首页 > 文献资料
-
急性乙肝患者HBcAg、HBc-IgM、PHSA-R与HBV-DNA联检的意义
本文对342例急性乙肝患者血清进行HBcAg、HBc-IgM、PHSA-R的测定,同时用Light CyclerTM实时定量PCR系统检测HBV-DNA含量,从而为临床急性乙肝患者的诊断、治疗、预后提供一定的依据.
-
HBV-DNA与乙肝免疫标志物的相关性研究
本文通过对2002年~2003年期间本院收治的632例乙型肝炎患者血清进行免疫标志物和HBV实时定量PCR检测,分析HBV-DNA含量与乙肝标志物的关系,探讨其对临床诊断的指导价值.
-
用实时定量PCR检测慢性髓系白血病患者的bcr/ablP210融合基因转录本
目的建立实时定量PCR(RQ-PCR)检测慢性髓系白血病(CML)bcr/ablP210融合基因转录本,评价其在CML诊断和微小残留病(MRD)监测中的意义.方法设计TaqMan探针和引物,建立RQ-PCR法对b3a2和ABL阳性模板进行扩增,并检测22例CML患者bcr/ablP210转录本含量.结果 RQ-PCR法低可检测到10个拷贝/μl的阳性模板,但重复性较差,而108~102拷贝/μl的重复性良好,正常对照无扩增信号.19例初诊CML患者bcr/ablP210转录本绝对含量为1.42×102~2.24×105拷贝/50 ng(中位数量3.06×104拷贝/50 ng),ABL纠正后的相对含量为3%~687%(中位数147%).2例患者骨髓移植后bcr/ablP210转录本下降,1例患者由慢性期进展为加速期时含量显著增高.结论 RQ-PCR方法敏感、可靠,可用于CML患者的诊断和MRD随访监测.
-
应用实时定量PCR法检测Gstp1基因启动区CpG岛超甲基化进行前列腺癌的诊断
-
白念珠菌临床株FLU1基因表达与氟康唑耐药的关系
近年来,深部真菌感染发生率逐渐增高,其中以白念珠菌(Candida albicans)的感染为常见.由于氟康唑的生物利用度高(>90%),不良反应小,常被作为首选药物,广泛用于念珠菌感染的预防和治疗.随着氟康唑的长期、大量使用,念珠菌耐药性的问题日益突出.白念珠菌主要耐药机制包括,细胞对药物外排能力的不断增强、药物作用靶点编码基因突变或高度表达等.本研究针对编码药物外排泵蛋白的FLU1基因,采用实时定量PCR技术检测白念珠菌氟康唑耐药株和敏感株的FLU1基因的表达差异,初步探讨FLU1基因表达与氟康唑耐药的关系.
-
Taqman MGB荧光PCR检测生殖支原体
目的 参照文献建立一种快速、灵敏、准确的生殖支原体(Mg)的检测方法,并应用该方法调查生殖支原体在广西贺州暗娼中的流行情况.方法 参考文献中以生殖支原体Pa基因为靶基因设计的引物和Taqman MGB探针进行实时定量PCR,以生殖支原体标准菌株G37制备标准品,对广西贺州暗娼人群的宫颈拭子标本进行生殖支原体的检测.结果 建立的Taqman MGB实时定量PCR方法检测的线性范围好(1×10~106拷贝/μl),R2=0.993,重复性好,(批内变异系数=0.7%,批间变异系数=1.09%),敏感性高,检测限(LOD)为10拷贝/μl,定量限(LOQ)为50拷贝/μl.采用该方法检测404份拭子标本,生殖支原体的检出率为12.1%.结论 针对生殖支原体Pa基因的Taqman MGB实时PCR可以快速、灵敏地对生殖支原体进行定性及定量的检测.
-
CIP2 A在非小细胞肺癌的表达及患者预后分析
目的:研究蛋白磷酸酶2A的抑癌因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A,CIP2A)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的差异表达情况及探讨其临床意义及潜在的预后价值。方法应用免疫组织化学和实时定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法检测60例NSCLC癌组织及其癌旁正常组织2组中CIP2A表达情况,通过检测CIP2AmRNA及蛋白的表达情况,并分析其与临床病理资料和预后因素的关系。结果 CIP2A mRNA肺癌组织比癌旁组织高表达(P<0.01);CIP2A的蛋白在癌组织中的表达明显高于对应的癌旁组织(P<0.01)。CIP2A的表达水平与非小细胞肺癌组织的分化程度及淋巴转移有关(P<0.05),而与性别、年龄、组织学分级、肿瘤大小、TNM(tumor node metastasis)分期无关。结论 CIP2A在非小细胞肺癌组织中高表达,且随着非小细胞肺癌组织分化程度的增高及伴有淋巴结转移而增高。CIP2A及淋巴结转移情况是预后的独立危险因素。
关键词: 非小细胞肺癌 蛋白磷酸酶2A的抑癌因子 实时定量 免疫组织化学 -
GAPDH mRNA在支气管肺泡灌洗液和血清中表达的差异
我国肺癌发病呈逐年上升趋势,目前比较成熟的基因检测是GAPDH mRNA的检测[1],我们采用实时定量PCR方法,针对GAPDH mRNA扩增测定间接反映总的游离RNA水平,建立一种新的游离RNA测定的方法,探讨通过肺泡灌洗液(BALF)和血清中的游离RNA测定,再结合细胞学检测结果,探讨是否能提高肺癌的诊断率.
