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对人禽流感不必过多恐慌
2008年12月24日,家住北京市朝阳区三间房的19岁女孩黄燕清,出现类似感冒发烧的症状.12月27日症状加重后入院治疗,经全力救治无效,于2009年1月5日7时20分死亡.经过北京市疾病预防控制中心、军事医学科学院的平行检测,以及中国疾病预防控制中心的复核检测,死者样本显示禽流感病毒(H5N1)核酸阳性.
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2014年春季济南市活禽交易市场与饲养环境禽流感病毒污染情况调查
目的 了解济南市禽类交易市场与饲养环境禽流感病毒污染状况,为防控人感染禽流感提供科学依据.方法 2014年在流感高发的春季采集活禽交易市场和养殖场所环境标本,用实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测禽流感病毒FIuA、H5、H9、H7、N1、N2、N9.结果 活禽市场H5N1检出率为25.32％,其中粪便标本H5H1检出率为24.14％,禽类污水H5H1检出率为25.00％,涂抹笼具表面H5H1检出率为26.92％,H9、H7未检出.养殖场所H5、H7、H9均未检出阳性标本.结论 济南市不同活禽交易市场、饲养环境H5N1禽流感病毒污染存在差异.
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2012年全球动物与人相关流行性感冒病毒感染人类的新情况
1人感染高致病性禽流感(H5N1)1.1 时间和地区分布2012年,尽管一些国家家禽病毒持续广泛流行,但实验室确诊的人感染高致病性禽流感(H5N1)病例数下降.从2009年的73例、2010年的48例和2011年的62例下降到2012年的32例.32例人感染高致病性禽流感(H5N1)病例中有11例发生在埃及,9例发生在印度尼西亚,4例发生在越南,3例发生在柬埔寨,3例发生在孟加拉国,2例在中国.根据联合国粮农组织(FAO)情报,高致病性禽流感(H5N1)病毒在孟加拉国、中国和越南的家禽中呈地方性流行.埃及和印度尼西亚官方宣布高致病性禽流感(H5N1)病毒在家禽中呈地方性流行.近柬埔寨巴斯德研究所研究表明该病毒在柬埔寨家禽中也呈地方性流行.2012年所有报告人感染禽流感病例的国家以前都曾报告过.
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禽流感病毒H5N1对卫生工作人员的危险
2003年7月以来,东南亚许多国家发生了高致病性禽流感疫情暴发,包括越南、泰国、印度尼西亚、柬埔寨、老挝、韩国、日本、马来西亚和中国.2006年2月8日,非洲尼日利亚北部也出现了H5N1禽流感疫情.自1997年发生高致病性禽流感病毒H5N1感染人以来,以往的禽流感病毒不能直接感染人类,也不能在人体内有效繁殖的观念得以改变.继之的禽流感病毒H9N2和H7N7直接感染人,使人们担心可能发生世界性流感大流行.
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人感染H5N1型高致病性禽流感的临床特征分析
目的 认识人禽流感的临床特征,为人感染H5N1型高致病性禽流感的症状监测和疾病监测的完善提供循证依据.方法 以规定检索词在常用中、英文数据库中检索并严格按照纳入排除标准纳入文献.将纳入文献的研究病例汇集后分析其症状、体征、常见实验室检查、影像学改变及其并发症等临床特征发生的概率.结果 经过严格筛选共纳入文献32篇,其中中文文献11篇,英文文献21篇,汇集研究病例236例.质量评价得分中位数为31分,53.1%的文献质量评价得分>30分.人禽流感的症状及体征主要为发热(体温>38℃)、咳嗽、呼吸频率增快和呼吸困难,实验室检查主要为外周血白细胞数和淋巴细胞绝对数的减少,影像学改变以浸润、实变等肺炎改变为主,重症人禽流感患者易出现的并发症为急性呼吸窘迫综合征.结论 加强临床医生对人禽流感患者非呼吸系统的临床表现的认识,可提高对禽流感病例早期筛查的准确性.
关键词： H5N1 人感染高致病性禽流感 临床特征 系统综述 -
泛太平洋西岸地区部分H5N1亚型禽流感病毒毒株血凝素基因特性的研究
目的 了解泛太平洋西岸各个国家H5N1亚型人禽流感病毒血凝素(HA)基因分子特征,寻求HA基因变异规律.方法 从Genebank中下载泛太平洋西岸国家或地区(包括泰国、越南、香港、印度尼西亚、中国大陆、蒙古、俄罗斯)50株H5N1亚型高致病性流感病毒(HAPI)毒株血凝素基因序列,利用生物信息学软件DNASTAR 5.0进行核酸同源性分析,用MEGA 3.1进行核酸和氨基酸序列比对和进化树分析.结果 50株高致病性H5N1亚型流感病毒毒株可以分成3个相对独立的进化簇.第1簇为泰国越南簇;第2簇为中国印尼北亚簇(包含中国、印度尼西亚、蒙古以及俄罗斯);第3簇主要为1996～2001年期间分离的毒株,该簇毒株HA基因与Gs/Gd like毒株核酸同源性更为接近,其基因亚型更多表现为Gs/Gd like或其他基因亚型.HA基因分子特征分析表明在HA蛋白抗原性上,泰国越南分离株表现基本一致,而其他地域分离株存在表现各异,但也存在地域的一致性.结论 泛太平洋西岸地区分离的H5N1亚型禽流感病毒血凝素蛋白在分子特征上表现出一定的地域特异性,在一定地域范围内保持一致性.
