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细胞周期素D1 G870A基因多态性与鼻咽癌的相关性研究
目的 研究细胞周期素D1(cyclin DI gene,CCND1)G870A单核苷酸多态性与鼻咽癌患病风险性的关系,并探讨各基因型与鼻咽癌预后的相关性.方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性及测序方法 对241例云南籍汉族鼻咽癌患者和272例云南籍汉族健康对照进行基因分型,计算各基因型与鼻咽癌发病风险以及基因.环境交互作用.结果 CCND1 870A等位基因增加鼻咽癌的发病风险,与GG基因型相比,携带AA、AG基因型个体罹患鼻咽癌比值比(OR)分别为4.79(95%可信限CI为2.77～8.28,P<0.001)和1.72(95%CI为1.10～2.68,P=0.017);至少携带一个870A等位基因的个体罹患鼻咽癌的OR值为2.40(95%C/为1.59～3.63,P<0.001).吸烟与CCND1G870A多态性存在相乘交互作用.分别携带AA、AG、GG基因型患者5年生存率各为56.2%、78.5%、81.4%,AA与GG基因型患者生存率比较P=0.003,AA与AG基因型比较P=0.012,差异均有统计学意义;AG与GG基因型比较P=0.132,差异没有统计学意义.多因素Cox回归模型显示基因型并非影响鼻咽癌预后的独立因素(P=0.501).结论 CCND1 G870A多态性与云南汉族鼻咽癌遗传易感相关,870A等位基因与其预后亦相关.
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舌鳞状细胞癌顺铂耐药细胞系细胞周期蛋白D1RNA干扰的体外研究
目的 用人工合成的耐药相关基因细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的小分子干扰RNA(siRNA)处理人舌鳞癌顺铂耐药细胞系(Tca8113-CDDP), 探讨对靶基因转录调控的作用效果以及剂量和时间效应关系,为耐药性逆转提供实验依据.方法 CY3荧光素标记阳性对照基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)siRNA,分别于转染后4、24、48、72 h在激光共聚焦显微镜下观察瞬时转染率, 优化转染条件.用SYBR绿色荧光染料法、实时定量PCR技术分析目的基因mRNA的表达情况,同时采用蛋白印迹(Western blot)检测目的基因蛋白水平的表达.四甲基偶氮唑盐法检测cyclin D1 siRNA处理后细胞对顺铂敏感性的影响.结果 优化转染条件后,Tca8113-CDDP细胞中CY3 的GAPDH siRNA转染率达90%以上.转染cyclin D1 siRNA 后24、48 h mRNA表达的抑制率为81.6%、80.7%,72 h为明显,为94.3%.在低于100 nmol/L浓度下,RNA干扰抑制与剂量大小有关;当剂量进一步加大时,抑制效应则维持在"平台期".转染24、48和72 h 后,cyclin D1蛋白的表达也明显下降. siRNA干扰组和对照组细胞在顺铂作用后细胞生长抑制率分别为58.4%、34.8%.结论 化学合成的cyclin D1 siRNA在体外实验中,对Tca8113-CDDP细胞中目的基因的沉默提高了细胞对顺铂敏感性,并呈现剂量和时间依赖效应.
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多层螺旋CT灌注成像评价周围型肺癌的血管生成及周期蛋白D1基因表达
目的 探讨多层螺旋CT灌注成像与周围型肺癌血管生成及细胞周期蛋白D1(cyclinDl)表达的相关性.方法 73例周围型肺癌行16层螺旋CT灌注成像,分析周围型肺癌的时间密度曲线(TDC)、灌注参数图像和各灌注参数[血流量(BF)、血容量(BV)、平均通过时间(MTT)、表面通透性(PS)、强化峰值(PH)、肿块-动脉强化峰值比(PHpm/PHa)].利用免疫组织化学测定微血管密度(MVD)并标定cyclinDl,评价周围型肺癌各CT灌注参数与MVD计数及cyclinD1表达的相关性.统计学方法采用单因素方差分析及Pearson相关分析方法.结果 3组周围型肺癌(腺癌、鳞癌、其他类型癌)的TDC曲线相似,都有明显的上升支,CT值明显增加[TDC曲线的峰值分别为(44.87±6.83)、(34.91±8.05)、(40.66±5.87)HU],达峰值后变化较小,较平坦,有一个平台期;cyclinD1阳性表达44例,周围型肺癌cyclinD1阳性表达患者的MVD值明显高于阴性表达者[分别为(33.88±14.81)、(23.17±11.66)条/高倍视野,P<0.01];周围型肺癌cyclinD1阳性表达者的PH、PHpm/PHa、BF、BV、PS值[分别为(60.56±6.27)HU、(20.71±2.54)、(245.54±69.73)ml·100 mg-1·min-1、(12.17±3.50)ml/100 mg、(20.11±7.34)ml·100 mg-1·min-1]明显高于阴性表达者[(56.39±6.87)HU、(19.02±3.27)、(194.23±80.89)ml·100 mg-1·min-1、(9.67±3.00)ml/100 mg、(14.10±7.45)ml·100 mg-1·min-1],差异有统计学意义(P值均<0.05);3组周围型肺癌中,cyclinD1阳性表达的PH、PHpm/PHa、BF、BV、PS值与MVD均呈正相关,其中,BV、PS、BF值的r值分别为0.409、0.517、0.503,呈显著性相关(P值均<0.01);PH、PHpm/PHa的r值分别为0.319、0.324,呈低度相关(P值均<0.05).cyclinD1阴性表达者PH、PHpm/PHa、BF、BV、PS值与MVD均无相关性.结论 多层螺旋CT灌注成像与肿瘤血管生成具有较好的相关性,能够反映肿瘤的血管生成及cyclinD1表达,提供了一种定量评价周围型肺癌血流模式的非创伤性方法,有利于周围型肺癌的诊断.
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半巢式PCR方法检测外套细胞淋巴瘤bcl-1/IgH基因重排
目的探讨敏感、特异而又快捷的bcl-1/IgH基因重排检测方法.方法对28例经临床确诊的外套细胞淋巴瘤的新鲜冰冻组织,分别采用半巢式PCR和一步法PCR检测bcl-1/IgH基因重排.结果通过半巢式PCR测得有bcl-IgH基因重排者计17/28例,而采用一步法PCR仅9例有此基因重排,两者检出率差异有显著性意义(x2=4.59,P＜0.05).结论半巢式PCR方法检测外套细胞淋巴瘤中bcl-1/IgH基因重排比一步法PCR敏感而特异.
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心肌肥大大鼠心肌细胞凋亡与Bcl-2、Bax蛋白表达的变化
目的:探讨心肌肥大大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的变化.方法:腹腔注射异丙肾上腺素,建立大鼠心肌肥大模型.采用原位末端缺口标记(TUNEL)法观察心肌细胞凋亡;应用Western blotting和免疫组化方法检测Bcl-2和Bax的蛋白表达,并使用HPIAS10009图像分析仪进行定量分析.结果:与对照组比较,心肌肥大组心肌细胞凋亡显著增加(P＜0.01),Bax表达增加(P＜0.01),而Bcl-2表达减少(P＜0.01),Bcl-2/Bax比值下降(P＜0.01).结论:Bcl-2和Bax基因参与了心肌肥大心肌细胞凋亡的调控.