-
人脑胶质瘤中PTEN基因表达的实时定量PCR
胶质瘤是中枢神经系统常见的肿瘤,约占成人颅内肿瘤的40%~50%,恶性胶质瘤病人预后差,病死率高.近年来,随着分子生物学的发展及其在肿瘤学中的应用,人们认识到细胞原癌基因的激活或抑癌基因的失活是肿瘤发生的重要环节,其中抑癌基因PTEN对肿瘤细胞的生长起负调控作用.本研究运用实时定量PCR技术检测了44例人脑胶质瘤组织中PTEN基因mRNA表达情况,以探讨PTEN基因在胶质瘤的发生和恶性演变中的作用.
-
实时定量"桥"血流测定在冠状动脉搭桥术中的应用
血管桥是否通畅是冠状动脉搭桥术成败的关键.Ascer等的研究表明测量血管桥血流和阻力对于"搭桥"远期效果的预测有重要意义.本文总结了实时血流量仪在我科冠状动脉搭桥术中应用的情况.
-
实时荧光定量PCR技术进展
实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)技术是一种新型的核酸定量检测、分析技术,它通过在PCR扩增反应过程中加入荧光物质,使得对反应过程的实时监控成为可能.它具有实时监测、定量准确、灵敏度高、反应速度快、重复性好及PCR反应后不需电泳检测等优点,已逐步成为分子生物学研究中的重要工具.
-
实时定量大肠癌组织中MK基因表达及其临床意义
目的 利用实时定量PCR(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-PeR)相对定量大肠癌组织中Midkine(MK)基因的表达,探讨MK基因在大肠癌不吼病理状态中的意义.方法 提取34例临床大肠癌组织及其癌旁正常组织中的总RNA,经寡聚脱氧胸腺嘧啶逆转录,RT-PCR扩增,以内标甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基冈的mRNA相对定量MK基因的mRNA表达,比较癌组织与其癌旁正常组织中的MK表达差异.结果 34例样本中癌组织较之癌旁正常组织,MK基因表达降低(P<0.01);其中在Ducks'分期中C期、女性组、淋巴结转移、管状腺癌和浸润浆膜层组中痛组织较之癌旁正常组织表达降低(P<0.05),其余组大肠癌组织较之癌旁正常组织无统计学意义(P>0.05).结论 在大肠癌病程晚期癌组织中MK基因的表达水平降低.
-
荧光定量PCR检测人PDGFB mRNA方法的建立与运用
目的:克隆人PDGFB mRNA的cDNA,并以此作标准品,建立TaqMan技术实时定量检测人PDGFB mRNA的方法并加以应用.方法:RT-PCR扩增人PDGFB mRNA,将纯化产物与pMD18-T载体连接,转化DH-5 α感受态细胞.提取重组质粒,以PCR扩增、限制性内切酶双酶切、测序进行鉴定,作为标准品,建立实时定量检测人PDGFB mRNA的方法,用以检测HBSAg阴性组和HBSAg阳性组PDGFB mRNA含量.结果:PCR扩增、双酶切鉴定及测序分析均证实PDGFB cDNA重组成功.实时定量检测PDGFB mRNA后发现,HBSAg阴性组和HBSAg阳性组的Ct值分别为(32.185±2.006)和(21.769±5.256),浓度分别为(1.27±0.87)×107拷贝/106PBMC和(1.24±0.58)×109拷贝/106pBMC(P<0.05),后者PDGFB mRNA含量明显高于前者.结论:本研究成功克隆了PDGFB荧光定量PCR标准;荧光定量PCR检测人PDGFB mRNA含量具有快速、准确、简便,特异性强等优点,适用于临床检测.