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如何进行人感染禽流感H5N1病例的感染来源调查
为了给参与禽流感病例现场流行病学调查的专业人员提供参考,本研究对我国2005年以来确诊的40例禽流感病例的调查结果进行汇总分析,结果显示3例(7.50％)暴露史不详,21例(52.50％)有直接或间接接触病死禽史,14例(35.00％)有活禽市场或禽类制品暴露史,2例(5.00％)有与同类病例接触史.有病死禽暴露史的病例主要与居住在农村(95.24％)、住家或附近环境(85.71％)、成年人(66.67％)、女性(66.67％)和家务劳动(61.90％)等线索有关;有活禽市场或禽类制品暴露史的病例主要与成年人(85.71％)、居住在城市(78.57％)和饮食习惯(50.0％)等线索有关.既往现场调查经验提示,任何一例禽流感新发病例均可能具有与既往病例完全不同的特点,开展感染来源调查应结合实际情况灵活运用调查方法.
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H5N1型流感疫苗的开发进展
自2003年以来,H5N1亚型高致病性禽流感在禽间广泛传播,并造成人类持续感染,已经在60多个国家和地区分离到高致病性禽流感病毒.
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中国大陆首例人感染禽流感病毒(H5N1)的调查与确认
目的确认2005年10月湖南省湘潭县发生的一起家庭聚集性(姐弟二人)不明原因肺炎病例的病因.方法访谈病例发病前后的相关知情人,重现病家暴露环境及发病时间序列,查阅临床病志,对病例和病死禽的密切接触者进行医学观察.采集病例咽拭子,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和实时荧光定量PCR法,检测A/H5N1亚型特异的核酸片段,接种SPF鸡胚进行病毒分离.应用马血球血凝抑制试验和微量中和试验检测患者急性期和恢复期血清抗A/H5特异性抗体滴度.结果姐(病例1)弟(病例2)二人分别在其家鸡开始死亡2天和4天后出现发热和肺炎症状,病例1死于急性呼吸窘迫综合征和多器官功能衰竭,病例2痊愈.病例1病后第8天的血清A/H5抗体阴性,病例2急性期和恢复期血清抗体滴度呈4倍以上升高.192名密切接触者中,仅1名(接诊过病例1的医生)出现上呼吸道症状,但血清标本经微量中和试验阴性.结论病例2为中国大陆第一例感染禽流感病毒(H5N1)的确诊病例,病例1为临床诊断病例.二者发病可能是感染了相同家庭环境中病死禽传播的H5N1病毒,调查中未发现两病例之间有互相传播的证据.
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一例孕妇感染禽流感病毒(H5N1)死亡的调查
目的探讨2005年11月安徽省铜陵市人民医院报告的一例不明原因肺炎孕妇死亡的病因.方法访谈病例发病前后的相关知情人,查阅临床病志,对病例和病死禽的密切接触者进行医学观察.采集病例的气管吸取物,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和实时荧光定量PCR法,检测A/H5N1亚型特异的核酸片段,接种SPF鸡胚进行病毒分离.结果病例发病前4天有明确的病死禽直接暴露史,病例和病死禽的122名密切接触者经10天医学观察均健康.病毒性肺炎伴血白细 胞和淋巴细胞计数的显著下降,迅速进展的呼吸衰竭和多器官衰竭是其主要临床特征.病例的气管吸取物A/H5N1的HA和NA基因阳性,分离到的A/Anhui/1/2005(H5N1)的8个基因节段均为禽源的,血凝素抗原的受体链接肽仍为多个碱性氨基酸.结论该病例为首次报告感染禽流感病毒(H5N1)发病、死亡的孕妇.孕妇妊娠期间的免疫耐受状态可能是导致其感染,引起相应临床表现和进程的重要原因.
