探讨急性缺血缺氧刺激下VEGF和bFGF表达变化与新生血管形成的关系及意义.方法建立Wistar大鼠急性心肌梗死模型,分为对照组和急性心肌梗死组(3 d,7 d,14 d,28 d,42 d,56 d).免疫组化检测心肌细胞和内皮细胞中VEGF和bFGF的表达,Ⅷ因子相关抗原标记内皮细胞,检测新生毛细血管密度.结果实验组心肌梗死后VEGF和bFGF产生量迅速增加,梗死区VEGF和bFGF的表达在梗死后第7天达高峰,28天开始下降,42天和56天时表达明显下降,新生毛细血管密度与两者产生量成正相关, 与对照组比较差异有统计学意义.结论在心肌梗死急性缺血期心肌细胞和内皮细胞能通过自身分泌VEGF和bFGF协同刺激血管内皮细胞增殖,促进血管形成,从而改善缺血心肌的血液供应.二者的表达在梗死后第7天达到高峰,第28天时开始下降,为选择在表达消退期应用外源性VEGF和bFGF进行基因治疗提供了实验依据.
关键词： 急性心肌梗死 血管内皮细胞生长因子 成纤维细胞生长因子 -
人血管内皮细胞生长因子-165和人血管生成素-1促进大鼠缺血下肢血管新生
目的观察肌肉转染腺病毒(adenovirus,Ad-)携带的人血管内皮细胞生长因子-165(vescular endothelial grow factor,Ad5-VEGF165)和人血管形成素-1(angiopoietin-1,Ad5-Ang-1)基因对大鼠缺血下肢的生血管效应.方法制作大鼠下肢血管闭塞模型,肌肉内注射Ad5-VEGF165或/和Ad5-Ang-1,以Western blot法检测生长因子蛋白表达,免疫组化检测基因导入后在缺血肌肉引起的效应.结果肌肉经注射Ad5-VEGF165和Ad5-Ang-1后高表达人VEGF165蛋白和人Ang-1蛋白.术后7 d处理组与对照组新生毛细血管数目无明显差别.但术后14 d和21 d Ang-1和VEGF165组的新生毛细血管/肌肉数目比明显高于对照组(P<0.01),VEGF165+Ang-1两因子合用组明显高于单用组(P<0.01).Ad-VEGF165组及Ad-VEGF165+Ad-Ang-1合用组出现大量包围着一厚层α-SMA阳性平滑肌细胞的血管,其数量与肌肉数比值明显高于对照组(P<0.01).因子单用组和合用组肌肉内出现大量溴化脱氧尿嘧啶阳性细胞浸润,部分细胞表面呈现C-Kit阳性,新生血管内皮细胞中也有C-Kit阳性标记.结论 Ad5-VEGF165和Ad5-Ang-1能促进缺血肢体血管新生,二者合用的生血管效应更为显著;VEGF165能促进包被平滑肌细胞的形似微小动脉的血管数量增多;肌肉血管新生增加除了血管生成作用外,可能还有血管发生的参与.
关键词： 血管内皮细胞生长因子 血管形成素-1 血管生成 基因疗法 -
间歇低氧对大鼠血管内皮细胞生长因子表达的影响
目的 观察慢性问歇低氧对大鼠血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响.方法 72只雄性Wistar大鼠随机均分为间歇低氧组(IH组)、实验对照组(SC组)和空白对照组(UC组).IH组大鼠循环给予充入氮气和压缩空气(每一次循环60秒,使舱内低氧浓度达4%～6%,然后恢复至21%,8h/d);向SC组舱内循环充入压缩空气,UC组不予任何干预.应用免疫组化法(ELASA)检测各组大鼠分别在3,6,9周末血清VEGF的表达水平.结果 IH组大鼠3、6、9周VEGF表达均增加,并且随间歇低氧时间的延长而VEGF水平逐渐升高,从第3周[(193.16±102.13)pg/ml]开始高于SC组[(154.08±89.79)pg/ml]和UC组[(118.13±64.26)pg/ml]水平(P＜0.05,P＜0.01),第9周末IH组[(256.15+113.58)pg/ml]显著高于SC组[(154.36+90.32)pg/m1](P＜0.01),两组均明显高于UC组(P＜0.05),IH组大鼠VEGF水平与间歇低氧时间呈正相关(P＜0.05).结论 慢性间歇低氧可以诱导大鼠VEGF表达增强,血清VEGF表达增强与血管内皮功能受损有关,提示VEGF对慢性间歇低氧有内皮保护作用.
