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咪喹莫特抑制尖锐湿疣患者外周血TLR4的表达
目的 研究咪喹英特对尖锐湿疣患者外周血ToL1样受体(TLR)4表达的影响.方法 利用荧光定量聚合酶链反应法,测定16例尖锐湿疣患者治疗前后外周血及16例正常对照者外周血中TLR4mRNA的定量表达.结果 尖锐湿疣患者外周血中TLR4mRNA的表达高于正常对照者外周血的表达水平(t=10.82,P＜0.001).尖锐湿疣患者经过咪喹英特治疗8用后,皮损消退,外周血中TLR4mRNA的表达水平低于患者治疗前的表达水平(t=10.74,P＜0.001),但与正常对照者的表达水平差异无统计学意义(t=1.05,P=0.300 8).结论 TLR4的表迭增高与尖锐湿疵的发病有关.咪喹莫特抑制尖锐湿疣外周血TLR4mRNA的过度表达,可能是咪喹莫特治疗尖锐湿疣的作用机制之一.
关键词： 咪喹莫特 尖锐湿疣 Toll样受体4 荧光定量聚合酶链反应 -
慢性乙型肝炎患者血清e系统与HBV-DNA含量的关系及临床意义
[目的]探讨慢性乙型肝炎患者血清HBV-DNA的表达水平与e系统的关系及其与肝细胞损害的关系.[方法]用实时荧光定量PCR方法检测乙肝患者血清HBV-DNA,同时用ELISA法检测血清乙肝标志物.[结果]HBeAg(+)组与抗-HBe(+)组HBV-DNA阳性率分别为100%、58.89%,两组HBV-DNA含量比较,差异无显著性(P＞0.05);两组肝细胞损害指标ALT、AST、TBA比较,差异有显著性(P＜0.05),HBV-DNA含量与肝细胞损害各指标均无相关性.[结论]HBV-DNA的定量检测可更准确地反映体内HBV增殖复制水平,HBV-DNA的含量与肝实质损害程度无关.
关键词： 荧光定量聚合酶链反应 乙肝病毒 核酸 -
女性不孕与解脲支原体和沙眼衣原体感染的关系
目的:了解泸州地区女性不孕患者泌尿生殖道解脲支原体(UU)、沙眼衣原体(CT)感染现状,探讨女性感染UU、CT后与不孕的关系.方法:采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术对238例女性不孕者(不孕组)和208例正常生育者(对照组)的宫颈分泌物进行UU、CT检测.结果:不孕组UU阳性率为36.97%(88/238),CT阳性率为30.25%(72/238),UU+CT阳性率为14.29%(34/238);对照组UU阳性率为13.46%(28/208),CT阳性率为10.58%(22/208),UU+CT阳性率为4.81%(10/208).不孕组UU、CT和UU+CT的阳性检出率均明显高于对照组(P＜0.01).结论:生育期女性生殖道感染UU、CT是导致不孕的重要因素之一,对不孕妇女常规进行UU、CT检测并及时治疗非常必要.
关键词： 荧光定量聚合酶链反应 女性不孕 解脲支原体 沙眼衣原体 -
FQ-PCR检测泸州看守所患CA女性在押人员感染HPV的实验研究
目的:了解四川泸州看守所患尖锐湿疣(CA)女性在押人员感染人乳头瘤病毒(HPV)情况.方法:采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测518例女性CA患者泌尿生殖道皮损或分泌物中感染的HPV6、11型和HPV16、18型.结果:用通用引物从518例女性临床诊断为CA患者标本中检出HPV阳性353例,占68.15%(353/518),其中HPV6、11型阳性248例,占70.25%(248/353);HPV16、18型阳性36例,占10.20%(36/353);HPV6、11和HPV16、18的阳性检出率差异有显著性(x2=188.77,P=0.000);HPV6、11型和HPV16、18型同时阳性8例,占2.27%(8/353).病毒载量测定的结果显示:HPV6、11型DNA载量为(1.4×103～3.6×108)copies/ml;HPV16、18型DNA病毒载量为(1.9×103～1.7×107)copies/ml.结论:女性在押人员CA患者HPV的感染率较高,应加强对她们的性健康教育和对HPV的检测;用FQ-PCR技术检测HPV具有特异性和敏感性高、简便、快捷的特点,可广泛应用于临床检测.
关键词： 荧光定量聚合酶链反应 女性尖锐湿疣 人乳头瘤病毒 -
荧光定量PCR检测HCMC DNA的临床意义与探讨
本试验采用荧光定量聚合酶链反应(fluorescence quantitativePCR,FQ-PCR)法检测人巨细胞病毒(HCMV) DNA,并探讨其在HCMV感染诊断和治疗中的应用价值.
