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黄连解毒汤乙酸乙酯提取物对光滑念珠菌黏附作用的影响
目的:探讨黄连解毒汤乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extract of Huanglian Jiedu decoction,EAHD)对光滑念珠菌Candida glabrata黏附作用的影响.方法:采用二倍稀释法测定黄连解毒汤乙酸乙酯提取物对光滑念珠菌的低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC);采用XTF还原法评价EAHD对光滑念珠菌黏附作用的影响;利用倒置显微镜、扫描电子显微镜与荧光显微镜观察EAHD对光滑念珠菌早期黏附形态学影响;采用半定量与实时荧光定量PCR检测其黏附相关基因EPA1,EPA6和EPA7的表达量.结果:EAHD对光滑念珠菌的MIC为320 mg·L-1,阳性对照药氟康唑对光滑念珠菌的MIC为1 mg· L-1;EAHD对光滑念珠菌2,4h的黏附的干预作用较明显,其中对4h效果优于2 h;PCR结果显示EAHD可显著抑制EPA1,EPA6和EPA7的表达.结论:EAHD可能通过抑制光滑念珠菌部分黏附基因的表达而抑制其早期黏附.
关键词： 黄连解毒汤乙酸乙酯提取物(EAHD) 光滑念珠菌 黏附 -
鳖甲煎丸抑制肝癌细胞增殖、黏附及侵袭作用的实验研究
目的 研究鳖甲煎丸对肝癌细胞生长增殖、黏附及侵袭能力的影响,初步探讨鳖甲煎丸抗肝癌细胞的转移、侵袭作用机制.方法 运用血清药理学方,以高、中剂量的鳖甲煎丸含药血清和空白血清分别培养肝癌细胞HepG2,采用MTT比色法、细胞黏附实验和transwell侵袭实验检测药物对细胞生长、黏附和侵袭作用的影响,以进一步阐明鳖甲煎丸抗肝癌细胞的转移、侵袭作用机制.结果 高剂量和中剂量含药血清可显著抑制肝癌细胞生长增殖,对基底膜的黏附及侵袭穿越迁移亦有抑制作用,且该作用与药物浓度有关.结论 鳖甲煎丸能显著抑制肝癌细胞的生长增殖、黏附及转移侵袭.
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葛根素抑制卵巢癌细胞HO-8910侵袭及转移的实验研究
目的 观察葛根素对卵巢癌HO-8910细胞黏附、侵袭人工重组基底膜(matrigel)、趋化性运动能力的影响及可能的作用途径.方法 采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法检测HO-8910细胞内雌激素受体(estrogen receptor,ER)表达的情况;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测葛根素对卵巢癌细胞HO-8910细胞增殖的影响;细胞黏附人工重组基底膜实验检测葛根素对HO-8910细胞黏附能力的影响;聚碳酸酯膜细胞培养小室(Transwell小室)法检测葛根素对HO-8910细胞的侵袭能力和趋化运动能力.结果 HO-8910细胞阳性;细胞黏附实验中,20 μmol/L葛根素处理细胞12 h后OD值显著低于溶剂对照组(P<0.01),抑制率达50.63%;Transwell小室侵袭、趋化性运动实验中,20 μmol/L葛根素处理细胞12 h后穿膜细胞数均明显低于溶剂对照组(P<0.01),抑制率分别达到38.59%、40.63%;葛根素与雌激素联合干预组的穿膜细胞数比雌激素组明显减少[分别为(33.40±3.30)vs(48.05±3.56)(P<0.01);(35.35±3.03)vs(52.45±1.04)(P<0.01)].结论 葛根素可抑制人卵巢癌细胞株HO-8910黏附、侵袭和运动的能力,可拮抗雌激素对细胞恶性行为的刺激作用.
