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维甲酸诱导和生精小管重构促使小鼠诱导多能干细胞向雄性生殖细胞分化的实验研究
目的 探讨体外维甲酸联合异位重构生精小管诱导小鼠诱导多能干细胞(iPSCs)向雄性生殖细胞分化的潜能. 方法 自2010年12月至2011年12月,采用悬浮法培养小鼠iPSCs形成类胚体.类胚体培养至第5天,添加维甲酸进行诱导,不添加维甲酸的类胚体自发分化组作为对照组.收集培养10d的类胚体,采用实时定量PCR和免疫细胞化学检测其生精细胞相关基因和蛋白的表达.同时将类胚体消化为单细胞,与新生小鼠睾丸细胞混合注入雄性裸鼠皮下,移植完成后裸鼠行手术去势,移植后第4、6、8、12周取移植物进行HE染色和免疫组织化学染色. 结果 小鼠iPSCs经类胚体形成及维甲酸诱导后Stra8、Odf2、Act和Prm1基因的相对表达量上调,分别为对照组的(4.50±1.02)、(1.48±0.04)、(10.52±0.25)和(323.28±25.64)倍;Oct-4、Dppa3、Piwil2、Tex14和Scp3基因相对表达量下调,分别为对照组的0.56±0.02、0.11±0.01、0.50±0.01、0.53±0.14和0.16±0.00.类胚体同时表达雄性生殖细胞相关蛋白VASA和联合复合体蛋白3.HE染色发现,iPSCs来源生精细胞和新生小鼠的睾丸细胞共移植后能重构成类生精小管.免疫荧光染色结果显示,类生精小管管腔内可见由iPSCs分化而来的VASA阳性生精细胞. 结论 小鼠iPSCs经类胚体形成和维甲酸诱导后可分化为雄性生殖细胞.部分iPSCs来源的生精细胞可定居于类睾丸生精小管的基底膜,异位重构的生精小管可为iPSCs向雄性生殖细胞分化提供适宜的微环境.
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维甲酸对大肠癌患者免疫功能的影响
为探索维甲酸对大肠癌患者免疫功能的影响,我们对40例大肠癌患者进行了前瞻性随机研究.
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维甲酸β受体在结直肠癌组织中的表达及其意义
目的 探讨维甲酸β受体(RAR-β)在结直肠癌组织中的表达及其意义.方法 应用免疫组化法检测2006年1月至2007年1月收治的60例结直肠癌患者肿瘤组织、癌旁组织及正常组织标本中RAR-β的表达,采用化学发光免疫法检测该60例患者术前血清癌胚抗原(CEA)水平,结合其临床病理资料,分析人结直肠癌组织中RAR-β的表达情况及其意义.结果 60例结直肠癌患者的肿瘤组织中RAR-β阳性表达率(48%)显著低于正常组织(87%)及癌旁组织(87%)(P<0.05).有淋巴结转移患者的肿瘤组织中RAR-B阳性表达率(32%)显著低于无淋巴结转移患者的肿瘤组织(60.0%),且晚期肿瘤患者(TNM Ⅲ、Ⅳ期)的RAR-β阳性表达率(29%)显著低于早期肿瘤患者(Ⅰ、Ⅱ期)(69%)(P均<0.05).RAR-β阳性表达率在高、中、低分化肿瘤组织中无明显差异.本组患者中,CEA水平升高者20例,正常者40例,有淋巴结转移及晚期肿瘤患者中CEA水平升高者(48%、52%)分别高于无淋巴结转移及早期肿瘤患者(23%、14%)(P均<0.05).结论 RAR-β在结直肠癌组织中表达下调,这可能与结肠癌发生相关,且其表达下降程度与淋巴结转移情况及TNM分期呈明显负相关,与CEA类似,其表达可作为结直肠癌的预后指标.
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先天性马蹄内翻足的实验及临床初步观察
目的在动物模型和临床电生理检测基础上,探索先天性马蹄内翻足的病理与临床病变间的可能联系.方法 83只大白鼠从怀孕第10天起,将维甲酸石蜡油混悬液经胃管单次注入,以建立马蹄内翻足动物模型;应用躯体感觉诱发电位等电生理检测方法,对48例(63足) 先天性马蹄内翻足患儿的神经功能进行检测.结果动物模型的马蹄内翻足发病率为53.7%.距骨持续停滞在胚胎阶段,距骨、跟骨间重叠不良和跟骨内翻,脊髓前角细胞有凋亡现象;68.3%的患儿电生理检测异常,明确病变位点位于腰骶脊髓占48.8%.结论先天性马蹄内翻足在胚胎发育期即有足的马蹄内翻,且畸形程度随生长发育而逐步加重.脊髓前角细胞凋亡可能同时诱发脊柱裂、肛门直肠畸形、先天性马蹄内翻足等疾患.
