首页 > 文献资料
-
半巢式荧光定量PCR快速检测登革Ⅰ型病毒成熟microRNA方法的建立
目的 建立外周血中登革病毒微小RNA检测方法,探讨其作为登革热病毒感染生物标记物的可行性. 方法 设计并筛选半巢式实时荧光定量PCR检测登革病毒miRNA引物,验证方法的灵敏度、特异性和重复性. 结果 设计的登革病毒茎环引物和扩增引物可区分健康人和登革热I型感染者;重复试验确定Ct≤35为登革病毒感染阳性,Ct>35为阴性,同一样品内相对标准偏差(RSD)为0.05%,样品间的相对标准偏差(RSD)为0.15%,总体样品的相对标准偏差(RSD)为5%;该方法检测miRNA的灵敏度为1×10-7tmol/L,检测1~10-4μmol/L内的miRNA呈良好的线性关系.该方法也显示了较好的特异性. 结论 成功建立了半巢式SYBR Green工荧光定量qRT-PCR检测工型DENV的miRNA方法.外周血中成熟的miRNA可以作为一种潜在的DENV感染生物标志物.
-
半巢式PCR技术检测牙菌斑唾液及胃黏膜中幽门螺杆菌
本文通过半巢式PCR对82例慢性胃炎和十二指肠溃疡患者的牙菌斑、唾液及胃黏膜中的幽门螺杆菌(Hp)进行了检测.82例患者中活动期十二指肠溃疡患者24例,慢性浅表性胃炎27例,慢性萎缩性胃炎31例,其中男性42例,女性40例,平均年龄42.3岁.
-
聚合酶链反应直接测序法检测细胞色素b5还原酶基因突变
在DNA突变检测方法中,DNA测序能精确判断突变部位和性质,是具决定性的一步.聚合酶链反应(PCR)产物经直接测序分析而不预先克隆到测序载体上,使序列分析的效率极大提高.我们从遗传性高铁血红蛋白血症患者外周血白细胞提取总RNA,经逆转录(RT)合成cDNA,用半巢式PCR方法扩增其NADH-细胞色素b5还原酶编码基因,并进行了PCR产物直接序列分析,取得满意的结果.证明逆转录PCR产物直接测序法是检测基因错义突变的迅速有效的方法.
-
分子生物学技术在检验医学中的应用
20世纪80年代中期分子生物学技术问世.这种以核酸生化为基础的新技术自发现以来,已逐渐成为医学领域不可或缺的有价值的诊疗手段之一[1,2],作为检验医学的新方法,已广泛应用于检验学科的各领域之中.分子生物学的核心技术是聚合酶链反应(PCR),在十几年的应用中PCR技术有了长足的发展,依托该技术衍生出的多种反应模式,如巢式和半巢式PCR、锚定PCR、恒温PCR等.
-
半巢式MSP在急性白血病患者p15基因甲基化检测中的应用
传统的观点认为,基因的缺失和突变是基因失活的主要方式,近研究显示,基因异常甲基化所导致的基因沉默亦是基因失活的方式之一.在多种恶性血液病中,p15基因发生异常的主要途径是基因异常甲基化和缺失.目前国内文献上p15基因甲基化的检测方法主要集中在甲基化敏感限制性酶切和Herman等[1]总结的甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法.我们通过优化MSP方法,设计了p15基因的半巢式-MSP(Hn-MSP)引物对85例急性白血病(AL)患者进行了p15甲基化状态的检测.
-
外套细胞淋巴瘤bcl-1基因重排的分析
外套细胞淋巴瘤(Mantle cell lymphoma, MCL)的诊断目前主要依靠其形态特征,但易与其他淋巴瘤相混淆.因此,寻找一种敏感而特异的分子标志将有助于对该病的明确诊断.染色体t(11;14)主要见于MCL,其分子对应物是bcl-1基因重排,尽管bcl-1的断裂点分散于11q13区内,但其中一半以上的断裂点集中在一个1?kb大小、被称为主要易位簇(major translocation cluster, MTC)的区域内[1].在MTC内,断裂点又发生在相对更小的区域内,正是断裂点相对集中的特点,使得PCR技术适用于这种易位的检测.我们研究的目的在于设计一种特异和敏感的半巢式PCR方法来检测MCL中的bcl-1基因重排,并检查该方法在检测石蜡标本时与新鲜冰冻组织结果的一致性.
