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蛋氨酸-胆碱缺乏诱导大鼠脂肪性肝纤维化肝细胞凋亡机制
目的 探讨内质网应激和有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号在蛋氨酸一胆碱缺乏饮食( MCDD)诱导的非酒精性脂肪性肝纤维化肝细胞凋亡中的作用.方法 (1)MCDD喂养10周诱导非酒精性脂肪性肝纤维化大鼠模型(M组),恢复组(R组)于第9周开始将MCDD转变为蛋氨酸一胆碱对照饮食(MCCD)喂养2周；(2)评价肝细胞脂肪变性、纤维化和炎性反应程度,采用免疫组织化学、蛋白印迹或real time-PCR(RT-PCR)方法评价肝星状细胞活化；(3)采用4一羟基壬烯酸(4-HNE)、HO-1/2免疫组织化学、蛋白印迹或RT-PCR方法评价肝细胞氧化损伤；(4)肝细胞凋亡采用TUNEL染色法评价；(5)采用RT-PCR及蛋白印迹方法评价内质网应激相关细胞因子ERP78、caspase-12、caspase-7、cleaved caspase-7、caspase-9、caspase-3、cleaved caspase-3,以及MAPK信号相关细胞因子c-Jun、ERKl/2、p-ERKl/2.结果 MCDD转换为MCCD后,肝细胞脂肪变性、炎性反应、氧化损伤及肝纤维化程度明显减轻.与正常组比,M组ERP78、caspase-12、caspase-7、cleaved caspase-7蛋白表达均显著增加(P ＜0.05或＜0.01),RT-PCR分析显示ERP78、caspase-12、caspase-7 mRNA表达水平亦显著增加(灰度值分别为3.03 ±0.41比2.12±0.37,1.86±0.36比0.78 ±0.20,2.38 ±0.19比1.84±0.13,P＜0.05或＜0.01).但caspase-3、cleaved caspase-3蛋白表达以及caspase-3、caspase-9mRNA表达在正常组、M组和R组之间差异无统计学意义(P＞0.05)；M组与正常组比c-Jun mRNA表达升高(0.19 ±0.03比0.11 ±0.05,P＜0.05),R组降低(与M组相比,0.13±0.04比0.19±0.03,P＜0.05)；ERK1和p-ERK1蛋白表达在M组均升高(P＜0.01),R组均降低(与M组比,P＜0.01).结论 内质网应激相关的caspase-12凋亡途径可能不是非酒精性脂肪性肝纤维化肝细胞凋亡的主要机制,而MAPK信号可能在该模型肝细胞凋亡中发挥重要作用.
关键词： 肝硬化 细胞凋亡 丝裂原激活蛋白激酶激酶类 -
胰腺癌组织Shh、Gli1、Sufu、TAK1、p-TAK1蛋白的表达及其临床意义
目的 探讨Hedgehog信号通路重要成员Shh、Gli1、Sufu以及TAK1和磷酸化TAK1(p-TAK1)在胰腺癌组织中的表达及其与临床病理参数的相关性.方法 应用免疫组化法检测38例手术切除的胰腺癌组织及其配对的癌旁胰腺组织中Shh、Gli、Sufu、TAK1、p-TAK1蛋白的表达,分析它们与临床病理参数间的关系及它们相互间的关系.结果 胰腺癌组织Shh、Gli1、Sufu、TAK1、p-TAK1蛋白的表达率分别为86.8％(33/38)、52.6％(20/38)、68.4％(26/38)、55.3％(21/38)、52.6％(20/38),而癌旁胰腺组织中的表达均为阴性.Gli1表达与肿瘤远处转移及临床分期呈正相关(r值分别为0.524、0.361,P值均＜0.05)；Sufu表达与患者性别相关(r=-0.378,P＜0.05)；TAK1表达与胰腺癌临床分期呈正相关(r=0.468,P＜0.05)；p-TAK1表达与临床分期、肿瘤远处转移呈正相关(r值分别为0.418、0.361,P值均＜0.05).胰腺癌组织中Gli1的表达水平与TAK1及p-TAK1呈正相关(P＜0.05).结论 Hedgehog信号通路及TAK1途径在胰腺癌的发生、发展中具有一定作用,且两条途径可能存在一定的相互作用.
