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氯化锂对沙土鼠前脑缺血后神经细胞凋亡及磷酸化Akt蛋白表达的影响
目的:观察沙土鼠前脑缺血后神经细胞凋亡的变化及磷酸化Akt蛋白的表达并探讨氯化锂对其干预作用.方法:夹闭沙土鼠双侧颈总动脉5min,制备前脑缺血损伤模型.沙土鼠72只,随机分为假手术组(SH组)、缺血再灌注组(IR组)、氯化锂预处理组(U-Pre组)、氯化锂治疗组(U-Post组).依术后处死动物时间的不同,各组再分别分为3个亚组,每个亚组6只动物.采用TUNEL染色法观察海马CA1区神经细胞凋亡的变化,免疫组化(SP法)检测大脑皮质区磷酸化Akt蛋白的表达.结果:①TUNEL染色:脑缺血再灌注后3天,与相应IR组相比较,LI-Pre组和LI-Post组海马CA1区TUNEL阳性细胞明显减少(P＜0.01);②磷酸化Akt免疫组织化学染色:与相应IR组相比较,LI-Pre组或Li-Post组各时点亚组大脑皮层部位磷酸化-Akt阳性细胞表达显著增多(P＜0.05或P＜0.01).结论:①氯化锂能显著减轻沙土鼠短暂前脑缺血后海马CA1区神经细胞凋亡;②氯化锂的脑保护作用与其激活PI3-K/Alt信号传导通路有关.
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沙土鼠前脑缺血后海马P53蛋白的表达及氯化锂的干预作用
目的:观察沙土鼠前脑缺血时海马区P53蛋白的表达并探讨氯化锂对其干预作用.方法:夹闭沙土鼠双侧颈总动脉5min,制备前脑缺血损伤模型.沙土鼠54只,随机分为假手术组(SH组)、缺血再灌注组(IR组)、氯化锂预处理组(LI组).依术后处死动物时间的不同,每组再分为3个亚组(SH1d、SH3d、SH7d;IR1d、IR3d、IR7d和LI1d、LI3d、LI7d),每个亚组6只动物.苏木精-伊红染色观察海马区病理变化,免疫组化(SP法)检测海马CA1区P53蛋白的表达.结果:①苏木精-伊红染色LI组中LI3d、LI7d亚组海马区神经元损伤程度明显较IR组中相对应的IR3d、IR7d亚组为轻,LI3d、LI7d亚组海马CA1区存活锥体细胞数明显多于相对应的IR3d、IR7d亚组(P＜0.01);②P53免疫组化IR组于再灌注后1天P53蛋白表达增高,3天后显著增高,再灌注后7天有所下降,但仍高于SH组;LI组P53蛋白的表达显著低于相应的IR组(P＜0.01).结论:①氯化锂预处理能显著减少沙土鼠短暂前脑缺血后海马CA1区神经元死亡;②下调促凋亡基因P53蛋白的表达可能是氯化锂产生脑保护作用的机制之一.
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氯化锂对帕金森病小鼠黑质多巴胺能神经元保护作用的实验研究
目的 研究氯化锂(LiCl)对KM小鼠中脑黑质受损伤的多巴胺(DA)能神经元的保护作用.方法 利用1-甲基4-苯基1,2,3,6 四氢吡啶(MPTP)腹腔注射构建帕金森病(PD)动物模型,将实验动物分为MPTP组、NS组(生理盐水组)、LiCl组、PBS组(磷酸盐生理盐水缓冲液组).模型动物存活1周后,一部分取其中脑黑质节段,固定、包埋做连续冠状石蜡切片,以免疫组织化学染色方法,显示各组酪氨酸羟化酶(TH)和钙结合蛋白(CB)表达阳性细胞,光镜观察并细胞计数,统计学分析;另一部分取其中脑黑质组织匀浆,行TH、CB 的Western blot免疫印迹方法检测,用LabWorks软件分析处理.结果 免疫组织化学染色结果显示 LiCl组、NS组小鼠黑质致密部TH与CB阳性神经元数量分别显著多于PBS组(P＜0.01)、MPTP组(P＜0.01);Western blot免疫印迹结果显示LiCl组TH、CB表达水平显著高于PBS组(P＜0.05).结论 LiCl对成年PD小鼠黑质DA能神经元具有保护作用,且这种保护作用可能与细胞内CB表达增加有关.
