医源性输尿管膀胱损伤的预防与处理

目的 探讨妇产科手术引起的医源性输尿管膀胱损伤的原因、预防与处理.方法 回顾性分析1996-2006年笔者所在医院妇产科传统手术引起的31例医源性输尿管膀胱损伤的病因及相应处理的临床资料.结果 良性疾病全子宫切除术输尿管损伤2例,膀胱损伤3例;子宫癌前病变扩大子宫切除术输尿管损伤3例,膀胱损伤2例;恶性肿瘤根治性子宫切除术输尿管损伤5例,膀胱损伤7例;剖宫产术损伤输尿管1例,膀胱损伤8例.术中发现输尿管损伤7例给予断端缝合,膀胱损伤15例给予修补;术后发现输尿管损伤4例,包括输尿管下段梗阻伴患侧肾积水2例,输尿管阴道瘘2例,尽早行输尿管下段膀胱再植术;术后发现膀胱阴道瘘5例,术后3个月行经膀胱瘘管切除修补术.术后随访5个月～10年,全部痊愈.结论 妇产科手术医源性损伤重在预防,及早发现并采取积极有效的措施,可减少并发症的发生.

肝移植术后结核感染的诊断与治疗

目的 总结肝移植术后结核感染的发生率、临床表现和诊治方法.方法 回顾分析246例肝移植患者中术后发生结核感染的3例的临床表现、化验检查结果、影像学资料及诊断和抗结核治疗经过.结果 肝移植术后结核感染的发生率为1.2%(3/246).3例中1例为血行播散型肺结核合并结核性胸膜炎;1例为结核性胸膜炎合并肝脏结核,经抗结核治疗痊愈,未再复发;1例术前有结核空洞,术后合并多种细菌感染和真菌感染,死于肺部感染.3例患者的临床表现均不典型,从症状出现到确诊平均历时30d;血清免疫指标均为阴性,PPD试验仅1例阳性;抗结核治疗安全有效,取得了满意疗效.应用抗结核药后免疫抑制剂血药浓度下降,可通过增加免疫抑制剂剂量后可纠正.无一例患者因抗结核药物的肝毒性而需中断治疗.结论 肝移植术后结核感染在临床表现、诊断及治疗上有其特殊性,早期诊断,合理治疗预后较好.

丙戊酸钠注射液治疗成人难治性癫痫持续状态的临床效果分析

目的 探讨丙戊酸钠注射液治疗地西泮不能控制的难治性癫痫持续状态(RSE)的疗效和安全性.方法 1999年9月-2007年5月连续登记的25例经地西泮静滴,苯巴比妥肌注治疗未能控制的RSE患者,评估其使用丙戊酸钠注射液控制RSE的疗效及不良反应.患者中男性10例,女性15例,平均年龄为55岁.发作类型包括全面强直阵挛发作持续状态(GTCS)14例,复杂部分发作持续状态(C2PS)7例,单纯部分发作持续状态(SPS)2例,肌阵挛持续状态(MS)2例.25例患者中病毒性脑炎13例,停药或不正规服用抗癫痫药物(AEDs)的癫痫患者5例,颅脑手术后3例,脑梗死后2例,中毒后1例,脑瘫1例,其中既往有癫痫病史者9例.结果 丙戊酸钠治疗后,22例患者1h内癫痫持续状态(SE)得到控制,1h后意识基本恢复.治疗前后的血、尿常规,肝、肾功能,心电图及血压、心率、呼吸无明显变化,无脑病发生.3例未控制患者痫性发作频率降低,每次发作持续时间缩短.结论 丙戊酸钠注射液作为非镇静性抗惊厥药物对地西泮未能控制的多种类型的RSE是安全有效的,患者意识恢复较快,没有明显的不良反应.

七氟醚吸入麻醉对喉返神经监控下甲状腺手术的影响

目的 研究吸入不同浓度的七氟醚对甲状腺手术中的喉返神经实时监控下喉返神经肌电活动的影响.方法 20例择期在全麻下行甲状腺部分切除手术的患者,气管插管后采用单纯七氟醚吸入麻醉,将七氟醚呼气末浓度调整为0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6低肺泡有效浓度(MAC)时,观察并记录收缩压、舒张压、心率及喉返神经肌电活动波形的振幅变化(振幅大于100uV时监测有效),同时记录脑电双频指数(BIS)的变化.结果 喉返神经肌电活动振幅随七氟醚呼气末浓度的增高而逐渐降低(P＜0.05),但均大于:140uV,在整个手术、麻醉过程中全组患者的喉返神经实时监控均未中断.七氟醚呼气末浓度低于1.0MAC时,大多数患者的BIS值为43～61;当七氟醚呼气末浓度高于1.0MAC、低于1.4MAC时,全组患者血压、心率与麻醉前相比均有轻度下降(P＜0.05),BIS值为44～46.当七氟醚呼气末浓度高于1.6MAC时,全组患者血压、心率进一步下降,BIS值降至36左右,喉返神经肌电活动波形的振幅均大于140uV;当七氟醚呼气末浓度低于0.1±0.1MAC,BIS值为90～94时,全组患者清醒.结论 静脉快速诱导、单纯七氟醚吸入全麻不会影响喉返神经功能监控的连续性,不但能维持甲状腺手术时血压、心率的平稳,而且苏醒迅速、完全,可在喉返神经监控手术中推广使用.

