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荧光定量聚合酶链反应染料法在HLA-B*5801等位基因分析中的应用
目的:评估荧光定量聚合酶链反应(PCR)染料法在HLA-B*5801等位基因分析中的灵敏度、特异度、准确度和Kappa值,并与经典测序方法进行比较.方法:应用HLA-B*5801基因检测试剂盒对268例痛风、痛风性关节炎和高尿酸血症患者和50例正常人HLA-B*5801进行分析,并对318例标本HLA-B基因2、3、4外显子双向测序.结果:荧光定量PCR染料法敏感度、特异度和准确度均为100％,Kappa值为1.318例参与者HLA-B*5801等位基因发生率为9.2％(29/318).痛风患者HLA-B*5801发生率8.51％(8/94),痛风性关节炎发生率9.52％(2/21),高尿酸血症发生率11.11％ (17/153),正常人发生率4％(2/50).结论:荧光定量PCR染料法能够快速准确检测HLA-B*5801,检测结果与测序方法完全一致.
关键词： 荧光定量聚合酶链反应 染料法 HLA-B*5801 灵敏度 特异度 -
34904人健康体检人群中乙肝核心抗体与e抗体阳性的HBV-DNA检测分析
目的：了解核心抗体和e抗体双抗体阳性与HBV-DNA含量相关性，并分析其临床意义。方法应用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术检验300例双抗体阳性HBV-DNA含量。结果核心抗体与e抗体双抗体阳性的健康体检人群中HBV-DNA阳性率为3.61%。结论乙肝核心抗体与e抗体阳性的健康体检人群中极少数仍存在病毒复制，具传染性。在乙肝核心抗体与e抗体阳性的健康体检人群中进行HBV-DNA检测是很有必要的。
关键词： 乙肝病毒复制 传染性 荧光定量聚合酶链反应 -
实时荧光定量PCR方法在沙门菌鉴定及筛选中的应用
目的 在沙门菌鉴定中运用taqman技术建立荧光定量聚合酶链反应(PCR)的方法,并考评该方法的特异性、灵敏度、抗干扰性及重复性.方法 根据沙门菌GenBank Accession NO DQ644631基因序列,设计并合成引物和荧光标记探针.建立实时荧光定量PCR反应体系,用沙门菌各种型别对该方法进行考评.结果 实时荧光定量PCR技术在沙门菌鉴定中有良好的特异性、极高的灵敏度、较强的抗干扰性及重复性.结论 在沙门菌的鉴定和筛选中实时荧光定量PCR方法准确、快速、简便,有很好的应用前景和研究价值.
关键词： 荧光定量聚合酶链反应 沙门菌 方法考评 -
荧光定量聚合酶链反应在小儿人巨细胞病毒感染检测中应用
目的：探讨荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）在小儿人巨细胞病毒（HCMV）感染检测中的临床应用价值。方法选择2012年1月至2013年10月在武汉市妇女儿童医疗保健中心就诊的疑似HCMV感染患儿血清或尿液标本，其中血清标本454例，尿液标本1001例，患儿男女比为1005∶394，年龄1天～3岁。用FQ-PCR检测疑似HCMV感染患儿血清和尿液中的HCMV-DNA，比较两种标本的阳性率。结果 1001例尿液标本的HCMV-DNA阳性率为46.35%（464/1001），显著高于血清标本的阳性率5.95%（27/454）；56例血清和尿液标本HCMV-DNA进行配对检测，其中血清检测阴性的52例中有23例尿液检测为阳性，而血清检测阳性的4例尿液检测均为阳性。结论应用FQ-PCR检测患儿HCMV-DNA，采用尿液标本可提高阳性检出率。
关键词： 人巨细胞病毒(HCMV) 荧光定量聚合酶链反应 血清 尿 儿童 -
MAGE-1 MAGE-3及AFP基因在肝癌组织中的表达
目的:探讨MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA在肝癌组织中的表达及用于检测微小转移的可能性.方法:应用聚合酶链反应(PCR)检测86例原发性肝癌患者肝癌组织中MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA的表达.结果:86例原发性肝癌患者肝癌组织中MAGE-1、MAGE-3和AFPmRNA的阳性率分别为34.9%(30/86)、60.5%(52/86)和69.8%(60/86);所有患者肝癌组织至少表达其中一种mRNA.结论:MAGE-1、MAGE-3结合AFP mRNA在肝癌组织中表达率较高,有可能用于联合检测肝癌血行微小转移.