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氯化锂对BV-2小胶质细胞炎症反应的影响
目的 探讨氯化锂预处理对脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应的影响及其作用机制.方法 体外培养小鼠BV-2小胶质细胞株,用脂多糖1.0g/ml(A组)、氯化锂10 mmol/L(B组)或两药联用(C组)刺激BV-2细胞12h,以不加药物作对照(D组).采用实时FQ-PCR法检测各组细胞中炎症因子IL-1β和TNF-α mRNA表达量,Western blot法检测磷酸化糖原合成酶激酶3β(pGSK-3β)表达量.结果 与D组比较,A组和C组BV-2细胞IL-1β和TNF-α mRNA表达量及pGSK-3β表达量均增加(P＜0.05).与A组比较,C组IL-1β和TNF-α mRNA表达量减少(P＜0.05),pGSK-3β表达量增加(P＜0.05).结论 氯化锂可以减轻脂多糖诱导的小胶质细胞炎症反应,其机制可能与GSK-3β通路有关.
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氯化锂对布比卡因诱导神经毒性的保护作用
目的 探讨氯化锂对布比卡因所致神经毒性的保护作用.方法 将体外培养的小鼠神经母细胞瘤细胞株N2a细胞分为四组:对照组不加任何药物；氯化锂组加入30 μmol/L氯化锂；布比卡因组以600μmol/L布比卡因刺激细胞36 h；氯化锂十布比卡因组以30 μmol/L氯化锂预处理细胞30 min,然后加入600 μmol/L布比卡因刺激细胞12-36 h.观察细胞形态学,MTT评价细胞损伤程度.结果 布比卡因剂量依赖性地抑制N2a细胞增殖,其半数抑制浓度(IC50)为633.3 μmol/L.氯化锂处理36 h对细胞存活率无显著影响；但在布比卡因刺激后的6、12、24和36 h,氯化锂十布比卡因组的细胞存活率较布比卡因组分别提高了26.1％、26.0％、38.5％和47.8％.结论 氯化锂可减轻布比卡因诱导的N2a细胞损伤.
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氯化锂对大鼠急性心肌缺血-再灌注损伤的保护作用
目的 探讨氯化锂(LiCl)对大鼠急性心肌缺血-再灌注(I-R)损伤的保护作用.方法 60只SD大鼠随机平均分为4组:假手术(A)组,I-R(B)组.LiCl干预(C)组,L-精氨酸甲酯(L-NAME)+LiCl干预(D)组.实验前7 d开始,D组腹腔注射L-NAME 30 mg·kg-1·d-1.经左侧肋间切口进胸.C和D组术前经颈静脉置管注射LiCl 15 mg/kg,B、C、D组行冠状动脉左前降支(LAD)结扎术.缺血60 min,再灌注240 min.记录心率和心电图变化,实验结束时检测血浆肌酸激酶同工酶(CK-MB)、羟丁酸脱氢酶(HBDH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)活力及心肌组织中MDA含量、SOD活力;在光镜和电镜下比较组织形态学变化.结果 与B组相比,C组SOD活力显著增高,MDA含量、再灌注心律失常发生及血HBDH CK-MB水平显著降低(P<0.05)}光镜和电镜下C组心肌病理损害较B组明显减轻.结论 LiCl可能通过减轻氧化应激途径对大鼠心肌急性I-R损伤起保护作用.
