首页 > 文献资料
-
肺移植中应用雷公藤内酯醇保护供肺的实验研究
目的:探讨雷公藤内酯醇(TRI)在兔肺移植中对供肺缺血再灌注肺的保护作用及可能的作用机制.方法:将16对健康家兔随机分为两组,对照组肺以改良低钾右旋糖酐(LPD)肺保护液灌注及保存,实验组则将雷公藤内酯醇(0.5 mg/L)加入改良LPD液灌注及保存,在4 C保存4 h后再灌注1 h,测定肺组织中核转录因子-kB(NF-kB)的表达以及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达;并观察肺组织病理结构的变化.结果:再灌注后,实验组的肺组织中NF-kB和I-CAM-1的表达明显低于对照组(P<0.01),肺组织病理变化较对照组轻.结论:雷公藤内酯醇能减轻肺的缺血再灌注损伤,对供肺具有明显的保护作用.
-
雷公藤内酯醇对胶原诱导关节炎大鼠外周血清和关节腔中细胞因子水平的干预
背景:雷公藤具有抗炎、免疫抑制等作用,目前已被用于治疗类风湿关节炎等多种自身免疫性疾病.其化学成分复杂,其中雷公藤内酯醇被公认为是雷公藤中重要的有效成分之一.目的:建立Ⅱ型胶原诱导的关节炎大鼠模型,观察雷公藤内酯醇对其外周血清和关节腔中白细胞介素6、白细胞介素10以及肿瘤坏死因子α含量的影响.设计:随机对照动物实验.单位:华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医结合科.材料:实验于2004-11/2005-07在武汉同济医院完成.选取清洁级健康雄性Wistar大白鼠50只(购于华中科技大学同济医学院实验动物中心,动物质量合格证号:scxk(鄂)2004-2007).雷公藤内酯醇(购于福建省医学科学研究所,临时生产无批号),纯度为98.5%以上.方法:①50只大鼠随机数字表法选10只作为正常对照组,其余建立关节炎模型.沿造模大鼠背部及尾根部分5点皮内注射Ⅱ型胶原乳剂,0.05 mL/点,15 d后分两点皮内激发注射.正常对照组予以生理盐水同法注射.初次免疫30 d后参照关节炎指数评分标准对造模效果进行评估,共20只大鼠评分在6分以上成功造模而用于实验,随机数字表法分为关节炎模型组、雷公藤内酯醇组,10只/组.②将雷公藤内酯醇用体积分数为0.05的丙二醇配制成注射液,其中含雷公藤内酯醇100mg/L,雷公藤内酯醇组按0.04mL/100g后腿肌注给药,每3 d用药1次,共30 d.正常对照组给予等量生理盐水,关节炎模型组给予等量的体积分数为0.05的丙二醇液.③给药30 d后取材,采用酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清和膝关节腔液中白细胞介素6,10以及肿瘤坏死因子α的含量.主要观察指标:雷公藤内酯醇对外周血和关节腔液中肿瘤坏死因子α、白细胞介素6,10含量的影响.结果:实验选取清洁级雄性Wistar大鼠50只,10只作为正常对照,剩余40只大鼠共20只造模成功而进入结果分析.①关节炎模型组外周血和关节腔内的肿瘤坏死因子α含量高,经雷公藤内酯醇治疗后均明显下降[(35.09±8.82),(15.35±3.56)ng/L;(44.17±8.94),(22.54±4.76)ng/L;P均＜0.01],且与正常对照组基本相似(P＞0.05).②关节炎模型组外周血和关节腔内的白细胞介素6含量高,经雷公藤内酯醇治疗后均明显下降[(76.58±6.81),(42.45±5.72)ng/L;(88.69±10.56),(48.67±5.97)ng/L;P均＜0.01],但未能达到正常对照组水平(P＜0.05).③关节炎模型组外周血和关节腔内的白细胞介素10含量低,经雷公藤内酯醇治疗后均明显升高[(17.53±2.07),(21.23±2.91)ng/L;(10.59±2.96),(14.74±1.85)ng/L;P均＜0.01],且与正常对照组基本相似(P＞0.05).结论:雷公藤内酯醇可能通过对细胞因子含量的调节治疗关节炎.