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下调let-7微小RNA对卡波西肉瘤相关疱疹病毒裂解复制和丝裂原激活蛋白激酶激酶激酶激酶4及其下游因子的影响
目的：探讨下调let?7微小RNA（ miRNA）的表达对卡波西肉瘤相关疱疹病毒（ KSHV）裂解复制的影响。方法采用miRNA海绵技术抑制let?7 miRNAs的表达，脂质体法将pEGFP?C2?let?7 sponge质粒转染到BCBL?1和293T细胞中。实时荧光定量PCR法检测let?7 miRNAs的表达，丝裂原激活蛋白激酶激酶激酶激酶4（MAP4K4）、环氧合酶2（COX?2）和基质金属蛋白酶13（MMP?13） mRNA的表达以及KSHV开放读码框（ ORF）50和ORF72基因DNA复制水平。 Western blot法检测MAP4K4和COX?2蛋白的表达以及 p38丝裂原活化蛋白激酶、细胞外调节蛋白激酶（ ERK1／2）和c?Jun氨基末端激酶（ JNK）蛋白的表达及磷酸化水平。结果在BCBL?1细胞中，let?7 sponge组中let?7 miRNAs的相对表达水平与空载体组比较，差异均有统计学意义（均P＜0．05）；在293T细胞中，let?7 sponge组中let?7a、let?7b、let?7c、let?7d、let?7e、let?7f、let?7g和let?7i的相对表达水平与空载体组比较，差异均有统计学意义（均 P＜0．05）。质粒转染 BCBL?1细胞48 h后，空载体组和 let?7 sponge组中KSHV ORF50 DNA的相对复制水平分别为1．00±0．10和2．33±0．18，差异有统计学意义（P＜0．001）；KSHV ORF50 mRNA的相对表达水平分别为1．08±0．48和3．22±0．27，差异有统计学意义（ P＜0．001）。空载体组和let?7 sponge组中 KSHV ORF72 DNA的相对复制水平分别为1．07±0．49和1．67±0．45， mRNA相对表达水平分别为1．01±0．19和1．54±0．11，差异均有统计学意义（均P＜0．05）。转染质粒48 h后，空载体组和let?7 sponge组中 MAP4K4 mRNA的相对表达水平分别为1．00±0．05和5．73±0．96， COX?2 mRNA的相对表达水平分别为1．00±0．05和2．68±0．19，MMP?13 mRNA的相对表达水平分别为1．00±0．02和2．69±0．25，差异均有统计学意义（均 P＜0．001）。 let?7 sponge 组与空载体组比较， MAP4K4和COX?2的蛋白表达水平也明显提高。在 BCBL?1细胞中 let?7 miRNAs 的表达下调时， KSHV ORF50和 ORF72 mRNA 的表达水平增加， KSHV ORF50和 ORF72 DNA 的复制水平增加， MAP4K4、COX?2和MMP?13 mRNA的表达上调。在293T和BCBL?1细胞中，let?7 sponge组的ERK1／2磷酸化水平高于空载体组，但p38和JNK磷酸化水平无变化。结论抑制细胞let?7 miRNAs的表达可激活KSHV复制，其可能是通过上调其靶基因MAP4K4的表达，上调MAP4K4下游因子COX?2和MMP?13的表达水平及ERK1／2磷酸化水平来诱发KSHV的激活，终导致卡波西肉瘤的发生和发展。
关键词： 疱疹病毒8型 人 丝裂原激活蛋白激酶激酶类 Let-7微小RNA 卡波西肉瘤 -
抑制长链非编码RNA FAL1表达对上皮性卵巢癌细胞生物学行为的影响及其分子机制
目的:探索上皮性卵巢癌细胞与正常人卵巢细胞中长链非编码RNA (lncRNA) FAL1的表达差异及沉默卵巢癌细胞株SKVO3中lncRNA FAL1的表达对卵巢癌细胞侵袭、迁移及凋亡的影响.方法:利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测组织中lncRNA FAL1表达水平;设计并合成FAL1-siRNA引物序列转染SKVO3,通过细胞划痕试验检测卵巢癌细胞的迁移能力,Transwell侵袭实验检测卵巢癌细胞的侵袭能力,流式细胞术检测卵巢癌细胞的凋亡,蛋白质印迹(Western blotting)检测磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)和磷酸化丝裂原细胞外激酶1/2(p-MEK1/2)蛋白的表达水平.