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神经病理性疼痛对大鼠脊髓背角蛋白磷酸酶1的表达调控作用
目的 明确双侧坐骨神经松结扎(bCCI)大鼠脊髓背角蛋白磷酸酶1催化亚基β异构体(PPP1 CB)的表达水平及其与miR-203之间的关系,以及加巴喷丁的干预效果.方法 48只雌性大鼠,被随机分为Naive组、Sham组、bCCI组和bCCI+加巴喷丁组,建立bCCI模型.加巴喷丁干预组分别于术前15 min 1次、术后第7天起每日2次腹腔注射给予加巴喷丁100 mg/kg,连续7d.术后第14天处死大鼠,留取脊髓背角(L4～L6)标本,分别利用real-timePCR与Western blot技术检测PPP1CB mRNA及蛋白质表达,并进行生物信息学分析.结果 PPP1 CB mRNA表达显著下降约80％,而大鼠脊髓背角PPP1 CB蛋白表达水平则较对照组和假手术组上升约2倍;加巴喷丁干预组大鼠脊髓背角PPP1 CB蛋白表达水平较未干预组显著回落(P＜0.05),但未恢复到对照组和假手术组水平,而PPP1CB mRNA表达水平则较未干预组有显著回升(P＜0.05),恢复到与正常对照组、假手术组相同水平;利用生物信息学验证了 miR-203对PPP1CB的调控关系.结论 bCCI大鼠脊髓背角PPP1 CB蛋白的表达量上升可能受到了miR-203的调控作用,并可能通过多种途径参与了神经病理性疼痛的发生发展.
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miR-203通过靶向调控SOCS3影响人皮肤鳞癌细胞增殖、细胞周期行为及其机制研究
目的 探究miR-203对人皮肤鳞癌细胞A-431增殖、细胞周期行为的影响.方法 实时荧光定量PCR检测27对人皮肤鳞癌/癌旁组织及A-431/HaCaT细胞中miR-203的表达.在A-431细胞中过表达miR-203,针对miR-NC组和miR-203 mimic组,通过MTT、流式细胞技术检测miR-203对细胞增殖、细胞周期的影响.生物信息学对miR-203进行靶基因预测,并通过双荧光素酶实验确定miR-203和靶基因是否存在相互作用,Western Blot检测该靶基因在过表达miR-203皮肤鳞癌细胞中表达变化.结果 miR-203在皮肤鳞癌组织及癌细胞A-431中均显著低表达,相对癌旁组织及HaCaT细胞分别降低36％及40％.与miR-NC组比较,miR-203 mimic组抑制A-431细胞增殖,导致G1/S进程受阻,S期细胞减少.生物信息学分析表明SOCS3是miR-203直接作用的靶基因,双荧光素酶实验验证了该结果,且过表达miR-203可以明显下调SOCS3的蛋白表达量.结论 miR-203在人皮肤鳞癌中低表达,可以通过负调控靶基因SOCS3抑制鳞癌的生长,具有作为临床治疗靶标分子的潜能.
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miR-203对Tca8113增殖能力影响观察
目的:探讨miR-203对人舌鳞癌细胞系Tca8113增殖能力的影响.方法:通过慢病毒转染技术构建miR-203过表达的舌鳞癌细胞模型.RT-PCR法检测miR-203过表达慢病毒转染前后miR-203的表达水平;MTT方法检测miR-203过表达(micro up组)及阴性对照(NC组)2组细胞的增殖能力,连续检测5d,酶标仪检测A490值,绘制细胞增殖曲线;PI-FACS细胞周期检测miR-203过表达后对DNA合成和细胞周期的影响,取处于对数生长期的细胞,70％乙醇固定＞1 h,细胞染色,流式细胞仪检测.结果:成功建立了miR-203过表达舌鳞癌细胞模型.定量PCR结果显示,Tca8113细胞中,micro up组miR-203表达丰度是NC组的286.262倍,t=-34.879,P=0.001.MTT检测结果表明,与NC组相比,micro up组细胞增殖能力明显降低;检测第4天micro up组A490值为0.492±0.011,NC组为0.681±0.009,t=-23.463,P＜0.001.PI-FACS细胞周期检测结果显示,micro up组DNA合成前期(G1期)细胞所占百分率为(58.98±0.56)％,较NC组的(53.86±0.96)％明显增高,t=-7.989,P=0.001;而DNA合成期(S期)、合成后期(G2期)及有丝分裂期(M期)细胞所占百分率降低.结论:miR-203可能通过将细胞周期阻滞于G1期,从而抑制舌鳞癌细胞系Tca8113的细胞增殖能力.