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三氧化二砷对人肝癌细胞黏附和侵袭影响的实验研究
目的探讨三氧化二砷(亚砷酸,As2O3)注射液是否具有抗肝癌细胞黏附和侵袭的作用及其相关机制.方法选用人类肝癌细胞株SMMC-7721细胞及裸鼠人类肝癌转移模型为研究对象,通过细胞运动迁移实验、细胞黏附实验和免疫组化方法观察As2O3对SMMC-7721细胞的运动迁移、与纤维粘连蛋白(FN)、内皮细胞黏附以及裸鼠人肝癌转移模型肝移植瘤表达CD44和MMP-2基因蛋白的影响.结果As2O3注射液可显著抑制SMMC-7721细胞在FN上的迁移运动和SMMC-7721细胞与FN、内皮细胞的黏附,并能降低裸鼠肝移植瘤CD44、MMP-2的表达.结论As2O3具有抗肝癌细胞黏附和侵袭的作用,其机制可能与As2O3能降低肝癌细胞表达CD44和MMP-2有关.
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内外环境因素在子宫内膜异位症发病中的作用
子宫内膜异位症(endo-metriosis,EM)发病机制复杂.Sampson的经血逆流学说可诠释腹膜及部分卵巢EM.正常情况下约有.50%～90%的育龄妇女发生经血逆流入盆腔;但只有少数罹患EM,说明EM的发病尚受其他因素影响.逆流子宫内膜向腹膜黏附过程中发生的事件是EM发病的关注焦点.
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黑素再生液对体外培养的黑素细胞黏附和迁移的影响
目的:探讨黑素再生液对黑素细胞黏附、迁移的影响.方法:分别用黑素再生液和补骨脂处理人表皮纯化培养的黑素细胞,观察其在纤维连接素包裹的培养板上黏附以及通过微孔滤膜的情况,并作对照比较.结果:黑素再生液和补骨脂均可促进黑素细胞黏附于培养板,黑素再生液可诱导黑素细胞迁移并呈剂量依赖性(P＜0.01),补骨脂对黑素细胞迁移无明显影响(P＞0.05).结论:黑素再生液可以促进黑素细胞的黏附和迁移,其效果优于补骨脂.
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如何辨证治疗肠粘连
答:由于各种原因引起的肠管与肠管之间,肠管与腹膜之间,肠管与腹腔内脏器之间发生的不正常黏附叫肠粘连.肠粘连患者的临床症状可因粘连程度和粘连部位而有所不同.
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用复合液滴模型研究稳定剪切流动下黏附于血管表面白细胞的变形
变形作用是黏附于血管表面的白细胞响应外界流体作用的重要特征,然而,尚不清楚白细胞的细胞核是否伴随细胞而发生变形.我们用复合液滴模拟黏附于血管表面的白细胞,根据二维计算流体动力学方法研究稳定剪切流动下白细胞及其细胞核发生变形的生物力学机制.结果表明:(1)外界流场雷诺数是引起细胞变形的重要原因.随着雷诺数的增大,细胞变形也增大;(2)细胞核随细胞的变形而发生了变形,但细胞的变形指数总是大于其细胞核,表明细胞核更能耐受剪切流动;(3)当雷诺数增大到一定值时,细胞和细胞核都不能进一步变形,变形指数达到峰值;(4)压力分布曲线表明,在细胞的下游形成一个高压区,提供促使细胞受力达到平衡的升力,从而阻止了细胞的进一步变形.因此,具有高粘性的细胞核在细胞的变形过程中发挥特殊作用.
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OPN促进大鼠肝星状细胞黏附、迁移及黏着斑激酶活性
目的探讨细胞外间质(ECM)成分骨桥蛋白(OPN)和精-甘-天冬-丝氨酸(Arg-Gly-Asp-Ser,RGDS)四肽对大鼠肝星状细胞(HSCs)黏附、迁移与黏着斑激酶(FAK)活性的影响.方法应用体外细胞培养技术,MTT法检测HSCs增殖,甲苯胺蓝法检测HSCs黏附情况,并观察HSCs迁移;采用免疫沉淀和Western blot技术测定黏着斑激酶活性变化.结果①不同浓度OPN和RGDS四肽作用于HSCs 2 h后,8、16、32 mg/L OPN组细胞黏附促进率均高于对照组(P＜0.05);25 mg/L～100 mg/L RGDS四肽不同浓度组细胞黏附率明显下降(P＜0.05).②不同浓度OPN干预细胞48 h后,促进HSCs增殖,而RGDS四肽组抑制HSCs增殖.③16 mg/LOPN作用12、24和36 h,细胞迁移距离显著高于对照组(P＜0.05);而100 mg/L RGDS四肽组则显著性低于对照组(P＜0.05).④经OPN作用后各浓度组HSCs中磷酸化FAK均有显著表达;RGDS四肽干预后,磷酸化FAK表达量降低.结论①OPN促进HSCs增殖、黏附和迁移;RGDS四肽对HSCs增殖、黏附和迁移具有抑制作用.②OPN可以诱导FAK活化,RGDS四肽可抑制磷酸化FAK的表达.