结果:lncRNA FAL1在卵巢癌组织中的表达高于正常卵巢组织[(15.04±2.24) vs.(2.93±0.39),P＜0.05].沉默lncRNA FAL1的表达后,卵巢癌细胞的凋亡能力显著增强[(18.38±0.73)％ vs.(2.86±0.09)％,P＜0.05],而卵巢癌细胞迁移、侵袭能力均降低[(6.68±1.49)μm vs.(12.85±2.56)μm,(25.80±2.59)个vs.(145.6±5.23)个,均P＜0.05],MEK/ERK通路MEK1/2和ERK1/2蛋白磷酸化水平明显降低(P＜0.05).结论:lncRNA FAL1通过激活MEK/ERK通路影响上皮性卵巢癌细胞的侵袭、迁移及凋亡,其表达异常增高可能是卵巢癌发生发展的重要分子机制.
关键词： FAL1 长链非编码RNA 卵巢肿瘤 聚合酶链反应 丝裂原激活蛋白激酶激酶类 -
细胞信号转导通路MEK在宫颈癌前病变和宫颈癌的表达及意义
目的：探讨宫颈癌前病变及宫颈癌组织中丝裂原激活细胞外信号调节激酶（mitogen-activated extracellular signal-regulated kinase，MEK）细胞信号转导通路表达的意义。方法：选择并收集2013年1月—2014年4月在天津市第一中心医院妇科诊治、临床病理资料完整的宫颈病变患者共92例，根据宫颈病变程度将患者分为正常组（30例）、高级别宫颈上皮内瘤样变（CIN）组（30例）和宫颈癌组（32例）。用免疫组织化学SP法检测MEK在不同组织中的表达。结果：MEK在正常组、高级别CIN组和宫颈癌组中阳性表达率分别为20.0％、56.7％和68.8％，其中宫颈癌组MEK阳性表达率高，分别高于高级别CIN组及正常组，差异有统计学意义（P＜0.05）。高级别CIN组MEK的阳性表达率高于正常组（P＝0.003）。MEK阳性表达率与患者年龄、宫颈癌病理类型、肿瘤组织分化程度、肿瘤大小及宫颈癌临床分期等因素无关（P＞0.05）。结论：MEK转导通路可能在宫颈癌及癌前病变的发生发展中有一定的作用。
关键词： 宫颈肿瘤 癌前状态 丝裂原激活蛋白激酶激酶类 信号传导 -
β片层阻断肽H102对PAP小鼠脑内ERK信号转导通路的影响
目的：研究β片层阻断肽H102对PAP双转基因小鼠脑内ERK信号转导通路的激活作用。方法将PAP双转基因小鼠随机分为模型组和给药组，每组10只，设同背景C57BL/6J小鼠为对照组。给药组每日鼻腔给予H102溶液（5.8 mg/kg）5μL，对照组、模型组每日鼻腔给予等体积H102空白辅料溶液。30 d后行Morris水迷宫测试。之后采用免疫组化及免疫印迹技术观察小鼠脑组织内RAS、P-MEK及P-ERK蛋白的表达变化。结果（1）Morris水迷宫测试。模型组小鼠学习记忆能力较对照组显著降低，给药组较模型组显著提高（均P<0.05）。（2）免疫组化及免疫印迹检测结果。模型组脑内RAS、P-MEK及P-ERK表达较对照组显著降低，给药组蛋白表达较模型组显著增高（均P<0.01）。结论β片层阻断肽H102可激活PAP双转基因小鼠脑内ERK信号转导通路，增加神经细胞PAS、P-MEK及P-ERK的含量，改善PAP小鼠学习记忆能力。
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神经病理性痛大鼠远位触液神经元磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶表达的变化
目的 探讨神经病理性痛大鼠远位触液神经元磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)表达的变化.方法 成年雄性SD大鼠48只,体重230 ～ 270 g,2～3个月龄,采用随机数字表法,将其随机分为2组(n=24):假手术组(S组)和坐骨神经慢性压榨性损伤(CCI)组.CCI组采用CCI方法制备神经病理性痛模型.分别于术前及术后1、3、5、7、14 d时取4只大鼠,测定热刺激缩足潜伏期(TWL),每个时点处死大鼠前48 h时侧脑室注射30％霍乱毒素亚单位B与辣根过氧化物酶复合物3μl,然后处死,取中脑导水管所在的脑组织,采用四氨基联苯胺-钨酸钠显色的组织化学染色结合p-p38MAPK免疫组织化学染色,进行中缝背核远位触液神经元及表达p-p38MAPK远位触液神经元的计数.结果 与S组比较,CCI组CCI后1～14d时TWL缩短,CCI后5～14d时表达p-p38MAPK远位触液神经元计数升高(P＜0.01),远位触液神经元计数及CCI后1、3d时表达p-p38MAPK远位触液神经元计数差异无统计学意义(P＞0.05).结论 远位触液神经元p38MAPK参与了大鼠神经病理性痛的维持,而不参与其发生.
