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免疫交叉反应在单克隆抗体类药物临床前安全性评价中的应用/95%肟草酮的亚慢性经口毒性/Beagle犬经口给药AF-5/PVP固体分散体9个月和恢复期3周毒性研究/Beagle犬经口给予六神丸急性毒性研究
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CLIA与RIA测定血清β-HCG的对比分析
HCG是一种分子量为39000的糖蛋白,由胎盘滋养层细胞合成和分泌,其分子结构包括α、β两个亚单位.由于其α亚单位与LH、FSH和TSH的α亚单位相似,存在免疫交叉反应,而其β亚单位与LH等不同,故测定β亚单位意义更大.β-HCG的测定,在早期妊娠、先兆流产、流产不全、绒毛膜癌和恶性葡萄胎的诊断、监测及疗效观察方面有重要意义.目前实验室测定血清β-HCG的方法有RIA、EIA和化学发光免疫分析(CLIA)等.本文应用CLIA和RIA同时对β-HCG不同浓度混合血清及50份标本进行检测,并进行对比分析,现报道如下.
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细粒棘球绦虫EgA31重组抗原与其它寄生蠕虫的免疫交叉反应
为了研究细粒棘球绦虫EgA31重组蛋白的抗原性,作者将细粒棘球绦虫66 kDa抗原的cDNA克隆EgA31 3′端500 bp碱基片断亚克隆入pGEX-5X表达质粒,构建EgA31/GST重组蛋白原核表达系统,所制备的重组蛋白免疫豚鼠获得抗血清;免疫试验表明该抗血清可识别EgA31/GST重组蛋白及细粒棘球绦虫66 kDa抗原,也可与多房棘球蚴、犬复孔绦虫、犬钩虫、日本血吸虫的成虫虫体总蛋白66 kDa抗原分子发生交叉反应,提示EgA31抗原分子在上述虫体中均有存在.
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西尼罗病毒与乙脑病毒免疫交叉反应的实验研究
为明确西尼罗病毒(WNV)与乙型脑炎病毒(JEV)的免疫交叉反应,本文分别用WNV全抗原与JE减毒活疫苗免疫小鼠,采用间接免疫荧光试验检测血清中2种病毒IgG抗体水平及其交叉反应情况.结果表明:WNV组在第4次免疫后的14天和35天出现2个高峰,平均效价分别为6 088和4 305;JEV组第4次免疫后,小鼠血清JEV抗体呈现缓慢上升的趋势.无论是在WNV全抗原免疫小鼠血清中还是在JE减毒活疫苗免疫小鼠血清中,同一血清对WNV抗原和JEV抗原均有反应,且抗体效价差异有显著性.在抗WNV抗体阳性血清中,两者交叉反应相对较强,在抗JEV抗体阳性血清中,两者交叉反应较弱.WNV与JEV存在一定交叉反应,但是否有交叉保护作用则需要中和试验等进一步证实.
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水痘人免疫球蛋白与疱疹相关病毒免疫交叉反应的试验
由单纯疱疹病毒(HSV)引起的单纯疱疹病毒性角膜炎(HSK)的发病率和致盲率居感染性角膜病的首位,常规抗病毒药物治疗HSK的效果较差,受血清滴眼治疗HSK的启发,临床上使用抗HSV人免疫球蛋白治疗HSK的设想有必要进行试验.
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食物过敏反应及其机制
食物过敏是人们对某些食物产生的一种不良反应,在医学上属于一种变态反应.据国外的一些流行病学调查表明,占总人口4%以及3岁以下婴幼儿的6%~7%的人群对某些食物产生过敏[1].婴幼儿患者在5~6岁时大约80%对牛乳、鸡蛋、花生、小麦、大豆产生免疫耐受,大约20%对鱼及甲壳类水产动物的过敏会消除,对其余的往往是终生过敏.在成年人,果蔬过敏的发病率成快速上升的趋势,主要是因为存在果蔬-花粉的免疫交叉反应.我国尚未进行大规模调查,但早些时候的小范围调查表明:在北京、广州及胜利油田,居民食物过敏的发生率为3.4%~5.0%[3].食物过敏反应的临床表现包括荨麻疹、疱疹样皮炎、口腔过敏综合征、肠病综合征、哮喘及过敏性鼻炎等不同形式的临床症状,严重时可导致过敏性休克,危及生命.患者在长期的忌食过敏食物过程中,往往会导致营养摄入的缺失,如1~9岁儿童的食物过敏患者,钙、铁、锌、维生素D、维生素E的摄入量小于RDA的有67%[4].因此,食物过敏已被视为一种严重的公共营养卫生问题,引起了全球广泛的关注.