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两种方法检测myc基因表达水平在乳腺癌诊断中的应用
目的:比较荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对乳腺癌相关基因-核内原癌基因(c-myc)的检测灵敏度和特异性,探讨其在乳腺癌诊断中的应用.方法:采用荧光定量聚合酶链反应,并以β2-微球蛋白为内对照,检测乳腺癌和良性乳腺疾病等不同病种患者139例及健康志愿者40例外周血中mycmRNA水平,同时采用逆转录聚合酶链反应进行对比研究.结果:若以myc/β2一微球蛋白高于正常对照组x+2s为阳性,78例乳腺癌患者myc mRNA基因表达阳性数为32,阳性率41.0%,良性乳腺疾病组和其它肿瘤组阳性数为0.mycmRNA在乳腺癌组表达高于良性乳腺疾病组和其它病种组(P＜0.01),在正常对照组和良性乳腺疾病组间差异无显著性意义(P＞0.05).β2-微球蛋白在四组间差异无显著性意义(P＞0.05).FQ-PCR对乳腺癌诊断的灵敏度和特异性为41.0%,82.2%,RT-PCR则分别为32.1%,75.2%,FQ-PCR均显著高于RT-PCR法.结论:FQ-PCR检测myc对乳腺癌诊断灵敏度和特异性较高,具有高精确性、高效率和污染小等特点,而且标本来源容易,FQ-PCR对myc的检测可有效辅助诊断乳腺癌.
关键词： myc 乳腺癌 荧光定量聚合酶链反应 RT-PCR -
乙型肝炎病毒前S1抗原与HBV-DNA相关性的探讨
目的:研究乙型肝炎前S1抗原与HBV-DNA检测的相关性.方法:前S1抗原检测采用酶联免疫吸附试验;HBV-DNA检测采用荧光定量PCR法.结果:HBsAg-HBeAb-HBcAb-PreS1组DNA阳性率为49%;HBsAg-HBeAb-HBcAb组DNA阳性率为34%;HBsAg-HBcAb-PreS1组DNA阳性率为32.5%;HB-sAg-HBcAb组DNA阳性率为15%.结论:含前S1抗原的阳性标志组HBV-DNA阳性率明显高于不含前S1抗原的阳性标志组.
关键词： 前S1抗原 荧光定量聚合酶链反应 乙肝病毒DNA -
HBV-DNA和ALT作为慢性乙肝患者临床治疗实验指标的探讨
HBV-M共9种常见模式,在HBsAg-HBeAgHBcAb阳性标志组中绝大多数检出高拷贝数的乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA),临床上必须给予治疗;而HBsAg-HBeAb-HBcAb、HBsAg-HBcAb 2种阳性标志组中,也较多出现中、高拷贝数的HBVDNA.
关键词： 荧光定量聚合酶链反应 乙型肝炎病毒 HBV-DNA 丙氨酸氨基转移酶 -
消癥注射液对实验性子宫内膜异位症异位内膜Fas、Survivin表达的影响
[目的]探讨消癥注射液治疗子宫内膜异位症的机制.[方法]采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法对SD雌性大鼠内膜异位内膜治疗前后进行子宫内膜组织中Fas和Survivin基因表达的测定.[结果]模型组中Fas基因表达的降低,survivin基因表达升高,使其无论在位还是异位内膜的促凋亡能力下降,异位的内膜在盆腔外存活的能力增强,而治疗后消癥注射液和无水乙醇均升高了Fas基因的表达,降低survivin基因表达,两治疗组之间比较差异无显著意义(P>0.05),但不同剂量消癥注射液之间有一定的差别(P<0.05).[结论]消癥注射液和无水乙醇均能升高了Fas基因的表达,降低survivin基因表达,从而诱导异位内膜细胞调亡的发生,达到治疗目的.
关键词： 消癥注射液 子宫内膜异位症 荧光定量聚合酶链反应 -
用荧光定量PCR检测46,XY女性的SRY基因
目的:探讨用荧光定量聚合酶(FQ-PCR)检测46,XY女性SRY基因的可靠性和临床意义.方法:应用FQ-PCR方法对10例46,XY女性患者进行了SRY基因检测,并将检测结果与剖腹探查及病理组织学结果比较.结果:10例患者中,有8例SRY基因阳性,定量结果为(2～5)×108拷贝/mL,与正常男性SRY基因的拷贝数相近,8例体内均无卵巢组织,6例有发育不良的睾丸组织,2例卵巢部位为曲细精管组织;2例SRY基因阴性,体内有未发育的卵巢组织和幼稚子宫,无睾丸组织.结论:用FQ-PCR法检测SRY基因是可靠的,该方法可为患者的临床诊断、治疗提供进一步的依据.
