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雌、孕激素和肝素结合生长因子对Ishikawa细胞金属蛋白酶组织抑制物-1表达的调节
目的通过体外实验研究雌激素、孕激素、肝素结合生长因子(HB-EGF)对Ishikawa细胞中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)蛋白表达的调节及其在胚胎种植中的意义.方法体外培养高度分化的子宫内膜癌细胞Ishikawa,按实验目的分别加入雌激素、孕激素、雌孕激素联合、雌孕激素与米非司酮(RU486)联合、HB-EGF刺激48 h后,采用免疫细胞化学、Western blot两种方法测定各种条件下Ishikawa细胞中MMP-9、TIMP-1蛋白的表达.结果雌、孕激素单独或联合作用48 h后都可以显著降低Ishikawa细胞中TIMP-1蛋白的表达(P＜0.05),同时加RU486后TIMP-1蛋白的下降趋势减弱.相反,加HB-EGF刺激48 h后TIMP-1蛋白的表达增高(P＜0.05).各种因素处理48 h后,Ishikawa细胞中MMP-9蛋白均没有阳性表达.结论雌、孕激素对TIMP-1蛋白的表达具有下调作用,RU486可抑制孕激素的下调作用;HB-EGF对TIMP-1蛋白的表达具有上调作用;MMP-9蛋白在Ishikawa细胞中无表达.
关键词： Ishikawa细胞 金属蛋白酶组织抑制物-1 胚胎着床 -
云南白药加血竭对环状混合痔术后难愈创面的促愈及作用机制
目的:观察云南白药加血竭治疗环状混合痔术后难愈创面的临床疗效及对基质金属蛋白酶-3(MMP-3),金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1),血管内皮生长因子(VEGF)和转化生长因子-β1(TGF-β1)水平的影响.方法:将116例患者随机按数字表法分为对照组和观察组各58例.经清创、消毒处理措施后,对照组给予生肌玉红膏涂抹患处,观察组给予云南白药加血竭涂抹患处,1～2次/d,两组患者均连续治疗14 d.比较两组创面恢复情况,进行创面组织形态观察,检测治疗前后血清MMP-3,TIMP-1,VEGF和TGF-β1水平.结果:观察组临床总有效率为94.83％,高于对照组的81.03％(x2=5.198,P＜0.05);治疗第7天时,观察组创面面积、创面肉芽组织、水肿程度和创面渗液评分均低于对照组(P＜0.01);治疗第14天时,观察组创面面积和创而肉芽组织评分均低于对照组(P＜0.01);观察组创面愈合时间平均为(10.75±3.64)d,短于对照组的(14.85±5.73)d;治疗第7天,观察组创面中成纤维细胞数、新生毛细血管数和创面巨噬细胞比率均显著升高且高于对照组(P＜0.01);在治疗后14 d,两组患者成纤维细胞数、新生毛细血管数和创面巨噬细胞比率均较治疗后7d下降(P＜0.01),与对照组比较观察组成纤维细胞数、新生毛细血管数和创面巨噬细胞比率均低于对照组(P＜0.01);治疗后观察组患者血清MMP-3,VEGF和TGF-β1均高于对照组,TIMP-1水平低于对照组(P＜0.01).结论:云南白药加血竭用于环状混合痔外剥内扎术后难愈创面,能促进创面修复愈合,缩短了愈合时间,可通过改善创面的组织形态变化及调节血清VEGF,TGF-β1和MMP-3/ TIMP-1水平来促进创面毛细管血管形成,促使肉芽组织生长与表皮修复.