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iTRAQ技术鉴定TCDD与维甲酸致胎鼠腭裂共同表达的差异蛋白质
目的 应用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)技术结合质谱分析筛选2,3,7,8-四氯二苯二噁英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-pdioxin,TCDD)与维甲酸致胎鼠腭裂发生的共同差异表达蛋白质.方法 将36只C57BL/6J孕鼠按照随机数表法分为3组,每组12只.分别以28 μg/kg TCDD、80 mg/kg维甲酸在C57BL/6J孕鼠第10.5个妊娠日(gestational day 10.5,GD10.5)灌胃,建立胎鼠腭裂模型,对照组给予等量玉米油灌胃,于GD17.5观察胎鼠腭部的解剖学及组织学改变;取TCDD组、维甲酸组与对照组GD17.5胎鼠的腭组织,从中提取总蛋白质,采用iTRAQ技术联合二维液相色谱-串联质谱分析和鉴定实验组与对照组的差异表达蛋白质;用Western Blot对Annexin A1、14-3-3 sigma差异蛋白进行表达验证.实验数据应用SPSS17.0软件进行统计分析,腭裂发生率的比较采用卡方检验,3组目的蛋白相对表达量比较采用单因素方差分析,方差齐性分析采用Levene检验,组间比较采用Turkey HSD检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 ①成功建立了胎鼠腭裂模型,TCDD组与维甲酸组腭裂发生率分别为97.1％ (68/70)和98.6％ (70/71),2组比较差异无统计学意义(x2=0.00,P＞0.05),腭裂表型在形态学上相似.②共鉴定出2 996个蛋白质,TCDD组、维甲酸组与对照组比较,分别筛选出差异蛋白75个和90个,2个实验组共同表达的差异蛋白有18个.③Western Blot结果显示,Annexin A1蛋白表达水平对照组为0.52±0.11,TCDD组和维甲酸组分别为0.99 ±0.34和0.98±0.31,分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);14-3-3 sigma蛋白表达水平对照组为0.55±0.15,TCDD组和维甲酸组分别为0.86±0.17和0.93±0,13,分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05),与iTRAQ检测结果一致.结论 应用iTRAQ技术能够快速、有效地筛选TCDD与维甲酸致C57BL/6J胎鼠腭裂发生的共同表达的差异蛋白,这些差异蛋白可能与TCDD、维甲酸致胎鼠腭裂发生密切相关.
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维甲酸改变腭突发育关键时期细胞增殖和凋亡导致腭裂
目的 探讨维甲酸对腭发育关键时期腭突间充质细胞和上皮细胞增殖和凋亡的影响,确定其致腭裂的胚胎学作用节点.方法 将100只怀孕12d(E12)的C57孕母鼠采用随机数字表法平均分为2组,实验组灌胃维甲酸1次,70 mg/kg,对照组灌胃玉米油,分别取E13.5、E14.5、E15.5和E17.5的胎鼠头部制成石蜡切片,HE染色观察腭突的形态,BrdU和TUNEL染色分别检测间充质和上皮细胞增殖、凋亡情况.结果 在E13.5～15.5切片中,维甲酸处理组的前部腭突间充质细胞增殖明显增多,差异有统计学意义.后部腭突间充质细胞的增殖无明显差异.对照组前部和后部的上皮细胞增殖均无明显差异.E13.5～14.5切片中维甲酸处理组口腔侧上皮细胞的凋亡减少.结论 维甲酸诱导腭突间充质细胞过度增殖,口腔面上皮细胞凋亡减少,腭突不能正常抬升和融合,终导致腭裂发生.