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Gli2基因沉默逆转肝癌细胞系SMMC-7721的上皮间质转化
目的：探讨胶质瘤相关癌基因同源蛋白2（Gli2）对肝癌细胞系SMMC-7721上皮间质转化（EMT）和侵袭能力的影响及机制。方法合成shRNA-Gli2、shRNA-NC病毒载体，实验设shRNA-Gli2组、shRNA-NC组和空白组，转染SMMC-7721细胞。用Transwell小室和细胞黏附实验观察细胞侵袭及黏附能力；用qRT-PCR和Western blot检测细胞间Gli2、E-cadherin、N-cadherin及vimentin基因和蛋白的表达。结果在不同肝癌细胞系中，随着肝癌细胞系侵袭能力的增强，Gli2的表达逐渐增高，shRNA-Gli2组与对照组相比侵袭能力降低，同种黏附能力增加，异种黏附能力降低（P＜0.05）。 shRNA-Gli2组与对照组相比，E-cadherin 表达明显增高而N-cadherin 和vimentin 表达明显降低（ P＜0.05）。结论沉默Gli2的表达能够促进肝癌细胞SMMC-7721 EMT的反转，并降低其侵袭能力，机制可能与E-cadherin的上调和N-cadherin、vimentin的下调有关。
关键词： Gli2 上皮间质转化( EMT) SMMC-7721 侵袭 黏附 -
骨桥蛋白对小鼠胚泡黏附和扩展的影响及其机制
目的 探讨骨桥蛋白(OPN)对小鼠胚泡黏附、扩展的影响及机制. 方法 采用纤维蛋白铺板微滴培养法培养胚胎,观察并统计重组小鼠OPN(rmOPN)、OPN抗体及精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽(RGD)对胚泡的脱带、黏附和扩展的影响;采用24孔板培养胚胎,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测胚泡培养液基质金属蛋白酶2和9(MMP-2、-9)的浓度. 结果不同浓度的OPN组间胚泡的脱带率、黏附率与对照组相比无显著性差异(P>0.05);但1.0 mg/L和10.0 mg/L OPN组可促进小鼠胚泡提前扩展,72h囊胚扩展率与对照组相比差异有显著性,10.0 mg/L组72h的扩展率显著高于OPN 0.1 mg/L组(P<0.05).OPN抗体和RGD均显著抑制胚泡的脱带、黏附和扩展,与对照组相比,差异有显著性,且随着浓度的增加,抑制作用越明显.OPN促进胚泡分泌MMP-2及MMP-9,且存在时间和剂量依赖性. 结论 OPN在体外可通过促进小鼠胚泡的扩展和分泌MMP-2、-9来调节小鼠早期胚泡着床.
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非内质网钙网蛋白的生物学作用及其机制
钙网蛋白(calreticulin,CRT)是一种一级结构高度保守的、主要存在于内质网内的分子伴侣和钙离子结合蛋白,主要发挥着协助蛋白质正确折叠、调节细胞内钙离子稳态等重要作用.近年来研究发现一些CRT定位于多种细胞的细胞膜外表面、细胞质或胞外基质等内质网以外部位.尽管这些CRT转出内质网及释放至胞外的机制尚不清楚,但可以明确这些非内质网定位的CRT具有调节黏附、迁移、吞噬及免疫应答等一系列重要的生物学效应,在创伤修复、抗肿瘤治疗方面具有良好的临床应用前景.本文综述了非内质网CRT的生物学效应、转位机制的研究进展及其临床应用展望.
