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黄芩苷对流感病毒PR8感染小鼠内质网应激反应的干预作用
目的 观察黄芩苷(Baicalin)对流感病毒PR8感染小鼠急性肺损伤内质网应激相关蛋白PERK、CHOP、pJNK及Caspase-12表达的影响,探讨其对PR8小鼠感染急性肺损伤的保护作用及机制. 方法 实验分为健康对照组,PR8组,黄芩苷治疗组,黄芩苷预防给药组,利巴韦林治疗对照组.用流感病毒鼠肺适应株A/PR/8/4(H1N1)建立小鼠流感病毒性肺炎模型后按相应治疗方案进行给药治疗,观察小鼠肺组织病理变化,应用Western blot法检测PERK、CHOP、p-J NK及Caspase-12蛋白水平. 结果 黄芩苷治疗和预防给药肺指数(0.98±0.13、1.25±0.14)较比PR8组(1.42±0.11)明显降低(F-43.850,P＜0.01;F=5.750,P＜0.05),肺组织病变减轻;黄芩苷治疗和预防给药组各指标相对表达量分别为PERK(1.53±0.09、1.96±0.21)、CHOP(2.10±0.26、2.75±0.12)、pJNK (2.57±0.33、3.42±0.34)及Caspase-12(1.75±0.21、2.44±0.38),与PR8组(2.86±0.23、4.75±0.38、5.02±0.49、3.64±0.36)相比,表达量显著下降(F=135.340,P＜0.01;F=74.100,P＜0.01). 结论 黄芩苷治疗和预防给药均能缓解甲型流感病毒PR8诱导的小鼠肺炎性病理损伤,通过下调内质网应激反应和抑制组织细胞的凋亡,发挥抗流感病毒感染的作用.
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PERK参与调控砷化物诱导细胞自噬反应的信号转导机制研究
目的 探索PERK是否参与调控砷化物诱导的细胞自噬反应.方法 体外培养人肝癌细胞HepG2,以砷化物为刺激源,采用Western印迹方法检测自噬反应标志性蛋白的表达水平、PERK诱导活化状态以及敲低PERK表达水平后砷化物诱导细胞自噬反应和p53诱导活化水平变化情况;采用双荧光素酶报告基因技术检测敲低PERK表达水平后p53的转录激活活性变化.结果 砷化物刺激HepG2细胞后自噬反应相关蛋白Beclin-1诱导表达、LC3发生剪切、p62发生降解反应,同时PERK活化水平显著增强;敲低PERK表达水平后,砷化物刺激作用下Beclin-1的诱导表达、LC3的剪切以及p62的降解均被显著抑制;同样条件下p53在Ser15和Ser392位的磷酸化修饰反应水平和转录激活活性显著下降、p53下游靶基因DAPK1的诱导表达水平被显著抑制.结论 PERK能通过调节p53活化及其下游靶基因DAPK1表达从而介导砷化物诱导的细胞自噬反应.
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氯化镧对大鼠星形胶质细胞内质网应激及凋亡的影响
目的 观察氯化镧(LaCl3)对大鼠大脑皮质星形胶质细胞(Ast)中葡糖调节蛋白-94(GRP-94)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白153(GADD153)、半胱天冬蛋白酶-12(caspase-12)表达的影响.方法 分别用0、0.25、0.5、1.0 mmol/L LaCl3作用Ast细胞24 h,再以四甲基偶氮唑盐法检测Ast细胞活力,以流式细胞仪检测Ast细胞凋亡,以Western blotting法检测Ast细胞GRP-94、PERK、磷酸化PERK(pPERK)、GADD153和caspase-12的水平.结果 0.25、0.5、1.0 mmol/L LaCl3染毒后,Ast细胞活力降低,Ast细胞凋亡升高,均呈剂量-效应关系,差异均有统计学意义(P＜0.05).0.25、0.5、1.0 mmol/L LaCl3染毒组Ast细胞的GRP-94、pPERK、GADD153、caspase-12水平均高于对照组,其中1.0 mmol/LLaCl3染毒组上述指标分别为对照组的3.10、5.25、2.73、3.14倍,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 GRP-94、pPERK、GADD153和caspase-12表达上调使凋亡异常增多,其可能是LaGl3对Ast细胞产生毒作用的机制之一.
