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姜黄素降低Ⅲ型CP/CPPS模型鼠炎性反应因子的表达
目的研究姜黄素对Ⅲ型慢性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征(CP/CPPS)模型鼠炎性反应因子表达的影响.方法将大鼠随机分为假手术组(sham)、CP/CPPS模型组(model)、姜黄素50及100 mg治疗组(cur-50 mg,cur-100 mg)和p38抑制剂组(SB203580),连续腹腔给药12 d后,real-time PCR检测前列腺组织中TNF-α、p38、COX-2的mRNA表达;免疫组化检测TNF-α,COX-2的蛋白表达;Western blot检测p38、p-p38和NF-κB蛋白的表达.结果CP/CPPS模型组的NF-κB、p-p38、TNF-α和COX-2蛋白,TNF-α、COX-2和p38的mRNA表达较假手术组升高(P<0.01);cur-100 mg组和SB203580组可显著缓解模型组的变化(P<0.01);cur-100 mg组中的COX-2蛋白和mRNA均比SB203580组明显下降(P<0.05);相较模型组,姜黄素2个组、SB203580组p-p38与NF-κB的表达呈正相关(P<0.01).结论姜黄素能够降低CP/CPPS模型鼠NF-κB、TNF-α和COX-2及p-p38等炎性反应因子的表达.
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抑制BCAR1降低肺癌细胞系A549 p-P38表达
目的 探讨抑制乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白(BCAR1)表达对肺癌细胞系A549 P38和p-P38表达的影响.方法 培养正常A549细胞(对照组)、慢病毒BCAR1基因干扰A549细胞(干扰组)和慢病毒阴性对照A549细胞(阴性对照组),用Western blot检测细胞P38和p-P38表达水平,用克隆形成实验、流式细胞计量术、Transwell实验和划痕实验检测细胞的细胞克隆、细胞周期、细胞侵袭和迁移能力.结果 干扰组p-P38表达显著低于其他两组(P<0.05);干扰组细胞G1期比例显著高于其他两组(P<0.05);干扰组细胞增殖、侵袭和迁移能力低于其他两组(P<0.05).结论 抑制BCAR1表达可下调p-P38表达,减弱肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭能力.
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人乳腺癌中p-P38信号分子与nPA表达增强
目的 研究磷酸化P38(p-P38)信号分子和uPA在乳腺癌组织及细胞中表达及意义.方法 免疫组化检测60例乳腺癌组织及其邻近正常乳腺组织中p-P38和uPA蛋白,Western blot检测人乳腺癌细胞中p-P38及uPA蛋白表达及用P38 MAPK特异性抑制剂SB203580阻断P38 MAPK信号通路后uPA蛋白水平的变化.结果 免疫组化显示,p-P38、uPA蛋白在乳腺癌组织中表达阳性率分别为56.7%和60.0%,显著高于正常乳腺组织中的表达(P<0.05),并与乳腺癌的TNM分期及淋巴结转移相关(P<0.05),而与患者年龄、肿瘤大小无明显相关性,且两者表达存在正相关(r=0.316,P<0.05).乳腺癌高转移性的MDA-MB-231细胞系p-P38及uPA蛋白表达水平高于低转移的MCF-7细胞系.用SB203580阻断P38MAPK通路可降低uPA蛋白表达.结论 p-P38和uPA表达在乳腺癌恶性进展中起重要作用,可为乳腺癌转移机制研究提供有效线索.
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花生四烯酸在诱导人肾小球足细胞凋亡中的作用
目的 研究花生四烯酸(AA)在诱导人肾小球足细胞凋亡中的作用及可能机制.方法 以体外培养的人肾小球足细胞为研究对象,使用无血清培养基同步化12h.分别以不同浓度(10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L)的AA刺激培养的人肾小球足细胞2h和以相同浓度(10-s mol/L)的AA在不同时间(0.5、1.0、2.0h)刺激人肾小球足细胞.流式细胞术及Hoechst-33342染色检测人肾小球足细胞凋亡,Western-blot检测p-p38及p53蛋白变化情况.结果 不同浓度的AA刺激人肾小球足细胞2h,与浓度0 mol/L(对照)刺激比较,浓度10-8、10-7 mol/L时人肾小球足细胞凋亡率和p53蛋白差异无统计学意义(P＞0.05);浓度10-6、10-5 mol/L时,人肾小球足细胞凋亡率[流式细胞术检测:(11.57±1.10)％、(12.67±0.92)％比(4.80±0.17)％]、p-p38及p53蛋白水平明显增加(均P＜0.05).相同浓度(10-5 mol/L)的AA在不同时间刺激人肾小球足细胞,与刺激0h(对照)比较,刺激0.5h人肾小球足细胞凋亡率和p53差异无统计学意义(P＞0.05);刺激1.0、2.0h时,人肾小球足细胞凋亡率[流式细胞术检测:(12.60±1.15)％、(14.83±1.39)％比(4.80±0.97)％]、p-p38及p53蛋白水平明显增加(均P＜0.05).结论 AA浓度为10-6和10-5 mol/L时在体外能诱导培养的人肾小球足细胞凋亡,且与p-p38及p53蛋白水平相关.