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芎芪颗粒对肾间质纤维化大鼠肾组织HGF、MMP-3、TIMP-1的影响
目的:探讨芎芪颗粒抗肾间质纤维化的作用机制.方法:将32只雄性Wistar大鼠随机分入假手术组、UUO模型组、蒙诺治疗组和芎芪颗粒治疗组,采用相应处理后取肾脏组织,以Western Blot检测HGF蛋白表达,以免疫组织化学法检测MMP-3和TIMP-1.结果:与假手术组比较,UUO模型组的肾脏组织HGF蛋白相对表达量下降(P＜0.01),MMP-3和TIMP-1均升高(P＜001).与UUO模型组比较,蒙诺治疗组和芎芪颗粒治疗组的肾脏组织HGF蛋白相对表达量和MMP-3均升高(P＜0.01),TIMP-1均下降(P＜0.01).结论:芎芪颗粒可能通过提高HGF的表达及诱增其下游因子MMP-3的表达,抑制TIMP-1的表达,恢复MMP-3/TIMP-1的失衡,来达到抗肾间质纤维化的作用.
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平喘宁对哮喘大鼠肺组织Raf mRNA、ERK1 mRNA表达的影响
目的:观察平喘宁对哮喘大鼠Raf mRNA、ERK1mRNA表达及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制物-1 (TIMP-1)含量的影响,探讨其治疗哮喘的相关作用机制.方法:雄性Wistar大鼠70只,随机分为正常组、模型组、地塞米松组、桂龙咳喘宁组以及平喘宁高、中、低剂量组,每组10只.以卵蛋白致敏及寒冷刺激复制大鼠哮喘模型,造模21d后,正常组、模型组每天给予蒸馏水灌服,其它各组给予相应药物灌服,4周后解剖大鼠并取出肺组织.用SP免疫组化法观察TIMP-1、MMP-9含量,用RT-PCR法观察Raf mRNA、ERK1mRNA在平喘宁治疗哮喘前后的变化.结果:与正常组比较,模型组肺组织MMP-9、TIMP-1、Raf mRNA、ERK1mRNA显著性上调(P＜0.01);与模型组比较,各治疗组以上指标均有不同程度的下调(P＜0.05,P＜0.01);平喘宁中、高剂量组和地塞米松组比较,无显著性差异.结论:平喘宁可通过下调MMP-9和TIMP-1的表达,并调节MMP-9/TIMP-1之间的平衡,显著降低哮喘大鼠肺组织ERK信号通路Raf mRNA、ERK1 mRNA的表达而治疗哮喘.
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TIMP-1水平在IgA肾病患者血清中的变化及意义
目的 观察不同病理类型的IgA肾病患者和由原发性肾小球肾炎发展至肾衰竭的患者血清中金属蛋白酶组织抑制物-1(tissue inhibitor of metalloprotei-nase-1,TIMP-1)水平的变化.方法 将经肾活检确诊的原发性IgA肾病患者分组,并设立慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)患者组和正常对照(normal control,NC)组,观察各组间TIMP-1水平的表达情况,数据用(x±s)表示,用方差分析进行统计学处理,P<0.05为有统计学意义.结果 肾衰竭组、IgA肾病重度病理改变组及中度病理改变组血清中TIMP-1水平较正常对照组明显增高(P<0.05),且肾衰竭组和IgA肾病重度病理改变组血清中TIMP-1水平又较中度病理改变组显著增高(P均＜0.01),而IgA肾病轻度病理改变组患者血清中TIMP-1水平与正常对照组相比无统计学意义.结论 TIMP-1在肾衰竭组、IgA肾病重度病理改变组及中度病理改变组血清中水平明显增高,提示TIMP-1与细胞外基质((extracelluar matrix,ECM)的增加以及肾脏的纤维化密切相关,它可能通过抑制肾小球细胞外基质的降解过程而导致ECM积聚,从而导致基质纤维化和肾小球硬化.
