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转导反向6A8α-甘露糖苷酶cDNA对抗Fas抗体诱导Jurkat细胞凋亡的影响
用梯形DNA电泳与Gimsa染色研究人T细胞瘤细胞株Jurkat在转导编码人6A8 α-甘露糖苷酶基因的反向cDNA后，对抗Fas 抗体诱导凋亡敏感性的变化，并用间接免疫荧光染色（流式细胞仪）检测细胞表面Fas分子的表达。结果表明，抗Fas抗体诱导细胞24h后，野生型及转导空载载体的Jurkat细胞出现明显的梯形DNA，两者之间无明显差异，但转导反向6A8 cDNA的细胞未见明显的梯形DNA。Gimsa染色结果显示转导反向6A8 cDNA的Jurkat细胞中凋亡细胞数明显减少，而转导空载载体则无影响。Jurkat细胞为Fas（CD95, Apo-1）全阳性细胞，转导反向6A8 cDNA或空载载体对Fas表达阳性率与Fas表达强度无明显影响。以上结果提示，转导编码6A8α-甘露糖苷酶基因的反向cDNA使人T细胞株Jurkat对抗人Fas抗体诱导的凋亡作用产生耐受。
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6A8 α-甘露糖苷酶基因的mRNA表达与染色体定位
目的对6A8 α-甘露糖苷酶基因作染色体定位，比较6A8 α-甘露糖苷酶mRNA在人多种免疫细胞株的表达。方法用Fish原位杂交作染色体定位，用RT-PCR检测mRNA表达。结果 6A8 α-甘露糖苷酶基因定位于人第13号染色体长臂的31～32区。6A8 α-甘露糖苷酶mRNA在B细胞株SKW 6高表达，在B细胞株3D5、BJAB、CESS、Daudi、Nalm 6中度表达，在B细胞株Navalm，T细胞株GM、Jurkat，组织细胞瘤细胞株U937弱表达，在T细胞株Peer，慢性髓性白血病细胞株K562极弱表达。结论 6A8 α-甘露糖苷酶基因定位于人第13号染色体长臂的31～32区，其mRNA表达水平在各种人免疫细胞株不同。
关键词： 6A8α-甘露糖苷酶 染色体定位 mRNA表达 -
6A8α-甘露糖苷酶表达抑制使Jurkat细胞间的黏附性增强
目的探讨6A8α-甘露糖苷酶表达抑制对人T淋巴母细胞Jurkat生物学行为的影响. 方法采用反义核酸技术抑制细胞中6A8α-甘露糖苷酶的表达.用PCR检测转导基因在基因组中的整合.用单抗6A8作探针,Western印迹和免疫荧光染色流式细胞术检测细胞中6A8α-甘露糖苷酶的表达状况.用Con A结合试验检测细胞蛋白质的糖基化改变.普通光学显微镜观察细胞的形态.用DNA芯片技术分析AS细胞和M细胞mRNA表达的差异.用RT-PCR和免疫荧光染色流式细胞术验证基因芯片结果的可靠性. 结果制备了6A8α-甘露糖苷酶表达抑制的Jurkat细胞(AS).与对照细胞(野生型细胞W和转导空载体的细胞M)相比,AS细胞在培养中黏附成大团块.DNA芯片分析见与M细胞相比,AS细胞中有19个基因的表达上调,20个基因的表达下调.上调的基因中有一些与细胞间黏附相关,如CD54、CD11a、CD24、CD82、整合素αX、整合素α7、整合素αE、IL-1R、IL-2Rγ和TNFSF9.RT-PCR肯定了DNA芯片分析的可靠性.免疫荧光染色流式细胞术进一步肯定了CD54和CD11a在AS细胞表达的上调. 结论 6A8α-甘露糖苷酶表达抑制使Jurkat细胞间黏附增强,CD54和CD11a等黏附分子表达的增高可能与此相关.
关键词： 6A8α-甘露糖苷酶 糖基化 Jurkat细胞 黏附
