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血小板衍生因子-B文献资料
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荧光定量PCR检测人PDGFB mRNA方法的建立与运用
目的:克隆人PDGFB mRNA的cDNA,并以此作标准品,建立TaqMan技术实时定量检测人PDGFB mRNA的方法并加以应用.方法:RT-PCR扩增人PDGFB mRNA,将纯化产物与pMD18-T载体连接,转化DH-5 α感受态细胞.提取重组质粒,以PCR扩增、限制性内切酶双酶切、测序进行鉴定,作为标准品,建立实时定量检测人PDGFB mRNA的方法,用以检测HBSAg阴性组和HBSAg阳性组PDGFB mRNA含量.结果:PCR扩增、双酶切鉴定及测序分析均证实PDGFB cDNA重组成功.实时定量检测PDGFB mRNA后发现,HBSAg阴性组和HBSAg阳性组的Ct值分别为(32.185±2.006)和(21.769±5.256),浓度分别为(1.27±0.87)×107拷贝/106PBMC和(1.24±0.58)×109拷贝/106pBMC(P＜0.05),后者PDGFB mRNA含量明显高于前者.结论:本研究成功克隆了PDGFB荧光定量PCR标准;荧光定量PCR检测人PDGFB mRNA含量具有快速、准确、简便,特异性强等优点,适用于临床检测.
关键词： 血小板衍生因子-B 逆转录-聚合酶链反应 T-A克隆 实时定量 乙肝病毒表面抗原