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miR-203在前列腺癌中的表达及其与预后的相关性
目的 探讨miR-203在前列腺癌组织中的表达及其与前列腺癌临床病理特征和患者预后的关系.方法 应用实时荧光定量反转录PCR检测30例前列腺癌和10例前列腺良性增生组织中miR-203的表达,应用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-203与患者预后的关系,多变量Cox比例风险回归模型筛选影响患者生存的独立预后因素.结果 miR-203在前列腺癌组织中表达较良性增生组织增高,差异有统计学意义(P＜0.05),Gleason积分＞7分者较＜7分者miR-203表达量增高了约2倍；Gleason积分7～8分与前列腺良性增生症、Gleason积分9～10分与前列腺良性增生症、Gleason积分7～8分与7分、Gleason积分9～10分与＜7分的组间比较,miR-203的表达量分别增高了2.8、3.1、2.7、2.9倍,差异均有统计学意义(均P＜ 0.05).miR-203表达与Gleason积分、临床分期及发生骨转移相关,miR-203高表达的患者生存时间明显缩短(P＜0.05).结论 miR-203表达异常可能在前列腺癌的发生、发展中发挥了一定作用,其表达水平与肿瘤恶性分化及患者不良预后密切相关,可作为提示肿瘤恶性程度和风险评估的分子标志物.
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miR-203靶向RUNX2对牙周膜干细胞成骨分化能力的调控作用
目的:体外研究miR-203对人牙周膜干细胞成骨分化能力的影响及调控机制.方法:分离培养人牙周膜干细胞,检测牙周膜干细胞矿化诱导前后miR-203和RUNX2的表达;分别转染miR-203沉默及过表达模拟物;qPCR检测miR-203和RUNX2mRNA水平的表达;Western blot检测RUNX2蛋白水平的表达,茜素红染色观察细胞成骨分化能力的变化;生物信息学分析miR-203的靶基因,双荧光素酶报告实验验证;共转染miR-203 inhibitor和RUNX2 siRNA,分析共转染后对RUNX2表达及细胞成骨分化能力的影响.结果:成骨诱导液诱导后牙周膜干细胞中miR-203的表达水平显著下调,而RUNX2的表达水平明显升高;miR-203过表达可明显抑制hPDLSCs的成骨分化能力和RUNX2的表达,抑制miR-203的表达,则结果相反;通过生物信息学分析miR-203的潜在靶基因含有RUNX2,双荧光素酶报告实验验证RUNX2为miR-203的靶基因;进一步实验结果表明沉默RUNX2可逆转miR-203 inhibitor对牙周膜干细胞成骨分化的促进作用.结论:miR-203可靶向调控RUNX2对人牙周膜干细胞成骨分化能力产生影响,提示miR-203在hPDLSCs组织工程损伤修复过程中发挥着重要作用.