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广州市禽类从业人群禽流感病毒感染特征分析
目的 应用血清流行病学调查广州市禽类从业人群感染禽流感病毒H5N1、H9N2、H7N7的状况,分析其感染特征.方法 采集广州市与禽类接触相关的职业人群血清,包括农贸市场活禽零售与非禽类零售人群、企业化家禽养殖与农村家禽散养人群、活禽批发市场人群、野生鸟驯养人群、生猪屠宰人群以及一般人群,用血凝抑制试验、中和抗体试验检测H5、H9、H7 IgG抗体;使用logistic回归分析、χ2检验分析感染率分布.结果 2881名调查对象中检测出4例H5抗体阳性(0.14%);146例H9抗体阳性(5.07%),其中以活禽零售人群H9感染率高(14.96%),企业化家禽养殖人群为8.90%,活禽批发人群为6.69%,野生鸟驯养人群为3.75%,生猪养殖人群为2.40%,非禽类零售人群为2.21%,农村家禽散养人群为1.77%,一般人群为2.30%.而1926名禽类从业人群中H7抗体均为阴性.结论 人群中H5感染率较低,而H9感染率较高,未检测到H7感染;活禽零售、家禽批发、企业化家禽养殖等职业具有较高感染禽流感病毒的风险,其中以活禽零售感染风险高,且接触家禽时间越长感染风险越高.
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人禽流感诊疗方案(2008版)
人感染高致病性禽流感A(H5N1)(简称"人禽流感")是人类在接触该病毒感染的病/死禽或暴露在被A(H5N1)污染的环境后发生的感染.在2003年下半年世界上多个国家爆发家禽和野生禽类的A(H5N1)病毒感染,其中有14个国家出现人禽流感病例.截止至2008年1月15日,由世界卫生组织报道的全球确诊病例共350例,其中217例患者死亡,病死率高达62.0%[1].
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众生丸在小鼠体内抗H5N1亚型禽流感病毒的实验研究
目的:研究众生丸在小鼠体内对禽流感病毒H5N1亚型的抑制作用.方法:以达菲为阳性对照,观察众生丸对小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用和对染毒小鼠的死亡保护作用,从而判定其抗流感病毒作用.结果:与病毒对照组相比较,众生丸可降低禽流感病毒性肺炎小鼠肺指数,调节T淋巴细胞亚群,降低小鼠血清中TNF-α含量,促进IFN-γ和IL-10产生,减轻肺问质、肺泡内炎症;众生丸低剂量组对H5N1亚型禽流感病毒所致小鼠的死亡有降低作用,并延长生存时间.结论:众生丸对H5N1禽流感病毒感染小鼠所致肺病变具有抑制作用.
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人禽流感诊疗方案(2008版)
人感染高致病性禽流感A(H5N1)(简称"人禽流感")是人类在接触该病毒感染的病/死禽或暴露在被A(H5N1)病毒污染的环境后发生的感染.在2003年下半年世界上多个国家爆发家禽和野生禽类的A(H5N1)病毒感染,其中有14个国家出现人禽流感病例.截至2008年1月15日,由世界卫生组织报道的全球确诊病例共350例,其中217例患者死亡,病死率高达62.0%[1].我国大陆从2005年10月底确诊第一例人禽流感病例以来,现已确诊30例,其中17例患者死亡,病死率为66.7%[1].
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表达人高致病性禽流感病毒H5N1(安徽株)结构基因的DNA疫苗在小鼠中诱导的免疫应答分析
本研究旨在研发经济、高效的人高致病性禽流感病毒H5N1实验疫苗并优化免疫方案.首先优化并合成H5N1(安徽株)的血凝素基因(HAop)和神经氨酸酶基因(NAop)并证实其正确表达,再构建含有H5N1(安徽株)结构基因的多个单顺反子(HAwt、HAop和NAop)和双顺反子(HAop/M2和NAop/M1)DNA疫苗质粒.随后,采用不同途径的体内电转法在第0周和第3周2次免疫Balb/C小鼠,初步分析了抗原特异性体液免疫(HA血凝抑制抗体,NA特异性抗体,中和抗体)和细胞免疫应答(IFN-γ ELISpot)的特点.结果表明;含有优化血凝素基因(HAop)和优化神经氨酸酶基因(NAop)的DNA疫苗可以快速激发较强的免疫应答,尤其是细胞免疫应答;皮内电转所激发的体液免疫应答强于肌肉电转.本研究为新型H5N1疫苗的研发以及免疫方案的优化奠定了基础.
