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尖叶假龙胆有效成分的活性追踪分离及对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用研究
目的 从尖叶假龙胆不同极性部位中寻找对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤具有较强保护作用的化合物.方法 采用活性追踪分离的方式,通过H2O2诱导PC12细胞损伤建立氧化应激损伤模型,利用实时细胞分析技术(real-time cell analysis,RTCA)研究尖叶假龙胆不同极性部位对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用;采用HPLC法测定具有活性的单体化合物的质量分数,并确定其化学结构.结果 尖叶假龙胆正丁醇和醋酸乙酯部位对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤具有保护作用.同时,从尖叶假龙胆正丁醇和醋酸乙酯部位中分离得到的化合物1、2、3、5也对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤具有保护作用.其中化合物1和2的保护作用在3.125～50.000 μmol/L呈一定剂量依赖性,浓度为50.000 μmol/L时,对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用强;而化合物3和5的保护作用在3.125～50.000μmol/L内不具有剂量依赖性,浓度分别为25.000、3.125 μmol/L时,对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用强.经结构鉴定,化合物1、2、3、5分别为雏菊叶龙胆酮、去甲基雏菊叶龙胆酮、当药醇苷及去甲基当药醇苷.结论 化合物1、2、3、5对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤具有保护作用,可能是尖叶假龙胆抗氧化的主要活性成分.
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HPLC法测定尖叶假龙胆中雏菊叶龙胆酮和去甲基雏菊叶龙胆酮含量
目的:建立HPLC法同时测定尖叶假龙胆中雏菊叶龙胆酮和去甲基雏菊叶龙胆酮的含量.方法:色谱柱:Thermo Syncronis C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:0.5％磷酸水(A)-乙腈(B),梯度洗脱,0～15 min,40％～45％B,15 ～ 30 min,45％～60％B;检测波长:254 nm;柱温:30℃;流速:1.0mL· min-1.结果:雏菊叶龙胆酮和去甲基雏菊叶龙胆酮分别在1.99～79.52 μg· mL-1(R2=0.999 9)、2.28～56.90 μg·mL-1(R2=0.999 7)范围内线性关系良好;平均加样回收率(n=9)分别为100.01％(RSD=1.50％)、100.65％(RSD=1.14％).结论:该方法简便、快速、准确、可靠,为尖叶假龙胆的质量控制提供参考.
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雏菊叶龙胆酮对低氧诱导PC12细胞的保护作用及潜在机制
目的 研究雏菊叶龙胆酮(Bellidifolin)对低氧所致神经细胞损伤的保护作用及机制.方法 通过建立肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12)低氧模型,观察Bellidifolin对低氧所致PC12损伤的保护作用,利用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑嗅盐(MTT)法测定细胞存活率,免疫细胞化学法检测Bellidifolin对低氧诱导的PC12磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)、p-p38有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)蛋白表达的影响,Western印迹法检测半胱天冬酶(Caspase)-3蛋白表达.结果 PC12经低氧处理后,细胞存活率显著降低(P<0.05),预先用不同浓度Bellidifolin(10、20、40μmol/L)作用后再进行低氧刺激,PC12损伤减轻,细胞存活率明显提高(P<0.05).免疫细胞化学染色显示,各组细胞pERK蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),而PC12经低氧刺激后p-p38MAPK蛋白表达显著增强(P<0.05).预先用不同浓度Bellidifolin作用后再进行低氧处理,PC12 p-p38MAPK蛋白表达显著降低(P<0.05).Western印迹显示,低氧刺激引起关键因子Caspase-3在PC12表达升高,差异有统计学意义(P<0.05).预先用不同浓度Bellidifolin作用后再进行低氧处理,PC12 Caspase-3表达显著降低.结论 Bellidifolin对低氧所致PC12损伤具有保护作用.Bel-lidifolin抑制细胞凋亡,机制与ERK通路无关;而是通过抑制p38MAPK信号通路激活及下游Caspase-3的表达而实现.
关键词： 雏菊叶龙胆酮 MAPK PERK P38 半胱天冬酶(Caspase)-3 -
HPLC法同时测定尖叶假龙胆中三种山酮类化合物的含量
目的:利用高效液相色谱法同时测定尖叶假龙胆中当药醇苷、雏菊叶龙胆酮、去甲基雏菊叶龙胆酮的含量.方法:取尖叶假龙胆粗粉0.5g,用甲醇25 mL超声震荡提取30 min,制成供试品溶液.色谱条件:Waters Symmetry C18色谱柱(4.6mm×150 mm,5μm);流动相:甲醇-磷酸水(pH2.6);柱温35℃;流速1 mL/min;进样量:10 μL;梯度洗脱45 min.结果:尖叶假龙胆中当药醇苷、去甲基雏菊叶龙胆酮、雏菊叶龙胆酮分别在13.6～122.4 μg/mL,10 ～90 μg/mL,10.8 ～ 97.2 μg/mL的范围内线性关系良好(r值分别为0.997 4,0.996 7,0.998 0);当药醇苷、去甲基雏菊叶龙胆酮、雏菊叶龙胆酮平均回收率(n=6)分别为99.97％,102.02％,98％.结论:尖叶假龙胆中当药醇苷,去甲基雏菊叶龙胆酮和雏菊叶龙胆酮的含量分别为23.94 mg/g,4.49 mg/g,7.92 mg/g.
