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丝状真菌Pythium sp.GY1938菌株蛋白图谱染色方法的比较及优化
目的 探索制备灭蚊丝状真菌Pythium sp.GY1938菌株菌丝体可溶性蛋白图谱的佳染色方案.方法 采用不同的破壁方法制备Pythium sp.GY1938菌丝体可溶性蛋白,并通过SDS-PAGE进行蛋白质电泳分离,进一步采用考马斯亮蓝R-250染色法、Vorum银染法、EMBL银染法、Blum银染法4种染色方案分别进行凝胶染色,对不同染色方案的染色效果进行分析和比较.结果 对于Pythium sp.GY1938菌丝体可溶性蛋白样品中的中、高分子质量蛋白≥44 ku),考马斯亮蓝R-250的染色效果较好,且简单、快捷;对于低分子质量(<44 ku)的可溶性蛋白,Vorum银染法染色效果较好;Blum银染法和EMBL银染法的染色效果均不理想.结论 考马斯亮蓝R-250染色法和Vorum银染法均可应用于Pythium sp.GY1938菌丝体可溶性蛋白图谱的制备,前者适合对中、高分子质量蛋白染色,后者适合对低分子质量蛋白染色.
关键词： 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 考马斯亮蓝染色 银染 -
热打击对人骨骼肌细胞通透性、细胞骨架及细胞周期的影响
目的 研究热打击对培养人骨骼肌细胞(HSKMC)通透性、细胞骨架及细胞周期影响.方法 流式细胞仪钙离子内流检测热打击对HSKMC细胞膜通透性的影响,考马斯亮蓝R-250染色法检测热打击对HSKMC细胞骨架影响,流式细胞仪检测热打击对HSKMC细胞周期改变.结果 给予培养人HSKMC细胞不同温度梯度热打击1h后,43℃热打击组钙离子流式检测的中位数为91.63,37℃对照组中位数为22.98.同对照组相比,随着热打击程度加强,显微镜高倍镜下可见骨骼肌细胞骨架逐渐出现变粗、变短、出现明显的应力纤维.骨骼肌细胞在热打击情况下,各组G0/G1期DNA含量在44.13～62.98之间,与正常对照组对比,当细胞离开热打击环境后培养18 h前G0/G1期DNA含量明显高于对照组,培养第18小时恢复才同对照组基本相同.结论 热打击的情况下造成细胞钙离子内流效应,导致细胞内钙超载.可改变HSKMC骨架结构,使骨架失去正常的网状有序排列结构,间隙增大.细胞周期出现阻滞,细胞被阻滞在G0/G1期.
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双向电泳两种凝胶染色方法的比较
目的 比较肾脏蛋白质双向电泳凝胶银染色法与考马斯亮蓝G-250染色方法的染色效果.方法 利用蛋白质固相pH梯度双向电泳技术分离SD大鼠肾脏组织蛋白,应用银染色和考马斯亮蓝G-250染色两种染色方法,及ImageMaster 2D 5.0凝胶分析软件对凝胶进行染色分析.结果 银染后的可见蛋白点比考马斯亮蓝染色法多,银染色法与考马斯亮蓝染色法平均匹配率为49.42%.结论 银染法比考马斯亮蓝染色法的灵敏度高.
