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半夏叶片总RNA四种提取方法及效果的比较
目的 针对三叶半夏成熟叶片化学成分复杂,富含多糖、酚类及其他多种化学物质的特点,选择优化一种简便、经济、高效的半夏成熟叶片高质量总RNA提取方法.方法 用4种不同的RNA抽提方法如异硫氰酸胍法、皂土法、CTAB-LiCl法和改进的SDS/酚法提取总RNA,通过电泳、紫外分光光度计检测以及RT-PCR验证等对提取结果进行分析比较.结果 4种方法均能从半夏成熟叶片中提取到总RNA.其中皂土法的提取过程只需3～4h,是其他3种提取方法所用时间的一半.提取1g叶片的成本只有其他3种方法的1/13～1/14.此法提取的总RNA 18S、28S带型清晰无弥散,完整性好,无严重的蛋白质和其他杂质污染,A260/A280为1.8～2.0,A260/A230大于2.0,且总RNA的产率高,为365.744 μg/g鲜重,提取的总RNA适用于RT-PCR试验.结论 皂土法提取的RNA完全适用于DDRT-PCR、Northern blotting、cDNA文库构建等分子生物学研究,是一种快速、经济,适于抽提半夏总RNA的好方法.
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大黄总RNA提取方法的研究
目的 建立大黄根中总RNA提取的方法,为后续的分子生物学研究打下基础.方法 以新鲜的大黄根为材料,分别采用Trizol法、常规CTAB-LiCl法、改良CTAB-LiCl法、通用型试剂盒法提取总RNA,利用琼脂糖凝胶电泳、微量紫外分光光度计和实时荧光定量PCR检测总RNA的纯度、完整性和产量.结果 除CTAB-LiCl法外,Trizol法和通用型试剂盒法均不能从大黄根中提取出总RNA.同时,常规CTAB-LiCl法不稳定,所提总RNA有一定程度的降解.采用改良CTAB-LiCl法所提取的总RNA量大,纯度、完整性及质量均较好.结论 改良CTAB-LiCl法对大黄等富含多酚、多糖类药材的总RNA提取具有一定的借鉴意义.
关键词： 大黄 根 总RNA CTAB-LiCl法