关键词： 氯化锂 心肌缺血-再灌注损伤 心肌保护 -
氯化锂对沙土鼠全脑缺血后神经细胞凋亡及相关基因表达的影响
目的观察氯化锂对沙土鼠全脑缺血时海马CA1区神经细胞凋亡及相关基因蛋白表达的影响.方法 54只沙土鼠,随机分为假手术组(SH组)、缺血再灌注组(IR组)、氯化锂预处理组(LI组),每组18只.依术后处死动物时间的不同,各组再分别分为1、3、7d亚组.采用免疫组化、TUNEL染色法观察海马CA1区肿瘤抑制基因p53蛋白、核因子-κB(NF-κB)的表达和细胞凋亡情况.结果 (1)脑缺血再灌注后3、7d,LI组各亚组海马CA1区TUNEL阳性细胞明显少于相对应的IR各亚组(P＜0.01);(2)脑缺血再灌注后1、3、7d,LI组各亚组p53蛋白的表达显著低于相对应的IR组各亚组(P＜0.01).(3)脑缺血再灌注后3d,LI组NF-κB阳性细胞表达明显低于相对应的IR组(P＜0.01).结论氯化锂预处理能显著减轻沙土鼠短暂全脑缺血后海马CA1区神经元凋亡;下调促凋亡基因p53蛋白及NF-κB蛋白的表达可能是氯化锂产生脑保护作用的机制之一.
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β结合素与大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用机制
目的：研究大鼠心肌缺血、缺血再灌注、无创性缺血预处理以及氯化锂干预后心肌细胞β结合素的阳性表达率及细胞凋亡指数的变化，以探讨β结合素与心肌缺血、缺血再灌注的关系以及可能机制。方法将入选的60只大鼠随机分为假手术对照组（C ）、缺血组（I ）、缺血再灌注组（IR ）、氯化锂药物预处理组（PPC ）。以TUNEL方法评估各组大鼠心肌细胞凋亡情况，以免疫组化方法测定各组大鼠心肌细胞中β结合素的表达，并计算各组大鼠的心肌细胞凋亡指数及β结合素。结果与C组比较，I、IR、PPC四组凋亡指数均升高（ P＜0.05），各组心肌细胞凋亡指数比较的结果为：IR组＞I组＞PPC组＞C组（各组两两比较均 P＜0.05）；各组心肌细胞β_cat阳性表达率比较的结果为：PPC组＞C组＞I组＞IR组。β_cat阳性表达率与凋亡指数呈负相关，R＝-0.90。结论β_cat阳性表达率与凋亡指数呈负相关，提示β_cat可以减少心肌缺血、缺血再灌注引起的细胞凋亡。
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糖原合酶激酶3β对体外加压培养下的视网膜神经节细胞的作用
目的 研究体外加压培养的视网膜神经节细胞(RGCs)中糖原合酶激酶3β(GSK3)活性变化及其对RGCs存活的影响。方法 实验研究。混合培养大鼠RGCs，分为RGCs无加压对照组、单纯RGCs加压组（60 mmHg压力下培养24h）、RGCs加压+10 mmol/L氯化锂（Licl，GSK3β抑制剂）组和RGCs加压+20 mmol/L Licl组。采用免疫荧光法检测RGCs中磷酸化丝氨酸9位点GSK3β(pS9-GSK3β）的表达情况；以MTT法检测吸光度(OD)值反映RGCs活性。对数据进行单因素方差分析。结果 加压组pS9-GSK3β表达的荧光密度平均光密度（MOD）值为0.057±0.012，较对照组(0.085±0.023)低，而加压+10 mmol/L Licl组和加压+20 mmol/L Licl组pS9-GSK3β表达的荧光密度(分别为0.081±0.016和0.099±0.024)均较加压组大，且随着Licl浓度的增加，pS9-GSK3β表达的荧光密度增大。MTT结果显示，4个实验组的OD值差异有统计学意义（F=14.539，P＜0.05）。加压组OD值(0.109±0.016)较对照组(0.135±0.015)低(P＜0.05)，细胞活性较低；而加压+20 mmol/L Licl组中OD值(0.159±0.014)较加压组高(P＜0.05)，细胞活性较高。结论 压力培养下，视网膜神经节细胞中pS9-GSK3β表达减少，提示GSK3β活性增强，RGCs活性降低。Licl作为GSK3β的抑制剂，可能对RGCs有保护作用。