胰岛素强化治疗对危重症合并高血糖患者外周血单核细胞NF-кB活性的影响

目的 观察胰岛素强化治疗抢救危重症并高血糖过程中外周血单核细胞NF-кB活性的变化及其意义.方法 112例收入内外科ICU病房的高血糖危重症患者(ICU停留时间≥3d)随机分为胰岛素强化治疗组(强化组,n=57,血糖控制在4.4～6.lmmol/L)和胰岛素常规治疗组(常规组,n=55,血糖控制在9.0～11.1mmol/L).两组均于收入ICU后24h、4d、10d空腹抽取肘静脉血2ml,提取外周血单核细胞(PBMC)核蛋白,地高辛标记NF-кB出寡核苷酸探针,电泳迁移率变动法(EMSA)检测NF-кB活性,并对两组间死亡率进行比较.结果 EMSA结果显示,强化治疗组收人ICU后24h、4d、lod NF-кB活性(以凝胶成像分析系统所得光密度值表示)分别为44.69±10.46、34.47±14.32、25.95±11.50,均明显低于常规治疗组(分别为50.37±11.54、43.76±10.27、35.87±9.97,P＜0.05).强化治疗组死亡率(14.0%)明显低于常规治疗组(30.9%,P＜0.05).结论 胰岛素强化治疗能够显著降低危重症合并高血糖患者外周血单核细胞NF-кB的活性,可能是其降低患者死亡率的一个重要原因.

亲属活体供肾移植30例临床分析

目的 总结亲属活体供肾移植的临床经验及其安全性,以及供者选择、供肾摘取手术方式、术前干预措施、配型结果与移植疗效的关系.方法 回顾性分析2002年7月-2007年7月亲属活体肾移植30例,其中夫妻间供肾2例,血缘亲属供肾28例;首次肾移植29例,二次肾移植1例;ABO血型相同28例,相容2例;HIA无错配1例,4位点错配者3例,2位点错配者13例,1位点错配者13例;29例取供者左肾,1例取供者右肾;21例经开放手术取肾,9例手辅助腹腔镜取肾.术后采用环孢素A、硫唑嘌呤(或霉酚酸酯)及泼尼松预防排斥反应.结果 28例受者移植肾功能恢复正常时间为6.3±8.0d;1例因术中发生超急性排斥反应切除移植肾;1例术后移植肾功能未恢复正常,半年后行尸体肾移植.4例在术后发生巨细胞病毒感染,予更昔洛韦治疗后痊愈;1例发生移植肾输尿管膀胱吻合口漏,经充分引流、加强营养支持、预防感染后痊愈;2例术后1个月内发生急性排斥反应,经激素冲击治疗后逆转.全部供者恢复顺利,在10d内出院,术后复查生化指标、肾功能均正常.结论 严格把握供者的选择以及术前对供、受者双方进行全面评估是亲属活体肾移植成功的保证;亲属活体肾移植具有供肾来源广、等肾时间短、组织配型好、供肾缺血时间短等优点,值得临床推广.

胰岛素对人肺腺癌细胞A549的化疗增敏作用

目的 探讨用胰岛素提高人肺腺癌细胞A549生长代谢水平后对其化疗敏感性的影响.方法 采用MTT法检测顺铂对A549细胞抑制率达30%时的药物浓度(IC30),检测胰岛素促进细胞增殖的佳作用浓度和佳作用时间,并检测不同浓度及不同时间胰岛素作用后对A549细胞化疗敏感性的影响.用流式细胞仪测定胰岛素对A549细胞周期的影响.结果 顺铂的IC30约为36.87ug/ml;胰岛素促进细胞增殖的佳作用浓度为4.0～16mU/ml,取8mU/ml为终浓度时,胰岛素促进细胞增殖的佳作用时间为8～16h;胰岛索(2.0～16.OmU/m1,8～16h)可增强顺铂(36.87ug/ml)的细胞毒作用(P＜0.01).流式细胞仪分析显示,胰岛素(8mU/m1)作用4～12h,S期细胞随作用时间延长而逐渐增多,但作用16h后S期细胞数目又逐渐接近于对照组水平.结论 胰岛素可通过提高人肺腺癌细胞A549的生长代谢水平而提高顺铂对该细胞的抑制率,且该作用呈时间和浓度依赖性.

激光激发5-氨基乙酰丙酸己酯对人红白血病耐药/非耐药细胞株的杀伤效应研究

目的 探讨5-氨基乙酰丙酸己酯-光动力疗法(He-ALA-PDT)对人红白血病细胞株K562及其耐阿霉素细胞株K562/ADM的杀伤效应.方法 实验设4组:PDT组(加光敏剂并接受光照)、激光组(不加光敏剂只接受光照)、暗毒性组(只加光敏剂而不接受光照)、正常对照组(不加光敏剂且不接受光照).用不同浓度(0.025、0.1,0.4、1.6rmnol/L)的He-ALA避光孵育细胞,给予不同功率密度(4.5,9、18、36J/cm2)的630nm波长激光照射后,继续培养12h,观察细胞形态学变化,以CCK8法测定细胞存活率,采用甲基纤维素培养体系分析白血病细胞克隆形成能力的变化.结果 暗毒性组、激光组均未对细胞产生明显杀伤作用,而PDT组能明显杀伤白血病细胞,且细胞存活率随He-ALA浓度和激光功率密度的增加而降低,且在相同条件下,K562细胞的存活率显著低于K562/ADM细胞(P＜0.05).PDT组的集落形成率明显低于正常对照组(P＜0.001),且与K562/ADM细胞相比,K562细胞的集落形成率降低程度更为显著(P＜0.001).结论 He-ALA-PDT可杀伤K562、K562/ADM细胞,并显著降低白血病细胞的克隆形成能力;K562/ADM细胞对PDT的反应不如K562细胞敏感.

抗PSMA7单克隆抗体的制备和初步鉴定

目的 制备抗蛋白酶体α7亚基(PBMA7)的单克隆抗体,为PSMA7的功能研究奠定基础.方法 以纯化的重组蛋白PBMA7为抗原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备PSMA7单克隆抗体,并用间接ELSA法和Western bbt法对单克隆抗体的特性进行鉴定.结果 成功建立两株稳定分泌抗PSMA7蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为B013和13001.检测杂交瘤细胞培养上清抗体效价为1:128和1:256,腹水效价为1:25 600和1:32 000.两株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类均为IgG1.Westernblot及免疫组化实验证实,两株单克隆抗体均能特异性结合真核细胞内源性PSMA7蛋白.结论 成功建立了两株效价高、特异性好的抗PSMA7单克隆抗体杂交瘤细胞,制备的单克隆抗体可用于PSMA7蛋白的鉴定,为其生物学功能研究奠定了基础.

