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转导反向6A8α-甘露糖苷酶cDNA对抗Fas抗体诱导Jurkat细胞凋亡的影响
用梯形DNA电泳与Gimsa染色研究人T细胞瘤细胞株Jurkat在转导编码人6A8 α-甘露糖苷酶基因的反向cDNA后，对抗Fas 抗体诱导凋亡敏感性的变化，并用间接免疫荧光染色（流式细胞仪）检测细胞表面Fas分子的表达。结果表明，抗Fas抗体诱导细胞24h后，野生型及转导空载载体的Jurkat细胞出现明显的梯形DNA，两者之间无明显差异，但转导反向6A8 cDNA的细胞未见明显的梯形DNA。Gimsa染色结果显示转导反向6A8 cDNA的Jurkat细胞中凋亡细胞数明显减少，而转导空载载体则无影响。Jurkat细胞为Fas（CD95, Apo-1）全阳性细胞，转导反向6A8 cDNA或空载载体对Fas表达阳性率与Fas表达强度无明显影响。以上结果提示，转导编码6A8α-甘露糖苷酶基因的反向cDNA使人T细胞株Jurkat对抗人Fas抗体诱导的凋亡作用产生耐受。
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抗Fas的抗体在实验性病毒性心肌炎中作用机制的研究
目的探讨中和型抗Fas的抗体对小鼠柯萨奇病毒性心肌炎的治疗作用及作用机制.方法60只BALB/c小鼠随机分为4组:1组空白对照组,2组病毒对照组、3组IgG对照组、4组抗Fas抗体治疗组.于接种后第10天每组随机处死小鼠8只,心肌组织切片HE染色了解心肌损伤情况,电镜技术及原位末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡情况,免疫组化方法检测caspase-3的表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测心肌组织中caspase-3的mRNA表达.实时定量PCR(RQ-PCR)定量心肌柯萨奇病毒B3(CVB3)mRNA拷贝数.结果(1)病毒对照组可见caspase-3表达和心肌细胞凋亡,且均与心肌病变积分成正相关(r=0.81,P＜0.01;r=0.73,P＜0.05).(2)抗Fas抗体治疗组小鼠心肌组织病变积分、心肌细胞凋亡率、caspase-3蛋白和mRNA表达及心肌内CVB3 mRNA拷贝数均明显低于病毒对照组(P＜0.05)和IgG对照组(P＜0.05).结论Fas/FasL途径介导的心肌细胞凋亡参与了病毒性心肌炎的发病过程,凋亡是导致病毒性心肌炎心肌损伤的重要机制之一,抗Fas抗体可降低caspase-3活化和mRNA表达,减少心肌细胞凋亡,降低心肌细胞内病毒复制,使心肌损伤明显减轻.
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抗Fas抗体诱导人肾小球系膜细胞凋亡
目的:研究抗Fas抗体对人肾小球系膜细胞的致凋亡作用,探讨Fas-FasL在肾脏损伤中的作用.方法:常规方法分离、培养人肾小球系膜细胞(Mcs),并传代鉴定,用不同浓度的抗Fas抗体(0,2,5,10 μg/ml)刺激4～6代Mcs 16 h后,荧光染色观察Mcs凋亡变化,二苯胺法和DNA凝胶电泳方法定量和定性分析Mcs DNA片段化变化.结果:抗Fas抗体可诱导Mcs凋亡,且致凋亡效应呈依赖性关系.结论:Fas-FasL系统在Mcs凋亡中起着重要作用.
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抗Fas抗体诱导维甲酸分化后的髓母细胞瘤细胞凋亡
目的:观察全反式维甲酸(RA)诱导分化前后,人髓母细胞瘤细胞系Med-3对抗Fas抗体的反应特点并探讨其免疫治疗意义.方法:使用10 μmol/L的RA诱导Med-3细胞分化并在处理当时或第24、 48、72、 96 h,分别加入终浓度为25,50,100,200和400 ng/ml的抗Fas抗体.结合各组细胞Fas表达形式,分析其形态学,细胞动力学,克隆形成能力和死亡特点.结果:正常培养的Med-3细胞表达30 kD的可溶型Fas(sFas).RA能促进 Med- 3分化和膜型Fas(mFas)表达,但不诱导凋亡.单纯抗Fas抗体处理对靶细胞无明显效应.RA 处理的同时或不同时期加入抗体能在不同程度上诱发细胞凋亡;其中,以RA处理后第48 h加入200 ng/ml 抗体的凋亡诱导效果佳.结论:RA通过上调mFas表达提高髓母细胞瘤细胞系的凋亡易感性.因此 ,RA与Fas相关性凋亡促进剂配伍可能有助于改善髓母细胞瘤的临床免疫和/或药物治疗现状.