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孕哺期及断乳后氯化镧暴露对子代大鼠大脑皮质GRP表达和PERK及IRE1磷酸化的影响
目的 观察氯化镧(lanthanum chloride,LaCl3)对大鼠大脑皮质细胞凋亡、葡萄糖调节蛋白(glucose regulated protein,GRP)表达、PKR样内质网激酶(PKR-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)和肌醇需求酶1(inositol requiring enzyme 1,IRE1)磷酸化的影响,研究LaCl3对大脑皮质产生损害效应的机制.方法 32只成年雌性Wistar大鼠随机分为对照组、2.5、5和10 g/L LaCl3组,2.5、5和10 g/L LaCl3组妊娠大鼠从受孕起分别饮用2.5、5和10 g/L LaCl3蒸馏水溶液,对照组妊娠大鼠从受孕起饮用蒸馏水.LaCl3组子代大鼠断乳前经母鼠胎盘和母乳染镧,断乳后饮用2.5、5和10 g/L LaCl3蒸馏水溶液1个月.取子代大鼠大脑皮质,以尼氏染色法检测大脑皮质神经细胞尼氏体表达水平,以流式细胞仪法测定大脑皮质神经细胞凋亡率,采用Western blot法检测大脑皮质GRP78、GRP94、PERK、IRE1、磷酸化的PERK(pPERK)和IRE1(pIRE1)及分别受PERK和IRE1调控的生长迟滞和DNA损伤诱导蛋白(growth arrest and DNA damage inducible protein,GADD)153和JUN氨基端激酶(JUN NH2-terminal kinase,JNK)的表达水平.结果 各LaCl3组子代大鼠大脑皮质神经细胞尼氏体表达水平低于对照组(P＜0.05),而细胞凋亡率高于对照组(P＜0.05),且均具有一定的剂量-效应关系.2.5 g/LLaCl3组子代大鼠大脑皮质GRP78、GRP94、pPERK、pIRE1、GADD153和pJNK表达水平高于对照组(P＜0.05),5 g/L LaCl3组子代大鼠大脑皮质GRP78、GRP94、pPERK、pIRE1、和GADD153表达水平高于对照和2.5 g/L LaCl3组(P＜0.05),10g/LLaCl3组子代大鼠大脑皮质GRP78、GRP94、pPERK、pIRE1、GADD153和pJNK表达水平高于对照、2.5 g/L和5 g/L LaGl3组(P＜0.05).结论 LaCl3对大鼠大脑皮质的毒性效应机制可能涉及GRP78和GRP94表达上调、PERK和IRE1磷酸化水平升高所致凋亡增多.
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NR2B、pERK、pElk-1共同参与大鼠逃避性学习和记忆
目的:探讨NR2B-pERK-pElk-1途径是否参与了大鼠各学习记忆相关脑区Y-迷宫逃避性学习和记忆.方法:健康雄性成年SD大鼠45只,共分为4组:①ifenprodil腹腔注射组(ifenprodil ip,14只),②DMSO腹腔注射组(DMSO ip,15只);③ifenprodil脑室注射组(ifenprodil ic,8只);④DMSO脑室注射组(DMSO ic,8只.以Y迷宫训练和测试成绩作为行为学评定指标,用免疫组织化学和Western blot方法观察大鼠学习记忆相关脑区pERKl/2和pElk-1的变化.结果:Ifenprodit ip组与DMSK)ip组动物的Y迷宫学习成绩没有明显差异(P＞0.05),但ifenDrodilip组Y迷宫记忆成绩差于DMSO ip组(P＜0.05).腹腔注射ifenprodil导致Y迷宫训练后各脑区pERKl/2和pElk-1表达的普遍下降,其中以海马、边缘区、杏仁核为明显,与DMSO ip组相比差异有显著性(P＜0.05).Ifenprodil ic组与DMSO ic组第一次Y迷宫测试成绩没有明显差异(P＞0.05).第一次测试后立即脑室给药并在给药后6 h测试Y迷宫记忆再巩固成绩,发现ifenprodil ic组成绩下降,与DMSOic组相比有明显差异(P＜0.05).而且ifenprodil ic组动物各脑区的pERK1/2和pElk-1表达与DMSO ic组相比均普遍下降,其中pElk-I表达在尾壳核和边缘区几乎完全消失.结论:NR2B对于大鼠Y迷宫长期记忆的形成、记忆再巩固过程是必要的,NR2B的失活将破坏这些过程.同时NR2B的失活减弱了Y迷宫训练后及记忆再巩固测试后学习记忆相关脑区pElk-1和pERK1/2表达,其中在尾壳核和边缘区,NR2B的失活使记忆再巩固测试后pElk-1表达完全被阻断.