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雏菊叶龙胆酮对局灶性脑缺血损伤的保护作用及机制探讨
目的研究雏菊叶龙胆酮(Bellidifolin)对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制.方法利用电凝法制作SD大鼠右侧大脑中动脉阻塞 (MCAO)模型,于MCAO缺血后4 h和24 h进行神经行为学评分, 24 h评分后断头取脑测量脑梗塞面积,应用HE染色和免疫组化法观察 Bellidifolin干预后缺血区病理学改变和ICAM-1、Bcl-2蛋白的变化.结果 Bellidifolin能改善MCAO缺血后神经功能障碍并缩小脑梗塞面积;减轻相关脑区神经元损伤程度 ;显著抑制大鼠局灶性脑缺血损伤ICAM-1表达,上调缺血周边区神经元 Bcl-2抗凋亡蛋白的表达.结论 Bellidifolin 口服给药对缺血性脑损伤有保护作用,其作用机制可能与抑制ICAM-1表达和促进Bcl-2表达有关.
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雏菊叶龙胆酮对脑缺血损伤的保护作用及机制研究
目的:探究雏菊叶龙胆酮用于脑缺血损伤治疗的保护作用及其作用机制.方法:采用不同的方法制备两种动物全脑缺血损伤模型,并观察不同剂量(50mg· kg-1、75mg· kg-1、100mg· kg-1)雏菊叶龙胆酮对断头后小鼠张口喘息时间以及对大鼠脑缺血后脑指数、脑SOD活力、脑MDA含量、脑兴奋性氨基酸Glu以及抑制性氨基酸GABA含量的影响,同时比较雏菊叶龙胆酮与尼莫地平的作用效果差异.结果:与模型组比较,雏菊叶龙胆酮50mg·kg-1、75mg· kg-1、100mg· kg-1组可显著延长小鼠断头后张口喘息时间(P＜0.05);雏菊叶龙胆酮组脑SOD活力、脑MDA含量、脑兴奋性氨基酸Glu以及抑制性氨基酸GABA浓度均改善,且75mg· kg-1浓度组改善效果佳(P＜0.05).结论:雏菊叶龙胆酮能明显延长小鼠断头后张口喘息时间,并且对于脑SOD活力、脑MDA含量、脑兴奋性氨基酸Glu以及抑制性氨基酸GABA含量改善效果显著,其对于临床脑缺血损伤治疗药物的开发具有重要的参考价值.
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高速逆流色谱法分离尖叶假龙胆中[口山]酮类活性成分
目的:建立利用高速逆流色谱法分离尖叶假龙胆中两个主要的[口山]酮类活性成分雏菊叶龙胆酮和去甲基雏菊叶龙胆酮的方法.方法:先后采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(9∶10∶9∶10,v/v/v/v)和正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(6∶5∶6∶5,v/v/v/v)两个溶剂系统,进行梯度洗脱,对尖叶假龙胆乙酸乙酯提取物进行分离,对所得馏分用Sephadex LH-20进行纯化,所得单体利用UV、MS和NMR数据确定其结构.结果:分离得到两个具有显著生理活性的[口山]酮类成分雏菊叶龙胆酮和去甲基雏菊叶龙胆酮.结论:高速逆流色谱法是一种有效的分离制备尖叶假龙胆中[口山]酮类活性成分雏菊叶龙胆酮和去甲基雏菊叶龙胆酮的方法.
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雏菊叶龙胆酮对STZ诱导的糖尿病大鼠胰腺的保护作用
目的:探讨瘤毛獐牙菜中分离所得的雏菊叶龙胆酮对糖尿病大鼠胰腺的保护作用机制.方法:将雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、雏菊叶龙胆酮(50 mg/kg)组,每组8只.模型组和雏菊叶龙胆酮组建立链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病模型,雏菊叶龙胆酮组用雏菊叶龙胆酮进行干预,检测各组大鼠血清抗氧化因子超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性以及氧化代谢产物丙二醛(MDA)浓度,同时对胰腺组织HE染色并应用免疫印迹研究损伤相关因子NF-κBp65以及IκBα 蛋白表达量的差异,分析雏菊叶龙胆酮对胰腺的保护作用.结果:雏菊叶龙胆酮能提高糖尿病大鼠血清CAT、SOD的活性(P<0.01),能降低MDA的浓度(P<0.01);胰腺HE染色显示雏菊叶龙胆酮能够减少糖尿病大鼠胰岛的萎缩,免疫印迹显示雏菊叶龙胆酮能增加胰腺组织内IκBα 的表达,降低NF-κBp65蛋白表达.结论:雏菊叶龙胆酮可能通过胰腺NF-κB信号通路来减轻氧化应激水平,从而减轻STZ诱导的胰岛损伤,对胰岛起到保护作用.
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高效液相色谱法测定川东獐牙菜中多种成分的含量
目的:建立测定川东獐牙菜中雏菊叶龙胆苷、苦龙胆酯苷、去甲基雏菊叶龙胆酮和雏菊叶龙胆酮含量的高效液相色谱方法.方法:HYPERSIL BDS C18(4.6 mm×200 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-磷酸二氢钠(0.03 mol·L-1,pH=3.0),梯度洗脱(CH3CN%:0 min 10%,15 min 20%,30 min 35%,50 min 55%),流速为1.0 mL·min-1,检测波长为250 nm,柱温为25℃.结果:雏菊叶龙胆苷,苦龙胆酯苷,去甲基雏菊叶龙胆酮和雏菊叶龙胆酮分别在0.0403-0.3024μg,0.0604-0.4527μg,0.1320-0.9900 μg,0.1610-1.2072 μg范围内线性良好,相关系数r分别为0.9999,0.9999,0.9999,0.9999,其平均回收率均在98%-103%范围内,RSD均小于1%(n=5).结论:本方法操作简便,分离效果好,灵敏度高,重现性好,为全面控制川东獐牙菜质量提供一个可靠的方法.