关键词: 血小板衍生因子-B 逆转录-聚合酶链反应 T-A克隆 实时定量 乙肝病毒表面抗原 -
马尔尼菲青霉菌丝相和酵母相的异柠檬酸裂解酶表达差异的研究
目的 比较不同培养条件下马尔尼菲青霉(Pm)菌丝相及酵母相的异柠檬酸裂解酶(ICL)基因转录水平,初步探讨乙醛酸循环在Pm致病中的意义.方法将Pm分为高糖培养的菌丝相(MH)、低糖培养的菌丝相(ML)及高糖培养的酵母相(YH)、低糖培养的酵母相(YL)4组,采用实时定量RT-PCR法比较各组ICL基因转录水平.结果 MH、ML、YH、YL组ICL相对表达量分别为1.000、3.000、3.654、69.530,组间差异有统计学意义(P<0.05);温度增高和葡萄糖浓度降低两因素之间具有协同效应.结论 Pm酵母相的ICL转录水平较菌丝相增高,而且低糖培养时增高更为显著,提示乙醛酸循环可能在Pm致病过程中起着重要的作用.
-
胶体金法和实时定量PCR法对小儿巨细胞病毒IgM抗体水平检测的敏感性及准确率对比观察
人巨细胞病毒(HCMV)在自然界普遍存在,人类是该病毒的唯一宿主并且极易感染[1]。儿童免疫机制尚不完善,对抵抗HCMV的入侵更弱。初次感染一般在2岁以下,感染后即使有症状但也没有特征,需要做实验室检查[2]。目前采用方法多为ELISA和胶体金法,缺点是检出率低下,只能作为定性检测标准。PCR荧光在定量方面优于前面二者,能更好的检测到病毒本身。为此本文比较胶体金和PCR荧光两种方法的优劣,旨在选择更好的检测方法。
-
实时定量PCR与常规PCR检测乙型肝炎病毒感染的比较及临床意义
我们采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检测了812例血清HBV-DNA,并与常规PCR检测结果进行了比较分析,总结如下.
-
PCR技术与ELISA方法在检测HBV中的对比分析
乙肝病毒检测中,目前较为广泛采用的是以酶联免疫吸附(ELISA)法,检测乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、乙肝病毒表面抗体(HBsAb)、乙肝病毒e抗原(HBeAg)、乙肝病毒e抗体(HBeAb)、乙肝病毒核心抗体(HBcAb)五个指标.随着现代医学检测技术的发展,实时动态荧光定量PCR(EQ-PCR)因其技术成熟具有较高的灵敏度和特异性,已逐渐应用于临床.为了解乙型肝炎病毒HBV DNA和乙肝病毒血清标志物之间的关系,我们采用ELISA法与实时定量(FQ-PCR)技术,同时进行HBV检测,结果报告如下:
-
不同方法检测血清HBV DNA水平的比较
目前,检测慢性乙型病毒性肝炎血清或血浆病毒的几种分子生物学技术均建立在靶序列或者信号扩增的基础之上,如Quantiplex HBV DNA(bDNA)技术即是基于分支链DNA技术的信号扩增,而COBAS Amplicor则是基于引物特异的靶序列扩增.其他尚有基于核苷酸交联技术的定量检测方法也为实验室所常用.然而以上方法对于开展临床大规模检测来说成本昂贵,不适用于经济不发达地区.实时定量PCR方法因其灵敏度高、检测范围宽、定量值准确、成本低而为临床检测所常用.本研究采用两种实时定量PCR(LightCycler及Mx3000p)方法进行HBV DNA定量检测,同时与COBAS Amplicor方法进行对照.
-
成纤维细胞生长因子信号持续增高对体外培养的骺板软骨细胞发育的影响
我们以体外培养的软骨细胞为对象,观察持续的大剂量应用成纤维细胞生长因子(FGF)对软骨细胞发育的影响.一、材料和方法1.材料:出生后第4天的C57BL/6J小鼠72只,雌雄未分,碱性成纤维细胞生长因子( bFGF)、肝素钠、Ⅱ型胶原蛋白酶.胰蛋白酶、DMEM、胎牛血清、青霉素、链霉素.Trizol、The Cells-to-cDNA Ⅱ 试剂盒、TaKaRa聚合酶链反应(PCR)Amplification试剂盒、SYBR Premix Ex Taq试剂盒、实时定量PCR( Real-time PCR)引物.
-
Survivin在膀胱癌组织中的表达及其临床意义
Survivin高表达于绝大多数恶性肿瘤,研究结果显示其通过抗凋亡、调节细胞周期、促进血管形成等途径参与肿瘤的发生和发展[1,2].我们通过运用实时定量RT-PCR法检测膀胱癌组织中Survivin mRNA的表达,探讨其与病理分级、临床分期及预后之间的关系.