急性颅内高压对犬呼吸系统顺应性的影响

目的 探讨急性颅内高压对犬呼吸系统静态容积一压力(P-V)曲线的影响.方法 健康成年杂种犬14只,全麻肌松,控制性机械通气,采用自制双水封瓶加U形管系统测量呼吸系统吸气相静态P-V曲线.8只犬额叶注入自体血凝块形成颅内高压,另6只不注血凝块作为对照.结果 犬急性颅内高压后呼吸系统静态P-V曲线右移,顺应性下降(注血前后比较.P＜0.01);而对照组无明显改变.结论 严重颅脑损伤急性颅内压升高后肺的顺应性下降,易发生呼吸功能障碍.

5-氮杂-2'-脱氧胞苷联合曲古菌素A对人胃癌细胞株化疗敏感性的协同增强作用

目的 探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CAR)联合曲古菌素A(TSA)协同增强人胃癌细胞MKN-74化疗敏感性的作用及机制.方法 以MTT法观察5-Aza-CAR和(或)TSA与氟尿嘧啶(5-FU)、紫杉醇(PTX)、奥沙利铂(OXA)、伊立替康代谢产物SN38或吉西他滨(GEM)联合应用对MKN-74细胞生长的抑制;流式细胞术分析细胞凋亡情况;RT-PCR检测p21、caspase3、Rb和p16基因表达,经Bandsean 4.3分析软件进行条带灰度分析,计算目的 基因与GAPDH灰度比值.结果 5-Aza-CdR联合TSA可进一步增强5-Aza-CdR对5-FU、PTX、OXA或GEM的化疗增敏作用,也可以增强TSA对OXA、GEM的化疗增敏作用.TSA+OXA组、5-Aza-CdR+OXA组与5-Aza-CAR+TSA+OXA组的细胞凋亡率分别为28.07%±2.37%、25.33%±2.84%及38.37%±3.23%;TSA+GEM组、5-Aza-CdR+GEM组与5-Aza-CAR+TSA+GEM组的细胞凋亡率分别为17.20%±2.07%、19.30%±2.95%、29.57%±3.10%(P＜0.05),说明5-Aza-CdR联合TSA协同可以促进OXA或GEM诱导MKN-74细胞凋亡.5-Aza-CAR联合TSA还可以增强caspase3、p16、Rb和p21基因的表达,与对照组(以其灰度值为1.00)相比,4种基因的表达分别为2.67、2.28、2.39和2.75.结论 5-Aza-CAR联合TSA可能通过协同调控基因表达、诱导细胞凋亡,提高胃癌细胞的化疗敏感性.

Survivin siRNA联合紫杉醇对肺癌细胞株的生长抑制作用

目的 探讨survivin siRNA对肺癌A549细胞化疗敏感性的影响.方法 将A549细胞分为siRNA转染组、N-siRNA转染组、阴性对照组、空白对照组,用MTT法检测不同浓度紫杉醇联合siRNA对细胞存活率的影响.将A549细胞分为阴性对照组、sLRNA组、紫杉醇组、siRNA+紫杉醇组,采用MTT法检测siRNA联合紫杉醇作用不同时间对细胞存活率的影响;采用Western blot检测细胞内survivin、p21、PARP蛋白表达变化;采用流式细胞仪分析各组细胞周期和凋亡变化的差异.结果 Survivin siRNA可增加A549细胞对不同浓度紫杉醇的敏感性,但以低浓度(0.1、1、10nmol/L)显著(P＜0.05);survivin siRNA与10nmol/L紫杉醇共同处理A549细胞48h后,对细胞增殖的抑制具有协同或相加的效果(q值分别为1.34、1.03、1.02).siRNA不仅可以抑制.4.549细胞内源性survivin表达还可以抑制紫杉醇诱导的survivin表达,阴性对照组、紫杉醇组、siRNA组和siRNA+紫杉醇组中survivin蛋白条带相对强度分别为0.244、0.99、0、0;survivin siRNA和紫杉醇联合作用后,对凋亡的诱导也有轻度相加作用,阴性对照组、紫杉醇组、sLR-NA组和siRNA+紫杉醇组凋亡率分别为0.47%、9.50%、4.78%、19.81%;与对照组相比,siRNA和紫杉醇联合作用对细胞周期的影响表现为G期、G2/M期细胞增加,S期细胞比率明显减少,对PARP的裂解和p21蛋白的表达也有促进作用.结论 Survivin过表达可能参与了紫杉醇获得性耐药的形成,siRNA阻抑survivin表达是增加肺癌细胞对紫杉醇敏感性的有效途径.

血清MUC1、MUC2及MUCSAC表达与结直肠癌的关系

目的 制备黏蛋白(MUC)检测用蛋白芯片,应用该芯片定量检测结直肠癌患者血清中MUC1、MUC2及MUC5AC含量,探讨其与结直肠癌的关系.方法 利用MUC1、MUC2及MUCSAC的单抗及多抗,制备黏蛋白芯片,采用免疫荧光原理进行检测,并用癌胚抗原(CEA)作为指标,检测30例结直肠癌患者(结直肠癌组)及30例非肿瘤患者与健康成人(对照组)血清MUC的水平.结果 结直肠癌组与对照组比较,血清MUCI(5.25±2.37 us 3.65±1.82U/ml,P＜0.01),MUC2(4.28±2.14 us 2.73±1.63U/ml,P＜0.01),MUC5AC(5.04±3.20 us 3.16±1.57U/ml,P＜0.05)和CEA(8.58±3.48 us 5.36±2.58ug/L,P＜0.05)水平均显著增高.MUC1、MUC2、MUC5AC的阳性表达与结直肠癌分期无关(P＞O.05),而与肿瘤的不同分化程度相关,MUCI、MUC5AC在低分化肿瘤中的表达高于高中分化肿瘤,而MUC2在高中分化肿瘤中阳性表达较多.定量检测血清MUC作为结直肠癌诊断指标的敏感度及特异度均较高,单一MUC中MUCI的敏感度和特异度好,分别达到82.1%、78.1%,而联合诊断(即3种MUC中至少两种阳性)的敏感度和特异度分别达到96.2%、85.3%.结论 应用蛋白芯片技术检测血清MUCl、MUC2及MUCSAC水平,此法诊断结直肠癌的敏感度及特异度较高,可为结直肠癌的早期诊断提供新思路,并对其预后判断提供帮助.