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电化学发光法检测乙型肝炎患者血清标志物与HBV DNA定量关系的研究
电化学发光技术检测乙型肝炎(乙肝)血清标志物较普通的ELISA法更为灵敏,但其检测的仍然是乙肝的表型指标,只能提供HBV存在的间接证据.随着分子生物学技术的发展,荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测技术逐渐应用于临床实验诊断,直接反映了乙肝病毒的分子水平,使乙肝病毒核酸的定量测定成为可能[1].本文运用该技术检测了260例乙肝患者的血清HBV DNA含量,旨在探讨其与乙肝标志物的关系,为临床诊断、治疗及疗效观察提供新的信息.
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慢性HBV感染患者血清中HBsAg与抗-HBs两种标志物同时阳性罕见模式的分析
目的 通过分析慢性HBV感染患者乙型肝炎病毒(HBV)血清学标志物HBsAg与抗-HBs同时阳性这种罕见模式的病例,来探讨其存在的原因及临床价值.方法 采用电化学发光法(ECLIA)检测患者血清中的HBsAg,抗-HBs,HBeAg,抗-HBe,抗-HBc,5种标志物,采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV DNA.结果 HBsAg与抗-HBs同时阳性的罕见模式组仍有病毒复制.应用HBIC治疗失败时可以出现HBsAg与抗-HBs同时阳性.结论 HBsAg和抗-HBs同时阳性并非疾病真正好转的指标.
关键词： 乙型肝炎病毒 血清学标志物 荧光定量聚合酶链反应 -
肺结核患者结核菌L型感染及其荧光定量PCR检测的意义
目的 评价荧光定量PCR(FQ-PCR)和结核菌(MTB)L型检测的临床价值.方法 收集61例痰阴性肺结核患者痰、血标本分别进行分枝杆菌及其L型培养,并采用染色、免疫组化和FQ-PCR技术进行检测和鉴定,部分标本透射电镜观察.结果 痰MTB及其L型检测的阳性率为72.4%,血液阳性率为28.3%,而痰血检测总的阳性率为75.4%.痰直接FQ-PCR33.3%,培养后FQ-PCR40.4%,总阳性率45.5%.血直接FQ-PCR 0/35,培养后FQ-PCR22.5%.痰血FQ-PCR阳性率比较,x2=5.3028,P＜0.05,差异有统计学意义,痰阳性率明显高于血.痰和血FQ-PCR阳性率低于相应的涂片和培养结果.结论 分枝杆菌L型的分离和FQ-PCR的应用可提高痰菌阴性肺结核的诊断效率.FQ-PCR阴性不能完全排除结核病,但可用于痰及血中分枝杆菌L型的辅助诊断,尤其对不易从感染部位取得标本的患者更有帮助.
关键词： 结核 肺 分枝杆菌 L型 荧光定量聚合酶链反应 -
荧光PCR技术检测梅毒螺旋体DNA的意义
目的:评估荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测梅毒螺旋体DNA的应用价值.方法:使用FQ-PCR技术检测硬下疳、一期横痃、二期梅毒皮损、梅毒患者全血、室温保存1～3年半的梅毒螺旋体DNA阳性标本以及部分生活污染品中的梅毒螺旋体DNA含量.结果:该技术的特异性为100%,敏感性分别为一期梅毒100%,二期梅毒90%,早期梅毒全血为20%,无症状梅毒全血为0%,其敏感性主要受到治疗药物和梅毒病程的影响;与梅毒口腔黏膜斑密切接触的污染品中1个茶杯获得阳性结果;室温保存的梅毒螺旋体DNA阳性标本均阳性.结论:FQ-PCR技术适用于确认未经治疗的形态各异的早期梅毒疹;对一期梅毒后期或二期梅毒早期患者血中梅毒螺旋体DNA检查有价值;梅毒螺旋体DNA在常温下可长期保持稳定;该技术对探明梅毒间接传播途径可能有价值.
关键词： 梅毒 梅毒螺旋体 荧光定量聚合酶链反应 -
FQ-PCR试剂质量评估方法的建立及评价
本文介绍一种简捷、实用的荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)试剂质检评估方法,具体方法是随机选择不同品牌HBV DNA的FQ-PCR试剂,分别将其编为a、b和c.
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HBV-DNA定量检测的临床应用
目的探讨荧光定量聚合酶链反应方法定量检测乙肝病毒核酸的临床应用价值.方法荧光定量聚合酶链反应方法定量检测肝炎病人血清标本的HBV-DNA.结果 285例乙肝患者HBV-DNA定量范围为1.62×103～9.42×1010,呈现不同的血清标志模式.HBsAg"+"者275例(96.5%), 仅HBcAb"+"或 HBV-M全阴者各5例(分别为1.75%). 结论 FQ-PCR是了解HBV在体内复制和判断疗效的有利手段.