关键词： 神经痛 神经元 脑 中缝核 丝裂原激活蛋白激酶激酶类 -
乳腺癌与细胞外信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶关系的研究进展
在信号网络中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号传递途径起着极为重要的作用,MAPK异常活化导致细胞分化、凋亡功能的丧失,引起细胞恶性转化,异常增殖、肿瘤发生、侵袭能力增强,终导致肿瘤转移.细胞外信号调节激酶(ERK)是MAPK家族极其重要的一员,它的信号传递途径是涉及调节细胞生长、发育及分裂的信号网络的核心,其基本的信号传递步骤已明确,遵循MAPKs的三级酶促级联反应,即上游激活蛋白→MAPK激酶激酶(MAPKKK)→MAPK激酶(MAPKK)→MAPK.在ERKs的传递途径中,Ras作为上游激活蛋白,Raf作为MAPKKK,MAPK/ERK激酶(MEK)作为MAPKK,ERK即MAPK,即Ras-Raf-MEK-ERK途径,它是表皮生长因子受体(EGFR)信号传导通路主要的通路之一,主要调节细胞增殖和生长.在恶性肿瘤尤其是乳腺癌的发生、发展、浸润和转移方面都起着重要的作用.
关键词： 乳腺肿瘤 丝裂原活化蛋白激酶 丝裂原激活蛋白激酶激酶类 -
Sonic Hedgehog通过调控促分裂原活化的蛋白激酶/胞外信号调节激酶信号通路促进类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖
目的 初步探讨促分裂原活化的蛋白激酶/胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)信号通路在Sonic Hedgehog (Shh)调控RA成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)增殖中的作用.方法 收集病情活动(DAS28≥3.2)的RA患者经关节镜下滑膜清理术或关节置换术切除的滑膜组织,组织块培养法培养分离RA-FLS,分别予Shh激动剂purmorphamine、抑制剂cyclopamine及MAPK/ERK信号通路抑制剂U0126处理,采用蛋白质印迹法检测RA-FLS细胞MAPK/ERK信号通路关键蛋白phospho ERK1/2(p-ERK1/2)磷酸化水平,细胞增殖与毒性试剂盒(CCK8)检测细胞增殖活力,以及流式细胞术检测细胞增殖情况,采用单因素方差分析和Kruskal-Wallis H (K)方法对数据进行分析.结果 与对照组相比,浓度为1μmol/L的purmorphmine可短时间内引起p-ERK1/2蛋白表达增加,作用15 min时显著(P＜0.01),经U0126和cyclopamine处理后,p-ERK1/2蛋白表达明显下降(P＜0.01).RA-FLS经purmorphmine(1μmol/L)处理后,细胞增殖活力为(114±5)％,明显高于对照组(100±0)％(P＜0.01),purmorphmine(1μmol/L)组S期细胞占(8.39±0.60)％,较对照组(3.29±0.69)％明显增加(P＜0.01);经cyclopamine(10 μmol/L)处理后,细胞增殖活力为(89±1)％(P＜0.05),S期细胞占(1.53±0.22)％(P＜0.05);经purmorphamine(1μmol/L)和U0126(10 μmol/L)共同处理后,细胞增殖活力为(89±2)％(P＜0.05),S期细胞占(1.07±0.25)％(P＜0.05).结论 Shh可能通过调控MAPK/ERK信号通路,促进RA-FLS细胞增殖,促进滑膜增生,导致RA疾病的进展.