关键词： 性腺发育不全 46 XY女(雌)性 Y染色体 荧光定量聚合酶链反应 -
乙型肝炎病毒血清标记物少见模式分析
乙型病毒性肝炎简称乙肝,是由乙型肝炎病毒(HBV)感染引起的一种常见感染病.乙肝这种疾病已在全球广泛流行,据统计,全世界共约3.5亿人感染HBV,每年死于HBV感染所致的终末期肝病和肝癌的人数超过100万[1].我国目前有近十分之一的人群是"乙肝病毒携带者".HBV感染可引起肝脏炎症和纤维化,与肝硬化、肝癌的发生密切相关.多年来乙肝一直是法定报告传染病,是危害人民健康严重的常见传染病之一.乙肝已成为严重的社会和公共卫生问题之一.乙肝给患者、家庭、社会造成了沉重的经济负担,给社会经济发展带来了不容忽视的影响,是许多家庭因病致贫、因病返贫的重要原因,同时也引发了一系列的社会问题.乙肝两对半(乙肝五项)是目前国内医院常用的乙肝病毒(HBV)感染检测血清标志物.
关键词： 乙型肝炎病毒 乙肝两对半 荧光定量聚合酶链反应 病毒血清标记物 -
荧光定量PCR检测性传播疾病病原体结果分析
目的 调查荆州市性传播疾病(STD)的感染现状,为防治工作提供依据.方法 采用荧光定量PCR技术对1 207例门诊疑似患者的分泌物进行沙眼衣原体(CT)、解脲支原体(UU)、淋球菌(NG)检测,运用2检验等方法进行统计分析.结果 1 207例患者中有583例检出病原体,STD阳性率48.3%;其中22例检出NG,阳性率为1.8%;43例检出CT,阳性率为3.6%;518例检出UU,阳性率为42.9%;混合感染中CT+UU检出率3.7%,UU+NG检出率为2.6%,CT+UU+NG混合检出率为1.5%.结论 中青年就诊者泌尿生殖道病原体阳性率高,应重视病原学的检查,进一步加强STD的防治工作.
关键词： 性传播疾病 淋球菌 沙眼衣原体 解脲支原体 荧光定量聚合酶链反应 -
HBV-M与HBV-DNA结果差异研究
目的 探讨乙肝患者HBsAg(+)血清中乙肝病毒血清学标志物(HBV-M)模式与HBV-DNA检测结果的相互关系,了解HBV-M模式其对应的HBV-DNA载量.方法 用TRFIA法定量测定HBV-M,取乙肝表面抗原阳性标本同时用荧光聚合酶链反应(FQ-PCR)对患者进行HBV-DNA检测.结果 在271例患者血清中检测出HBV-DNA病毒基因拷贝值范围为2.1×103～3.8×107copies/ml,平均含量为3.0×104copies/ml,总阳性检出率为48.0%(130/271).模式4HBV-DNA阳性率高于其他模式差异有统计学意义(P＜0.05).结论 HBV-M和或HBV-DNA检测评价乙肝疗效或治愈标准都存在一定的局限性,需要联合诊断和寻找新的指标.
关键词： 乙肝病毒 乙肝病毒血清学标志物 荧光定量聚合酶链反应 时间分辨荧光技术 -
放射免疫法与FQ-PCR法检测乙型肝炎病毒相关性探讨
、HBeAb阳性中,HBV-DNA定性阳性率为12.12%;两对半HBcAb阳性中,HBV-DNA定性阳性率为0%;两对半五项全阴性中,HBV-DNA定性阳性率为0%.结论:荧光定量PCR法检测HBV-DNA是乙型肝炎病毒复制直接的可信指标,可反映HBV真实感染和复制状态,特别是低复制状态,结合RIA法检测HBV-m,具有重要临床意义.