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不同检测系统测定肾移植患者血浆总霉酚酸浓度比较
有关血浆总霉酚酸活性代谢物霉酚酸(MPA)的血药浓度测定方法,国外文献报道有超高效液相色谱法(UPLC-MS)、高效液相色谱法(HPLC)法和酶免疫法(EMIT),但U-PLC-MS和HPLC方法样本预处理繁琐、耗时,对测定仪器和操作人员要求都很高,不适于MPA血药浓度常规监测, EMIT的方法一直被临床广泛应用,优点是快速方便,但特异性较差,代谢物会产生免疫交叉反应,导致结果正偏离。罗氏总霉酚酸诊断试剂采用双试剂系统,比浊法模拟酶在活体内机制MPA存在时非竞争性抑制次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶Ⅱ(IMPDHⅡ)酶活性受抑制原理,通过340 nm信号减少进行测量。本文将此两种系统与方法所测结果进行比对,分析其准确度与相关性。
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2型糖尿病患者血清真胰岛素检测与分析
2型糖尿病患者普遍存在胰岛素抵抗和高胰岛素血症,血清胰岛素水平一直是临床常用的评价B细胞功能的指标.目前多数实验室采用放射免疫法测定免疫反应性胰岛素(IRI),它包括前胰岛素原、胰岛素原和真胰岛素(TI)及其中间代谢产物的总水平,而不是单纯的TI水平,难以排除胰岛素原免疫交叉反应的影响,双抗体夹心酶联法测定的真胰岛素,由于排除了胰岛素原的干扰,能更真实地反映患者的胰岛素水平.TI是胰岛素中真正有生理活性的部分,测定TI可客观评价B细胞功能.
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免疫球蛋白制品靶抗体谱、效价水平与交叉反应的实验研究
目的:研究免疫球蛋白制品靶抗体谱、效价水平与交叉反应.方法:采用水痘病毒、巨细胞病毒、Ⅰ与Ⅱ单纯疱疹病毒、狂犬病毒、破伤风类毒素IgG ELISA试剂盒及乙肝病毒表面抗原RIA试剂盒分别检测水痘、巨细胞、狂犬、乙肝、破伤风5种特免球蛋白及肌注、静注免疫球蛋白中所含靶抗体效价.结果:由疫苗免疫献血员制备的狂犬、破伤风与乙肝人免疫球蛋白有较高的特异性抗体效价,由筛选高效价血浆制备的巨细胞病毒人免疫球蛋白与其它免疫球蛋白比较,其特异性抗体效价差距较小,人群中也普遍存在水痘病毒与单纯疱疹Ⅰ型病毒感染,其强度较巨细胞病毒弱、较单纯疱疹Ⅱ型病毒强.结论:免疫球蛋白受试品均能检测到7种抗原的靶抗体,其抗体效价水平与主动、被动免疫有关,水痘疫苗能诱导出高效价的抗巨细胞病毒交叉反应抗体,肌注与静注IgG之间存在值得注意的抗体效价差别.
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重组早孕因子与天然早孕因子的免疫交叉反应
目的:探讨细胞表达的重组早孕因子(CHO-EPF)、大肠杆菌表达的重组早孕因子(BL21-EPF)和天然早孕因子(Native EarlyPregnancy Factor,nEPF)之间的免疫交叉反应,寻找制备EPF抗体比较理想的免疫原.方法:采用CHO-EPF、nEPF作为免疫原分别免疫BALB/c小鼠,制备CHO-EPF多抗和nEPF多抗;结合本实验室储备的BL21-EPF鼠单克隆抗体,运用SDS-PAGE、Westernblotting及ELISA等方法对nEPF、CHO-EPF、BL21-EPF之间的免疫交叉反应进行检测.结果:三种来源的EPF诱导抗体的效价比较无显著性差异.原核表达BL21-EPF与nEPF诱导的抗体中BL21-EPF单抗能识别nEPF中26 ku和52 ku组分,且抗nEPF多抗也能与BL21-EPF中10ku组分反应;真核表达CHO-EPF与nEPF诱导的抗体中CHO-EPF多抗能识别nEPF中10ku和26 ku组分,而nEPF抗体不能与CHO-EPF反应;原核表达BL21-EPF与真核表达CHO-EPF诱导的抗体中CHO-EPF多抗能识别BL21-EPF中10ku片段,而BL21-EPF单抗不能与CHO-EPF反应.结论:真核源性CHO-EPF、原核源性BL21-EPF、人源性nEPF之间存在一定的交叉反应,在抗体制备过程中用rEPF替代nEPF作为免疫原是可行的.