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中药止痛巴布贴对骨癌痛大鼠脊髓背角p - ERK、p-CREB的影响
目的:观察中药止痛巴布贴对骨癌痛大鼠痛行为及骨髓背角神经节pERK、pCREB表达的影响.方法:108只180 ～ 220g雌性Wistar大鼠随机分为3组,分别为空白对照组(Con组,n=24)、假手术组(Sham组,n=24)、骨癌痛模型组(Ca组,n=60),3组分别于手术前2天、术后每隔4日测定机械痛阈(MWT)和热痛阈(TWL).于术后7天确认造模成功后,将成功的模型鼠随机分为两组,即模型组(Ca组,n=28)和中药止痛巴布贴组(CM组,n=25).术后7天、14天和21天各组处死大鼠(n≥8),取大鼠脊髓腰椎L4-6膨大处,用免疫组化方法测定脊髓背角pERK、pCREB的变化.结果:脊髓背角神经pERK、pCREB表达:Ca组阳性神经元数目增加,术后7天、术后14、21天与Con组和Sham组比较有统计学差异(P＜0.05)；CM组于术后14天、术后21天与Con组和Sham组统计学差异逐渐缩小(P＞0.05).结论:中药止痛巴布贴对骨癌痛有比较明显的镇痛作用,其对脊髓背角c-fos的影响,可能是通过降低脊髓背角神经节pERK、pCREB的表达而产生的,即通过ERK - CREB 信号转导通路完成的.
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缺血后处理抑制内质网应激PERK通路减轻大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤
目的 探讨缺血后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的作用及相关机制.方法 36只Wistar大鼠(257-326g),随机分为3组,对照组(Con组),缺血再灌注组(IR组),缺血后处理组(IPoC组).采用Langendorff灌流装置建立缺血再灌注损伤模型,TTC染色评价梗死面积,Western blot检测凋亡蛋白及内质网应激相关通路蛋白表达.结果 IR组较Con组梗死面积增加,而Bcl-2表达显著降低,GRP78、CHOP、cleaved caspase 12、cleaved caspase3、Bax及p-PERK表达水平显著增加.缺血后处理显著缩小梗死面积,并部分逆转相关蛋白表达的变化.结论 缺血后处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤,可能与抑制PERK通路介导的ERS相关凋亡相关.
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雏菊叶龙胆酮对低氧诱导PC12细胞的保护作用及潜在机制
目的 研究雏菊叶龙胆酮(Bellidifolin)对低氧所致神经细胞损伤的保护作用及机制.方法 通过建立肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12)低氧模型,观察Bellidifolin对低氧所致PC12损伤的保护作用,利用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑嗅盐(MTT)法测定细胞存活率,免疫细胞化学法检测Bellidifolin对低氧诱导的PC12磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)、p-p38有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)蛋白表达的影响,Western印迹法检测半胱天冬酶(Caspase)-3蛋白表达.结果 PC12经低氧处理后,细胞存活率显著降低(P<0.05),预先用不同浓度Bellidifolin(10、20、40μmol/L)作用后再进行低氧刺激,PC12损伤减轻,细胞存活率明显提高(P<0.05).免疫细胞化学染色显示,各组细胞pERK蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),而PC12经低氧刺激后p-p38MAPK蛋白表达显著增强(P<0.05).预先用不同浓度Bellidifolin作用后再进行低氧处理,PC12 p-p38MAPK蛋白表达显著降低(P<0.05).Western印迹显示,低氧刺激引起关键因子Caspase-3在PC12表达升高,差异有统计学意义(P<0.05).预先用不同浓度Bellidifolin作用后再进行低氧处理,PC12 Caspase-3表达显著降低.结论 Bellidifolin对低氧所致PC12损伤具有保护作用.Bel-lidifolin抑制细胞凋亡,机制与ERK通路无关;而是通过抑制p38MAPK信号通路激活及下游Caspase-3的表达而实现.