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LiCl对七氟醚引起的神经细胞凋亡的缓解作用
目的 研究氯化锂(LiCl)对中枢神经系统发育期七氟醚神经毒性的影响,以及β-arrestin2/AKT信号通路在其中所起的作用.方法 对离体培养7d的海马神经细胞及出生后7d的Sprague-Dawley幼鼠进行七氟醚处理(3％,6 h),制备七氟醚神经毒性模型.离体实验中给予LiCl或LiCl+β-arrestin2 siRNA转染处理后,应用流式细胞仪、MTT及Hoechst染色检测细胞凋亡;应用免疫印迹检测total AKT、Phospho-AKT、total GSK3β、Phospho-GSK3β、Bax及Bcl-2的蛋白表达水平;应用条件恐惧实验及Morris水迷宫检测实验动物的情绪及空间学习记忆功能变化.结果 七氟醚处理(3％,6 h)使海马神经细胞凋亡增加,应用LiCl则可明显缓解七氟醚神经毒性.七氟醚处理可降低Phospho-AKT及Bcl-2的蛋白表达,增加Phospho-GSK3β及Bax的蛋白表达;LiCl可增加Phospho-AKT及Bcl-2表达,降低Phospho-GSK3β及Bax表达水平.LiCl的神经保护作用可被转染β-arrestin2 siRNA、SH-5或LY294002所逆转.LiCl明显缓解了中枢神经系统发育期七氟醚处理引起的情绪及空间学习记忆功能异常.结论 LiCl可缓解中枢神经系统七氟醚神经毒性,其机制可能与β-arrestin2依赖的AKT/GSK3β信号通路有关.
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氯化锂对肝癌细胞BEL-7402增殖、周期的影响及其作用机制
目的：探讨氯化锂对人肝癌细胞BEL-7402增殖、周期的影响及其作用机制。方法应用MTT法及DNA PREP细胞周期法检测BEL-7402经氯化锂作用后的增殖及周期改变情况，Western blot检测糖原合成激酶-3（GSK-3）、失活pGSK-3及其下游分子CyclinD1的表达情况。结果氯化锂可显著抑制BEL-7402的增殖，并呈时间、剂量依赖性（P＜0.05）；氯化锂可使BEL-7402的G0/G1期比例明显降低、G2/M期比例显著升高（P＜0.05）；氯化锂作用后GSK-3、失活pGSK-3及CyclinD1蛋白的表达水平均明显升高（P＜0.05）。结论氯化锂可抑制肝癌细胞增殖，其机制可能是通过抑制GSK-3活性并上调CyclinD1表达使肝癌细胞阻滞于G2/M期。
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2,6-二异丙基苯酚、人参皂苷Rg-1和氯化锂逆转电休克后嗅球切除抑郁大鼠学习记忆障碍
目的 观察2,6-二异丙基苯酚与人参皂苷Rg-1和氯化锂对电休克后抑郁模型大鼠学习记忆、海马内谷氨酸浓度和Tau蛋白磷酸化的影响,比较其药理作用机制,为临床治疗提供依据.方法 按2×4析因设计设2个干预因素,即ECT干预(2水平:无处置、施行1疗程电休克)和药物干预(4水平:海马CA1区微量注射2,6-二异丙基苯酚、人参皂苷Rg-1、氯化锂,生理盐水).电休克结束后行Morris水迷宫测认知能力;取海马通过高效液相色谱法测谷氨酸的浓度;免疫印迹法测Tau-5和p-AT8Ser202表达.结果 2,6-二异丙基苯酚、人参皂苷Rg-1和氯化锂可改善电休克后认知障碍;2,6-二异丙基苯酚和人参皂苷Rg-1可减少谷氨酸浓度;2,6-二异丙基苯酚与人参皂苷Rg-1和氯化锂可降低海马中Tau蛋白磷酸化程度.结论 2,6-二异丙基苯酚与人参皂苷Rg-1和氯化锂均可缓解ECT后的Tau蛋白过度磷酸化进而改善电休克后的学习记忆;前两者与降低海马谷氨酸浓度有关.