关键词： miR-203 人牙周膜干细胞(hPDLSCs) 成骨分化 Runx2 -
Down regulation of miR-203in radiation-induced thymic lymphoma promoted cells proliferation and inhibited apoptosis
Objective To investigate the role of miR-203 in radiation-induced thymic lymphoma (RITL).Methods A 60Co irradiator was used for total-body irradiation.MicroRNAs(miRNAs) level was assayed by qRT-PCR.Cell proliferation was assayed by MTT assay.Cell apoptosis was examined by fluorescence activated cell sorter (FACS).Dual luciferase reporter assay system was used to detect the 3'UTR reporter.Results MiR-203 was down-regulated in RITL tissues.Overexpression of miR-203 strongly inhibited the proliferation of both NIH3T3 cells and EL4 cells and vice versa.MiR-203 inhibited cells proliferation and induced apoptosis via TANK-binding kinase (TBK1),SLUG (SNAI2) and Cyclin D1 (CCND1).Conclusions Radiation down-regulated the level of miR-203 in thymic,which promoted radiation-induced thymic lymphoma by targeting TBK1,SNAI2 and CCND1.
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组织与脱落细胞中的microRNA表达量检测指示miR-203在口腔扁平苔藓中的潜在作用
口腔扁平苔藓(OLP)是一种癌前病变和慢性炎症,其损伤具有组织学异质性,多种类型的细胞参与其发生与恶性转化,而其分子机制尚不明确.本研究检测了来自于OLP患者和健康志愿者口腔组织和脱落细胞中miR-96/182/183簇、miR-203、miR-375、miR-769-5p的表达水平,并通过双标图法评价了显著差异表达的miRNA与OLP的相关性.研究发现,相对于志愿者正常组织,miR-203在患者病损区组织中显著高表达,其变化程度明显高于其它miRNA.与此相反,miR-203及miR-96/182/183簇的表达在脱落细胞中则没有显著差异,提示OLP病损区中不同类型细胞对miRNA表达的调控不同,可能与OLP的组织学异质性相关.双标图分析表明miR-203与miR-96/182/183簇的表达量在患者病损区组织中呈正相关.本研究结果表明miR-203不仪在分子层次显示了OLP的组织学异质性,还可能成为潜在的诊断标志物和治疗药物靶标.
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类风湿关节炎患者关节滑膜液miR-203和MMP-3表达及其临床意义
目的 探讨类风湿关节炎(RA)患者关节滑膜液中miR-203和MMP-3表达的相关性及其临床意义.方法 选取RA患者60例作为研究组,选取我院健康志愿者30例作为对照组,qRT-PCR检测miR-203表达水平,ELISA法检测MMP-3表达水平.ROC曲线分析评价其对RA诊断的灵敏度及特异度.结果 RA患者关节滑膜液中miR-203和MMP-3表达高于对照组,其在活动期表达升高更明显,两者存在显著正相关(r=0.678,P<0.001).相关性分析显示,miR-203、MMP-3与RA临床指标RF、ACCP、CRP、ESR及DAS28等存在正相关性.ROC曲线分析表明关节滑膜液miR-203及MMP-3对RA具有较高的诊断灵敏度和特异度,联合检测能提高疾病的临床诊断能力.结论 miR-203及MMP-3在患者关节滑膜液中存在差异表达,这种差异具有较强的临床诊断能力,有望成为新的临床诊断指标;通过调控miR-203及MMP-3表达,可以作为RA潜在治疗靶点.
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miR-203在儿童急性白血病患者中的表达及其临床意义
目的 检测miR-203在儿童急性白血病患者中的甲基化状态及表达情况,探讨其临床意义.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应检测miR-203启动子区CpG岛的甲基化状态,用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-203的相对表达量,分析其与临床指标间的关系.结果 31例儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)、15例儿童急性髓系白血病(AML)及23份非恶性血液病患儿骨髓标本(对照组)均未检测到miR-203的甲基化现象.miR-203在对照组、儿童急性白血病组、ALL组及AML组的相对表达量分别为16.93±6.31、48.97±10.38、55.88±12.91、24.28±9.10,儿童急性白血病组、ALL组与对照组相比,差异有统计学意义(P值分别为0.011和0.009),儿童AML组与对照组相比,差异无统计学意义(P=0.514).各项临床指标中,miR-203的表达与初诊ALL患儿的性别、免疫分型、染色体核型、是否检出融合基因、BCR-ABL基因表达、SIL-TAL1基因表达、泼尼松试验及急性白血病患儿的性别、染色体核型、是否检出融合基因、SIL-TAL1基因表达相关(P值均＜0.05).其中在ALL危险度分组两两比较中,中危组与高危组两组间miR-203的表达差异有统计学意义(P=0.022).结论 miR-203在大部分急性白血病患儿中不受甲基化机制调控.miR-203可能作为原癌基因参与儿童急性白血病尤其是ALL的形成.miR-203的高表达可能与急性白血病患儿尤其是ALL患儿的不良预后相关.