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钙网蛋白在内皮细胞相关疾病中的病理生理作用
心脑血管病、糖尿病和肿瘤等内皮相关疾病严重威胁人类健康.内皮结构与功能的损伤是内皮相关疾病发病机制中至关重要的环节.内质网Ca2+结合蛋白钙网蛋白(calreticulin,CRT)调节内皮细胞增殖、黏附、迁移、凋亡等过程,参与肿瘤、糖尿病、心脑血管病等内皮相关疾病的发生、发展和转归.外源性CRT对肿瘤、眼部新生血管病变、慢性愈合不良性伤口和缺血性疾病具有潜在治疗作用.本文综述钙网蛋白对内皮细胞的调节及其在内皮相关疾病中的病理生理学作用.
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幽门螺杆菌hp0788基因对GES-1细胞功能影响的初步研究
目的 构建幽门螺杆菌ATCC26695 hp0788基因敲除突变菌株(ATCC26695△0788km),观察hp0788基因对GES1细胞功能的影响. 方法 以基因敲除质粒载体pSJHK构建基因敲除质粒,在hp0788基因的上下游分别扩增800～1100 bp的基因片段作为同源臂,经限制性内切酶酶切后与质粒载体连接构建基因敲除质粒pSJHK-0788,通过电击转化构建hp0788基因敲除突变菌株,以FITC标记法检测其对GES-1细胞黏附能力的影响;以感染复数(MOI)为200∶1构建幽门螺杆菌与GES-1细胞共培养体系,比较ATCC26695和ATCC26695△0788km对GES-1细胞凋亡及活性的影响. 结果 构建了hp0788基因双交换敲除质粒,电击转化获得hp0788基因敲除突变菌株.FITC标记ATCC26695和幽门螺杆菌ATCC26695△0788km与GES-1细胞混匀后采用流式细胞术检测FITC的荧光强度,ATCC26695组的黏附率记为100％,ATCC26695△0788km组黏附率为90.40％,差异均有统计学意义(t=2.80,P＜0.05);ATCC26695与ATCC26695△0788km分别与GES-1细胞共培养8h和16h,流式细胞术检测细胞凋亡率分别为(15.73±7.84)％、(25.26士5.81)％和(12.46±12.30)％、(21.13±10.09)％,细胞增殖一毒性检测试剂盒检测细胞活力分别为53％、40％和66％、50％,差异均有统计学意义(t值分别为3.30,2.80,-2.93,-2.76,P＜0.05). 结论 hp0788基因敲除幽门螺杆菌ATCC26695对GES-1细胞的黏附率下降,并使GES-1凋亡率下降,而细胞活力增高.表明hp0788基因是影响幽门螺杆菌ATCC26695感染GES-1细胞后引起细胞凋亡和活性变化的重要基因.
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重力矢量及趋化诱导对脂肪干细胞在PLGA电纺膜上早期增殖的影响
观察研究重力矢量方向及血小板衍生生长因子(PDGF)趋化诱导,在体外环境对人脂肪于细胞(ASCs)在PLGA电纺膜表面黏附和增殖活动的影响.体外原代培养从人颊脂垫提取的ASCs,根据不同重力矢量条件以及有无趋化因子PDGF将实验分为4个组.A组:PDGF/重力矢量(+),含PDGF的PLGA电纺膜置于ASCs悬液底部;B组:PBS/重力矢量(+),空白(PBS)电纺膜置于ASCs悬液底部;C组:PDGF/重力矢量(-),含PDGF的PLGA电纺膜覆于ASCs悬液表面;D组:PBS/重力矢量(-),空白(PBS)电纺膜覆于ASCs悬液表面.分别于0、1、3、5、8、11d加入Alamar Blue继续孵化24 h后测OD值,对照标准曲线,计算各组Alamar Blue的下降百分比,评估ASCs的黏附增殖活动.结果显示:在重力矢量(+)组的早期(第1～4 d),无论趋化因子PDGF存在与否,Alamar Blue的下降百分比都能达到30％左右,不影响细胞的定植、黏附与增殖.但是在重力矢量(-)组,缺少趋化因子PDGF的Alamar Blue的下降百分比为25％左右,细胞将无法正常的定植与黏附.PDGF具有明显诱导ASCs趋化聚集作用,能减轻不利重力因素的影响,显著改善ASCs黏附与增殖.