关键词： 关节炎 类风湿 Sonic hedgehog 丝裂原激活蛋白激酶激酶类 细胞增殖 -
p38MAPK在EGCG诱导人胃癌MGC803细胞凋亡中的作用
目的:探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activaced protein kinase,p38MAPK)在表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)诱导人胃癌MGC803细胞凋亡中的作用.方法:采用MTT法检测MGC803细胞的存活率,荧光显微镜观察和碘化丙啶染色FCM检测MGC803细胞凋亡率,Western印迹法检测MGC803细胞中p38MAPK蛋白及磷酸化p38MAPK蛋白的表达.结果:EGCG可诱导MGC803细胞凋亡,且p38MAPK被激活.用p38MAPK特异性抑制剂SB203580干预后,EGCG抑制MGC803细胞生长的作用明显减弱,细胞凋亡率下降,p38MAPK活性显著下降.结论:EGCG可诱导MGC803细胞凋亡,该作用可被SB203580显著抑制,提示EGCG可能通过激活p38MAPK使部分MGC803细胞凋亡.
关键词： 胃肿瘤 表没食子儿茶素没食子酸酯 丝裂原激活蛋白激酶激酶类 细胞凋亡 -
Ras/Raf/MEK-ERK通路靶点药物联合治疗新进展
Ras/Raf/MEK/ERK通路的异常与肿瘤的发生密切相关,由于其导致细胞增殖失控和凋亡受阻,因此可作为肿瘤治疗的一个靶点.目前在研究各靶点单药疗效的同时,更多的研究侧重于将对应Ras/Raf/MEK/ERK通路各靶点的药物与一般的放化疗、其他靶点药物和内分泌治疗等联合应用,并且取得了一定的进展.
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MAPK/ERK信号转导通路在白藜芦醇抑制A431细胞株裸鼠移植瘤生长中的作用机制研究
目的 探讨白藜芦醇对人皮肤鳞状细胞癌(简称鳞癌)A431细胞株裸鼠移植瘤生长的影响.方法 取对数生长期A431细胞株接种于Balb/c (nu/nu)裸鼠左腋下造模,7～8d后将A431裸鼠移植瘤模型按随机数字表法分为空白组、阴性对照组(生理氯化钠溶液组)、环磷酰胺(CTX)阳性对照组、白藜芦醇高、中、低剂量组,每组10只.通过终末瘤质量计算白藜芦醇的抑瘤率,观察各组移植瘤组织病理形态学变化,原位末端标记技术检测细胞凋亡,Western印迹检测各组移植瘤组织中P-ERK、p53、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase3)的表达.SPSS13.0统计软件对结果进行方差分析及Pearson相关分析.结果 CTX组、白藜芦醇高、中、低剂量组、阴性对照组、空白组裸鼠移植瘤体积分别为(1153.56±255.41)、(1001.69±115.08)、(1206.80±175.88)、(1342.28±211.12)、(1642.34±225.85)、(1564.32±156.49) mm3,各组差异有统计学意义(F=16.00,P＜0.05)；各组瘤质量差异亦有统计学意义(F=19.15,P＜ 0.05),白藜芦醇高、中、低剂量组抑瘤率分别为45.57％、37.97％、15.51％.CTX组、白藜芦醇高、中、低剂量组、阴性对照组、空白组肿瘤组织的凋亡指数分别为36.79±8.86、33.15±6.00、18.09±3.92、10.53±4.20、3.87±1.63、2.73±1.61,白藜芦醇各组均高于阴性对照组及空白组(F=93.26,P＜0.05).各组肿瘤组织中P-ERK/β肌动蛋白、p53/β肌动蛋白caspase3/β肌动蛋白比值经方差分析,F值分别为6.65、6.78、11.56,均P＜0.05,白藜芦醇各组P-ERK、p53、caspase3蛋白的表达均高于阴性对照组及空白组.经Pearson相关分析,裸鼠移植瘤P-ERK与p53、p53与caspase3表达具有显著相关性(r分别0.68和0.56,均P＜0.05).结论 白藜芦醇对A431荷瘤裸鼠移植瘤的生长具有抑制作用,其机制之一可能与活化肿瘤组织中MAPK/ERK信号传导通路,进而活化p53,诱导肿瘤细胞凋亡有关.
