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HPLC法同时测定黄花獐牙菜根中8种成分
目的 建立同时测定黄花獐牙菜Swertia kingii根中獐牙菜苷、龙胆苦苷、异荭草苷、1,3,7,8-四羟基(口山)酮-1-O-β-D-葡萄糖、当药醇苷、1,3,7,8-四羟基(口山)酮、去甲基雏菊叶龙胆酮和1,5,8-三羟基-3-甲氧基(口山)酮8种成分的HPLC方法.方法 采用Agilent Zorbax ODS (250 mm×4.6mm,5 μm)色谱柱,乙腈-0.5％磷酸水梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,检测波长254 nm,柱温30℃.结果 獐牙菜苷、龙胆苦苷、异荭草苷、1,3,7,8-四羟基(口山)酮-1-O-β-D-葡萄糖、当药醇苷、1,3,7,8-四羟基(口山)酮、去甲基雏菊叶龙胆酮和1,5,8-三羟基-3-甲氧基(口山)酮分别在3.84～96.00 μg/mL (r=0.999 6)、3.36～84.00 μg/mL (r=0.999 2)、5.92～148.00 μg/mL (r=0.999 8)、4.81～118.00 μg/mL (r=0.999 2)、4.32～108.00 μg/mL (r=0.999 3)、4.16～104.00μg/mL (r=0.999 2)、5.12～128.00 μg/mL (r=0.9994)、4.80～120.00 μg/mL (r=0.999 6)与峰面积积分值呈良好的线性关系;平均回收率分别为99.59％、98.95％、98.61％、99.63％、99.31％、99.50％、99.80％、98.50％,RSD分别为0.99％、3.37％、1.87％、1.93％、1.21％、1.62％、0.54％、1.87％.结论 所建方法简便、高效、准确,重复性好,可用于对黄花獐牙菜的质量控制,有利于对该植物的综合利用开发.
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尖叶假龙胆有效成分的活性追踪分离及对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用研究
目的 从尖叶假龙胆不同极性部位中寻找对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤具有较强保护作用的化合物.方法 采用活性追踪分离的方式,通过H2O2诱导PC12细胞损伤建立氧化应激损伤模型,利用实时细胞分析技术(real-time cell analysis,RTCA)研究尖叶假龙胆不同极性部位对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用;采用HPLC法测定具有活性的单体化合物的质量分数,并确定其化学结构.结果 尖叶假龙胆正丁醇和醋酸乙酯部位对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤具有保护作用.同时,从尖叶假龙胆正丁醇和醋酸乙酯部位中分离得到的化合物1、2、3、5也对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤具有保护作用.其中化合物1和2的保护作用在3.125～50.000 μmol/L呈一定剂量依赖性,浓度为50.000 μmol/L时,对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用强;而化合物3和5的保护作用在3.125～50.000μmol/L内不具有剂量依赖性,浓度分别为25.000、3.125 μmol/L时,对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用强.经结构鉴定,化合物1、2、3、5分别为雏菊叶龙胆酮、去甲基雏菊叶龙胆酮、当药醇苷及去甲基当药醇苷.结论 化合物1、2、3、5对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤具有保护作用,可能是尖叶假龙胆抗氧化的主要活性成分.
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HPLC法测定尖叶假龙胆中雏菊叶龙胆酮和去甲基雏菊叶龙胆酮含量
目的:建立HPLC法同时测定尖叶假龙胆中雏菊叶龙胆酮和去甲基雏菊叶龙胆酮的含量.方法:色谱柱:Thermo Syncronis C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:0.5％磷酸水(A)-乙腈(B),梯度洗脱,0～15 min,40％～45％B,15 ～ 30 min,45％～60％B;检测波长:254 nm;柱温:30℃;流速:1.0mL· min-1.结果:雏菊叶龙胆酮和去甲基雏菊叶龙胆酮分别在1.99～79.52 μg· mL-1(R2=0.999 9)、2.28～56.90 μg·mL-1(R2=0.999 7)范围内线性关系良好;平均加样回收率(n=9)分别为100.01％(RSD=1.50％)、100.65％(RSD=1.14％).结论:该方法简便、快速、准确、可靠,为尖叶假龙胆的质量控制提供参考.
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HPLC法同时测定尖叶假龙胆中三种山酮类化合物的含量
目的:利用高效液相色谱法同时测定尖叶假龙胆中当药醇苷、雏菊叶龙胆酮、去甲基雏菊叶龙胆酮的含量.方法:取尖叶假龙胆粗粉0.5g,用甲醇25 mL超声震荡提取30 min,制成供试品溶液.色谱条件:Waters Symmetry C18色谱柱(4.6mm×150 mm,5μm);流动相:甲醇-磷酸水(pH2.6);柱温35℃;流速1 mL/min;进样量:10 μL;梯度洗脱45 min.结果:尖叶假龙胆中当药醇苷、去甲基雏菊叶龙胆酮、雏菊叶龙胆酮分别在13.6～122.4 μg/mL,10 ～90 μg/mL,10.8 ～ 97.2 μg/mL的范围内线性关系良好(r值分别为0.997 4,0.996 7,0.998 0);当药醇苷、去甲基雏菊叶龙胆酮、雏菊叶龙胆酮平均回收率(n=6)分别为99.97％,102.02％,98％.结论:尖叶假龙胆中当药醇苷,去甲基雏菊叶龙胆酮和雏菊叶龙胆酮的含量分别为23.94 mg/g,4.49 mg/g,7.92 mg/g.