微孔杂交快速检测主要黄病毒方法的建立

目的 建立特异、敏感、实用的登革病毒Ⅰ-Ⅳ型、流行性乙型脑炎病毒及黄热病毒检测及分型方法.方法 在系统分析上述病毒基因组序列基础上,分别设计针对6种病毒的特异性包被探针,扩增、克隆、测序后包被聚乙烯微孔板.随后设计检测用PCR引物,并于引物5'端标记生物素,对待检样品进行扩增后用检测探针进行微孔杂交(PCR-ELISA)反应,并对包被DNA浓度、包被时间、杂交温度、杂交时间等反应条件进行优化.结果 初步建立了微孔杂交快速检测上述病毒的方法,试验结果直观,阳性标本吸光度(A)值在0.5以上,阴性结果A值在0.1以下,S/N值在10.0以上.结论 PCR-ELISA方法敏感、特异,为上述病毒的快速诊断提供了新的方法.

Tempol对浸水束缚应激大鼠胃黏膜p38MAPK活化的影响

目的 研究浸水束缚(WIR)应激大鼠胃黏膜p38MAPK信号转导级联的活化情况及氧自由基对其的影响.方法 雄性ST)大鼠随机分为对照组(n=10)、WIR应激模型组(n=50)和Tempol预处理组(n=20).采用浸水束缚应激方法复制大鼠应激性溃疡损伤模型,术前1h按分组情况给予或不给予氧自由基清除剂Tempol.WIR应激模型组动物于应激后0、5、15、30、45、90、180、360min分批处死,Tempol处理组动物于应激30min和360min处死取材,Westernblot法检测胃黏膜p38MAPK活化情况,并检测胃黏膜组织丙二醛(MDA)活性和促炎性细胞因子的表达情况.结果 胃黏膜组织p38MAPK在应激后15min即开始活化,90min达高峰并且持续活化到应激后360min.提前给予Tempol后抑制了p38MAPK活化,应激后30min及360min大鼠胃黏膜p38MAPK活化水平Tempol处理组(分别为0.77±0.24、0.58±0.12)明显低于模型组(分别为1.22±0.16、1.73±0.09,P＜0.05),且MDA活性和促炎性细胞因子TNF-α、IL-β、CINC-1的mRNA表达都受到抑制.结论 氧自由基介导的p38MAPK活化在浸水束缚应激后早期大鼠胃黏膜损伤中具有重要作用,清除氧自由基可预防和治疗应激后胃黏膜损伤.

人源H5N1亚型禽流感病毒株空斑特性和致病性研究

目的 观察不同H5NI亚型禽流感病毒株空斑特性,对比研究不同空斑类型H5N1病毒致病性和复制能力差异.方法 将不同稀释度的H5N1亚型禽流感病毒株分别接种于MDCK单层细胞,加盖营养琼脂,合适时间染色,观察不同H5NI亚型禽流感病毒株空斑形成特点,按照Dullbecco R的方法计算病毒PFU数;根据空斑大小进行挑选、纯化、筛选不同类型空斑病毒,测定这些病毒对Ba1b/c小鼠致病性差异和在MDCK细胞上复制差异.结果 野生的人源H5N1禽流感病毒株在空斑形成上都存在不同程度的不均一性,空斑大小、形状差异明显:A/Vietnam/1194/2004(H5N1)以大圆形斑为主,夹杂少量小点状斑.A/Beijing/01/03(H5N1)大多数为中等大小空斑,并有少数针尖状斑.野生A/Vietnam/1194/2004经过分离纯化后,得到的两种空斑类型病毒在致病性和复制能力存在明显差异.结论 野生的人源H5N1禽流感病毒株在空斑形成上都存在不同程度的不均一性,从野生病毒株中分离、纯化的大小斑病毒在致病性和复制能力上存在明显差异.

健康青年近端胃功能与胃电活动检测

目的 探讨健康青年近端胃功能和胃电活动的情况并为进一步探讨肥胖、近端胃功能和胃电活动三者间的关系作准备.方法 健康、体重正常青年志愿者35例,男19例,女16例.试验第1天行水负荷试验,试验第2天用电子恒压器检测近端胃功能并同时描记胃电图.结果 饮水负荷试验:女性组饮水量显著小于男性组(P＜0.001).胃感觉阈值:女性组初始容积(IV)和大耐受容积(Mv)均显著小于男性组(P＜0.001).胃内压和胃顺应性:女性组小扩张压(MDP)、初始胃内压(IP)和大耐受胃内压(MP)与男性组差异均无统计学意义(P＞0.05);女性组初始顺应性(IC)小于男性组(P＜0.05),大耐受顺应性(MC)女性组与男性组差异无统计学意义(P＞0.05).胃电图参数:随着胃内压的升高,正常胃电节律百分比呈下降趋势,胃电紊乱增多,主频不稳定性增加,主功率升高.结论 胃容量、胃感觉阈值和初始顺应性有性别差异.不同状态近端胃功能、胃电活动有差异.主功率升高示胃收缩加强.

胃癌细胞株hTERT基因启动子区甲基化分析

目的 检测人端粒酶反转录酶(hTERT)基因启动子区甲基化状态.方法 采用TRAP法检测细胞端粒酶活性,免疫荧光法观察hTERT表达;选择hTERT启动子中-692～-403bp共290bp为靶序列,采取亚硫酸氢钠修饰和测序法(BSP)检测2种胃癌细胞株中靶序列甲基化状态并作分析.结果 端粒酶和hTERT在SGC-7901和BGC-823胃癌细胞株中都有表达;PCR扩增产物测序测出-634～-403bp共232bp,经比对与亚硫酸氢钠转化前源序列对应良好,此序列段26个CpG胞嘧啶中,BGC-823细胞株有25个发生甲基化,SGC-7901细胞株全部发生甲基化,经检索此序列段含2个MZF-2结合域即2个锌指基序,但仅可结合MZF-2一个转录调节因子.结论 高甲基化改变了DNA的空间结构可能是hTERT启动子高甲基化上调hTERT表达的原因之一,从而阻断了MZF-2与锌指基序的结合.