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miR-203靶向调控机制在妇科肿瘤中的研究进展
微小RNA(microRNA)是一类进化历程中高度保守的、小型非编码RNA,参与基因表达的转录后调控,在细胞凋亡、转移、上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)、新陈代谢和血管再生等细胞事件中起重要作用.microRNA基因沉默受转化抑制和mRNA退化影响.RNA诱导沉默复合物(RNA-induced silencing complex,RISC)是由microRNA与Argonaute (Ago),GW182,and FXR1蛋白等结合而成,可与microRNA组装成miR-RISC,通过完全或不完全互补方式识别并结合到靶基因mRNA3'UTR(未翻译区),进而降解靶基因mRNA或抑制其翻译表达,终实现对靶基因表达水平的转录后调控[1].
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MicroRNA在类风湿关节炎中的作用
MicroRNA(miRNA)是一类新型保守的非编码单链小分子RNA,能够在转录后水平调节mRNA表达导致蛋白翻译抑制或促进靶mRNA降解.到目前为止,在生物界已发现5000多种miRNA,在miRBase所登记的miRNA数据库中仅人类就有千余种,预计人类有超过30％的蛋白编码基因受miRNA调控.免疫细胞中表达多种miRNA,对固有免疫和适应性免疫的分子通路和细胞分化及功能有广泛的影响,其表达失调将导致免疫相关的疾病(如类风湿关节炎),因此研究miRNA对诊断各种疾病类型及预后有潜在临床应用价值.
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miR-203在肝细胞肝癌中的表达及其对肿瘤细胞增殖及侵袭能力的影响
目的:探讨miR-203在肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)患者血浆中的表达及其对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响.方法:选择2013年5月-2015年7月在我院确诊为肝细胞肝癌的患者57例作为研究对象,另选取同期在我院接受健康体检的志愿者49例作为对照组.采用实时荧光定量RT-PCR法检测两组血浆中miR-203的表达水平;将过表达的miR-203转染至人肝癌细胞系Hep 3B和JHH-1;采用CCK-8法检测miR-203对肝癌细胞增殖能力的影响;采用transwell法检测miR-203对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响.结果:miR-203在肝癌患者血浆中的表达水平显著低于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.01);与未转染的肝癌细胞比较,Hep 3B和JHH-1细胞转染miR-203mimic后,肿瘤细胞的增殖、迁移及侵袭能力受到明显抑制,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:miR-203在肝细胞肝癌中呈低表达,而过表达miR-203能够抑制肿瘤细胞的增殖及侵袭能力,提示miR-203可以作为一种新的肿瘤抑制性microRNA.
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MicroRNA-155、microRNA-203在银屑病患者皮肤中的表达及定位
目的:研究microRNA-155 (miR-155)、microRNA-203(miR-203)在银屑病患者皮损区及非皮损区皮肤中的表达及定位.方法:活检切取12名寻常型银屑病患者皮损及邻近非皮损区的皮肤组织,采用石蜡包埋,通过RT-PCR法检测和比较12对标本的皮损区、非皮损区中miR-155、miR-203表达水平,并以5'端、3'端地高辛标记的探针对组织切片中的目的miRNA进行原位杂交,观察miR-155、miR-203在皮肤组织中的定位情况.结果:12对标本中,miR-155在皮损区的表达显著高于非皮损区,差异具有显著统计学意义(P＜0.05);而皮损区和非皮损区miR-203的表达未见统计学差异(P＞0.05).miR-155在皮肤的表皮、真皮均有表达,定位在细胞核,基底层表达较高;miR-203在基底层和表皮突表达较高,细胞核、细胞质中均有表达.结论:银屑病患者皮损区miR-155的表达显著升高,定位在细胞核,在皮肤的表皮、真皮均表达,可能参与了银屑病的发生发展过程.