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子宫颈脱落细胞中DAPK1、 RAR-β和MGMT基因启动子的甲基化水平及其临床意义
目的 检测宫颈脱落细胞中DAPK1、RAR-β、MGMT基因启动子的甲基化水平,探讨其筛查高级别宫颈病变[包括宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅱ、Ⅲ]及宫颈鳞癌的价值.方法 采用简单随机法选取2010年3-10月间北京协和医院临床使用后剩余的宫颈脱落细胞标本共103份,其中,细胞学诊断包括正常宫颈细胞12份、不典型鳞状上皮细胞(ASC)17份、低度鳞状上皮内病变(LSIL) 30份、高度鳞状上皮内病变( HSIL)30份、宫颈鳞癌14份；组织学诊断包括正常宫颈组织27份、CIN Ⅰ19份、CIN Ⅱ 17份、CIN Ⅲ 25份、宫颈鳞癌15份.采用甲基化特异性高分辨率熔解曲线分析(MS-HRM)法检测宫颈脱落细胞中DAPK1、RAR-β、MGMT基因启动子的甲基化率,并评价MS-HRM法检测的敏感性；采用第二代杂交捕获技术( HCⅡ)检测宫颈脱落细胞中高危型HPV载量(以HPV-HCⅡ值表示)；评价DAPK1、RAR-β、MGMT基因启动子的甲基化和HCⅡ单独或联合检测筛查高级别宫颈病变及宫颈鳞癌的价值.结果MS-HRM法可以检测出标准样本中的1％DNA甲基化率.在不同细胞学病变中,DAPK1、RAR-β、MGMT基因启动子的甲基化率分别比较,差异均有统计学意义(P值分别为0.000、0.011、0.002)；在不同组织学病变中,DAPK1和RAR-β基因启动子的甲基化率分别比较,差异均有统计学意义(P值分别为0.000、0.021).高级别宫颈病变+宫颈鳞癌与正常宫颈+CINI组织中DAPK1基因启动子的甲基化率分别为1.47％和20.98％,两者比较,差异有统计学意义(P =0.000).DAPK1基因启动子的甲基化检测筛查高级别宫颈病变及宫颈鳞癌的灵敏度为0.571、特异度为0.791,曲线下面积(AUC)为0.709；DAPK1基因启动子的甲基化联合HCⅡ检测的灵敏度为0.825、特异度为0.565,AUC为0.695.结论 MS-HRM法检测宫颈脱落细胞的甲基化水平是可行的.DAPK1、RAR-β基因启动子甲基化可以作为筛查宫颈病变的分子标记.DAPK1基因启动子的甲基化联合HCⅡ检测有助于筛查高级别宫颈病变及宫颈鳞癌.
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维甲酸对人子宫颈癌细胞系HeLa细胞间隙连接蛋白转导途径调控作用的研究
目的 探讨维甲酸对人子宫颈癌细胞系HeLa 细胞间隙连接蛋白（Cx）43信号转导途径的调控作用。方法 应用特异性钙指示剂（Fluo-3 AM）在激光扫描共聚焦显微镜下动态观察维甲酸作用后的细胞质内信号转导分子游离钙的分布及强度变化。采用流式细胞仪、结合蛋白印迹技术分析，检测外源信号分子对Cx43的表达以及蛋白酪氨酸磷酸化状态的影响。结果 HeLa细胞内游离钙经维甲酸作用后明显超载，细胞内游离钙浓度（［Ca2+］i） 由静息状态下的35.73 μmol/L上升至58.16 μmol/L。流式细胞仪分析，Cx43阳性细胞表达率由1.9%上升至26.3%。蛋白印迹技术分析，HeLa细胞出现Cx43酪氨酸磷酸化。结论 维甲酸对HeLa细胞Cx43信号转导途径的调控是在细胞质内游离钙的参与下，使Cx43阳性细胞表达率上升，并在酪氨酸位点出现明显的磷酸化作用下实现的。
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卵巢癌自杀基因治疗的旁观者效应及其与间隙连接蛋白43表达的关系
目的探讨单纯疱疹病毒-胸苷激酶/更昔洛韦(HSV-TK/GCV)在卵巢癌治疗中的旁观者效应及其与间隙连接蛋白(Cx)43表达的关系,同时观察全反式维甲酸(RA)对两者关系的影响.方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法比较经HSV-TK/GCV治疗及RA作用前后卵巢癌细胞株OVCAR3、CAOV3细胞旁观者效应的强弱;采用流式细胞仪,蛋白质免疫印迹法(Westem Blot)、间接免疫荧光染色检测两卵巢癌细胞株RA作用前后Cx43的表达,Cx43的表达以平均荧光强度表示.结果(1)HSV-TK/GCV对OVCAR3细胞产生较明显的旁观者效应,而对CAOV3细胞旁观者效应弱,两者比较,差异有显著性(P＜0.05).(2)RA对OVCAR3细胞的旁观者效应有增强作用(P＜0.05),但不影响CAOV3细胞的旁观者效应(P＞0.05).(3)流式细胞仪检测提示,OVCAR3细胞中Cx43的表达为4.45,而CAOV3细胞中Cx43的表达为0.89,两者比较,差异有显著性(P＜0.05);Western Blot、间接免疫荧光染色检测结果也表明,OVCAR3细胞有Cx43的表达,且定位于细胞膜,而CAOV3细胞中无Cx43的表达.(4)RA作用后,Western Blot、间接免疫荧光染色检测均显示,两卵巢癌细胞株的Cx43表达增加;流式细胞仪检测提示,细胞中Cx43表达均明显增加,OVCAR3细胞由4.45增至9.83,CAOV3细胞由0.89增至3.15(P均＜0.05),Cx43仍定位于OVCAR3的细胞膜和CAOV3的细胞浆.结论卵巢癌HSV-TK/GCV治疗的旁观者效应与其Cx43表达以及定位有关,增强细胞膜Cx43表达,将增强卵巢癌HSV-TK/GCV的旁观者效应,提高其疗效.