关键词： IgA肾病 金属蛋白酶组织抑制物-1 ELISA双抗体夹心法 -
大鼠视网膜光损伤中TIMP-1、ERK-1的表达及临床意义
目的：观察金属蛋白酶组织抑制物-1（TIMP -1）以及细胞外信号调节蛋白激酶-1（ERK -1）在视网膜光损伤中的表达情况，分析视网膜光损伤中促红细胞生成素（EPO）对 TIMP -1以及 ERK -1表达的影响。方法选取健康成年大鼠60只作为实验动物，随机选取10只作为空白对照组（不进行任何干预），其余50只大鼠建立视网膜光损伤模型后，随机分为模型对照组（给予光照）和观察组（给予光照结合注射 EPO）共两组，每组25只。在光照后的12 h、2 d、3 d、4 d 以及7 d 时随机处死5只大鼠，应用 HE 染色处理后观察视网膜色素上皮细胞细胞（RPE）形态学变化，同时应用免疫组织化学法测定 TIMP -1以及 ERK -1表达情况。结果与空白对照组相比，视网膜光损伤大鼠的视网膜 RPE细胞结构遭受明显破坏，并且随着时间的延长，损伤逐渐加重，但是观察组大鼠的细胞破坏程度显著轻于模型对照组；空白对照组无 TIMP -1以及 ERK -1阳性表达，模型对照组仅见少量 TIMP -1以及 ERK -1阳性表达，与空白对照组相比，无显著性差异（ P >0.05），在相同时间点上，观察组大鼠的 TIMP -1以及 ERK -1显著高于其他两组（ P <0.01），直线相关分析显示观察组大鼠的 TIMP -1阳性表达水平与 ERK -1阳性表达水平呈显著正相关（ P <0.05）。结论视网膜光损伤能够导致视网膜RPE 遭受严重破坏，给予EPO 干预能够显著提高TIMP -1以及ERK -1阳性表达水平，有效改善视网膜光损伤程度，保护视网膜RPE 细胞。
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依那普利及波生坦对糖尿病肾病大鼠干预作用的初步研究
目的 探讨依那普利和波生坦对糖尿病肾病(DN)的治疗作用. 方法 Wistar大鼠摘除右肾后,静脉注射链脲佐菌素致成糖尿病模型鼠,分为4组:糖尿病模型(Veh)组(给缓冲液);波生坦干预(Bos)组(100 mg*kg-1*d-1);依那普利干预(Ena)组(10 mg*kg-1*d-1);波生坦及依那普利联合干预(Bos+Ena)组(两药剂量同上).尚设单肾对照组(静脉注射缓冲液).每组大鼠6只.20周时测量体重、血压、血糖及24 h尿蛋白定量,处死大鼠,取左肾称重,用 RT-PCR及免疫组化法检测肾组织中Ⅰ型胶原(CⅠ)、Ⅳ型胶原(C Ⅳ)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤溶酶原激活剂抑制物-1(PAI-1)及金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)的mRNA及蛋白质表达. 结果与对照组相比,Veh组大鼠平均动脉压、血糖、尿蛋白定量及肾重/体重比值均显著上升(P<0.05),肾组织的CⅠ、C Ⅳ、TGF-β1、PAI-1及TIMP-1的mRNA及蛋白质表达均显著上调(P<0.05).Bos、Ena及两药联合治疗后,上述上调指标除血糖外均显著抑制(P<0.05),而3组间抑制率差异无显著意义(P>0.05). 结论无论非选择性内皮素-1受体拮抗剂Bos或血管紧张素转换酶抑制剂Ena,对DN均具有肯定疗效;两药可能通过下调肾组织中TGF-β1、PAI-1及TIMP-1表达,而使CⅠ及C Ⅳ生成减少而发挥疗效.