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水蛭热刺激分泌物与日本血吸虫成虫可溶性物质的免疫交叉反应性分析
目的 分析水蛭热刺激分泌物(Wp-hs)与日本血吸虫成虫可溶性物质(Sj-Ds)间的共同组分,探讨两者之间免疫交叉反应的物质基础.方法 通过升高温度刺激水蛭虫体产生Wp-hs,同时收集室温放置的水蛭分泌物作为对照,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析Wp-hs与Sj-Ds之间的共同蛋白组分;将这些共同蛋白组分分别与日本血吸虫病患者混合血清、兔抗Wp-hs免疫血清、健康人混合血清进行斑点酶联免疫吸附试验和免疫印迹试验,找出具有免疫交叉反应活性的共同蛋白组分.结果 Wp-hs与Sj-Ds之间存在着分子量(12.6~85.4 kDa)相近的蛋白条带.Wp-hs抗原在21.6~95.4 kDa分子量范围内与日本血吸虫病患者混合血清反应尤为明显,且不与正常人血清反应;Sj-Ds(40.1~89.0 kDa)与兔抗Wp-hs免疫血清能较好的结合.结论 Wp-hs与Sj-Ds之间至少存在3种具有免疫活性的共同蛋白组分.
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蚯蚓与日本血吸虫免疫交叉反应分子机制的初步探讨
目的初步探讨蚯蚓与日本血吸虫免疫交叉反应的分子机制,为研究和解决临床常见寄生蠕虫病相互间免疫交叉反应现象提供理论和实验依据.方法采用噬菌体展示技术(PDT)、饱和硫酸铵溶液梯度盐析法、SDS-PAGE和Western blot,对经12肽库筛选所获蚯蚓与日本血吸虫共同模拟表位以及蚯蚓的盐析沉淀蛋白、蚓激酶和热刺激分泌物的分子成分及免疫活性进行研究.结果获得了3个蚯蚓与日本血吸虫的共同模拟表位,分别包含NSIL、LAET和HT-HI氨基酸序列.蚯蚓与日本血吸虫的共同模拟表位以及蚯蚓的盐析沉淀蛋白、蚓激酶及热刺激分泌物均存在分子量为28.3~97.8 kDa的蛋白带,其中能被日本血吸虫病患者血清识别的反应带对应分子量在61.2~95.1 kDa.结论蚯蚓与日本血吸虫间存在分子量为61.2~95.1 kDa的共同分子成分,该成分中可能部分属于酶类,氨基酸序列可能包含NSIL、LAET和HT-HI片段,该类物质是蚯蚓与日本血吸虫免疫交叉反应的重要分子基础,由此推测,这也许是蠕虫病相互间免疫交叉反应的重要分子基础.
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绵羊脑多头蚴病45m基因在多头绦虫和细粒棘球绦虫不同发育阶段同源性的比较
目的 研究绵羊多头蚴病45M重组蛋白的同源性.方法 将多头蚴的45m基因片段亚克隆到pET41b表达质粒,构建45m-pET41b原核表达系统,诱导表达45M重组蛋白,制备小鼠高免血清,进行免疫印迹试验(Western blot);运用RT-PCR的方法,从多头绦虫的成虫cDNA中分离到45mA.结果 45M蛋白的高免血清可被细粒棘球绦虫不同发育阶段的天然抗原所识别,均在63kD处发生交叉反应;从多头绦虫的成虫cDNA中分离到45m基因的同源基因,命名为45mA(GenBank 号为EU326106),45m和45mA的核酸序列和蛋白序列分别有86% 和76%的同源性;45M和45MA蛋白与细粒棘球蚴的保护性蛋白Eg95有57%的氨基酸同源性.结论 提示45m抗原分子在多头绦虫和细粒棘球绦虫的不同发育阶段均存在,为45M蛋白的免疫原性的分析提供了宝贵的资料.