关键词： 肝炎病毒/乙型 血清标志物 放射免疫法 脱氧核糖核酸 荧光定量聚合酶链反应 -
荧光定量PCR检测HBV-DNA的临床价值
目的:检测血清中乙型肝炎病毒(HBV)DNA拷贝数,以探讨乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)与血清免疫标志物的关系.方法:荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测血清样本中HBV-DNA含量;酶联免疫吸附法(ELISA)检测HBV血清标志物(HBVM).结果:在HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)组(大三阳组)患者血清HBV-DNA阳性率为97.63% (371/380),平均拷贝数为1.86×107/ml;HBsAg(+) HBeAg(+)组HBV-DNA阳性率为95.65%(22/23),平均拷贝数为1.75×107/ml;HBsAg(+)HBeAb(+)HBcAb(+)组(小三阳组)患者血清HBV-DNA阳性率为43.68%(83/190),平均拷贝数为4.85×105/ml;HBsAg(+)HBcAb(+)组血清HBV-DNA阳性率为82.22%(37/45),平均拷贝数为2.17×105/m1;小三阳及HBsAg(+) HBcAb(+)组 HBV-DNA 阳性检出率及拷贝数均低于大三阳及HBsAg(+) HBeAg(+)组,与之比较均具有显著性差异(P<0.05); HBVM 全阴性组HBV-DNA检出率为1.78%(2/112),平均拷贝数为1.48×105/ml.结论:荧光定量PCR在乙肝的诊断、判断传染性强弱及评价抗病毒治疗效果方面具有较大的临床应用价值.
关键词： 乙型肝炎病毒 荧光定量聚合酶链反应 血清学标志 HBV-DNA -
慢性丙型肝炎患者血清抗-HCV及HCVRNA水平与病情的关系研究
目的探讨慢性丙型肝炎患者血清抗-HCV水平和HCVRNA含量与病情的关系.方法应用微粒子发光法检测抗-HCV水平,应用荧光定量PCR技术检测HCVRNA含量,并与病情进行相关性分析.结果血清抗-HCV水平＞100 S/CO时,HCVRNA含量较高,且大多数患者血清ALT升高;当HCVRNA含量较高时,抗-HCV水平及ALT同步异常.结论 HCVRNA含量与抗-HCV水平在一定程度上均能反映HCV的复制情况,且与病情密切相关,应同步检测.
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人端粒酶逆转录酶基质金属蛋白酶-7 mRNA在胃肠癌患者外周血中的表达及意义
人端粒酶逆转录酶（HTERT）是端粒酶的主要成分之一，其表达与端粒酶的激活密切相关，在细胞永生化中发挥重要作用［1］。基质金属蛋白酶-7（MMP-7）是基质金属蛋白酶家族成员之一，具有强大的基质降解活性和广泛的底物特异性，参与肿瘤的发展、浸润和转移过程［2］。我们应用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）法检测胃肠癌患者外周血HTERT及MMP-7mRNA，探讨其对早期发现胃肠癌患者血液微转移的临床意义。
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P16蛋白表达在鲍温样丘疹病与尖锐湿疣鉴别诊断中的意义
鲍温样丘疹病(bowenoid papulosis,BP)与人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染密切相关,临床上易误诊为尖锐湿疣(condyloma acuminatum,CA).我们先前的研究[1]表明在HPV相关的CA与BP皮损中p16基因的表达产物--P16蛋白过度表达,且这两种疾病组织中P16蛋白表达升高的程度不同.本研究应用免疫组织化学法检测P16蛋白在BP以及CA组织中的表达情况,同时用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检测上述相同组织中HPV6/21、HPV16/18 DNA.探讨P16蛋白表达在BP与CA鉴别诊断中的意义.
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乙型肝炎患者255例HBV-DNA载量与T淋巴细胞亚群的相关性研究
本研究对255例乙型肝炎患者进行分组,用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测乙型肝炎病毒(HBV)-DNA载量,用流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+及CD3+CD4+/CD3+CD8+,对结果进行分析,旨在得出乙型肝炎患者T淋巴细胞亚群变化与HBV-DNA载量之间的关系,为临床对乙型肝炎的诊断及抗病毒治疗效果评价、预后判断等方面提供可靠依据[1].
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荧光定量检测乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸与乙型肝炎血清标志物的关系研究
目的了解乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒(HBV)复制及传染性.方法运用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测HBV血清标志物和荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV DNA,并对其结果进行分析比较.结果乙型肝炎大三阳患者血清HBV DNA检出率为100%,平均拷贝数为2.09×107/mL,HBV DNA的对数值为7.3±1.6;小三阳患者血清HBV DNA检出率为64.5%,平均拷贝数为6.76×104/mL,HBV DNA的对数值为4.8±1.2.结论同时进行乙型肝炎血清标志物的ELISA检测及HBV DNA的FQ-PCR检测,有利于临床对HBV感染的诊断、治疗方案的选择及疗效判定.
关键词： 乙型肝炎病毒 HBV DNA 荧光定量聚合酶链反应