-
不同类型造血干细胞移植后巨细胞病毒感染的监测
目的观察在不同类型造血干细胞移植中巨细胞病毒感染状况.方法应用半巢式PCR技术定期检测了2001-03~2003-07苏州大学附属第一医院住院病人55例移植病人外周血标本,比较不同类型移植CMV-DNA阳性率的差别.结果在检测的462份标本中,有285份为阳性,33/55(60%)患者CMV-DNA阳性,非清髓性造血干细胞移植(NST)的阳性检出率为15/17(88.2%),亲缘间外周血造血干细胞移植(PBSCT)的阳性检出率为3/7(42.9%),非亲缘性骨髓移植(UR-BMT)的阳性检出率为7/11(63.6%),亲缘性骨髓移植(R-BMT)的阳性检出率为8/20(40.0%).NST与PBSCT、R-BMT的巨细胞病毒感染率差别显著(χ2=5.44,P<0.05;χ2=9.14,P<0.05),NST与UR-BMT(χ2=2.39,P>0.05)间的差别无统计学意义.结论巨细胞病毒感染在不同的造血干细胞移植方式可能存在差异.
-
半巢式PCR方法检测外套细胞淋巴瘤bcl-1/IgH基因重排
目的探讨敏感、特异而又快捷的bcl-1/IgH基因重排检测方法.方法对28例经临床确诊的外套细胞淋巴瘤的新鲜冰冻组织,分别采用半巢式PCR和一步法PCR检测bcl-1/IgH基因重排.结果通过半巢式PCR测得有bcl-IgH基因重排者计17/28例,而采用一步法PCR仅9例有此基因重排,两者检出率差异有显著性意义(x2=4.59,P<0.05).结论半巢式PCR方法检测外套细胞淋巴瘤中bcl-1/IgH基因重排比一步法PCR敏感而特异.
-
用半巢式PCR检测无创性标本诊断卡氏肺孢子虫肺炎的实验研究
目的无创性诊断卡氏肺孢子虫肺炎.方法采用一对半引物进行半巢式DHFR-PCR检测实验大鼠无创性标本支气管液、血清及活检标本肺及肝脏组织中的卡氏肺孢子虫DNA.结果从59只经病理学检查证实的卡氏肺孢子虫肺炎大鼠中采集到的上述4种标本,卡氏肺孢子虫DNA的半巢式DHFR-PCR检出率分别为72.7%(32/44),37.3%(22/59),94.9%(56/59)和36.4%(8/22),而DHFR-PCR的检出率则仅为25%,13.6%,71.2%和9.1%.12只轻度感染的PCP大鼠的无创性标本中卡氏肺孢子虫DNA的检出率由0%提高至41.7%.正常鼠标本及各种病原体对照的半巢式DHFR-PCR均为阴性.结论用半巢式DHFR-PCR无创性地诊断大鼠卡氏肺孢子虫肺炎具有敏感、特异、省时、省力等优点;本文在血和肝脏中检出卡氏肺孢子虫DNA,提示在卡氏肺孢子虫肺炎大鼠模型中存在虫血症和肺外卡氏肺孢子虫感染.
-
石蜡包埋组织显微切割后快速DNA提取技术
肿瘤的分子病理和分子遗传学研究常受到肿瘤组织成分多样性和取材准确性的影响,如瘤组织间质成分以及出血、坏死物等.这些非肿瘤组织的细胞基因组DNA将影响肿瘤的分子生物学研究结果.本文以半巢式PGR技术扩增胰腺癌组织K-ras基因为例,探讨一种不经过复杂的酚-氯仿抽提,而利用组织细胞显微切割技术快速、准确提取石蜡包埋组织DNA的方法.
-
人乳头瘤状病毒16型与新疆哈萨克族食管鳞癌的相关性研究
目的:探讨新疆哈萨克族食管鳞癌患者中人乳头瘤状病毒(HPV)16型的检出率.方法:采用半巢式PCR技术检测150例新疆哈萨克族食管癌石蜡包埋组织、加例正常食管粘膜活检组织中HPV16型,分析其与新疆哈萨克族食管癌发生的相关性.结果:在新疆哈萨克族食管癌组织中,HPV16型检出率为38.7%(58/150),与对照组10%(4/40)相比,差异有统计学意义(χ2=11.805,P<0.05).结论:HPvl6型感染与新疆哈萨克族食管癌的发生存在一定的相关性.