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氯化锂抑制β-淀粉样蛋白诱导细胞Tau蛋白磷酸化
目的 探讨GSK-3β抑制剂氯化锂(LiCl)在β-淀粉样蛋白25～35片断(Aβ25-35)诱导的细胞Tau蛋白磷酸化中的作用及机制.方法 MTT法观察不同浓度的LiCl(1、5、10、20 mmol·L-1)单独作用24 h,对SH-SY5Y细胞存活率的影响;20 μmol·L-1的凝聚态Aβ25-35作用于SH-SY5Y细胞不同时间点,蛋白免疫印迹法研究Tau蛋白磷酸化位点(Ser199、Ser396及Tau1)水平的变化;LiCl(20 mmol·L-1)预处理细胞1 h后,观察Aβ的作用有无变化及可能的作用机制.结果 不同浓度的LiCl作用24 h后,MTT法示细胞存活率无明显变化(P＞0.05);20 μmol·L-1 Aβ25-35作用不同时间点后,Tau蛋白在Ser396、Ser199位点的磷酸化水平在3 h逐渐增加,6 h达到高峰,12 h后又逐渐下降,在这3个时间点的增加量均具有统计学意义(P＜0.05),而对非磷酸化Tau1没有影响(P＞0.05);LiCl预处理可抑制Aβ25-35的作用(P＜0.05),并可诱导失活形式的GSK-3β在Ser 9位点的磷酸化(p-GSK-3βSer9)表达增高.结论 GSK-3β参与了Aβ25-35诱导细胞Tau蛋白磷酸化的作用,LiCl可通过诱导失活形式的p-GSK-3βSer9表达增高而抑制GSK-3β的活性,进而抑制Aβ诱导的细胞Tau蛋白磷酸化.该实验为研究AD的发病机制及探索有效治疗药物提供了重要的理论基础.
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氯化锂抑制丙泊酚诱导原代培养神经元凋亡
目的：探讨氯化锂对丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制。方法体外原代培养7d的大鼠皮层神经元,用 MTT 法检测不同浓度氯化锂(0．1、1、5、10μmol/L)单独作用皮层神经元12 h后神经元存活率的变化。神经元随机分为6组：溶剂对照组(给予等容积的20%脂肪乳),丙泊酚组(终浓度为500μmol/L),氯化锂+丙泊酚组(氯化锂终浓度分别为0．1、1、5、10μmol/L,丙泊酚终浓度为500μmol/L),药物处理12 h后,MTT法检测神经元存活率的变化,Hoechst33258核染色法和流式细胞仪检测神经元调亡,Western blot 法测定神经元磷酸化糖原合成酶激酶-3β( pGSK-3β)和裂解半胱天冬酶-3( cleaved-Caspase-3)蛋白水平。结果与溶剂对照组比较,不同浓度氯化锂单独作用神经元12 h后,神经元存活率未见显著变化。与溶剂对照组比较,丙泊酚组神经元存活率显著下降(P<0．01),神经元凋亡率显著增加(P<0．01),pGSK-3β蛋白水平显著下降(P<0．01), cleaved-Caspase-3蛋白水平显著增加(P<0．01)。与丙泊酚组比较,氯化锂可剂量依赖性增加神经元存活率(P <0．01),神经元凋亡率显著下降(P <0．01),pGSK-3β蛋白水平显著增加(P <0．01), cleaved-Caspase-3蛋白水平显著下降(P <0．01)。结论氯化锂可抑制丙泊酚诱导的原代培养皮层神经元凋亡,其机制可能与提高神经元pGSK-3β蛋白水平和降低cleaved-Caspase-3蛋白水平有关。