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CLD患者血清MMP-13和TIMP-1浓度水平及意义
目的：探讨慢性肝病（ chronic liver disease ，CLD）血清MMP-13、TIMP-1对肝脏纤维化的判断价值。方法：选择60例健康体检者、66例慢性乙型肝炎（CHB）患者和76例肝硬化患者（LC）作为研究对象，采用ELISA法检测其血清中MMP-13和TIMP-1的水平，采用放射兔疫法检测血清中Ⅲ型前胶原蛋白（ PCⅢ）、Ⅳ型胶原（ CⅣ）的水平、透明质酸（ HA）和层粘连蛋白（LN）含量，比较它们之间有无差别；观察MMP-13，TIMP-1在肝脏组织中的表达水平与在血清的浓度有无相关性。结果：CHB和LC组中血清MMP-13，TIMP-1， PCⅢ，Ⅳ-C， HA和LN水平明显高于正常对照组，差异有统计学意义（ p＜0．01）；LC组中患者血清MMP-13和TIMP-1， PCⅢ，Ⅳ-C， HA和LN的水平高于CHB组，差异有统计学意义（ P＜0．01）；随着慢性肝病的进展TIMP-1的升高幅度高于MMP-13，MMP-13/TIMP-1比值逐渐下降；CHB和LC组中患者血清MMP-13和TIMP-1的水平与其PCⅢ，Ⅳ-C， HA和LN呈明显正相关。结论：MMP-13和TIMP-1的血清水平及其两者的比值可作为判断慢性肝病纤维化程度的现察指标。
关键词： 慢性乙型肝炎 基质金属蛋白酶-13 金属蛋白酶组织抑制物-1 -
IgA肾病肾血管纤溶酶原激活物抑制物-1和基质金属蛋白酶-9的表达及其意义
为探讨免疫球蛋白A肾病(IgA肾病)患者肾血管壁纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达及意义,采用免疫组织化学技术检测38例IgA肾病肾组织血管壁的PAI-1、MMP-9、α-SMA和TIMP-1的蛋白表达.结果显示,α-SMA主要表达于平滑肌细胞;PAI-1表达与α-SMA类似;MMP-9在平滑肌细胞和内皮细胞均表达;TIMP-1仅在血管壁内膜的内皮细胞微弱表达.在IgA肾病Lee Ⅳ～Ⅴ级组,肾血管壁的PAI-1、MMP-9和α-SMA表达显著高于Lee Ⅰ～Ⅲ级组(P<0.01).直线相关分析显示,肾血管的PAI-1、MMP-9和α-SMA表达与肾小管间质的纤维化和炎细胞浸润呈正相关(P<0.01).提示PAI-1可能参与介导了IgA肾病肾血管壁细胞外基质的积聚过程,MMP-9则可能促进血管的平滑肌细胞迁移和内膜增生.
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紫癜性肾炎患者血清金属蛋白酶组织抑制物-1水平变化和临床意义
目的：观察不同分期过敏性紫癜性肾炎（Henoch-Schonlein purpura nephritis，HSPN）患者和健康人血清中金属蛋白酶组织抑制物-1（tissue inhibitors of metalloproteinase-1，TIMP-1）水平的变化，初步探讨TIMP-1在HSPN不同阶段中的作用及其与肾损害程度的关系，通过相关药物阻断TIMP-1的表达或抑制其活性，可能为预防、治疗肾脏纤维化提供一个新方法，以期达到理想治疗效果。方法：将过敏性紫癜性肾炎患者42例（试验组）按病理类型分组，并设立健康对照组。抽取两组的外周静脉血5 mL，分离血清，应用ELISA双抗体夹心法分别对其进行检测，观察各组TIMP-1水平的表达情况。结果：试验组Ⅱ~Ⅵ级组血清中TIMP-1水平较健康对照组显著增高（P<0.05），Ⅲ~Ⅵ级组血清中TIMP-1水平较Ⅱ级组显著增高（P<0.01），Ⅰ级组血清中TIMP-1水平与健康对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：通过检测TIMP-1水平，再结合其他化验指标和临床表现，有助于对该疾病的治疗效果或者预后给予判断，对减少肾功能衰竭发生率具有指导意义。
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IL-6、MMP-9及其TIMP-1的水平变化与胎膜早破发病的关系研究
目的 探讨胎膜早破的原因和发病机制.方法 80例初产妇分为胎膜早破组和对照组,每组40例.所有孕妇剖宫产前抽取静脉血3 ml,常温下高速离心5 min,抽取上层血清1.5 ml,置于-70℃冰箱中待测.行剖宫产手术时,抽取羊水3 ml,常温下高速离心5 min,抽取上层液体1.5 ml,置于-70℃冰箱中待测.比较胎膜早破组和对照组母体血清和羊水中MMP-9、TIMP-1的含量,羊水中IL-6含量.结果 胎膜早破组母血清和羊水中的MMP-9的含量高于对照组母血清和羊水中的含量,差异有统计学意义(P<0.05);2组孕妇血清中TIMP-1比较,差异无统计学意义(P>0.05);羊水中的TIMP-1含量在胎膜早破组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);胎膜早破组和对照组羊水中IL-6的含量比较,胎膜早破组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 宫内感染、胎膜羊水中MMP-9活性的异常升高、MMP-9和TIMP-1之间的失衡可能是多种因素诱发胎膜早破的共同环节.