关键词： 血管内皮细胞生长因子 间歇低氧 呼吸睡眠暂停 大鼠 -
血管内皮生长因子和内抑素在大鼠糖尿病肾病发病中的作用
目的 研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)作为促血管生长因子和内抑素(ENS)作为血管生成抑制因子,在糖尿病肾病(DN)血管生成中的作用.方法 以正常大鼠为对照,30只雄性Wistar大鼠建成糖尿病模型,分别于糖尿病模型建立2、4、8周观察24小时尿白蛋白排泄率(UAER),用免疫组织化学染色显示大鼠肾组织VEGF和ENS的表达及半定量分析;用酶联免疫法测定血中VEGF和ENS的浓度,根据DN病理学改变确定DN的血管增生严重性,分析内皮细胞增生、肾小球中弥漫或结节病变及肾小球硬化与VEGF和ENS的关系;采用RT-PCR的方法观察大鼠肾脏VEGF和ENS mRNA的表达.结果 DN大鼠肾组织VEGF和ENS的mRNA和蛋白表达水平明显高于对照组(P＜0.05);DN大鼠血清VEGF和ENS水平也明显高于对照组(P＜0.05).DN大鼠UAER与血浆VEGF和ENS相关(r=0.468,P＜0.01;r=0.395,P＜0.05),DN大鼠无论在血中还是肾组织免疫组化和RT-PCR都有VEGF和ENS的表达,VEGF的表达与DN血管增生程度密切相关(r=0.404～0.476,P＜0.01～0.05),ENS的表达也与DN严重程度密切相关(r=0.409～0.617,P＜0.05～0.01),血浆VEGF和ENS二者具有正相关性(r=0.484,P＜0.01).结论 VEGF和ENS与DN血管增生密切相关.
关键词： 血管内皮细胞生长因子 内抑素 糖尿病肾病 -
胰岛素通过激活P13K/mTOR通路诱导人肾小系膜细胞血管内皮细胞生长因子转录
目的 探讨胰岛素诱导人肾小球系膜细胞(HMC)血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因转录机制. 方法 (1)用VEGF报告质粒或低氧诱导因子1(HIF-1)结合位点畸变的VEGF mut报告质粒转染HMC,荧光素酶分析法检测其转录活性;(2)应用Real-time PCR、Western blot法分别检测HIF-1α mRNA和蛋白表达. 结果 (1)胰岛素呈剂量依赖性增加VEGF基因转录,在100nmol/L时达高峰,为未刺激组的2.14±0.17倍(P<0.01),但对转染VEGF mut报告质粒的HMC VEGF基因转录无影响;(2)Ly294002和雷帕霉素均可抑制胰岛素诱导的VEGF基因转录(P<0.01);(3)胰岛素呈时间依赖性上调HIF-1α蛋白表达,4h达高峰,为对照组的2.35±0.35倍(P<0.01),但对其mRNA表达无影响. 结论 胰岛素通过激活P13K/mTOR通路和上调HIF-1α蛋白表达诱导HMC VEGF基因转录.