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自然流产患者绒毛组织中致死基因mRNA的表达
目的探讨自然流产患者绒毛组织中致死基因维甲酸受体(RXR)α、N-myc和转录增强因子-1(TEF-1)mRNA的表达水平.方法采用逆转录聚合酶链反应技术,对38例自然流产患者的绒毛组织中RXRα、N-myc和TEF-1基因mRNA的表达水平进行检测,并和33例正常早孕妇女对比.结果 (1)RXRα和TEF-1基因mRNA表达水平,自然流产患者分别为0.4±0.3和1.6±1.1,正常早孕妇女分别为0.6±0.3和2.3±1.2,两者比较,差异有显著性(P<0.05);N-myc 基因mRNA表达水平分别为2.1±1.2和2.2±0.9,两者比较,差异无显著性(P>0.05).(2)复发性流产者(23例)与非复发性流产者(15例)的RXRα基因mRNA表达水平分别为0.3±0.2和0.6±0.4(P<0.05),TEF-1基因mRNA表达水平分别为1.0±1.1和1.9±1.2(P<0.05).结论 RXRα、TEF-1 基因可能参与调控人类胚胎的生长,其表达水平降低可能与自然流产尤其是复发性流产有关.
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子宫颈癌细胞中RAR-β基因表达缺陷与其DNA甲基化的关系
目的 观察宫颈癌细胞中RAR-β基因表达的情况,并探讨RAR-β基因DNA甲基化与RAR-β基因表达缺陷的关系.方法 采用RT-PCR技术检测宫颈癌细胞系SiHa、HeLa、C33A和Caski细胞中RAR-β mRNA的表达,免疫荧光化学染色法及蛋白印迹法检测其RAR-β蛋白的表达,同时应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术检测宫颈癌细胞中RAR-β基因DNA甲基化状态及采用5-脱氧-2'-杂氮胞苷(5-Aza-cdR)处理后RAR-β基因DNA甲基化状态的变化,以及5-Aza-cdR处理对RAR-β基因表达缺陷的影响.四甲基偶氮唑蓝(MTY)比色法测定5-Aza-cdR对细胞增殖的影响.结果 SiHa、HeLa、Caski和C33A细胞中RAR-β mRNA的表达水平分别为0.25±0.08、0、0.60±0.19、3.12±0.92,RAR-β蛋白表达水平分别为0.23±0.07、0、0.14±0.05、0.68±0.21.SiHa、HeLa、Caski细胞中存在RAR-β基因的表达缺失或低下,而C33A细胞中存在RAR-β基因的表达.MSP技术检测发现,SiHa、HeLa、Caski细胞中存在RAR-β基因DNA甲基化,而C33A细胞为非甲基化状态.5-Aza-cdR处理后,SiHa、HeLa、Caski和C33A细胞中RAR-β mRNA的表达水平分别为1.82±0.59、2.13±0.62、1.67±0.43、2.95±0.89,RAR-β蛋白表达水平分别为0.69±0.21、0.83±0.29、0.56±0.16、0.64±0.20.5-Aza-cdR处理前后SiHa、HeLa、Caski细胞中RAR-β mRNA和蛋白的表达水平比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);C33A细胞中RAR-β mRNA和蛋白的表达比较,差异则无统计学意义(P＞0.05).5-Aza-cdR处理后能抑制宫颈癌细胞的增殖.结论 RAR-β基因的表达缺陷在宫颈癌的发生中起重要作用,RAR-β基因DNA异常甲基化是导致该基因表达缺陷的重要原因.