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酪氨酸激酶抑制剂逆转黏附诱导的骨髓瘤细胞的耐药性
为了探讨酪氨酸激酶抑制剂STI571对RPMI8226细胞黏附、黏附诱导耐药以及靶细胞Rac1 mRNA表达的影响,本研究采用结晶紫染色法分析了RPMI8226细胞与纤连蛋白(fibronectin,FN)的黏附率,用MIT法检测瘤细胞的增殖性,并用半定量RT-PCR研究Rac1 mRNA水平的变化.结果显示:RPMI8226细胞与FN黏附1、6、12小时,其黏附率分别为(43.71±2.18)%、(55.63±1.56)%、(63.42±2.46)%;用20 μmol/L STI571处理1、6、12小时后黏附率分别降为(15.12±1.04)%、(17.58±1.32)%、(17.24±1.59)%;组间差异显著(P＜0.05);阿霉素作用后,FN黏附组细胞IC50值[(1.46±0.04)μmol/L]显著高于BSA组[(0.78±0.03)μmol/L](P＜0.05);FN联合ST1571组IC50值[(0.81±0.05)μmol/L]与BSA联合STI571组[(0.74±0.02)μmol/L]相比无显著性差异(P＞0.05),但却低于FN组(P＜0.05);半定量RT-PCR显示,Rac1 mRNA水平在20μmol/L STI571处理14小时后明显下降.结论:STI571能降低RPMI8226细胞与FN的黏附率、逆转黏附介导的阿霉素耐药,并且可以下调其Rac1 mRNA水平.
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TRAIL对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226黏附和凋亡的影响及其作用机制的初步探讨
本研究探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL对人多发性骨髓瘤细胞系RMPI8226的生长抑制作用,对细胞黏附和凋亡的影响及其作用机制.用MTT法检测TRALL对RPMI8226黏附功能和生长的影响:用An nexin Ⅴ/PI检测细胞凋亡;流式细胞学检测细胞表面黏附分子的表达;RT-PCR法测定凋亡相关基因表达水平和Western blot法检测凋亡相关蛋白表达.结果表明:TRAIL抑制RPMI8226细胞生长;可诱导RPMI8226细胞凋亡,并伴有抗凋亡基因Mcl-1、XIAP、cFLIP、CARP1、CARP2和Bcl-2 mRNA表达水平下降,促凋亡基因Bax mRNA表达水平升高;RPMI8226细胞内的凋亡执行蛋白caspase-3和NF-κB P65(RelA)表达水平随TRAIL浓度的增加而下降.此外,TRAIL明显上调了RPMI8226细胞表面黏附分子CXCR4的表达.结论TRAIL上调人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞表面的黏附分子CXCR4表达水平.TRAIL可诱导人多发性骨髓瘤细胞株RPMl8226凋亡.在一定的浓度范围内,TRAIL对人骨髓瘤细胞株RPMI8226的生长抑制呈时间-剂量依赖性.