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MiR-203及其调控机制的研究进展
MicroRNA(miRNA)是一种长18-25个碱基的单链非编码RNA,其广泛参与机体众多病理、生理过程.MiR-203是一种上皮组织特异性表达的miRNA.研究发现miR-203在皮肤发育、皮肤相关疾病、上皮组织肿瘤等病理、生理过程中发挥重要调控作用.一些疾病的研究还发现了miR-203与表观遗传学机制的相互作用,而miR-203调控机制的研究集中在P63、SOCS-3及相关的信号通路等方面.
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miR-203调控NEDD9抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭及迁移作用机制研究
目的:研究miR-203抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞NEDD9蛋白的作用对细胞侵袭和迁移的影响.方法:miR-203脂质体转染MDA-MB-231细胞,通过细胞划痕实验和Transwell实验观察细胞侵袭和迁移能力的变化;通过蛋白印迹检测miR-203对NEDD9表达的调控作用,并用sensor reporter确定miR-203的靶标位点;后,通过细胞“拯救”实验研究相关蛋白表达量的变化,用免疫荧光-激光共聚焦显微镜观察细胞片状伪足和黏着斑的改变,探究miR-203对MDA-MB-231细胞侵袭和迁移能力的调节机制.结果:细胞划痕实验和Transwell实验显示,miR-203抑制了MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力;通过生物信息学网站预测miR-203的靶基因是NEDD9;蛋白印迹和sensor reporter检测结果显示,miR-203通过与NEDD9 3'-UTR结合,下调NEDD9;共转染siNEDD9和miR-203的“拯救”实验后的细胞划痕实验、蛋白印迹和免疫荧光-激光共聚焦结果显示,miR-203抑制NEDD9表达导致激活态Rac1-GTP减少,致使细胞运动状态改变,侵袭迁移能力减弱,而siNEDD9干涉作用能“拯救”miR-203对MDA-MB-231细胞迁移能力的抑制.结论:miR-203通过降解NEDD9,下调激活的Rac1水平,导致乳腺癌细胞MDA-MB-231片状伪足和黏着斑的减少或消失,从而抑制细胞的侵袭及迁移.
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miR-203及其下游靶基因p63、生存素在银屑病皮损中的表达
目的 检测寻常性银屑病皮损中miR-203及其下游靶基因p63、生存素的表达水平.方法 实时PCR法检测30例寻常性银屑病患者皮损及30例健康对照皮肤中miR-203、p63、生存素mRNA的表达水平,miR-203以U6为内参照,p63和生存素以GAPDH为内参照;Western印迹法检测靶基因p63、生存素蛋白表达水平,两组间比较采用t检验,寻常性银屑病皮损中miR-203与生存素、p63表达的相关性采用Pearson相关分析.结果 与健康对照皮肤相比,寻常性银屑病皮损中miR-203 mRNA表达量为对照组的(0.41±0.11)倍,表达明显下调(t=3.16,P＜0.05);其靶基因p63、生存素mRNA表达量分别为对照组的(4.79±0.63)和(3.43±0.46)倍,表达水平明显上调(t值分别为4.72、4.35,均P＜0.05);靶基因p63、生存素蛋白表达量分别为对照组的(2.40±0.23),(3.49±0.14)倍,表达水平也明显上调(t值分别为3.87、4.36,均P＜0.05).寻常性银屑病皮损中miR-203mRNA与生存素mRNA呈负相关(r=-0.36,P＜0.05),与p63 mRNA呈负相关(r=-0.43,P＜0.05).结论 miR-203及其下游靶基因p63、生存素可能参与了银屑病的发病过程.