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新生儿呼吸窘迫综合征肺组织中维甲酸受体-α、Janus激酶-1、信号转导和转录活化因子-3的表达及意义
目的 探讨维甲酸受体-α(retinoic acid receptor α,RARα)、Janus激酶-1(Janus kinase 1,JAK1)、信号转导和转录活化因子-3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)在新生儿呼吸窘迫综合征(neonatal respiratory distress syndrome,NRDS)发病中的作用.方法 采用免疫组织化学方法检测20例NRDS死亡病例及19例非NRDS死亡病例肺泡上皮细胞中肺表面活性蛋白-B(surfactant protein B,SP-B)、RARα、JAK1、STAT3的表达,并分析其与SP-B之间的相关关系.结果 NRDS组肺组织SP-B、JAK1和STAT3的表达分别为0.2486±0.0572,0.2434±0.0454,0.3544±0.0670,均较对照组减弱(P均＜0.05).RARα在NRDS组中多表达于细胞质(14/20),在对照组中多表达于细胞核(10/19),差异有统计学意义(x2=6.384,P＜0.05).SP-B的表达在RARα细胞核表达组为0.3279±0.0923,较RARα细胞质表达组(0.2629±0.0541)和RARα阴性表达组(0.2113±0.0287)增强(P均＜0.05).RARα与SP-B的表达呈正相关(r=0.487,P＜0.01);JAK1和STAT3与SP-B表达均无明显相关性(r分别为0.233和0.133,P均＞0.05).结论 SP-B表达可能受RARα表达的影响,且与RARα的分布关系密切,RARα从细胞核向细胞质的转位可能与NRDS的发生有关,而JAK1及STAT3也可能参与其中.
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视黄醛脱氢酶2抑制剂对斑马鱼胚胎心脏发育的影响
目的 利用新型模式生物斑马鱼,采用外源性视黄醛脱氢酶2抑制剂--对二乙氨基苯甲醛(4-diethylaminobenzaldehyde,DEAB),建立维甲酸(retinoic acid,RA)缺乏的斑马鱼模型,探讨其对斑马鱼胚胎心脏发育的影响. 方法 在斑马鱼胚胎受精后5、8、10.3 h,分别用1×10~(-6),5×10~(-6)、10×10~(-6),25×10~(-6) mol/L的DEAB处理,在解剖显微镜下实时观察胚胎发育的全过程,在受精后5 h给予1×10~(-9) mol/L外源性RA干预,观察其对DEAB致畸的拮抗作用.通过胚胎心脏表型观察、心率和心室收缩分数比较以及心脏特异分子标记--心房利钠肽A基因整体原位杂交实验分析RA缺乏对胚胎心脏发育的影响. 结果 外源性DEAB处理后,胚胎生存率随着处理浓度增加而降低,随着处理时间点后移而升高.当DEAB浓度≥5×10~(-6) mol/L时,斑马鱼畸胎率为100%,异常表型一致,并能被1×10~(-9),mol/L外源性RA有效援救.RA缺乏时斑马鱼心脏表现出管状心脏、无向右环化或环化不完全、房室分化异常及房室管区血液反流.与野生型胚胎相比,DEAB处理后斑马鱼胚胎心率和心室收缩分数降低,心房利钠肽A基因表达改变,在心室部位表达清晰强烈,在心房部位表达明显减弱. 结论 DEAB影响胚胎发育有剂量依赖性和时效性,其致畸作用能被外源性RA有效拮抗.RA缺乏影响心脏早期发育的多个重要环节,导致心脏收缩功能受损.心脏心房利钠肽A基因表达受RA信号调控.