小鼠乳酸脱氢酶C4在大肠杆菌中的可溶性表达与鉴定

目的 构建小鼠精子特异性乳酸脱氢酶CA(mLDHCA)的原核表达载体并进行重组蛋白的纯化.方法 提取小鼠睾丸组织总RNA,反转录合成eDNA.自行设计引物,PCR扩增mLDHCA的编码序列,产物经EcoR I/BamH I双酶切后,克隆至表达载体pET-28a(-+-)中,获得重组载体.将重组载体转化大肠杆菌E coli BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导mLDHCA表达,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和乳酸脱氢酶活性测定方法对重组mLDHCA进行鉴定,Ni1+NTA亲和层析法纯化mLDHCA,并将其与pVAX1-mLDHCA(小鼠 mLDHC4的真核表达载体)免疫小鼠的抗血清进行免疫印迹反应.结果 重组载体经EcoR I/BamH I双酶切后,可释放大小约1000bp的插入片段,序列分析表明,克隆的DNA片段与GenBank登录的mLDHC4编码序列完全一致,将此重组质粒命名为pET-28a(+)-mLDHCA.在IFIY;的诱导下,重组菌可表达大小约35kD的蛋白质,且其裂解液具有很高的乳酸脱氢酶活性,经亲和层析纯化后在聚丙烯酰胺凝肢中仅显示单一蛋白区带,与抗血清反应后在硝酸纤维素膜上形成特异性条带.结论 小鼠mLDHCA的全长编码序列已被克隆至原核表达载体pET-28a(+)质粒,并在E coli BL21(DE3)中获得高效表达,纯化后的蛋白特异性高、活性强.

腺苷后适应对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 初步探讨腺苷后适应对大鼠缺血再灌注损伤心肌的保护作用及机制.方法 48只健康雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)、缺血后处理组(IPTC组)及腺苷后适应组(ADOP组),每组12只,建立大鼠在体心肌缺血再灌注损伤模型.实验终点测定心肌梗死面积(TTC染色),心肌核因子-KB(NF-KB)mRNA的表达水平(RT-PCR),同时观察心肌组织中自细胞介素-6(IL,6)、丙二醛(M13A)及超氧化物歧化酶(SOD)的含量变化,并行心肌组织病理学检查.结果 Sham组心肌组织形态改变不明显,IR组心肌损伤较重,IP'IE组及ADOP组中心肌组织病理学损伤较IR组明显减轻.与IR组比较,AIX)P组的心肌梗死面积、NF一出mRNA的表达水平及Ⅱ,6、MI)A含量明显降低(K0.01),而SOD含量则显著升高(P<:0.01);而ADOP组与IPTC组相比,除NF桲B mRNA的表达及Ⅱ,6的分泌稍许降低(P<0.05)外,其他均无统计学差异(P>0.05).结论 腺苷后适应可通过抑制再灌注后氧自由基的过量生成及NF梤．B活化所诱导的早期炎症反应,增强心肌抗氧化能力,从而发挥保护效应.

融合基因DNA疫苗STxB-VP1和MDC-VP1对CVB3的免疫效果研究

目的 构建融合基因DNA疫苗pcDNA3/STxB-VP1和pcDNA3/MDC-VP1,并免疫小鼠,观察其免疫效果.方法 从痢疾志贺菌PCR扩增志贺毒素B亚单位(STxB)基因片段,用RT-PcR法从小鼠脾细胞扩增巨噬细胞来源的趋化因子(MDC)基因片段.将这两个基因片段分别与柯萨奇病毒B组3型(CVB3)的衣壳蛋白VP1通过一个编码15肽的柔性接头(Linker)相连接,构建真核表达质粒peDNA3/STxB-VP1和pcDNA3/MDC-VP1.120只BAI B/c小鼠随机均分为6组,分别在胫骨前肌注射pcDNA3、pcD-NA3/STxB、pcDNA3/MDC、pcDNA3/VP1、pcDNA3/STxB-VP1和peDNA3/MDC-VP1,每3周1次,共3次.每次免疫后20d检测血清中中和抗体水平,后1次免疫后20d用7LD50的CVB3进行致死性攻击,观察小鼠生存率.结果 成功构建了融合基因疫苗pcD-NA3/STxB-VP1和peDNAa/MDC-VP1.各组小鼠的生存率分别是10%、10%、15%、40%、20%和75%,中和抗体水平及血中病毒滴度均与生存率一致.结论 与pcDNA3/VP1相比,pcDNA3/MDC-VP1可诱导产生高水平的中和抗体,提高小鼠生存率,而peDNA3/STxB-VP1仅诱导出低水平的中和抗体,小鼠的生存率降低.

脓毒症患者外周血鞭毛蛋白含量和单个核细胞TLR5 mRNA表达的测定及其意义

目的 通过检测脓毒症患者外周血鞭毛蛋白的含量及单个核细胞Toll样受体5(TLRS)mRNA的表达,进一步探讨脓毒症致急性肺损伤(ALI)的发病机制.方法 选取经检验科体液镜检或培养证实为G-杆菌所致脓毒症患者(G-菌组)26例,G1球菌所致脓毒症患者(G+菌组)15例,正常对照组为健康人15例:采用ELISA法检测外周血鞭毛蛋白的含量.密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,半定量RT-PCR法检测TLR5 mRNA表达水平.结果 G+菌组、正常对照组的外周血中未检测到鞭毛蛋白,(G-菌组的外周血鞭毛蛋白的含量为6.636±5.147ng/ml;G-菌组TLR mRNA表达水平较G+菌组、正常对照组显著升高(P＜0.01),G+菌组与正常对照组相比无显著性差异(P＞0.05).结论 鞭毛蛋白可能通过TLR5介导参与了AU的发生、发展.