关键词： 胰岛素 磷脂酰肌醇3激酶 雷帕霉素靶分子 低氧诱导因子1α 血管内皮细胞生长因子 -
2型糖尿病视网膜病变患者血清25羟维生素D、血清趋化素、血管内皮细胞生长因子及缺血性修饰蛋白水平的变化及其意义
目的 探讨DR患者血清25羟维生素D[25(OH)D]、血清趋化素(Chemerin)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)及缺血性修饰蛋白(IMA)水平及其临床意义. 方法 选取2016年10月至2017年3月于遵义医学院附属医院就诊的T2DM患者150例,分为并发DR组75例和非DR(NDR)组75例,按照美国“早期治疗糖尿病视网膜病变研究(ETDRS)”分级将DR组分为非增殖型糖尿病视网膜病变(NPDR)亚组35例和增殖型糖尿病视网膜病变(PDR)亚组40例.另随机筛选体检中心不同年龄健康受试者135名为正常对照(NC)组.分别检测各组血清中25(OH)D、Chemerin、VEGF及IMA水平. 结果 T2DM组、NPDR组及PDR组,25(OH)D水平逐渐降低,Chemerin、IMA、VEGF水平逐渐升高(P＜0.05). 结论 25(OH)D、VEGF、Chemerin、IMA可能共同参与了DR的发生发展.
-
心肌缺血的分子再血管化
应用促血管生成因子(AF)的蛋白多肽或表达基因治疗心肌缺血的分子再血管化技术成为人们关注的热点.AF包括一大类蛋白多肽,其中血管内皮细胞生长因子(VEGF)和成纤维细胞生长因子(FGF)的研究为深入,心肌缺血时VEGF和FGF及其受体表达增加,应用外源VEGF或FGF可以促进侧支和新生血管生成、改善血液灌注及减少缺血面积.心肌缺血的基因治疗是将AF的表达基因转入心脏,在局部产生表达蛋白发挥作用,一系列动物实验证实了其可行性.尽管目前仍有许多问题有待解决,但分子再血管化为终末期冠心病治疗提供了新的希望.
关键词： 心肌缺血 血管内皮细胞生长因子 成纤维细胞生长因子 -
血管内皮细胞生长因子对心包淋巴孔及心包间皮的作用
本文研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)对心包淋巴孔和心包间皮的作用.1 材料与方法1999年7月～2001年1月选择Rana esculenta蛙11只,随机分成V EGF组(n＝3)、牛血清蛋白(BSA)组(n＝3)和对照组 (n＝5).将0.1*!mmol/L VEGF-A165(美国Sigma公司)和0.1%BSA按0.01*!ml/g体重蛙腹腔注射,15天后,以毁脊髓法处死蛙,在精确定位下取心包膜,分别迅速固定于4℃的2.5%戊二醛液和10%福尔马林液中,再予扫描电镜制作及计算机图像处理.
-
血管内皮细胞生长因子与治疗性血管新生
本文概述了血管内皮细胞生长因子(VEGF)家族及其受体的组成,介绍了调控VEGF表达的因素及VEGF信号传导途径.着重阐述了VEGF促血管新生的作用机制,以及VEGF在治疗性血管新生中的研究与应用现状、存在问题及未来发展前景.还简要介绍了VEGF其他的生物学作用.
关键词： 血管内皮细胞生长因子 血管新生 -
VEGF通过MAPK途径上调MC3T3-E1及C2C12细胞中Cbfal基因的表达
目的 研究生长因子VEGF对Cbfal的调节作用及其与MAPK信号传导通路的关系.方法 采用瞬时转染技术和RT-PCR方法.结果 在MC3T3-E1细胞中,VEGF(1×10-8～1×10-6g·L-1)作用24小时能够增加Cbfal基因启动子活性,相对荧光素酶活性分别为对照组的1.29(P<0.05),1.28(P<0.01)和1.40(P<0.05).而加入PD98059(10μmol/L)后不但抑制了Cbfal基因启动子活性的基础表达,而且完全阻断了VEGF所诱导的Cbfal基因启动子活性的增加(P<0.05).C2C12细胞中不同浓度的VEGF处理组,其相对荧光素酶活性与对照组相比未见显著性差异.MC3T3-E1细胞中,VEGF处理前后,MC3T3-E1细胞中Cbfal基因mRNA的表达水平未见显著变化.C2C12细胞中,VEGF处理后,第2天和第3天Cbfal基因mRNA的表达由处理前的32.63±4.41,分别增加至46.56±2.70(P<0.01)和50.35 ±5.62(P<0.05).PD98059阻断了C2C12细胞中VEGF对Cbfal基因mRNA表达的上调作用.结论 VEGF部分通过MAPK信号传导通路增加MC3T3-E1和C2C12细胞中小鼠Cbfal基因启动子活性及mRNA的表达.