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维甲酸对高氧暴露早产大鼠胰岛素样生长因子系统表达的影响
目的探讨维甲酸(RA)对高氧暴露下早产大鼠肺组织胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)、Ⅱ型IGF受体(IGF-2R)及IGF结合蛋白2(IGFBP-2)mRNA和多肽表达的影响及其抗损伤机制.方法260只孕21 d剖宫产鼠为早产鼠,生后第2天随机分为四组,Ⅰ组:空气+生理盐水;Ⅱ组:高氧(85%O2)+生理盐水;Ⅲ组:空气+RA;Ⅳ组:高氧+RA.Ⅱ、Ⅳ组持续暴露于85%氧气中,Ⅰ、Ⅲ组置于空气中;Ⅲ、Ⅳ组从生后第3天起每日腹腔注射RA,Ⅰ、Ⅱ组每日注射生理盐水.分别于生后4、7、10、14、21 d记病死率,取肺标本作辐射状肺泡计数(RAC);测IGF-Ⅱ、IGF-2R和IGFBP-2mRNA表达强度(RT-PCR)或多肽表达强度(Western印迹).结果(1)存活率:7 d内四组差异无统计学意义;7 d后各时间点Ⅱ、Ⅳ组明显低于Ⅰ、Ⅲ组(P＜0.05或＜0.01),但Ⅳ组明显高于Ⅱ组(P＜0.01).(2)RAC结果:4 d时,Ⅱ、Ⅳ组RAC值即明显减少(P＜0.01);随后与对应Ⅰ、Ⅲ组比较差异有统计学意义(P＜0.01),但Ⅳ组明显高于Ⅱ组(P＜0.01).(3)RT-PCR结果:IGF-ⅡmRNA表达强度:与Ⅰ、Ⅲ组相比,Ⅱ、Ⅳ组4 d时表达即增强(P＜0.01);14 d时,Ⅱ组较Ⅰ组、Ⅳ组较Ⅲ组表达差异有统计学意义(P＜0.01);其中Ⅳ组表达较Ⅱ组相对降低(P＜0.01);IGF-2 R mRNA表达强度在4和14 d时,Ⅱ、Ⅳ组明显高于Ⅰ、Ⅲ组(P均＜0.01),而Ⅳ组明显低于Ⅱ组(P＜0.01);IGFBP-2mRNA表达强度:Ⅱ、Ⅳ组明显强于相应的Ⅰ、Ⅲ组,但14d时Ⅳ组表达低于Ⅱ组(P＜0.01).肽表达强度结果:IGF-Ⅱ多肽、IGF-2R膜蛋白、IGFBP-2多肽的表达强度与其各自的mRNA表达变化相似.结论RA可部分逆转高氧引发的肺发育阻滞;RA下调高氧暴露下肺组织中IGFBP-2、IGF-Ⅱ和IGF-2R的表达可能是其干预肺损伤的机制之一.
关键词： 维甲酸 胰岛素样生长因子Ⅱ 胰岛素样生长因子结合蛋白质2 高氧症 肺 -
成纤维细胞生长因子受体-1、2在维甲酸致大鼠神经管畸形发生中的作用
神经管畸形(neural tube defect,NTD)是人类出生缺陷中常见和为严重的一组畸形,由神经管的发生和分化异常而引起.许多文献报道神经管的关闭过程受多种基因形成的网络调控及环境因素的影响,成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factors,FGF)信号途径及叶酸代谢与NTD关系密切.
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维甲酸对缺氧缺血性脑损伤新生鼠内源性神经干细胞增殖分化的影响
哺乳动物脑内在生后仍有神经发生现象,特别是脑皮质及海马周围,病理情况下及某些细胞因子、学习运动等行为以及环境的改变均可诱导神经发生的进一步产生.维甲酸(retinoie acid,RA)是维生素A的衍生物,对于胚胎发育尤其是神经系统的发育起着重要作用,能选择性促进多潜能神经嵴前体细胞的复制、增殖与分化.因此,本研究旨在通过对新生鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic braindamage,HIBD)模型腹腔注射RA,探讨RA对海马区的内源性神经干细胞(neural stem cell,NSC)增殖、分化的影响.