关键词： 白细胞介素-6 基质金属蛋白酶-9 金属蛋白酶组织抑制物-1 胎膜早破 -
原发性肾病综合征患者血清中金属蛋白酶组织抑制物-1水平的变化及意义
目的:观察不同病理类型的原发性肾病综合征患者和由原发性肾病综合征而发展至肾衰竭的患者血清中金属蛋白酶组织抑制物-1水平的变化(tissue inhibitors of metalloproteinase-1,TIMP-1).方法:将原发性肾病综合征患者40例按病理类型的分组,并设立正常对照(NC)组和原发性肾病综合征肾衰竭(CRF)组.抽取入选患者和正常健康者外周静脉血5 ml,分离血清,应用ELISA双抗体夹心法分别对其进行检测,观察各组间TIMP-1水平的表达情况.结果:肾衰竭组、膜增生性肾炎组以及系膜增生性肾小球肾炎组血清中TIMP-1水平较正常对照组显著增高(P＜0.01),且肾衰竭组和膜增生性肾炎组血清中TIMP-1水平又较系膜增生性肾炎组显著增高(P＜0.01),而微小病变性肾小球肾炎组患者血清中TIMP-1水平与正常对照组相比无统计学意义.结论:TIMP-1在系膜增生性肾炎、膜增生性肾炎及肾衰竭患者血清中水平显著增高.提示在病理过程中,随着系膜细胞和系膜基质的增加,肾脏固有细胞分泌MMP-9和TIMP-1增加,但两者的分泌水平失衡,从而使肾小球基底膜Ⅳ型胶原降解减少,肾小球基底膜网络状结构破坏,导致肾小球基底膜重塑.
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小儿先心病不同肺动脉压力下MMP-2、TMP-1、VEGF水平的变化及治疗研究
目的 探讨血清MMP-2、TMP-1及VEGF水平在小儿先心病不同肺动脉压力下的变化,以及给予PGE1治疗及手术对MMP-2、TMP-1及VEGF表达的影响.方法 以2016年1月-2017年12月期间该院儿科收治的122例左向右分流型先心病患儿为研究对象,设为观察组,同时根据SPAP的程度不同分为重度、中度、轻度和非PH组4个亚组,其重度、中度、轻度PH组中共有29例接受前列腺素E1 (PGE1)治疗,36例接受手术治疗;以同期在本院进行健康体检的50例正常体检儿为对照组;用ELISA法检测血清MMP-2、TMP-1和VEGF的含量,并计算MMP-2/TMP-1的比值.结果 先心病各组MMP-2、VEGF水平、TMP-1的含量与对照组比较明显增高(均P＜0.05);非PH、轻度PH及中度PH组MMP-2/TMP-1的比值均明显增高(均P＜0.05);经PGE1治疗2周后,29例药物治疗患儿MMP-2、TMP-1及VEGF水平较治疗前出现了明显下降(均P＜0.05);经手术治疗1周后,36例手术患儿MMP-2、TMP-1、VEGF水平及MMP-2/TMP-1比值均明显下降(均P＜0.05).结论 ①先心病患儿血清MMP-2、VEGF水平升高明显,可能与先心病肺动脉高压形成及肺血管重构有关,检测血清MMP-2、TMP-1和VEGF水平有助于评估肺动脉压状况,以及肺动脉高压对肺血管重构的影响.②先心病并发PH严重危害患儿生命健康,应及时治疗和加强医护支持.其中采用 PGE1药物治疗和手术治疗都可以取得较好的效果.其中药物治疗治疗2周后,能够可有效地降低先心病并发PH患儿血清MMP-2、TMP-1和VEGF的表达.而手术后1周后,先心病并PH患儿血清MMP-2、TMP-1、MMP-2/TMP-1和VEGF的表达也明显降低.