-
血管内皮细胞生长因子与类风湿关节炎发病机制及其治疗的相关性
血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体以调控类风湿关节炎血管形成为主要的特点.他对滑膜炎症的发展及滑膜血管翳的形成具有十分重要的作用.其在类风湿关节炎患者滑液和血清中的表达,与疾病严重程度呈相关性.因此,以VEGF及其受体为靶点,将成为治疗类风湿关节炎的新途径.
关键词： 类风湿关节炎 血管形成 血管内皮细胞生长因子 -
骨桥蛋白及血管内皮细胞生长因子与类风湿关节炎滑膜血管发生的关联
目的 研究骨桥蛋白(OPN)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)在类风湿关节炎(RA)患者滑膜组织的表达及其与滑膜血管形成的关系.方法 应用免疫组织化学技术检测7例类风湿关节炎、5例骨关节炎(OA)和1例外伤后患者关节滑膜组织的OPN及VEGF,计数OPN、VEGF阳性细胞数及血管数目,比较它们之间的相关性.结果 RA滑膜衬里层和下层OPN阳性细胞数与滑膜血管数量呈正相关(r = 0.837,P = 0.019;r = 0.946,P = 0.010).OA滑膜衬里层和下层OPN阳性细胞数与血管数量无相关性(r = 0.872,P = 0.054;r = 0.154,P = 0.805).RA滑膜下层VEGF阳性细胞数和血管数目呈正相关(r = 0.982,P = 0.010).RA滑膜衬里层及下层OPN阳性细胞数和相应滑膜层VEGF阳性细胞数呈正相关(r = 0.821,P = 0.023;r = 0.964,P = 0.010);OA滑膜衬里层及下层OPN阳性细胞数和相应滑膜层VEGF阳性细胞数无相关性(r = 0.700,P = 0.188;r = 0.500,P = 0.391).结论 OPN在RA的滑膜血管形成中起重要作用,OPN和VEGF可能协同作用参与RA滑膜血管翳生成及软骨破坏.
关键词： 类风湿关节炎 骨桥蛋白 血管内皮细胞生长因子 血管发生 -
犬骨髓成年多能祖细胞诱导分化血管内皮细胞的实验研究
目的内皮细胞移植对损伤组织的修复治疗至关重要,本研究旨在探讨骨髓成年多能干细胞(MAPCs)体内外诱导分化血管内皮细胞的可行性.方法采用Percoll密度梯度法分离培养MAPCs.应用10 ng/ml血管内皮细胞生长因子(VEGF)对骨髓MAPCs进行体外诱导分化2～3周,使其定向分化成为血管内皮细胞.采用细胞形态学、细胞免疫组化以确定诱导分化的效果.将标记BrdU的MAPCs自体移植于犬心肌内,观察局部微环境对于骨髓MAPCs的分化能力.结果应用10 ng/ml VEGF孵育骨髓MAPCs 2～3周,可见MAPCs分化为血管内皮细胞:细胞形态呈鹅卵石样;形成血管样结构;细胞vWF免疫染色阳性.移植于心肌内的MAPCs在体内形成新生血管,血管内皮BrdU染色与vWF染色均阳性.结论骨髓MAPCs可在体外VEGF诱导下或在体内微环境作用下分化为成熟血管内皮细胞.骨髓MAPCs可为损伤组织的移植修复治疗提供内皮细胞资源.
关键词： 骨髓成年多能干细胞 犬 内皮细胞 诱导分化 血管内皮细胞生长因子