关键词： 癌 鳞状细胞 丝裂原激活蛋白激酶激酶类 肿瘤抑制蛋白质p53 细胞系 肿瘤 白藜芦醇 -
UVB应激性衰老成纤维细胞分泌细胞外基质对HaCaT细胞ERK信号的影响
目的 探讨UVB诱导的衰老(UVB-SIPS)成纤维细胞分泌的细胞外基质(ECM)对HaCaT细胞增殖的影响以及细胞外信号调节激酶(ERK)信号途径的作用.方法 采用辐射诱导人皮肤成纤维细胞衰老,分别制备由未衰老和衰老成纤维细胞分泌的ECM包被的培养皿(分别定为PRE-ECM组、SCIP-ECM组).以空白培养皿(NON-ECM组)为参照,在HaCaT细胞接种于培养皿后,采用MTT法和流式细胞法检测其细胞增殖、细胞周期等指标的变化;免疫印迹法分析ERK活化水平.干预性研究ERK信号通路对上述功能的影响.结果 三组中,SCIP-ECM组可诱导强烈的ERK1/2的活化.采用U0126抑制ERK信号活化可完全抑制衰老成纤维细胞来源的ECM的促细胞增殖效应.阻断HaCaT细胞的ERK活化,NON-ECM组、PRE-ECM组和SCIP-ECM组S+G2/M期细胞的比例明显下降,分别由处理前37.40%、41.34%和43.31%减少至29.41%、36.48%到39.96%.结论 UVB-SCIP成纤维细胞分泌的ECM通过刺激ERK磷酸化促进HaCaT细胞增殖.
关键词： 紫外线 细胞衰老 细胞外基质 丝裂原激活蛋白激酶激酶类 -
ITGB1通过激活MAPK/ERK通路促进前列腺癌细胞侵袭
目的 研究ITGB1基因在前列腺癌中的表达情况及对前列腺癌细胞侵袭行为的影响和可能作用机制.方法 实时荧光定量PCR检测ITGB1在前列腺癌标本和前列腺癌细胞株PC3和LNCaP中的表达水平.设计小干扰RNA干扰ITGB1的表达,观察干扰效率以及干扰后对前列腺癌PC3和LNCaP细胞的迁移和侵袭能力的影响.结果 ITGB1 mRNA在前列腺癌标本中表达水平上调(t =5.12,P＜0.05),在前列腺癌细胞株LNCaP和PC3中表达水平也较正常前列腺上皮高(P＜0.01).siRNA成功干扰ITGB1表达后,划痕实验显示,前列腺癌Lncap和PC3细胞迁移能力显著下降.Transwell侵袭实验显示干扰ITGB1后,前列腺癌细胞的侵袭能力较对照组也显著下降.GCBI基因网络分析显示,ITGB1与MAPK通路具有显著相关性.进一步行蛋白质免疫印迹杂交实验显示,干扰ITGB1后,MAPK通路中ERK蛋白和磷酸化的ERK的蛋白表达下降,并且下游MMP9蛋白水平也呈现下降.结论 ITGB1通过激活MAPK信号通路,促进前列腺癌细胞迁移和侵袭.