关键词： 雏菊叶龙胆酮 MAPK PERK P38 半胱天冬酶(Caspase)-3 -
内质网应激PERK通路在脑泰方提取物保护局灶性脑缺血大鼠海马神经元中的作用
目的 探讨中药复方脑泰方(NTF)提取物(NTE)对局灶性脑缺血的治疗作用及其对内质网应激PERK通路的干预作用.方法 自备NTE连续灌胃7 d后,在体制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,观察术后大鼠的神经行为,同时使用Nissl染色观察神经元凋亡情况,使用免疫组织化学、Western及RT-qPCR观察内质网应激PERK通路相关蛋白的表达.结果 NTE对大鼠脑缺血后的行为有一定的改善作用;NTE可明显增加MCAO后海马CA1区神经元的存活.NTE从术后12 h开始抑制PERK通路p-PERK的表达,明显促进GRP78蛋白的表达,抑制术后CHOP蛋白的表达,尤其在术后24 h.RT-qPCR结果显示NTE可以显著降低MCAO术后72 h海马CA1区神经元内CHOP的表达.结论 NTE对脑缺血具有治疗作用,其可能的机制是抑制内质网应激PERK通路,尤其是在脑缺血的早期.
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PERK信号通路对实验性绝经后骨质疏松雌性大鼠成骨细胞分化的影响
目的:探讨实验性雌性大鼠绝经后骨质疏松(PMOP)治疗前后骨组织中 PERK、ATF4、Runx2、osterix、RANKL和 OPG的变化,阐明PERK信号通路在PMOP发生中的作用.方法:复制雌性大鼠卵巢去势骨质疏松模型.45只大鼠分为正常对照组(大鼠不做处理,15只)、骨质疏松组(雌性大鼠卵巢摘除,15只)和骨质疏松治疗组(大鼠卵巢摘除后尾静脉注射雌激素,15只).观察各组大鼠血清中Ⅰ型胶原(ColⅠ)、碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)水平.饲养3个月后取各组大鼠股骨骨干做病理切片,RT-PCR法检测各组大鼠骨组织中 PERK、ATF4、Runx2、osterix、RANKL 和 OPG 基因表达水平,Western blotting 法分析PERK、ATF4、Runx2、osterix、RANKL和 OPG蛋白表达水平.结果:与对照组比较,骨质疏松组大鼠血清中ColⅠ、ALP和 OCN水平明显降低(P<0.05或P<0.01);与骨质疏松组比较,骨质疏松治疗组大鼠血清中ColⅠ、ALP和 OCN水平明显升高(P<0.01).与对照组比较,骨质疏松组大鼠骨组织中 PERK、ATF4、Runx2和osterix基因表达水平明显下降(P<0.05或P<0.01),RANKL基因表达水平明显升高(P<0.01);与骨质疏松组比较,骨质疏松治疗组大鼠骨组织中 PERK、ATF4、Runx2和 osterix基因表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),RANKL基因表达水平明显降低(P<0.01).与对照组比较,骨质疏松组大鼠骨组织中PERK、Runx2和osterix蛋白表达水平明显下降(P<0.05或P<0.01),RANKL蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01);与骨质疏松组比较,骨质疏松治疗组大鼠骨组织中PERK、Runx2和osterix蛋白表达水平明显上升(P<0.05或P<0.01),RANKL蛋白表达水平明显降低(P<0.01).HE染色,与对照组比较,骨质疏松组大鼠骨组织中骨吸收陷窝变大,骨吸收增强,导致骨质流失;与骨质疏松组比较,骨质疏松治疗组大鼠骨质吸收减弱,骨骼恢复正常结构.结论:雌性大鼠卵巢切除及注射雌激素治疗后,其骨组织中 PERK表达趋势与成骨细胞转录因子Runx2和osterix变化一致,与破骨细胞转录因子RANKL表达相反,提示PMOP发病时成骨细胞功能减弱与PERK表达下降有关.