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氯化锂介导经典Wnt/β-catenin信号通路在大鼠脂肪干细胞增殖和成骨中的作用
目的探讨在体外生长环境下不同浓度氯化锂对脂肪干细胞( ADSCs)增殖和成骨分化的作用及其可能的机制。方法①从3周龄SD大鼠腹股沟脂垫分离出脂肪组织,使用0.1%Ⅰ型胶原酶消化后置于含10%胎牛血清DMEM培养,以0、2.5、5、10、20、40 mmol/L浓度的氯化锂作用ADSCs 24、48、72 h,用 MTT 法测定氯化锂对细胞增殖的作用；于ADSCs加入含0、2.5、5、10、20、40 mmol/L氯化锂的成骨培养液中培养7 d后测定细胞中碱性磷酸酶( AKP)的活性；③用RT-PCR法检测成骨诱导3 d后,不同浓度氯化锂作用7 d时ADSCs中β-catenin、糖原合成激酶3β、AKP的表达。结果在体外环境培养下,低浓度氯化锂(2.5、5、10 mmol/L)促进干细胞增殖,高浓度氯化锂(20、40 mmol/L)抑制细胞增殖。5、10 mmol/L氯化锂促进ADSCs中 AKP的活性,但是40 mmol/L具有明显抑制AKP活性的作用。同时,氯化锂能上调β-catenin和AKP的表达。结论氯化锂在体外对大鼠ADSCs增殖有双重影响,并且促进AKP活性和ADSCs成骨分化,具有剂量依赖性。5 mmol/L浓度的氯化锂可作为促进大鼠ADSCs增殖和成骨分化的适浓度。
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莲心碱对氯化锂-匹鲁卡品致癫模型急性期皮层脑电图的影响
目的：探讨莲心碱对氯化锂—匹鲁卡品致癫大鼠模型急性期皮层脑电图的影响。方法32只 SD 大鼠随机分为生理盐水对照组（A 组，10μg）、低剂量莲心碱组（B 组，莲心碱2．5 g·L －1，25μg）、高剂量莲心碱组（C 组，莲心碱5 g·L －1，50μg）、左乙拉西坦组（D 组，100 g·L －1，1 mg），建立氯化锂—匹鲁卡品癫痫大鼠模型后侧脑室注射药物，记录各组大鼠脑电图的改变。结果莲心碱组及左乙拉西坦组与对照组相比大鼠的痫性放电频率减低，快波（β波）比率减少，慢波（δ波）比率增加；高剂量莲心碱组和左乙拉西坦组相比无统计学差异。结论莲心碱在氯化锂—匹鲁卡品癫痫大鼠模型急性期具有抗癫痫作用。
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GSK3β抑制剂氯化锂对大鼠前列腺增生的影响
目的：探讨 GSK3β抑制剂氯化锂在大鼠前列腺增生治疗中的作用。方法通过皮下注射丙酸睾酮的方法复制前列腺增生模型，建模大鼠随机分成3组：氯化锂高剂量治疗组、低剂量治疗组和模型对照组，另设正常对照组。高剂量和低剂量治疗组分别以20mg／（ kg? d）、10mg （kg? d）的剂量腹腔注射氯化锂，连续给药30d。称量各组大鼠前列腺组织湿重、体积，计算前列腺指数；酶联免疫法测定血清中睾酮（T）、雌激素（E2）和性激素结合球蛋白（SHBG）含量。结果氯化锂治疗组的前列腺湿重、体积和脏器系数较模型对照组显著降低（P＜0．01）；氯化锂治疗组的T、E2和SHBG水平也较模型对照组降低（P＜0．05）。结论 GSK3β抑制剂氯化锂对前列腺增生具有一定抑制作用。
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氯化锂对移植到周围神经内神经干细胞的影响