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高氧、维甲酸对胎鼠肺角化细胞生长因子及其受体表达的影响
目的探讨高氧、维甲酸(RA)对胎鼠肺成纤维细胞(LFs)和肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)角化细胞生长因子(KGF)及其受体(KGFR)表达的影响.方法原代培养胎鼠肺LFs及AEC Ⅱ,待生长至亚汇合状态时,随机分为:空气组,空气+RA组,高氧组,高氧+RA组.于培养2、6、12、24、48(AECⅡ)和72 h(LFs)时,采用半定量RT-PCR方法检测KGF和KGFR的mRNA表达.结果与空气组比较,高氧2 h时,胎鼠LFs KGF mRNA表达即明显下降,6 h时达极点,以后下降趋势逐渐减弱,至48 h后已无显著性差异;高氧2、6、12和24 h时,其下降幅度分别为3.0、5.2、2.3和2.1倍(P＜0.05、0.01、0.01和0.05).RA可上调高氧状态下胎鼠LFs KGF mRNA表达,与高氧组比较,高氧+RA组在2、6、12和24 h时KGF mRNA表达分别是高氧组的2.4、3.4、1.7和1.8倍(P＜0.05、0.01、0.01和0.05).高氧对胎鼠AEC Ⅱ KGFR mRNA表达影响较小,与空气组比较,仅在高氧12 h和24 h时其表达量分别是空气组的2.3和1.3倍(P＜0.05);RA对AEC H KGFR mRNA表达没有影响.结论促进KGF的表达是RA发挥高氧肺损伤保护作用的重要机制之一.
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维甲酸、血小板衍生生长因子对早产新生大鼠高浓度氧肺损伤的影响
目的 观察维甲酸(RA)和血小板衍生生长因子(PDGF)对高浓度氧(简称高氧)抑制早产新生大鼠肺发育的影响,探讨其作用机制.方法 1日龄早产SD大鼠随机分为:空气+生理盐水组(Ⅰ组)、高氧+生理盐水组(Ⅱ组)、空气+RA组(Ⅲ组)、高氧+RA组(Ⅳ组).Ⅱ、Ⅳ组持续暴露于85%氧气中,Ⅲ、Ⅳ组每日腹腔注射RA 500 μg/kg,Ⅰ、Ⅱ组注射相同剂量的生理盐水.应用RT-PCR和免疫组织化学法检测各时间点(生后4、7、10、14及21 d)各组大鼠肺组织PDGF Mrna和蛋白表达水平.结果 随日龄的增加,PDGF-A、-B Mrna及蛋白表达发生不同的变化.与Ⅰ组比较,高氧暴露下PDGF-B Mrna和蛋白表达显著增高(P＜0.05),但PDGF-A Mrna及蛋白表达却显著降低(P＜0.05).RA上调PDGF-A Mrna及蛋白表达(P＜0.05),但对PDGF-B Mrna及蛋白表达作用不显著(P＞0.05).结论 高氧暴露下,PDGF-A Mrna及蛋白表达受抑,PDGF-B Mrna及蛋白表达增强.PDGF-A、-B共同参与了高氧暴露下肺组织损伤过程.RA上调PDGF-A Mrna及蛋白表达,能部分逆转高氧引起的肺损伤.
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儿童早幼粒白血病治疗初期血液学变化及意义
目的 分析维甲酸治疗儿童早幼粒白血病初期血液学变化及意义.方法 用维甲酸+三氧化二砷(As2O3)+化疗治疗32例儿童早幼粒白血病,观察治疗初期白细胞、血小板、诱导分化细胞的改变,同时观察DIC在疾病过程中的发生和转归.结果 ①维甲酸治疗APL过程中,白细胞升高是一个常见症状,也会发生高细胞综合征,需积极处理;②维甲酸诱导过程中,外周血、骨髓中诱导分化细胞的出现对诊断、疗效评价有着重要作用;③血小板的回升在维甲酸治疗过程中,常提示疾病的缓解;④维甲酸治疗APL,减少了DIC的发生,改善了APL的出血程度,大大提高了APL的缓解率.结论 维甲酸治疗APL初期,血液学的改变评估对于本病确诊及疗效评判有着重要作用,为进一步治疗提供了依据.
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DA方案联合维甲酸诱导治疗小儿急性早幼粒细胞性白血病
为探讨诱导治疗小儿急性早幼粒细胞性白血病及预防其毒副作用的有效方法,对18例小儿急性早幼粒细胞性白血病采用DA方案联合维甲酸诱导治疗,1疗程后复查骨髓象,完全缓解14例,完全缓解率77.8%,其他4例2疗程结束后再复查骨髓,均完全缓解.完全缓解后给予定期交替强化治疗,维甲酸维持治疗.结果:所有病例均完全缓解且无明显毒副作用.结论:本方案是治疗小儿急性早幼粒细胞性白血病安全有效的方案.
关键词： 维甲酸 DA方案 诱导治疗 急性早幼粒细胞性白血病 小儿