强化胰岛素对严重烧伤大鼠心肌细胞TNF-α表达的抑制作用

目的 探讨强化胰岛素对严重烧伤大鼠心肌细胞僻TNF-α表达的抑制作用及其可能机制.方法 健康雄性SD大鼠18只,右颈静脉及左心室插管,随机均分为3组:假伤组,大鼠给以假烫;烧伤组,制作30%TBSAⅢ度烫伤后,常规给以液体复苏;强化组,烫伤后给以强化胰岛素治疗,液体总量同烫伤组.测定伤后0、1、2、3、4、5、6h的血糖及左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LV-EDP).伤后6h处死动物,留取左心室组织,分别用ELISA和定量PCR法测定TNF-α蛋白及其mRNA水平,Western blot观察p-IкBα口和IкBα变化.同时用烧伤血清培养新生鼠心肌细胞,观察胰岛素及其活化抑制剂LY294002对p-IкBα水平的影响.结果 与假伤组比较,烧伤组动物伤后出现应激性高血糖反应,LVSP降低,LVEDP升高,左心室组织1NF_a蛋白及mRNA水平升高,p-IкBα蛋白表达增高,IкBα蛋白表达降低(P＜0.05或0.01).烧伤大鼠经强化胰岛素治疗后,血糖维持在4.5～5.2mmol/L之间,左心室功能得到明显改善,左心室组织TNF-α蛋白及mRNA水平显著降低,кBα的磷酸化和降解明显减轻(P＜0.05或0.01).LY294002能够消除胰岛素对烧伤血清培养心肌细胞кBα磷酸化的抑制作用.结论 强化胰岛素可能通过减少IкBα的磷酸化降解而降低NF-кB活化,进而抑制心肌细胞TNF-α的转录与表达,发挥改善心肌功能的作用.

MNA、MNA-SF在老年患者营养评价中的应用

小型营养评价法(MNA)是一种专门评价老年人营养状况的方法,2001年又在此基础上提出了更加简便的营养评价精法(MNA-SF).本研究应用MNA、MNA-SF对82例老年患者的营养情况进行了分析,结果表明MNA、MNA-SF有助于检测出有营养不良危险的老年人并及早进行营养干预.

大黄对黄疸型肝炎患者Fas/FasL表达的影响

细胞毒性T细胞(cytotoxicity T lymphoeyte cell,CTLs)介导的细胞免疫在肝炎的发病机制中起重要作用,其主要机制是通过FasL介导Fas阳性的肝细胞凋亡,因此Fas/FasL介导的细胞凋亡与肝炎的发生发展有密切联系.大黄为常用中药,具有泻下、保肝、利胆、消炎、清除内毒素、调节免疫等作用,本实验通过分析大黄对黄疸型肝炎肝坏死后肝组织及血清中Fas/FasL的表达变化特点,阐述大黄保肝、抗炎、退黄的作用机制.

125例慢性乙型肝炎免疫治疗的临床观察

干扰素(IFN-α)治疗慢性乙肝(CHB)疗效肯定,但应答率较低;抗HBV特异性主动免疫疗法(SAI)亦有一定的抗HBV作用.本文采用普通IFNα-1b联合SAI治疗CHB 125例,现将结果报道如下.

HIV合并肺结核、恶性疟疾感染并发黑尿热1例

笔者2006年4-12月在利比里亚维和期间诊治了1例HIV感染合并肺结核、恶性疟疾并发黑尿热的病例,现报道如下.

新型复合膳食纤维治疗老年便秘的临床观察

便秘是老年人的常见病.我国60岁以上老年人便秘的患病率为8.7%～19.5%.便秘还是许多慢性病的诱因.一般认为,日常饮食中膳食纤维摄入不足是老年人便秘的重要原因之一.笔者应用创新生物工程研究所研制的复合膳食纤维,对22例老年便秘患者进行了临床观察,现报道如下.

不同因素对舰艇官兵细胞免疫功能的影响

目的 通过分析年龄、作业环境、电磁波辐射程度、噪声程度、应激紧张程度等因素对舰艇官兵细胞免疫功能的影响,明确导致舰艇官兵细胞免疫功能改变的具体因素.方法 用流式细胞仪对247名舰艇官兵进行T、B、NK淋巴细胞亚群包括CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4/CD8、CD3-CD19+和CD3-CD66+等6项免疫指标的检测,并按上述因素分组,进行统计学相关分析.结果 不同年龄的舰艇官兵其细胞免疫功能无显著性差异(P＞0.05);不同作业环境对机体CD3+、CD3+CD4+、CD31CD8+、CD3-CD19+淋巴细胞均有一定影响;按电磁辐射程度分组,A组CD3+T淋巴细胞计数显著高于C组(P＜0.05);其余各组免疫学指标则无统计学差异.按噪声程度分组,B、C两组CD3+T淋巴细胞低于A组(P＜0.05);C组CD3+CD8+T淋巴细胞低于A组(P＜0.05);B、C两组分别与A组比较,CD3-CD19+B淋巴细胞计数均显著增加(P＜0.01).按应激紧张程度进行分组,结果显示,与C组比较,B组CD3+T淋巴细胞和CD3-CD19+B淋巴细胞均增加(P＜0.05).结论 年龄对舰艇官兵的细胞免疫功能无影响,作业环境、电磁辐射、噪声和应激紧张等因素对舰艇官兵的细胞免疫功能均有影响.