关键词： 先天性心脏病 肺动脉高压 基质金属蛋白酶 内皮生长因子 金属蛋白酶组织抑制物-1 -
大鼠金属蛋白酶组织抑制物-1反义基因TA载体构建及其在肾小球系膜细胞表达的实验研究
目的:构建能在真核细胞表达的含大鼠金属蛋白酶组织抑制物-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)反义基因片段的TA克隆载体,并在体外培养的肾小球系膜细胞表达,为进一步研究TIMP-1反义基因片段抑制肾组织纤维化的作用奠定基础. 方法:用RT-PCR法扩增大鼠TIMP-1 cDNA片段(313bp),并将其反向克隆到真核表达载体pCR 3.1中,用脂质体将大鼠TIMP-1反义基因片段导入培养的大鼠肾小球系膜细胞,半定量RT-PCR法检测系膜细胞TIMP-1表达的变化. 结果:①用限制性内切酶鉴定TIMP-1 cDNA片段插入方向,测序结果证实扩增片段为目的片段;②导入TIMP-1反义基因后,肾小球系膜细胞内TIMP-1表达明显减少. 结论:①成功地构建了含大鼠TIMP-1反义基因片段的TA克隆载体;②该载体能在体外培养的系膜细胞中表达;③TIMP-1反义基因片段能有效地阻抑培养的大鼠系膜细胞中TIMP-1的表达.
关键词： 金属蛋白酶组织抑制物-1 反义基因 肾小球系膜细胞 -
ECM-1和TIMP-2在肝细胞癌患者血清中的表达及其临床意义
目的 通过检测肝细胞癌患者血清中ECM-1和TIMP-2的表达水平,分析ECM-1和TIMP-2与临床病理参数之间的关系及临床意义.方法 应用酶联免疫吸附法测定59例肝癌患者血清ECM-1和TIMP-2水平.结果 59例肝癌患者血清ECM-1和TIMP-2平均水平分别为145.08 +22.13 pg/ml、30.77±13.89 ng/ml；两者水平均与肿瘤包膜、TNM分级、血管侵犯、肿瘤结节有关(P＜0.005),而ECM-1与肿瘤分化程度有关(P＜0.005)；ECM-1和TIMP-2水平呈显著负相关(r=-0.469,P=0.000).结论 ECM-1与TIMP-2的表达可能与肝癌侵袭转移密切相关,可作为患者术后复发与转移的预测指标.