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利拉鲁肽下调游离脂肪酸作用下βTC3细胞PERK的表达
目的:探讨游离脂肪酸(FFA)作用下胰岛βTC3细胞双链RNA依赖性蛋白样内质网激酶(PERK)的表达以及利拉鲁肽(Lira)对其表达的干预作用.方法:以βTC3细胞为研究对象,分为对照组和FFA组(0.125,0.25,0.5及1 mmol/L)孵育24h,Westernblot方法检测PERK的表达.然后,分为对照组,FFA组,和FFA+Lira组(0.5 mg/L和1 mg/L),Lira预孵育6h后,1mmol/L FFA 继续孵育24h,Western blot检测PERK的表达.结果:①不同浓度FFA孵育24h后,与对照组相比,1mmol/L FFA组PERK表达增加(P＜0.05).②与1 mmo1/L FFA组相比,0.5mg/L Lira+1 mmol/L FFA和1mg/L Lira+1 mmol/L FFA组PERK表达减少(P＜0.05),两组之间有统计学差异(P＜0.05).结论:FFA作用能够上调βTC3细胞PERK的表达,而Lira在一定程度上逆转FFA水平异常导致的BTC3细胞PERK表达上调,减轻内质网应激反应.
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内质网应激时重组腺病毒Ad-PERK siRNA对人软骨肉瘤SW1353细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨靶向蛋白激酶样内质网激酶(protein kinase-like endoplasmic reticulum kinase,PERK]基因的小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)重组腺病毒在内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)时对人软骨肉瘤SW1353细胞增殖和凋亡的影响.方法:构建靶向PERK基因的siRNA重组腺病毒Ad-PERKsiRNA,并将其感染SW1353细胞后,RT-PCR和蛋白质印迹法检测SW1353细胞中PERK mRNA和蛋白的表达.应用衣霉素(tunicamycin,TM)建立ERS模型;在ERS状态下,MTT法检测Ad-PERKsiRNA感染后SW1353细胞的增殖情况,FCM法检测感染后SW1353细胞的细胞周期和细胞凋亡率,透射电子显微镜下观察感染后SW1353细胞超微结构的变化,蛋白质印迹法检测感染后SW1353细胞中cleaved caspase 3、caspase 12、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)和磷酸化c-Jun氨基端激酶(phospho-c-Jun-N-terminal kinase,p-JNK)蛋白的表达.结果:成功构建获得重组腺病毒AdPERKsiRNA.Ad-PERK siRNA感染后,SW1353细胞中PERK mRNA和蛋白的表达水平下调(P＜0.05).在ERS状态下,Ad-PERKsiRNA可促进SW1353细胞的增殖(P＜0.05),Ad-PERK siRNA感染组S期细胞所占比例高于感染空载体腺病毒Ad-RFP的阴性对照组和未感染的空白对照组(P＜0.05),Ad-PERK siRNA感染组SW1353细胞的凋亡率低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),透射电子显微镜下观察发现阴性对照组和空白对照组SW1353细胞存在明显的凋亡,Ad-PERK siRNA感染组SW1353细胞中cleaved caspase 3、caspase 12、CHOP和p-JNK蛋白的表达水平均明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05).结论:重组腺病毒Ad-PERKsiRNA可以促进ERS状态下SW1353细胞的增殖,并抑制其凋亡.