转化生长因子β1经鼻三叉神经通路入脑研究

目的 通过经鼻给予大鼠转化生长因子岛(TGF-β1)来探讨药物经鼻三叉神经通路人脑的可能性.方法 将健康雄性SD大鼠19只,随机分为对照组(n=6)和经鼻给药(IN)0.5h组(n=3)、lh组(n=4)、2h组(n=3)、6h组(n=3),即在经鼻给予50ul(20vg)TGF-β1后0.5、1、2、6h处死动物;对照组为不给药大鼠.取各组大鼠动脉血以及小脑、中脑、脑桥、延髓、上颈髓组织和双侧三叉神经,采用ELISA法检测各样本内TGF-β1含量.结果 与对照组(15.01±1.50pg/ng)相比,IN 0.5、1、2、6h组大鼠三叉神经TGF-β1脚含量均显著提高(P＜0.05),lh(75.46±12.50pg/mg)达高峰.IN lh组大鼠延髓TGF-β1含量为7.57土1.75pg/mg,与对照组(3.30±0.35pg/mg)相比显著提高(P＜0.01),脑桥TGF-β1含量(5.92±0.92eg/mg)与对照组(3.41±0.24pg/mg)比较无统计学意义.各实验组大鼠小脑、中脑、上颈髓及血浆中TGF-β1,的含量在给药前后均无显著改变.结论 经鼻给予TGF-β1后药物可绕过血-脑脊液屏障快速进人三叉神经,并沿三叉神经通路逆行转运至延髓等中枢神经系统(CNS),此种给药途径为治疗三叉神经及CNS疾病提供了一条新的思路.

颅脑外伤后晚发型癫痫患者认知损害和磁共振弥散张量研究

目的 分析颅脑外伤后晚发型癫痫患者的临床特点、认知功能及弥散张量成像技术在显示脑损害中的作用.方法 对1999年6月-2007年8月在解放军总医院癫痫门诊就诊的175例颅脑外伤后晚发型癫痫患者,将其分为有明确病灶组和无明确病灶组,并对其临床资料进行分析;再取其中37例癫痫患者作为癫痫组,39例健康人作为正常对照组,对癫痫组和正常对照组进行认知功能检查,并对癫痫组患者中的13例进行磁共振弥散张量(DTI)检查.结果 颅脑外伤后晚发型癫痫患者中有明确病灶组和无明确病灶组患者单纯部分发作或复杂部分发作的发作频率均显著高于部分继发全面性发作,差异具有统计学意义(P＜0.01),而比较两组间各发作类型的发作频率,差异无统计学意义(P＞0.05).颅脑外伤后晚发型癫痫组患者VIQ、PIQ、FIQ得分均明显低于对照组(P＜0.01),差异具有统计学意义.癫痫组imin之内说的蔬菜、动物、水果及总均数均明显低于正常对照组;数字广度、数字符号得分明显低于正常对照组;癫痫组较对照组Stroop试验反应时明显延长(P＜0.01).DTI研究可见在T2加权像病灶中心部位呈长T2信号,MD值明显增高、FA值明显减低.病灶周边T2加权像看似正常的白质(NAWM),其MD值高于、FA值低于对侧相应白质区域(P＜0.05).结论 颅脑外伤后晚发型癫痫患者存在广泛的认知功能损害,DTI成像能发现脑白质早期病变,尤其是能够显示T2加权像看似正常白质的细微病理改变.

补体片段C4d与实体器官移植排斥反应

近年来,细胞免疫和体液免疫两种机制同时参与实体器官移植排斥反应的理论越来越被人们所认可.

内皮祖细胞的研究进展

内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)是血管内皮细胞的前体细胞,在生理或病理因素刺激下,可从骨髓被动员到外周血进行损伤修复.

高原缺氧环境化学毒剂伤的伤情特点

有毒化学品在生产、储存、运输、使用过程中若发生泄漏,可能引发化学事故甚至酿成化学灾害.部分剧毒化学物质如沙林、梭曼、氰氢酸等甚至被外军、国际恐怖主义组织用作战争或者恐怖袭击的武器,可造成大批人员伤亡从而达到削弱对方有生力量或威胁社会安全的目的.因此,化学毒剂伤的防治问题,已引起社会的广泛重视[1].

胶原诱导性关节炎伴贫血大鼠模型的建立及沙利度胺对其血红蛋白的影响

目的 建立胶原诱导性关节炎(CIA)伴贫血大鼠模型,并研究沙利度胺对其血红蛋白的影响.方法 128只雄性Wist-ar大鼠随机分为5组:Ⅰ组(正常对照组,n=24)、Ⅱ组(模型组,n=26)、Ⅲ组(模型+沙利度胺高剂量组,n=26,200mg·kg-1·d-1)、Ⅳ组(模型+沙利度胺低剂量组,n=26,100mg·kg-1·d-1)、V组(模型+甲氨蝶呤组,n=26,每周2.7mg/kg).每组再按不同免疫后不同时间点各分为14、21、28、35、42、60d 6个亚组.模型组大鼠皮内多点、分次注射Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂,建立CIA伴贫血大鼠模型.对Ⅰ、Ⅱ组大鼠红细胞生成素(鳓、血清铁(SI)、总铁结合力(TIBC),骨髓形态学及骨髓内、外铁的情况进行观察与测定.造模后12d给药,观察大鼠血红蛋白水平的变化.结果 Ⅱ组大鼠在造模后28d出现贫血,与Ⅰ组比较,血红蛋白水平明显降低(P＜0.05),贫血表现为SI、TIBC、骨髓内铁降低,血清铁蛋白水平升高(P＜0.05),而骨髓外铁无显著变化.造模后60dⅢ组大鼠血红蛋白水平明显高于Ⅱ组(P＜0.05).结论 通过改良CIA大鼠模型的方法,可成功建立关节炎伴贫血的大鼠模型,关节炎越明显,贫血越显著.沙利度胺能够改善关节炎大鼠的贫血情况,为RA患者的临床治疗提供了实验依据.