关键词： 前列腺肿瘤 抗原 CD29 丝裂原激活蛋白激酶激酶类 -
雷公藤甲素对MV4-11细胞增殖的影响及RAS/ERK/MAPK通路相关机制研究
目的 探讨雷公藤甲素(TP)对Fms样酪氨酸激酶3基因内部串联重复(FLT3-ITD)突变阳性急性髓系白血病细胞株MV4-11的增殖、凋亡影响及RAS/细胞外信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶(ERK/MAPK)通路相关机制.方法 用不同浓度的TP分别处理MV4-11细胞,在不同的时间点,采用四甲基偶氮唑蓝法测定增殖抑制率,流式细胞术测定凋亡率,实时荧光定量PCR法测定FLT3、RAS、ERK、叉头框蛋白M1(FOXMl)、c-Myc的mRNA表达水平.结果 TP处理MV4-11细胞后,其增殖抑制率明显增高,且呈剂量-时间依赖性;10、20 nmol/L的TP分别处理MV4-11细胞,48h的凋亡率分别为(17.30 ±0.56)％、(35.77±0.55)％,72 h的凋亡率分别为(49.83±0.45)％、(68.90±0.75)％;PCR显示FLT3 mRNA的表达明显下降,RAS、ERK、FOXM1、c-Myc的mRNA的表达均降低.结论 TP能明显抑制MV4-11细胞的增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制是通过抑制RAS/ERK/MAPK通路相关基因的表达发挥作用.
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姜黄素抑制人肝癌细胞BEL-7402中VEGF和HIF-1α表达通过PI3K/AKT/FRAP信号传导通路
目的 探讨MAPK和PI3K信号传导通路在姜黄素调节VEGF和HIF-1α表达中的作用.方法 分别加入LY29400225 μmol/L、50 μmol/L,U0126 10 μmol/L、20 μmol/L,rapamycin 5 ng/ml、10 ng/ml处理人肝癌细胞BEL-7402,30 min后加入姜黄素10 μmol/L,对照组单独加入0、10 μmol/L姜黄素,缺氧环境中培养6 h后,行RT-PCR和Western Blot检测VEGF蛋白、mRNA和HIF-1α蛋白表达;分别加入不同浓度的的姜黄素以及LY294002 25 μmol/L处理人肝癌细胞BEL-7402,缺氧环境中培养6 h后,行Western Blot检测磷酸化AKT和总AKT蛋白表达.结果 姜黄素10 μmol/L+LY294002 25 μmol/L组、姜黄素10 μmol/L+LY294002 50 μmol/L组、姜黄素10 μmol/L+rapamycin 5 ng/ml组、姜黄素10 μmol/L+rapamycin 10 ng/ml组HIF-1α蛋白、VEGF蛋白、mRNA表达分别与姜黄素10 μmol/L组相比降低,差异有统计学意义(P＜0.01);而姜黄素10 μmol/L+U0126 10 μmol/L组、姜黄素10 μmol/L+U0126 20 μmol/L组HIF-1α蛋白、VEGF蛋白、mRNA表达分别与姜黄素10 μmol/L组相比差异无统计学意义(P＞0.05);不同浓度的姜黄素、LY294002 25 μmol/L处理的人肝癌细胞BEL-7402缺氧6 h后磷酸化AKT蛋白表达逐渐降低,LY294002 25 μmol/L可以基本阻断磷酸化AKT蛋白的表达,而对总AKT蛋白表达无明显变化.结论 姜黄素对人肝癌细胞BEL-7402中HIF-1α蛋白和VEGF的表达通过PI3K/AKT/FRAP信号传导通路.
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Tpl2在肿瘤发生发展中的研究进展
Tpl2是丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族中重要的三级激酶,在MAPK途径等多种信号通路中发挥重要作用.近年来,大量研究发现Tpl2在多种肿瘤呈异常表达并参与调控肿瘤的发生发展,有望成为新型的肿瘤标志物和治疗靶点.因此,揭示肿瘤中Tpl2的调控作用及其机制,将为肿瘤的诊断和治疗提供可行的理论依据与潜在的干预靶点.
关键词： 丝裂原激活蛋白激酶激酶类 肿瘤 综述