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PERK干扰慢病毒载体的构建及其在人牙髓细胞中的表达
目的:构建人PERK基因的shRNA慢病毒载体,检测其对人牙髓细胞(dental pulp cells,DPCs)PERK基因表达的抑制作用.方法:针对人PERK基因的cDNA序列,设计并合成针对人PERK基因的shRNA表达序列,将其连接到载体hU6-MCS-CMV-EGFP中.测序正确后,将构建的目的载体和包装质粒共转染293T细胞,72 h后收获并浓缩得到重组慢病毒颗粒.筛选佳感染复数(multiplicity of infection,MOI),将病毒感染人牙髓细胞,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)技术检测PERK基因mRNA和蛋白的表达水平,验证干扰效果.采用SPSS24.0软件包对数据进行统计学分析.结果:成功构建LV-PERK-RNAi慢病毒载体,病毒滴度为3×108 TU/mL,适MOI=30;RT-PCR和Western印迹法检测显示,与空白对照组相比,PERK基因的mRNA和蛋白质表达水平显著下降,在mRNA水平的表达抑制率约为63％.结论:成功构建PERK干扰慢病毒表达载体,为后续的研究创造了条件.
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慢病毒介导人PERK基因修饰对内质网应激介导凋亡的影响
目的 构建人蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)慢病毒载体并包装慢病毒颗粒(lentivirus),探讨成肌细胞C2C12中PERK基因慢病毒修饰对内质网应激介导凋亡的作用.方法 设计并合成人PERK基因的上、下游引物,采用PCR方法从真核质粒pcDNA3.1(-)-PERK中扩增目的基因.鉴定后与慢病毒载体pWPT-GFP进行重组,再将重组慢病毒载体pWPT-GFP-PERK与慢病毒包装质粒pMD2G、pSPAX2共转入293T细胞中,进一步包装形成PERK慢病毒(LV-PERK);收集转染后48 h的细胞上清,体外感染成肌细胞C2C12,观察绿色荧光蛋白(GFP)感染效率,并应用流式细胞仪(FCM)检测内质网应激时重组慢病毒PERK对C2C12细胞增殖凋亡的影响,蛋白质印迹法检测凋亡相关基因Cleaved Caspase-3与Chop蛋白的表达.结果 成功构建和包装了滴度为4.2×108 efu /mL的PERK重组慢病毒.FCM检测结果表明,TM+LV-PERK处理组G1期细胞比例为54.37％,低于TM组(77.91％)和LV-GFP组(66.41％);TM+ LV-PERK处理组S期细胞比例为31.36％,高于TM组(12.14％)和LV-GFP组(16.96％),各组差异均具有统计学意义(P＜0.05);此外,TM+ LV-PERK处理组细胞凋亡率为25.91％,高于TM组(11.79％)和Ad-GFP组(11.24％),各组差异具有统计学意义(P＜0.05).免疫印迹检测Cleaved Caspase-3和Chop蛋白的表达与FCM结果一致.结论 成功构建和包装LV-PERK重组慢病毒颗粒,在内质网应激时,LV PERK慢病毒可促进C2C12细胞的增殖和凋亡.
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鞘内注射GABA转运体-1抑制剂NO-711对CCI大鼠脊髓背角pERK表达的影响
目的 观察γ-氨基丁酸(GABA)转运体-1(GAT-1)抑制剂NO-711对坐骨神经慢性松结扎(OCI)大鼠机械和热痛阈及脊髓背角神经元磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)表达的影响,探讨NO-711在脊髓水平抗痛敏的机制.方法 雄性SD大鼠126只,随机均分为六组(n=21):CCI+NO-711 50μg组(N50组)、CCI+NO-711 100 μg组(N100组)、CCI+NO-711 200 μg组(N200组)、CCI+生理盐水组(CN组)、CCI组、假手术组(S组).CCI组和S组在术前、术后1、3、5、7、14、21 d测定大鼠机械缩腿阈值(MWT)和热缩腿潜伏期(TWL);其余各组大鼠在手术前5 d先进行鞘内置管,CCI手术后5 d鞘内注射不同剂量的NO-711或生理盐水,测定给药前、给药后30 min、1、2、4、8 h大鼠MWT、TWL及脊髓背角pERK表达的变化.结果 CCI组MWT和TWL术后3 d后各时点较术前2 d均降低和缩短、且相应时点均低于和短于S组(P＜0.01);与给药前比较,CN组大鼠各时点MWT和TWL,差异无统计学意义,而NO-711各剂量组大鼠给药后MWT和TWL均呈剂量依赖性增加;与CCI组和NS组比较,NO-711对脊髓背角pERK表达呈剂量依赖性抑制.结论 鞘内注射NO-711能明显抑制CCI大鼠机械痛敏和热痛敏及脊髓背角pERK表达,提示pERK介导NO-711在脊髓水平具有抗痛敏效应.