关键词： 肝细胞癌 细胞外基质蛋白-1 金属蛋白酶组织抑制物-1 -
参地颗粒对系膜增生性肾小球肾炎大鼠血清和肾脏MMP-9/TIMP-1的影响
目的 探究参地颗粒治疗系膜增生性肾小球肾炎(mesangial proliferative glomerulonephritis,MsPGN)的机制.方法 采用改良慢性血清病法复制MsPGN模型.将37只SD大鼠随机分为空白组(n=10)、模型组(n=8)、贝那普利组(n=9)和参地颗粒组(n=10).常规生化法检测24 h尿蛋白定量(24-hour urinary protein,24hUP),酶联免疫吸附法测定血清纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、Ⅳ型胶原(collagen-Ⅳ,Col-Ⅳ)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)水平,光镜下观察肾脏组织病理学变化,采用免疫组织化学法检测大鼠肾组织MMP-9和TIMP-1蛋白表达水平.结果 与模型组比较,参地颗粒组和贝那普利组大鼠24hUP水平,血清FN、Col-Ⅳ水平,以及肾小球基质相对面积显著降低(P＜0.05);参地颗粒组血清和肾组织MMP-9水平显著升高(P＜0.05),TIMP-1水平显著降低(P＜0.05),血清MMP-9/TIMP-1比值显著升高(P＜0.05).给药4周和8周后,参地颗粒组24hUP均显著低于贝那普利组(P＜0.05),血清和肾组织MMP-9/TIMP-1比值显著高于贝那普利组(P＜0.05).结论 参地颗粒可以降低MsPGN大鼠24hUP,降低肾脏细胞外基质含量,其机制可能与上调体内MMP-9水平、下调TIMP-1水平及升高MMP-9/TIMP-1比值有关.
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视网膜光损伤中TIMP-1、ERK-1的表达及促红细胞生成素对其影响
目的 研究实验性光损伤小鼠视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)中金属蛋白酶组织抑制物-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)及细胞外信号调节蛋白激酶1(extracellular regulated proteinkinase-1,ERK-1)表达的变化,以及促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对其的影响,探讨EPO对视网膜光损伤发挥保护作用的机制.方法 建立大鼠视网膜光损伤动物模型,于小鼠光照前腹腔注射重组人促红细胞生成素(recombination human erythropoietin,rhEPO),采用HE染色观察RPE细胞形态学变化,免疫组织化学法检测其TIMP-1、ERK-1蛋白的表达.结果 光损伤可以造成小鼠视网膜RPE细胞渐进性的破坏.外源性的EPO可以促进光损伤后视网膜RPE细胞TIMP-1及ERK-1表达的增加.随光照时间延长,单纯光照组RPE细胞密度逐渐减少,光照后7 d RPE细胞密度与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).光照后相同时间点,EPO处理组的RPE细胞密度较单纯光照组稍有增加,光照后7d二者差异有统计学意义(P＜0.01).光照后各时间点,EPO处理组均较单纯光照组中ERK-1的表达明显增强(均为P＜0.05).光照后6h、7d,单纯光照组和EPO处理组中TIMP-1的表达差异均无统计学意义(均为P ＞0.05);自光照后12h起至光照后96 h,各时间点EPO处理组较单纯光照组中TIMP-1的表达增强(均为P＜0.05).EPO处理组RPE中TIMP-1的表达与ERK-1的表达正相关(r=0.79,P=0.03).结论 外源性EPO通过增加光损伤后视网膜RPE细胞TIMP-1的表达,有利于MMPs/TIMP平衡的恢复,进一步证实EPO对视网膜光损伤的保护作用.EPO对RPE细胞TIMP-1分泌和表达的调节可能经由MAPK途径.