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尖叶假龙胆入血成分的初步研究
目的:研究尖叶假龙胆的入血成分.方法:建立尖叶假龙胆生药材与不同采血时间含药血浆的UPLC图谱,通过比对图谱,确认尖叶假龙胆入血成分.结果:尖叶假龙胆中去甲基雏菊叶龙胆酮以原型成分入血.结论:血浆中去甲基雏菊叶龙胆酮直接作用于体内,对其进行后续药理学研究,将有助于阐述尖叶假龙胆治疗疾病的物质基础与药理作用.
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去甲基雏菊叶龙胆酮在小鼠体内的药动学研究
目的:研究川东獐牙菜中去甲基雏菊叶龙胆酮在小鼠体内的药动学过程.方法:小鼠一次性腹腔注射去甲基雏菊叶龙胆酮后,用高效液相色谱法检测不同时间间隔血药浓度,计算药动学参数.结果:小鼠一次性腹腔注射0.8 g·kg-1的去甲基雏菊叶龙胆酮后其药动学参数为t1/2α为(19.8±4.8)min,t1/2β为(411.7±52.8)rain,AUC为(92.2±10.9)mg·min·L-1.结论:本方法灵敏、快速、准确、选择性强,可较好地满足去甲基雏菊叶龙胆酮的药动学研究,为进一步研究药理作用提供依据.
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去甲基雏菊叶龙胆酮对Ox-LDL诱导内皮细胞衰老的影响
目的 研究口山酮化合物去甲基雏菊叶龙胆酮(DMB)对氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)致内皮细胞衰老的影响.方法 培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),Ox-LDL(100 μg·mL-1)处理48 h后,检测β-半乳糖苷酶活性(染色法)和端粒酶活性(TRAP-银染法)评价细胞衰老状态;使用荧光染料H2DCF检测细胞内氧自由基生成.结果 Ox-LDL(100 μg·mL-1)处理48 h后,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数显著增加,而端粒酶活性显著降低.预先1 h给予不同浓度的DMB(1、3和10 μmol·L-1)并孵育48 h可显著抑制Ox-LDL诱导的内皮细胞β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数增加和端粒酶活性降低.Ox-LDL(100 μg·mL-1)孵育HUVECs 48 h,可明显增强细胞内活性氧族(ROS)水平,其效果能被预处理DMB所逆转.结论 DMB抑制Ox-LDL诱导的内皮细胞衰老,其作用可能与抑制氧化应激有关.
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一测多评法测定鱼胆草中4种活性成分
目的:建立测定鱼胆草中獐牙菜苦苷、去甲基雏菊叶龙胆(口山)酮苷、去甲基雏菊叶龙胆酮和龙胆(口山)酮酚含量的一测多评法,探讨一测多评法用于鱼胆草质量控制的可行性.方法:采用高效液相色谱法,以獐牙菜苦苷为内参物,分别建立獐牙菜苦苷与去甲基雏菊叶龙胆(口山)酮苷、去甲基雏菊叶龙胆酮和龙胆(口山)酮酚的相对校正因子,计算各成分的含量,实现一测多评;同时利用外标法和一测多评法测定4种化学成分的含量,并比较二者结果的差异.结果:各相对校正因子重复性良好,一测多评法的计算结果与外标法测得结果无显著差异.结论:一测多评法可用于鱼胆草中4种化学成分的定量分析,为进一步完善鱼胆草的质量标准提供参考.
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川东獐牙菜不同部位去甲基雏菊叶龙胆酮的含量测定
目的:建立以HPLC法测定川东獐牙菜不同部位去甲基雏菊叶龙胆酮含量的方法.方法:色谱柱为Hypersil C18(150mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.5%磷酸溶液(56∶44),流速为1.0mL·min-1,检测波长为254nm,柱温为室温.结果:去甲基雏菊叶龙胆酮进样量的线性范围为0.52～2.60 μg(r=0.999 4);平均加样回收率为99.77%,RSD=0.95%.结论:该方法简便、快速、重现性好,可用于川东獐牙菜中去甲基雏菊叶龙胆酮的含量测定.
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高效液相色谱法测定川东獐牙菜中多种成分的含量
目的:建立测定川东獐牙菜中雏菊叶龙胆苷、苦龙胆酯苷、去甲基雏菊叶龙胆酮和雏菊叶龙胆酮含量的高效液相色谱方法.方法:HYPERSIL BDS C18(4.6 mm×200 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-磷酸二氢钠(0.03 mol·L-1,pH=3.0),梯度洗脱(CH3CN%:0 min 10%,15 min 20%,30 min 35%,50 min 55%),流速为1.0 mL·min-1,检测波长为250 nm,柱温为25℃.结果:雏菊叶龙胆苷,苦龙胆酯苷,去甲基雏菊叶龙胆酮和雏菊叶龙胆酮分别在0.0403-0.3024μg,0.0604-0.4527μg,0.1320-0.9900 μg,0.1610-1.2072 μg范围内线性良好,相关系数r分别为0.9999,0.9999,0.9999,0.9999,其平均回收率均在98%-103%范围内,RSD均小于1%(n=5).结论:本方法操作简便,分离效果好,灵敏度高,重现性好,为全面控制川东獐牙菜质量提供一个可靠的方法.