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miR-203在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义
目的:探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单个核细胞中miR-203的表达水平与疾病活动度、肾脏受累情况等临床表现之间的关系,初步探讨miR-203在SLE中的临床意义.方法:收集31例SLE患者、16例健康志愿者外周血标本,根据肾脏受累分为狼疮肾炎21例和SLE无肾脏受累10例.采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quota polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中miR-203表达,比较各组间miR-203表达水平的差异,并分析其与SLE临床指标之间的关系.结果:SLE患者miR-203表达明显低于正常对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05);狼疮肾炎组患者miR-203表达低于SLE无肾脏受累组和正常对照组,差异具有统计学意义(P＜ 0.01);SLE患者miR-203表达水平与24 h尿蛋白、肾脏急性指数呈明显负相关(P＜0.01).结论:SLE患者PBMCs中miR-203的表达水平降低,表明miR-203在SLE发病机制中可能发挥一定作用;狼疮肾炎患者miR-203的表达降低,提示miR-203可能参与了狼疮肾炎的发病.
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miR-203过表达对人瘢痕成纤维细胞增殖的影响
目的:探讨miR-203过表达对人瘢痕成纤维细胞增殖的影响及其机制.方法:组织块法培养原代人瘢痕成纤维细胞6、12、24和48 h;miR-203模拟物(miR-203 mimics)转染人瘢痕成纤维细胞并培养24 h;采用CCK-8检测细胞的存活率;流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测miR-203与p53基因家族成员截短型p63(ΔNp63)的靶标关系;qRT-PCR检测miR-203和△Np63 mRNA的表达水平;Western blotting检测ΔNp63和P53的蛋白表达水平.结果:miR-203在瘢痕成纤维细胞中表达明显降低(P＜0.01),且呈时间依赖性;转染miR-203 mimics后作用24 h,miR-203表达水平显著增加(P＜0.0l);miR-203过表达使细胞存活率降低至42％ (P ＜0.01),细胞凋亡率增高至45％ (P ＜0.01);miR-203与ΔNp63存在直接靶标关系;miR-203过表达可显著抑制ΔNp63的mRNA和蛋白表达水平,同时显著上调P53的蛋白表达水平(P＜0.01).结论:miR-203过表达可抑制人瘢痕成纤维细胞增殖,其机制可能是通过靶向抑制ΔNp63的表达进而上调P53的蛋白表达.
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miR-203表达异常与甲状腺乳头状癌发生发展的关系
目的 探讨miR-203表达与甲状腺乳头状癌发生与发展的关系.方法 收集甲状腺乳头状癌标本40例,另选取良性甲状腺肿瘤标本30例,使用定量逆转录-聚合酶链反应技术(qRT-PCR)检测特定的miRNA表达,Transwell实验测定miR-203对细胞侵袭性的影响,通过启动子区乙酰化寻找与miR-203表达的关系.结果 甲状腺乳头状癌组织及细胞系中miR-203的表达量均低于良性甲状腺组织或细胞系(P＜0.05),且survivin的表达量有所上升(P＜0.05);miR-203启动子区的去乙酰化会导致miR-203的表达异常.结论 miR-203在甲状腺乳头状癌中的表达低于甲状腺良性肿瘤组织,在甲状腺乳头状癌中的诊断及靶向治疗方面具有广泛应用.
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miR-203及其靶基因与肿瘤关系的研究进展
miR-203是近年来发现的第一种皮肤特异性miRNA,不但参与构建皮肤保护层、与银屑病和牛皮癣等皮肤性疾病有关,而且作为抑癌或致癌因子与靶基因共同作用参与肿瘤发生、发展.本文从miRNA-203的生成与组织分布、靶基因及相关肿瘤作用机制等方面进行综述.