-
雷公藤内酯醇抑制滑膜成纤维细胞COX-2和iNOS表达
目的:研究雷公藤内酯醇对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASF)增殖和表达环氧化酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及合成前列腺素E2(PGE2)、一氧化氮(NO)的影响,并探讨其机制.方法:分离培养人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞,用TNFα(20 μg/L)刺激,同时加或不加雷公藤内酯醇(TP,0～100 μg/L).分别用3H-TdR法、竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)和硝酸酶还原法、半定量逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)法、细胞酶免疫法及蛋白免疫印迹(Western-blot)法,检测滑膜细胞的增殖活性、细胞培养上清液中PGE2和NO的水平,滑膜细胞COX-2和iNOS mRNA表达水平及蛋白表达水平.同时提取各组细胞蛋白,测定其核转录因子NF-κB活性.结果:TP(>20 μg/L)能显著抑制TNFα诱导的RASF COX-2和iNOS表达,并明显减少PGE2和NO的生成,抑制作用与TP浓度呈明显相关性.同时观察到,TP对TNFα激活的RASF核转录因子NF-κB活性有明显的抑制作用(IC50≈35 μg/L),TP对RASF NF-κB活性的抑制程度与其抑制RASF COX-2和iNOS表达的效应相一致.实验未观察到TP对RASF增殖的影响.结论:TP可显著抑制TNFα刺激的RASF COX-2和iNOS的表达及其诱导产物PGE2和NO的生成,这种作用可能通过TP抑制RASF NF-κB的活性而实现.
-
雷公藤内酯醇对高糖时人肾小球系膜细胞MC P-1表达的影响
目的探讨高糖及雷公藤内酯醇(TP)对人肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响。方法将培养的人肾小球系膜细胞分为6组：正常对照组(5 mmol/L 葡萄糖)、高糖组(30 mmol/L 葡萄糖)、甘露醇组(5 mmol/L 葡萄糖+25 mmol/L甘露醇)、TP甲组(30 mmol/L 葡萄糖+5μg/L TP)、TP 乙组(30 mmol/L 葡萄糖+10μg/L TP)、TP丙组(30mmol/L 葡萄糖+15μg/L TP)，分别在24 h、48 h、72 h采用 RT-PCR法检测TP对高糖条件下系膜细胞内 MCP-1 mRNA 及蛋白表达的影响。结果高糖组人肾小球系膜细胞 MCP-1 mRNA及蛋白较正常对照组增加，且差异有显著性(P<0.01)；TP各组比高糖组有明显下降(P<0.01)；不同浓度的TP对高糖诱导的系膜细胞 MCP-1的表达抑制程度不同(P <0.05)。结论 TP可抑制高糖诱导的人肾小球系膜细胞 MCP-1的表达，且呈时间、剂量依赖关系，其可能对延缓糖尿病肾病中肾小球硬化有一定作用。
-
雷公藤甲素诱导卵巢癌SKOV-3细胞株凋亡的实验研究
目的 研究雷公藤甲素(TP)对卵巢癌SKOV-3细胞株凋亡的调节作用及分子机制.方法 培养卵巢癌SKOV-3细胞株并用不同剂量的TP(1×10-6 mg/ml、1×10-5 mg/ml、1×10-4 mg/ml、1×10-3 mg/ml)进行处理,以不含TP的IMEM培养基作为阴性对照.处理后12、24、48 h时,采用原位末端标记法(TUNEL)测定细胞凋亡率;处理后48 h时,采用荧光定量PCR测定凋亡分子、侵袭分子的mRNA表达量.结果 (1)不同剂量TP处理后12、24、48 h时,同一处理时间点,TP处理剂量越大、SKOV-3细胞的凋亡率越高,同一处理剂量,TP处理时间越久、SKOV-3细胞的凋亡率越高,TP能够以剂量依赖性和时间依赖性的方式增加细胞凋亡率;(2)不同剂量TP处理后48 h时,TP处理剂量越大,细胞色素C(CgC)、Bax、Caspase-3的mRNA表达量越高,Bcl-2、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP7、MMP9、N-cadherin、Vimentin的mRNA表达量越低;TP能够以剂量依赖性的方式增加CytC、Bax、Caspase-3的mRNA表达量,降低Bcl-2、MMP2、MMP7、MMP9、N-cadherin、Vimentin的mRNA表达量.结论 TP能够诱导卵巢癌细胞株凋亡,激活线粒体凋亡途径、抑制细胞侵袭是TP发挥促凋亡作用的分子机制.
-
雷公藤甲素对MV4-11细胞增殖的影响及RAS/ERK/MAPK通路相关机制研究
目的 探讨雷公藤甲素(TP)对Fms样酪氨酸激酶3基因内部串联重复(FLT3-ITD)突变阳性急性髓系白血病细胞株MV4-11的增殖、凋亡影响及RAS/细胞外信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶(ERK/MAPK)通路相关机制.方法 用不同浓度的TP分别处理MV4-11细胞,在不同的时间点,采用四甲基偶氮唑蓝法测定增殖抑制率,流式细胞术测定凋亡率,实时荧光定量PCR法测定FLT3、RAS、ERK、叉头框蛋白M1(FOXMl)、c-Myc的mRNA表达水平.结果 TP处理MV4-11细胞后,其增殖抑制率明显增高,且呈剂量-时间依赖性;10、20 nmol/L的TP分别处理MV4-11细胞,48h的凋亡率分别为(17.30 ±0.56)％、(35.77±0.55)％,72 h的凋亡率分别为(49.83±0.45)％、(68.90±0.75)％;PCR显示FLT3 mRNA的表达明显下降,RAS、ERK、FOXM1、c-Myc的mRNA的表达均降低.结论 TP能明显抑制MV4-11细胞的增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制是通过抑制RAS/ERK/MAPK通路相关基因的表达发挥作用.