关键词： 荧光定量聚合酶链反应 乙肝病毒 核酸 -
阴道炎患者HPV6/11-DNA定量分析
目的了解女性阴道炎患者人乳头瘤病毒6/11型(HPV6/11)的感染情况.方法荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测258例门诊患者阴道分泌物中HPV6/11的病毒拷贝数.结果共检出HPV6/11阳性者94例,阳性率36.43%,拷贝数在105以上者78例,占阳性者中82.98%,40岁以上年龄组阳性率高且病毒复制量均在105以上.结论①中老年阴道炎患者就诊晚,感染重.②FQ-PCR检测HPV敏感、快速、准确,特别是其定量特点对临床很有意义.
关键词： 荧光定量聚合酶链反应 人乳头瘤病毒 阴道炎 -
荧光定量聚合酶链反应检测HCV-RNA
丙型肝炎病毒(HCV)是引起输血后肝炎的主要致病因子,在血中含量极微,免疫学标志仅有抗-HCV一项,而且抗-HCV出现较晚或不出现,所以单凭血清学诊断是不够的.为此,采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测血清中HCV-RNA,是确诊HCV感染的有效方法之一,可为制订治疗方案及疗效观察提供确切依据.
关键词： 丙型肝炎 肝炎病毒 荧光定量聚合酶链反应 -
丙型肝炎患者ELISA法检测抗-HCV与FQ-PCR检测HCV-RNA结果对比分析
目的 观察丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)酶联免疫吸附试验(ELISA)检测呈阴性、灰区、弱反应性标本采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)进行复检的情况.方法 选取2015年1月至2016年12月于本院就诊并经ELISA法检测抗-HCV结果呈阴性、灰区及弱反应性的标本476例为本文研究对象,所有研究对象均采用FQ-PCR复检,对两种方法检测结果进行比较.结果 在200例ELISA法检测阴性标本中,经FQ-PCR复检均呈阴性;96例灰区和180例弱反应标本中,经FQ-PCR复检分别有22例(22.92%)和150例(83.33%)HCV-RNA浓度>1000IU/ml;ELISA法检测抗-HCV双试剂灰区标本HCV-RNA阳性率均高于单试剂灰区,差异均有统计学意义(P<0.05);ELISA法检测抗-HCV单试剂、双试剂弱反应性标本FQ-PCR检测阳性率比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 ELISA法检测抗-HCV结果呈灰区、弱反应性标本存在一定的HCV-RNA阳性漏检和误诊,FQ-PCR检测对于HCV感染的早期诊断、治疗以及避免医疗纠纷的发生具有重要作用.
关键词： 酶联免疫吸附试验 灰区 弱反应性 丙型肝炎病毒抗体 荧光定量聚合酶链反应 -
人胃癌细胞中Stat3和VEGF的定量表达
目的探讨信号传导和转录活化子(activated signal transducer and activator of transcription 3,Stat3)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在人胃癌细胞中表达及其与临床病理特征的相关性.方法利用荧光定量聚合酶链反应法测定32例人胃癌细胞和25例癌旁细胞内Stat3 mRNA 和VEGF mRNA的定量表达,分析这些指标的相互关系及其与临床病理特征的相关性.结果人胃癌细胞中Stat3 mRNA 和VEGF mRNA的表达与性别、年龄无关 (P》0.05).人胃癌细胞中Stat3 mRNA 和VEGF mRNA的表达明显高于癌旁细胞的表达(P《0.01).人胃癌细胞中Stat3 mRNA 和VEGF mRNA的表达与组织类别、浸润深度、分化程度、淋巴结转移、分期和大小有关(P《0.05).人胃癌细胞中Stat3 mRNA与VEGF mRNA呈显著正相关(r=0.633 03,P=0.000 1).结论 Stat3 mRNA 和VEGF mRNA表达上调与人胃癌发生、发展和转移有关,JAK/Stat信号传导途径可能与VEGF mRNA在胃癌细胞过度表达有关.
关键词： 胃肿瘤 信号传导 血管内皮生长因子 荧光定量聚合酶链反应 -
荧光定量PCR方法在沙门菌鉴定中的应用
[目的]用taqman技术建立沙门菌荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测方法,尝试快速、准确地鉴定沙门菌.[方法]根据沙门菌GenBank Accession NO U25352基因序列,设计并合成引物和荧光标记探针.将PCR扩增的沙门菌基因片段克隆导入载体,构建的重组质粒经筛选、鉴定后,作为阳性模板,用于标准曲线的制定.利用荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术进行各类菌株的定性鉴定.[结果]应用重组质粒制作的定量曲线,其循环阈值与模板浓度的对数值具有良好的线性关系,相关系数为0.999.检测各类菌株,其中沙门菌41株、H抗原丢失的沙门菌16株均阳性;非沙门菌109株均阴性.[结论]建立了鉴定沙门菌的荧光定量PCR方法,该方法简便、快速、准确,有很好的应用前景和研究价值.