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低剂量电离辐射诱导小鼠睾丸细胞内质网应激及PERK-CHOP信号通路的激活
目的:探讨低剂量电离辐射与小鼠睾丸细胞内质网应激的发生以及PERK-CHOP通路激活的相关性. 方法:健康雄性昆明小鼠随机分成时程-效应(75 mGy照射后0、3、6、12和24h)和剂量-效应(0、50、75、100和200 mGy照射后12 h)组,每组动物10只.采用H2O2和MDA试剂盒比色法检测其含量；利用实时定量逆转录PCR( quantitative RT-PCR)检测GRP78、PERK和CHOP mRNA；Western印迹和图像分析技术检测GRP78、PERK、磷酸化PERK( phosphorylated PERK,pho-PERK)和CHOP蛋白表达. 结果:小鼠经75 mGy全身照射后,睾丸组织中H2O2含量随时间延长而增加,MDA含量在3和6h稍有降低,而后随时间延长而增加,二者在12和24h较0h时显著增加(P＜ 0.05,P＜0.01)；除了GRP78 mRNA(3和24 h)和蛋白表达(6 h)分别在照射后有降低趋势外,GRP78( 12 h)、PERK(3、6、12和24 h)和CHOP( 12和24h)的mRNA表达较0h显著增加(P＜0.05,P＜0.01),GRP78(12和24 h)、pho-PERK(3、12和24h)和CHOP(3、6、12和24 h)的蛋白表达也都较0h显著增加(P＜0.05,P＜0.01),PERK蛋白表达则无明显变化规律.小鼠经50 ～ 200 mGy全身照射后12 h,睾丸组织中H2O2含量在50 ～ 100 mGy照射后随剂量增加而增加,200 mGy照射后则稍有降低,MDA含量随剂量增加而增加,而且H2O2含量(75和100 mGy)和MDA含量(75、100和200 mGy)显著高于0 mGy组(P＜0.05,P＜0.01)；除了GRP78mRNA表达在50和200 mGy照射后有降低趋势外,GRP78(75和100 mGy)、PERK(75、100和200 mGy)和CHOP(50、75、100和200 mGy)的mRNA表达都显著高于0 mGy组(P＜0.05,P＜0.01),GRP78(100和200 mGy)、pho-PERK(50、100和200 mGy)和CHOP(50、75、100和200 mGy)的蛋白表达也都显著高于0mGy组(P＜0.05,P＜0.01),而PERK蛋白表达则无明显变化规律. 结论:低剂量电离辐射能够诱导小鼠睾丸细胞发生内质网应激,并且激活PERK-CHOP信号通路.
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IL-6调节MPP+处理的SH-SY5Y细胞的ERK分泌
目的 观察IL-6对1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)处理的SH-SY5Y细胞的生长和pERK的影响.方法 对MPP+处理的SH-SY5Y细胞进行IL-6干预,观察细胞结构形态的改变以及pERK的含量变化和定位.结果 MPP+处理的SH-SY5Y细胞系细胞活力下降；细胞系pERK上升,高峰在24 h,主要定位于胞浆；IL-6干预的SH-SY5Y细胞系pERK上升,高峰在6h,多定位于胞核.IL-6可以降低MPP+处理的SH-SY5Y细胞系的凋亡,使pERK分泌高峰提前；加用ERK抑制剂U0126可以下调IL-6对Mpp+处理的SH-SY5Y细胞系的影响.结论 IL-6可以通过调节pERK,减少MPP+诱导的细胞损伤,促进SH-SY5Y细胞的存活.