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LFA-1和VLA-4参与人高增殖潜能内皮祖细胞与血管内皮的黏附和跨内皮迁移
为了了解淋巴细胞功能相关抗原1(lymphocyte function-associated antigen 1,LFA-1)和极迟反应抗原4(very late antigen 4,VLA-4)在高增殖潜能内皮祖细胞(high proliferative potential endothelial progenitor cells,HPP-EPCs)归巢过程中与血管内皮的黏附和跨内皮迁移中的作用,利用流式细胞术检测HPP-EPC中整合蛋白β1和β2的表达以及小鼠骨髓内皮细胞相应的受体的表达.利用体外黏附和迁移实验研究经过功能级别的中和抗体阻断VLA-4和LFA-1后HPP-EPC黏附和迁移细胞数目的变化.结果表明,HPP-EPC表达整合蛋白β1和β2,活化后小鼠骨髓内皮细胞表达细胞间黏附分子1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)和血管细胞黏附分子1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1);加CD11a抗体组黏附细胞或CD49d抗体组黏附和迁移细胞均较同型对照抗体组少,而且加CD11a和CD49d两种抗体联用组黏附和迁移细胞明显减少,其细胞数较任何单一抗体组少.结论:LFA-1和VLA-4在HPP-EPC与血管内皮的黏附和跨内皮迁移中发挥了重要的作用.
关键词： LFA-1 VLA-4 高增殖潜能内皮祖细胞 黏附 跨内迁移 -
6A8α-甘露糖苷酶表达抑制使Jurkat细胞间的黏附性增强
目的探讨6A8α-甘露糖苷酶表达抑制对人T淋巴母细胞Jurkat生物学行为的影响. 方法采用反义核酸技术抑制细胞中6A8α-甘露糖苷酶的表达.用PCR检测转导基因在基因组中的整合.用单抗6A8作探针,Western印迹和免疫荧光染色流式细胞术检测细胞中6A8α-甘露糖苷酶的表达状况.用Con A结合试验检测细胞蛋白质的糖基化改变.普通光学显微镜观察细胞的形态.用DNA芯片技术分析AS细胞和M细胞mRNA表达的差异.用RT-PCR和免疫荧光染色流式细胞术验证基因芯片结果的可靠性. 结果制备了6A8α-甘露糖苷酶表达抑制的Jurkat细胞(AS).与对照细胞(野生型细胞W和转导空载体的细胞M)相比,AS细胞在培养中黏附成大团块.DNA芯片分析见与M细胞相比,AS细胞中有19个基因的表达上调,20个基因的表达下调.上调的基因中有一些与细胞间黏附相关,如CD54、CD11a、CD24、CD82、整合素αX、整合素α7、整合素αE、IL-1R、IL-2Rγ和TNFSF9.RT-PCR肯定了DNA芯片分析的可靠性.免疫荧光染色流式细胞术进一步肯定了CD54和CD11a在AS细胞表达的上调. 结论 6A8α-甘露糖苷酶表达抑制使Jurkat细胞间黏附增强,CD54和CD11a等黏附分子表达的增高可能与此相关.
关键词： 6A8α-甘露糖苷酶 糖基化 Jurkat细胞 黏附 -
梅毒螺旋体膜蛋白 Tpp17体外活化血管内皮细胞的实验研究
目的：研究梅毒螺旋体重组蛋白Tpp17体外对人脐静脉内皮细胞（ HUVEC ）的活化作用，探讨膜蛋白Tpp17在梅毒免疫学发病机制中的作用。方法将采用基因工程技术重组合成的梅毒螺旋体膜蛋白Tpp17刺激HUVEC， ELISA测培养上清中细胞因子TNF-α、MCP-1、ICAM-1及E-selectin的水平，荧光定量聚合酶链反应测HUVEC中TNF-α、MCP-1、ICAM-1及E-selectin mRNA的转录水平；将重组蛋白Tpp17预处理的HUVEC与Calcein-AM标记的THP-1细胞共培养，荧光倒置显微镜下观察HUVEC与THP-1细胞的黏附情况；将HUVEC接种于transwell小室的下室，重组蛋白Tpp17处理后，Calcein-AM标记的THP-1细胞接种于上室，荧光倒置显微镜观察下并计数THP-1细胞的迁移率。结果梅毒螺旋体膜重组蛋白Tpp17可上调HUVEC细胞因子TNF-α、MCP-1、ICAM-1及E-se-lectin的表达水平，提高其对THP-1细胞的趋化和黏附能力，与空白组比较，差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论梅毒螺旋体膜重组蛋白Tpp17可体外活化HUVEC，提高HUVEC对THP-1细胞的趋化和黏附能力，可能在梅毒的免疫病理中起重要作用。