关键词： 荧光定量聚合酶链反应 沙门菌 荧光标记探针 -
荧光定量聚合酶链反应检测HBV-DNA观察
乙型肝炎病毒(HBV)感染的实验诊断主要依据血清学标志(HBV-M)和HBV-DNA的检测.以往运用的普通PCR检测只能定性,其后处理过程易导致假阳性污染,且所用的染色剂溴乙锭是强致癌物.因此,普通PCR的应用和推广受到一定限制.我们采用实时荧光定量聚合酶链反应(Fluorescence quantitative ,FQ-PCR)克服了常规PCR的不足[1],直接检测146份血清标本乙型肝炎病毒核酸的拷贝数,并同时与酶联免疫吸附试验(ELISA)进行对照,现将结果报道如下.
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肉制品中沙门菌实时荧光定量聚合酶链反应标准质粒的构建
目的 制备用于检测肉制品中沙门菌实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)的标准质粒.方法 设计针对沙门菌invA基因的引物,扩增特异片段,转入质粒载体中构建重组质粒.将构建的重组质粒作为标准品,进行优化后的实时荧光定量PCR,建立标准曲线,并考察该标准品灵敏性及稳定性.结果 成功构建含有沙门菌invA基因的质粒标准品,用其建立的标准曲线循环阈值(Ct值)与模板的拷贝数呈良好线性关系(r2=0.9979),低可以检出10 拷贝/反应.该标准质粒经验证具有良好的稳定性.用该质粒标准品检测肉制品中的沙门菌,经2 h增菌后,可在7 h内完成对样品的检测.结论 所构建的质粒标准品可用于荧光定量PCR检测肉制品中的沙门菌,为考量实验质量提供参考依据.
关键词： 质粒标准品 荧光定量聚合酶链反应 沙门菌 肉制品 -
荧光定量聚合酶链反应技术在结核病诊断中的应用价值探讨
结核病是由结核分枝杆菌（ MTB）感染引起的慢性传染病，对疑似结核病人进行痰抗酸杆菌涂片染色镜检及分枝杆菌培养，直接找到病原菌，对诊断结核病具有重要意义。但上述两种方法也有其局限性：涂片镜检法总的敏感性为22％～80％［1］，并且无法在镜下区分与MTB形态、染色相同的非结核分枝杆菌（ NTM ），而NTM 与MTB一样严重威胁人类健康［2-3］。分枝杆菌培养法是临床诊断结核病的“金标准”，但该方法灵敏度也不够高，阳性率约为40％～60％［4］，并且该法检测周期长，从培养至菌种鉴定一般需要8周甚至更长，且对早期结核菌感染者、药物治疗后细胞壁缺损L型细菌难以检出。为此，找到一种适合基层医疗单位应用，并能快速、灵敏诊断结核病，有效区分MTB与NTM的实验室诊断方法，在临床上有重要应用价值。荧光定量聚合酶链反应（ FQ-PCR）是一种在聚合酶链反应（ PCR ）体系中引入荧光基团，利用荧光信号实时监测整个PCR扩增进程的方法，可对标本中起始 DNA 模板进行定量，提高检测灵敏度，同时省去了电泳步骤，减少污染机会，特异性更好。 FQ-PCR结果以循环阈值（ Ct值）表示， Ct值越小，说明起始模板核酸浓度越高。本研究试图应用FQ-PCR法检测痰标本中MTB，以为临床提供一种快速、灵敏、特异的结核病辅助诊断方法。
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慢性浅表性胃炎不同程度脾胃湿热证与胃黏膜水通道蛋白3、4基因表达的相关性
目的:探讨慢性浅表性胃炎(chronic superficial gastritis, CSG)不同程度脾胃湿热证与胃黏膜水通道蛋白(aquaporin, AQP)3、4基因表达的相关性.方法:共纳入24例CSG患者,按脾胃湿热证不同程度分为轻、中、重度组,另选择8名健康人作为正常对照.胃镜下取胃体上部黏膜,液氮保存,荧光定量聚合酶链反应法检测胃黏膜AQP3和AQP4的基因表达.结果:中、重度脾胃湿热证组AQP3和AQP4基因表达水平均高于正常对照组和轻度脾胃湿热证组(P<0.05,P<0.01).重度脾胃湿热证组AQP3高于中度脾胃湿热证组(P<0.05).结论:脾胃湿热程度不同,胃黏膜AQP3和AQP4基因表达亦不同,脾胃湿热程度与胃黏膜AQP3和AQP4基因表达相关,其表达会随着湿热程度的加重而升高.
关键词： 胃炎 水通道蛋白 基因表达 湿热证 荧光定量聚合酶链反应