目的 研究氯化锂对移植到胫神经内的神经干细胞的存活、分化的影响;研究神经干细胞移植和氯化锂处理对宿主神经轴突溃变、炎症细胞浸润的影响.方法 结扎成年大鼠右侧胫神经,将培养的神经干细胞注射到结扎部位远端,腹腔注射氯化锂或生理盐水,1周后用免疫荧光染色方法检测神经干细胞的巢蛋白(Nestin)、神经核抗原(NeuN)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)、胶质细胞原纤维酸性蛋白质(GFAP)、神经纤丝蛋白200(NF200)、巨噬细胞抗原(ED1)的表达情况.结果 移植到胫神经内的神经干细胞存活良好,并沿神经轴索间隙向周围扩散.移植后的神经干细胞未见Nestin阳性表达,大部分移植细胞呈GFAP阳性表达,无NeuN或ChAT阳性表达.腹腔注射氯化锂能显著减少移植细胞的GFAP阳性表达比例.胫神经结扎后,神经内轴突溃变明显.与未移植神经干细胞组比较,移植组胫神经内NF200阳性表达明显增多,联合应用氯化锂能进一步增加NF200的表达.应用氯化锂能显著减少神经干细胞移植后胫神经内的ED1表达.结论 氯化锂能减少移植后的神经干细胞向胶质细胞方向的分化,神经干细胞移植联合应用氯化锂可以减少宿主神经轴突的溃变程度,同时能抑制神经干细胞移植后的炎症细胞浸润.
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氯化锂用于质粒DNA的提纯
在分子生物学实验中常常涉及到小量质粒DNA的提取和纯化.用质粒DNA提纯试剂盒,虽然能得到高纯度的质粒DNA,但成本过高,不适合大量使用.用常规的苯酚氯仿提纯法,步骤繁琐,而且得到的产物中常残留有苯酚或其它杂质而影响后续的酶切分析等工作.再者,苯酚有害人体健康,而且废弃的苯酚又可造成环境污染.在本实验中,已摸索出一种可用于替代苯酚氯仿提纯质粒DNA的氯化锂质粒DNA提纯法.该方法简便易行,安全经济,所获结果稳定性好.
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氯化锂对脊髓损伤模型大鼠运动功能的作用和机制
[目的]观察氯化锂对脊髓损伤后BDNF/TrkB信号表达的作用,探讨其对脊髓损伤大鼠肢体运动功能恢复的作用和机制.[方法] 36只SD大鼠随机分为假手术组(12例)、对照组(12例)、氯化锂组(12例),假手术组仅行椎板切除术,对照组和氯化锂组采用NYU脊髓打击器建立脊髓损伤模型,术后第1、3、5d和第7d行BBB肢体运动功能评分.干预7d后取材,采用尼氏染色光镜观察神经元形态,免疫荧光定位BDNF阳性细胞,并计数进行半定量分析,Western blot检测BDNF蛋白、TrkB蛋白和p-TrkB蛋白表达.[结果]在脊髓损伤后肢体运动功能方面,白干预后第3d起,氯化锂组BBB评分高于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05),至术后第5d,两组间BBB评分差异更加明显(P＜0.01).尼氏染色提示氯化锂组脊髓损伤后神经元的形态优于对照组.氯化锂组脊髓损伤后脊髓前角运动神经元BDNF阳性细胞数高于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.01);Western blot检测表明氯化锂组的BDNF蛋白和p-TrkB蛋白表达高于对照组,两组间差异有统计学意义(P＜0.05),但两组间TrkB蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).[结论]氯化锂能促进脊髓损伤对照大鼠肢体运动功能恢复,其机制可能与其促进脊髓损伤后脊髓前角运动神经元分泌BDNF,促进TrkB受体磷酸化,从而上调BDNF/TrkB信号表达,促进脊髓损伤后神经元存活、再生和轴突再生、再髓鞘化有关.