关键词： 人高致病性禽流感病毒 H5N1 DNA疫苗 体内电转 -
H5N1禽流感病毒血凝素抗原快速检测试剂对不同现场标本的检测比较
利用H5亚型禽流感病毒血凝素抗原快速检测试剂"H5-HA(Ag)Dot-ELISA(H5-Dot)"对来自陆禽、水禽的484份气管拭子、泄殖腔拭子和粪便拭子标本进行检测,结果:①不同采集方式的H5N1阳性标本的检出率高低有别,气管拭子的检出率高,泄殖腔拭子次之,粪便拭子低(P＜0.05),因此建议现场采样时应尽可能采集气管拭子标本;②陆禽标本检出率显著高于水禽标本(P＜0.05),对病毒培养阳性的陆禽气管拭子检出率达80%(95%CI:70.6%～87.8%),对水禽气管拭子标本的检出率为38%(95%CI:26.9%～49.4%),可能与标本中病毒滴度高低有关;③有症状与无症状陆禽标本的检出率无显著差异.另外,H5-Dot试剂对333份非H5病毒气管拭子标本的特异性为99.4%(95%CI:97.9%～99.9%).这些结果表明,H5-Dot是一种较为可靠的H5亚型禽流感病毒早期快速检测方法,在缺乏仪器设施和高素质专业技术人员的H5N1禽流感病毒防控第一线具有重要推广价值.
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密码子优化的人H5N1流感病毒HA基因在哺乳动物细胞中获得高效表达
为了提高人禽流感病毒血凝素HA的表达量,应对流感大流行疫苗的需求,按照人的偏爱密码子将H5N1(A/Anhui/1/2005)流感病毒的HA基因进行优化改造,经全基因合成后插人到真核表达载体pDC315中,构建了真核表达质粒pDC315-Mod.HA;将此质粒和含野生HA基因的真核表达质粒pDC315-Wt.HA分别转染293T细胞,比较HA蛋白的表达量.结果表明:经间接免疫荧光实验及Western blot实验比较和鉴定,密码子优化后,HA蛋白在293T细胞中的表达水平显著提高,为流感大流行疫苗的研究打下了基础.
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深圳市首例人感染H5N1病毒病例的实验室诊断及分子特点分析
对深圳首例疑似人禽流感病人的标本,进行了RT-PCR、Real-time PCR检测及病毒分离培养、血清中和试验、抗原比检测及发病早期不同病程多份标本的病毒载量分析;对分离物进行了HA基因、NA基因及M基因的核酸检测.结果表明:患者气管吸出物的H5N1亚型和A型流感病毒的特异核酸均呈阳性,并通过细胞培养分离到禽流感病毒A/Guangdong/2/06(H5N1)株.气管吸取物病毒载量随着病程延长逐渐减少,而血清中和抗体水平逐渐上升达到1∶160之后又缓缓下降.A/Guangdong/2/06株8个片段的核苷酸序列显示,其与2005～2006年中国南部的禽流感分离株高度同源,与越南、泰国、印度尼西亚等分离到的禽流感分离株存在明显的差异.
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一种新型H5N1禽流感病毒血凝素抗原快速检测试剂的建立
利用5株广谱特异性抗H5亚型血凝素单克隆抗体和酶联免疫渗滤技术成功地建立了一种适于现场检测H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白的抗原快速检测试剂H5-HA(Ag) Dot-ELISA.该试剂对41株代表当前亚洲地区流行的各种遗传变异亚系H5N1禽流感病毒检测均为阳性,对多数毒株的分析灵敏度优于0.1 个血凝滴度 (HA titer),其中部分优于0.01 个血凝滴度;比较该试剂与早期开发的同类ELISA试剂,发现前者对后者未能检出的H5N1新变异株检测均为阳性;利用该试剂和商品化Directigen Flu A(BD)试剂检测两株H5N1病毒株,提示前者灵敏度高于后者;该试剂对一株H5N1病毒的检测灵敏度与标准RT-PCR相当;该试剂对24株非H5亚型病毒检测均为阴性,显示出良好特异性.以上结果提示,此研究建立的H5N1病毒抗原快速检测试剂在H5禽流感现场检测上具有较好的应用前景.
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HA基因322位和329位氨基酸对H5N1亚型禽流感病毒毒力的影响
A/mallard/Huadong/S/2005(S,IVPI=2.65)和A/mallard/Huadong/Y/2003(Y,IVPI=O),是对麻鸭具有不同致病力的病毒.两病毒的HA裂解位点区有2个氨基酸差异,S病毒在HA裂解位点区322是Leu(L322),329位缺失(-329),而Y病毒322位是Gin(Q 322),329位是Lys(K329).根据这两个位点的差异,利用反向遗传系统,以S和Y病毒各自为骨架,拯救HA基因突变病毒,检测获救的突变病毒对麻鸭的毒力.可以得知,以S病毒为骨架,将S病毒HA基因322位Leu替换为Gln和(或)在329位添加Lys,以及用Y病毒的HA(Q322L,K329-)替换S病毒HA,获救的重组病毒对麻鸭亦完全无致病力;但以Y病毒为骨架,将Y病毒HA基因322位Gln替换为Leu和(或)在329位缺失Lys后,Y重组病毒对麻鸭的毒力上升.结果提示,S和Y病毒HA基因裂解位点区322和329氨基酸残基突变或缺失均影响病毒对麻鸭的致病力,且HA基因与其它基因的匹配性显著影响病毒对麻鸭的致病力.