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幽门螺杆菌感染与胃肠外疾病关系的研究进展
幽门螺杆菌( helicobacter pylori ,Hp)是消化道常见病菌之一,近期流行病学调查表明,我国Hp感染率总体上仍然很高,成人感染率达40%~60%[1]。近年来,随着对Hp致病机制进一步认识, Hp可能与多种胃肠外疾病的发生、发展有关,Hp感染可能参与免疫性血小板减少症( ITP)、缺铁性贫血、代谢综合征、动脉粥样硬化、缺血性脑卒中、糖尿病、胰腺疾病、慢性肝病、皮肤病、自身免疫性疾病等多种胃肠外疾病的发生[2-4],其机制可能是Hp感染参与了慢性炎症、氧化应激、内皮功能紊乱、调节血脂水平、糖耐量异常和胰岛素抵抗、血液高凝状态、血小板聚集、免疫交叉反应的病理过程[5]。本文就Hp感染与胃肠外疾病关系的研究状况进行综述。
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凡纳滨对虾次要过敏原肌质钙结合蛋白的质谱鉴定及免疫交叉反应
[目的]质谱鉴定凡纳滨对虾相对分子质量(Mr)为21 000的次要过敏原组分肌质钙结合蛋白(SCP),分析它与其他虾、蟹等甲壳类过敏原的免疫交叉反应,以阐明SCP可作为甲壳类食物过敏原检测、检验及脱敏的标准过敏原物质.[方法]运用MALDI-TOF/TOF-MS鉴定凡纳滨对虾Mr为21000的过敏原组分,利用软件BLAST、ClustalW分析甲壳类食物中该蛋白的氨基酸序列同源性,同时用纯化的21 000过敏原免疫小鼠制备其特异性多克隆抗体,通过该抗体与其他8种甲壳类食物蛋白粗提液的Western blot法结果分析该过敏原的免疫交叉反应.[结果]质谱鉴定结果显示,凡纳滨对虾21 000过敏原为肌质钙结合蛋白;氨基酸序列同源性分析显示其与斑节对虾、中国对虾、克氏原螯虾、细趾小龙虾、褐虾的SCP序列一致性为81%~100%;Western blot结果显示,针对SCP的特异性多克隆抗体与凡纳滨对虾、刀额新对虾、斑节对虾、口虾蛄、罗氏沼虾、克氏原螯虾、远海梭子蟹、锈斑鲟、中华绒螯蟹粗提液在SCP对应的21 000左右处均有反应条带.[结论]凡纳滨对虾Mr为21 000的次要过敏原为肌质钙结合蛋白,其氨基酸序列与多种甲壳类具有很高的同源性以及较强的免疫交叉反应.
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拟步甲科昆虫不同抗冻蛋白的免疫交叉性分析
目的 利用甲虫小胸鳖甲的抗冻蛋白MpAFP698制备抗血清,分析拟步甲科不同种类昆虫抗冻蛋白的免疫同源性.方法 通过DNA疫苗初次免疫-蛋白质加强的策略免疫新西兰大白兔,先以重组质粒pcDNA3-Mpafp698作为DNA疫苗免疫接种2次,再以融合蛋白His-MpAFP698进行蛋白质加强免疫2次.采用ELISA检测MpAFP698抗体的效价,Western blot法检测抗体的特异性及不同昆虫抗冻蛋白与MpAFP698抗体的免疫交叉反应.结果 兔抗血清的效价可达1∶40万,Western blot结果显示抗血清分别与His-MpAFP698及GST-MpAFP698蛋白有特异性结合,与小胸鳖甲抗冻蛋白MpAFP149、MpAFPS77以及来自不同昆虫的抗冻蛋白ApAPAFP914、OcAFP4有特异性结合.结论 荒漠地区不同甲虫的抗冻蛋白具有相同的抗原表位,可以发生免疫交叉反应.
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锦鲤疱疹病毒病的研究进展
1前言锦鲤疱疹病毒(KHV),属于疱疹病毒科,是双链DNA病毒,有囊膜,与其同科的CHV、CCV之间有免疫交叉反应[1].