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黄芪多糖减轻2型糖尿病大鼠内质网应激和增加胰岛素敏感性的实验研究
目的 探讨黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)对2型糖尿病大鼠内质网应激和胰岛素抵抗的治疗作用.方法 雄性SPF级SD大鼠44只,利用高脂饲料联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)复制2型糖尿病模型成功后随机分为4组:正常-组、正常I-APS组、糖尿病组和糖尿病+APS组.饲养期间定期检测动物随机血糖、空腹血糖和Lj服葡萄糖耐量试验(oral glucose tolerance test,OGTT),动物处死后测定肝组织内质网应激的标志蛋白PERK(protein kinase R-l ike ER kinase)磷酸化表达的改变情况.结果 ①DM+APS组动物在治疗8周后,空腹血糖较DM组显著下降(P＜0.01),OGTT各时点血糖值较DM组均显著降低(P＜0.01);②磷酸化PERK的表达在DM组较C组显著增加(P＜0.01);但在DM+APS组的表达较DM组明显减少(P＜0.05).结论 ①APS可通过减少p-PERK的表达缓解2型糖尿病大鼠的内质网应激;②APS减少2型糖尿病大鼠的内质网应激反应可能是其增加胰岛素敏感性的机制之一.
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大鼠脑缺血预处理后PERK表达的变化及清热化瘀方的干预
目的 观察缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注后PERK mRNA及其蛋白表达和神经元凋亡的影响及清热化瘀方的干预作用.方法 SD大鼠160只,随机分为4组:假手术组、MCAO组、BIP组、QRHY组,每组按照再灌注后12 h、1d、2d、3d四个时间点平均分为4个亚组,制备缺血预处理模型,用原位杂交法和Western blot法观察再缺血后各个时间点PERKmRNA及其蛋白的表达变化,用流式细胞术检测神经细胞凋亡率.结果 ①MCAO组12 h PERK mRNA表达达高峰(P＜0.01),随再灌注时间延长其表达逐渐下降；BIP组缺血各时间点其表达水平均显著下降(P＜0.05),QRHY组较BIP组进一步降低其表达(P＜0.05).②MCAO组PERK蛋白表达于缺血再灌注后12h开始明显上升,24h达高峰(P＜0.01),2d后表达开始减弱；BIP组较MCAO组PERK表达明显降低(P＜0.05或P＜0.01),QRHY组较BIP组进一步降低其表达(P＜0.05).③MCAO组12 h细胞凋亡发生率显著增加,1d时达到高峰(P＜0.01),以后时间点逐渐下降(P＜0.01)；BIP组各个时间点神经元凋亡发生率较MCAO组显著降低(P＜0.05或P＜0.01)；QRHY组较BIP组神经细胞凋亡率进一步降低(P＜0.05或P＜0.01).结论 脑缺血预处理可能通过抑制内质网应激后PERK表达发挥其神经保护作用,清热化瘀方可促进其作用.
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中药止痛贴对骨癌痛大鼠脊髓背角MAPK信号转导通路影响的实验性研究
目的 观察中药止痛贴对骨癌痛大鼠痛行为及脊髓背角神经节p-ERK和p-p38表达的影响.方法 108只180～ 220 9雌性Wistar大鼠随机分为3组,分别为空白对照组(Con组,n=24)、假手术组(Sham组,n=24)、骨癌痛模型组(Ca组,n=60),3组分别于手术前2d、术后每隔4日测定机械痛阈(MWT)和热痛阈(TWL).于术后7天确认造模成功后,将成功的模型鼠随机分为两组,即模型组(Ca组,n=28)和中药止痛贴组(CM组,n=25).术后7d,14 d和21 d各组处死大鼠(n≥8),取大鼠脊髓腰椎L4-6膨大处,用免疫组化方法测定脊髓背角p-ERK和p-p38的变化.结果 脊髓背角神经pERK和p-p38表达:Ca组阳性神经元数目增加,术后7,14,21 d与Con组和Sham组比较有统计学差异(P＜0.05)；CM组于术后14 d、术后21 d与Con组和Sham组统计学差异逐渐缩小(P＞0.05).结论 中药止痛贴对骨癌痛有比较明显的镇痛作用,其对脊髓背角c-fos的影响,可能是通过降低脊髓背角pERK和-p38的表达而产生的,即通过MAPK-CREB信号转导通路完成的.