纳米疫苗经不同途径给药后的抗肿瘤免疫学效应比较

目的 比较纳米乳剂包裹的复合抗原NE(MHS)经不同途径免疫小鼠后的抗肿瘤免疫学效应,探索肿瘤疫苗有效的给药途径.方法 采用磁力超声法制备纳米疫苗NE(MHS)(融合蛋白MAGE1-HSP70和超抗原SEA按摩尔比100:1混合),评价其粒径、包裹率及稳定性.以NE(MHS)经口服、皮下、静脉和腹腔注射4种途径免疫C57BL/6小鼠,IFN-γELIJSPOT和LDH杀伤实验检测小鼠特异性细胞免疫反应情况,肿瘤治疗、攻击实验比较4种不同途径免疫的抗肿瘤效应.结果 所制备纳米乳剂为乳白色均质胶体混悬液,粒径为20+5nm,包裹率为87%.B16-MAGEl接种后第28天,口服免疫组小鼠肿瘤体积明显大于其他3组(P＜0.05),而小鼠脾淋巴细胞中分泌IFN-7的特异性T淋巴细胞频数及对B16-MAGEl的杀伤效果、荷瘤小鼠的生存期、小鼠成瘤时间等4组间两两比较均无统计学差异.结论 纳米乳剂疫苗NE(MHS)经不同途径给药后对小鼠的抗肿瘤免疫学效应相近,表明其适用于多种途径给药(包括口服),是一种使用方便的肿瘤基因工程纳米疫苗.

微创外科时代的外科医生:"天之骄子"还是"迷途的羔羊"?

21世纪的又一个年头过去了,这应该是一个"神奇"的世纪,我们的"嫦娥一号"正在太空中遨游,作为现时代的外科医生(尤其是普通外科医生),我们又有何感受呢?外科医生素来是让人肃然起敬而又略感神秘的,他们担负着救死扶伤、帮助病人摆脱困境的职责,同时又正承受着时代的压力,须从转变中选择自己的道路.

病例8 反复心悸、上腹胀痛

病历摘要患者女,53岁,因"反复心悸气促3年,上腹胀痛1年,症状加重5天"于2005年12月4日入院.患者于2002年开始活动后感心悸气促,持续十余分钟至数小时不等,无头晕头疼,无心前区疼痛.双下肢不肿,夜间可以平卧.在我院门诊用"消心痛"后心悸可缓解,但上述症状反复发作.2004年患者感上腹部胀痛,间断发作,进食后加重.

书讯

缺氧复合氰化钠中毒对大鼠心功能的影响

目的 研究缺氧复合NaCN中毒对大鼠心功能的影响.方法 雄性SD大鼠84只,随机均分为平原实验组和高原实验组.平原实验组大鼠在常规实验室内进行实验,高原实验组大鼠置4000m低压舱中预处理3d后开始实验.两组各取6只大鼠麻醉后进行气管和左侧颈总动脉插管,术后静待30min后,背部皮下注射NaCN 3.6mg/kg,记录中毒前:10min(-10min)、中毒即刻及中毒后10、20、30、40、50、60、90min各时相点左心室收缩压峰值(mLVSP)、左心室压力上升大速率(+dp/dtmax)和心率(HR);余下两组各36只大鼠皮下注射3.6mg/kg NaCN,于中毒即刻及中毒后0.5、1、2、4、6h取动脉血测定心肌酶谱(AST、LDH、CK、CK-MB).结果 与平原实验组比较,高原实验组大鼠NaCN中毒后mLVSP、+dp/dtmax、HR、心肌酶谱的变化更为明显且更难以恢复正常.心肌酶谱中以LDH变化为显著,这与缺氧环境下无氧呼吸相应增强一致.结论 高原缺氧后NaCN中毒对大鼠心脏功能影响较平原更为严重,需要进一步探索相应的防治措施.

高原缺氧对氰离子代谢的影响及其中毒机制研究

目的 研究高原缺氧对氰离子代谢的影响,并探讨其中毒机制.方法 家兔12只,雄性SD大鼠72只,分别随机均分为平原和高原氰化钠中毒组.家兔背部皮下注射2mg/kg氰化钠,分别于中毒后0、5、7、10、20、30、60、120min取股静脉血检测血氰、血红蛋白及高铁血红蛋白含量.大鼠背部皮下注射3.6mg/kg氰化钠,分别于中毒后0、0.5、1、2、4、6h取心脏血及肝脏组织,测定血氰含量及细胞色素氧化酶活性,并进行肝脏病理组织学检查.结果 家兔氰化钠中毒代谢动力学呈一室模型.大鼠平原及高原氰化钠中毒后血液中氰离子浓度均在30min达到高值,细胞色素氧化酶活性降低.肝脏病理学检查表明高原缺氧复合氰化钠中毒导致的肝脏损伤重于平原氰化钠中毒.结论 高原缺氧可明显影响氰化钠在体内的代谢过程,加重其对细胞色素氧化酶活力的抑制,引起更为严重的病理损伤.

缺氧复合氰化钠中毒对大鼠BALF和肺组织磷脂含量的影响

目的 研究缺氧合并氰化钠(NaCN)中毒对大鼠肺支气管灌洗液(BALF)和肺组织中磷脂含量的影响.方法 雄性SD大鼠72只,随机分为平原实验组和高原实验组.高原实验组动物置于低压舱(4000m,61kPa,舱内温度20土3℃)内,平原实验组置于普通试验室(海拔308m,大气压97.7kPa,室温20+3℃)内3d后进行实验.每组设0、0.5、1、2、4、6h等6个观测点,Oh时点大鼠不注射NaCN,其余大鼠腹腔注射NaCN(3.6mg/kg),于注射后0,0.5、1、2、4h和6h时点放血处死动物,取全肺,分别检测肺/体比值,肺干/湿重比,制取BALF及肺组织匀浆,定磷法测总磷脂(TPL)含量.结果 高原实验组部分大鼠鼻腔有少量泡沫状血性分泌物流出,注射后1h内3只动物中毒死亡.平原实验组大鼠NaCN中毒后,肺/体比值、肺干/湿重比、BALF中TPL含量显著增加(P＜0.05),而肺组织中TPL含量明显降低(P＜0.05).高原实验组大鼠NaCN中毒后,肺/体比值、肺干/湿重比、BALF中TPL含量增加更显著(P＜0.05),肺组织中TPL含量降低更明显(P＜0.05).结论 缺氧和氰化物中毒可能对肺组织存在联合损伤效应.