-
雷公藤甲素对K562/G01细胞增殖抑制及Wnt/β-catenin通路相关机制的作用
目的 探讨雷公藤甲素(TP)对耐药慢粒细胞株(K562/G01)增殖抑制和诱导凋亡的作用,同时探讨TP对K562/G01细胞株Wnt/β-catenin信号通路的调控影响.方法 采用10、20、40、80 nmol/L浓度的TP在12、24、48 h三个时间点,作用于伊马替尼耐药的K562/G01细胞株,噻唑蓝法(MTT)检测其对细胞增殖的作用,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测BCR/ABL融合基因,编码P210蛋白(BCR-ABL)、β-catenin及其下游靶基因Lef-1、cy-clinD1的mRNA表达情况.结果 TP能抑制K562/G01细胞的增殖并诱导其凋亡,该效应呈时间浓度依赖性.其中20、40 nmoL/L的TP处理细胞24 h后,细胞增殖抑制率分别为(22.62±1.33)％、(51.41±1.39)％,晚期凋亡率分别为(6.91±0.14)％、(7.64±0.47)％,定量PCR显示BCR-ABLmRNA表达明显减少;β-catenin及下游靶基因Lef-1、cyclinD1的mRNA同时降低.结论 TP可抑制K562/G01细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关.
-
雷公藤内酯醇诱导PC3细胞凋亡的机制研究
目的 观察雷公藤内酯醇( triptolide,TPL)对去势后抵抗性前列腺癌(Castration-Resistant Prostate Cancer,CRPC) PC3细胞的生长增殖抑制作用,对其诱导凋亡相关基因进行分析.方法 MTT比色法观察TPL对PC3细胞的生长增殖抑制作用；Annexin-V/PI标记分析细胞凋亡;RT-PCR方法检测0、6、12、24 h BCL-2、BAX、PIG3、P21、FAS、CASPASE3等与凋亡相关基因表达变化.结果 TPL抑制PC3细胞生长呈时间和剂量依赖性,24h和48 h半数抑制浓度分别为18.3 ng/ml和13.5ng/ml,与24h组相比,48 h组低浓度(5 ng/ml,t=1.47,P＞0.05)和高浓度(160 ng/ml,t =0.91,P＞0.05)差异无统计学意义.而10 ng/ml(t=3.26,P＜0.05)、20 ng/ml(t=4.21,P＜0.05)、40ng/ml(t=4.09,P＜0.05)、80ng/ml(t=2.91,P＜0.05)差异有统计学意义.Annexin-V/PI检测经18.3 ng/ml TPL处理后的PC3细胞凋亡随着作用时间的延长而增多,相对于对照组,6、12、24 h组Anexin-V阳性/PI阴性表达率分别为(5.42±2.21)％(t=3.52,P＜0.05)、(13.51±3.37)％(t=6.53,P＜0.01)、(29.3±4.53)％(t=8.74,P＜0.01)差异有统计学意义,并且各组间差异有统计学意义(P＜0.05)；RT-PCR显示经18.3 ng/ml TPL处理后,BAX、PIG3表达递增,P21、BCL-2表达递降,FAS、CASPASE3表达无明显改变.结论 TPL可以抑制PC3生长增殖并诱导细胞凋亡,而在凋亡的过程中,BAX、BCL-2、PIG3、P21等基因的改变可能扮演着重要的角色.
-
雷公藤内酯醇对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的作用及机制探讨
目的 探讨雷公藤内酯醇(Tri)对Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的可能治疗机制.方法 将40只EAE大鼠动物随机分为模型组及高低剂量的Tri治疗组,并以氢化可的松(HC)作为阳性对照,每组各10只,再取10只注射生理盐水为空白对照,观察Tri对EAE动物模型作用程度、脑和脊髓的病灶数目及血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-10的影响.结果 Tri减轻EAE动物发病程度、减少脑和脊髓的病灶数目,降低血清TNF-α水平的同时升高IL-10的水平.结论 Tri治疗EAE的作用具有一定效量关系,其机制可能与抑制TNF-α并上调IL-10的免疫应答有关.