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缬沙坦对大鼠心肌梗死后MMP-9和TIMP-1mRNA表达的影响
目的 探讨缬沙坦对大鼠心肌梗死后基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制物-1(tissue inhibitors of metalloproteinases-1,TIMP-1)表达的影响.方法 将冠状动脉前降支结扎后24 h的SD大鼠随机分为心梗组(A组)和心梗+缬沙坦组(B组);假手术大鼠分为假手术组(C组)和假手术+缬沙坦组(D组).灌胃4周后,各组存活动物数分别为A组7只,B组8只,C组9只,D组9只.测量各组大鼠体重、心脏重量,采用逆转录-聚合酶链反应测定梗死区及非梗死区心肌MMP-9和TIMP-1mRNA的表达.结果 A组的心脏重量/体重比值(心/体比)与C、D组比较显著增加(P＜0.05);B组的心/体比与A组相比明显减低(P＜0.05),与C、D组比较无明显差异(P＞0.05).A、B组梗死区和非梗死区MMP-9mRNA的表达较C、D组明显增高(P＜0.05);B组梗死区和非梗死区MMP-9mRNA的表达较A组相应区域明显降低(P＜0.05).A、B组梗死区及非梗死区TIMP-1mRNA的表达与C、D组相比,明显增高(P＜0.01),B组梗死区和非梗死区TIMP-1mRNA的表达较A组相应区域明显增高(P＜0.05).A组梗死区和非梗死区MMP-9/TIMP-1mRNA比值与C、D组相比,明显增高(P＜0.05);B组梗死区和非梗死区MMP-9/TIMP-1mRNA比值较A组相应区域明显降低(P＜0.05).结论 心肌梗死后,大鼠心肌内MMP-9和TIMP-1mRNA表达增加,共同参与心室重塑.经缬沙坦处理后,大鼠心肌内MMP-9mRNA表达减少;TIMP-1mRNA的表达升高;MMP-9/TIMP-1mRNA比值降低与抑制心肌重构有关.
关键词： 心肌梗死 基质金属蛋白酶-9 金属蛋白酶组织抑制物-1 缬沙坦 -
MMP1及TIMP1的表达与垂体腺瘤纤维化的关系
目的探讨垂体腺瘤纤维化与间质胶原酶(MMP1)及其抑制因子金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP1)表达的关系.方法 38例垂体腺瘤标本分为纤维化组(质地韧)6例与非纤维化组(质地软)32例,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学方法检测MMP1、TIMP1的表达并以天狼猩红染色法检测其胶原含量.结果纤维化与非纤维化组中:①胶原含量分别为 20.95%± 8.42%、7.98%± 5.18%,两者有统计学意义(P< 0.01).②MMP1 mRNA表达量分别为 0.47± 0.40、0.59± 0.54;蛋白表达量分别为 0.12± 0.09、0.13±0.09,两者无统计学意义(P> 0.05);其表达均与胶原含量无相关性(P> 0.05).③TIMP1 mRNA表达量分别为 1.61± 1.09、0.79± 0.59;蛋白表达量分别为 0.58± 0.11、0.32± 0.18,两组间差异有统计学意义(P< 0.01);其表达与胶原含量显著相关(P< 0.01).结论垂体腺瘤纤维化的显著病理特征是胶原过度沉积,TIMP1高表达可能是其重要原因.
关键词： 间质胶原酶 金属蛋白酶组织抑制物-1 垂体腺瘤 纤维化 胶原 -
TIMP-1B细胞表位的预测和鉴定
目的:预测并鉴定金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)蛋白B细胞表位.方法:采用DNAStar和BcePred分析软件联合预测TIMP-1的B细胞表位,以此合成8分支多抗原肽结构的表位肽(MAP),并与通用型T辅助表位肽(VQGEESNDK,氨基酸163～171)联合免疫家兔,检测免疫血清效价,用Western blotting和间接酶联免疫吸附测定等方法鉴定其特异性和抗体亲和力.结果:软件预测显示,TIMP-1的第27～41 位(MAP1)、第57～71 位(MAP2)、第95～109 位(MAP3)和第193～207 位(MAP4)氨基酸序列可能为其优势B细胞表位.抗体滴度动态检测表明,MAP2、MAP3和MAP4均能诱导产生特异性抗体,其中MAP2和MAP4诱导的抗体水平高;免疫印迹证实MAP2、MAP3和MAP4诱导产生特异性的TIMP-1抗体;间接ELISA证实MAP4与商品化TIMP-1抗体具有高的亲和力.结论:TIMP-1的第27～41位和第193～207位氨基酸为其优势B细胞表位,其中第193～207位氨基酸的免疫原性强,这为TIMP-1多肽抗体和B细胞优势短肽疫苗研制提供了理论依据.
关键词： 金属蛋白酶组织抑制物-1 表位 B淋巴细胞 多抗原肽 免疫原性