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叶黄素对人结肠癌HT29细胞增殖的抑制及其机制
目的:研究叶黄素对结肠癌HT29细胞的增殖抑制作用及可能的机制.方法:用不同浓度的叶黄素(20、40、80、160 mg/L)和空白对照组(0 mg/L)干预处理培养的HT29细胞24、48、72 h,采用SRB法检测其对该细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期;Hoechst33342/PI荧光染色法检测细胞凋亡;Western blot检测磷酸化ERK(phosphorylation of ERK,p-ERK)、磷酸化p38(phosphorylation of p38,p-p38)蛋白表达水平的变化.结果:叶黄素能抑制HT29细胞增殖,且有明显的剂量和时间依赖性.流式细胞仪检测细胞周期结果显示,叶黄素(80 mg/L)干预处理HT29细胞48 h后,G0/G1期细胞由58.67％增加至63.23％,且随药物浓度增加,G0/G1期细胞显著增加,当叶黄素浓度为160mg/L时,G0/G1期细胞增加至70.81％,表明叶黄素可将HT29细胞阻滞在G0/G1期;Hoechst33342/PI荧光染色法检测细胞凋亡结果显示,叶黄素可诱导HT29细胞凋亡;Western blot检测结果显示叶黄素可下调p-ERK、上调p-p38蛋白的表达,有浓度依赖性(P＜0.01).结论:叶黄素可显著抑制HT29细胞的增殖并诱导其凋亡,使细胞周期阻滞在G0/G1期;下调p-ERK蛋白、上调p-p38蛋白的表达可能是其诱导细胞凋亡的重要机制.
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尼古丁对口腔癌前病变细胞中Prx1表达及MAPK信号通路活化的影响
目的 通过检测尼古丁对口腔癌前变细胞株DOK细胞中抗氧化蛋白Prx1表达及MAPK三种激酶JNK、ERK、p38的磷酸化水平的影响,探讨尼古丁对口腔癌前病变细胞凋亡的作用机制,以期为口腔癌前病变的防治提供科学依据及新的生物靶点.方法 1μmol/L尼古丁长期处理口腔癌前病变细胞DOK 7天,采用荧光定量PCR和Western Blot的方法,检测尼古丁组与对照组中Prx1 mRNA与蛋白的表达及磷酸化JNK、ERK、p38蛋白(p-JNK、p-ERK、p-p38)的表达情况.结果 倒置显微镜下观察,1μmol/L尼古丁长期处理口腔癌前变细胞株DOK细胞7天后,细胞形态未见明显变化.与对照组相比,尼古丁组DOK细胞中Prx1 mRNA及蛋白表达水平均显著增高(P=0.011,P=0.044).p-p38(P=0.030)和p-JNK(P =0.017)蛋白表达与对照组相比降低,p-ERK的蛋白表达增高(P=0.035),差异有统计学意义.结论 Prx1、JNK、ERK及p38可能在烟草相关口腔癌前病变细胞凋亡中发挥重要作用.
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子宫内膜癌中P-P38和尿激酶型纤溶酶原激活剂的表达及临床意义
目的 探讨子宫内膜癌组织中P-P38和尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)表达情况及临床意义.方法 采用免疫组织化学S-P法检测60例子宫内膜癌、32例正常子宫内膜组织中P-P38和UPA的表达情况.结果 子宫内膜癌组织中P-P38和uPA分别表达定位于细胞浆和细胞核,其表达明显高于癌旁正常组织(P均＜0.05).二者的表达与肌层浸润程度、淋巴结转移、临床分期及病理分期有关;二者之间比较表达呈正相关.结论 P-P38和uPA在子宫内膜癌组织中呈高表达,且与子宫内膜癌的发生、发展和转移密切相关.
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遗传性癫痫大鼠小脑中p-CaMKⅡ、p-ERK和p-p38蛋白表达的异常变化
目的 研究遗传性癫痫大鼠(Tremor,TRM)与正常Wistar大鼠小脑中p-CaMKⅡ、p-ERK以及p-p38蛋白含量的变化,进一步阐明癫痫发病机制.方法 应用PCR技术,鉴定基因突变鼠(TRM),确定癫痫阳性大鼠.以Wistar大鼠作为正常对照模型,通过Western blot技术分别测定TRM及Wistar大鼠小脑内p-CaMKⅡ、p-ERK以及p-p38的蛋白表达量.结果 与正常大鼠相比,TRM大鼠小脑p-CaMKⅡ蛋白和p-p38蛋白表达量升高,而p-ERK蛋白表达量没有明显变化.结论 TRM大鼠小脑内p-CaMKⅡ和p-p38蛋白表达上调,表明CaMKⅡ与MAPK信号通路可能参与癫痫的发病机制.
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P-P38和NF-κB蛋白在子宫内膜癌中的表达及临床意义
[目的]检测子宫内膜癌组织P-P38蛋白和NF-kB蛋白表达并探讨其意义.[方法]采用组织芯片技术和微波EliVisionTM免疫组织化学法检测60例子宫内膜癌、32例正常子宫内膜组织中P-P38蛋白和NF-kB蛋白的表达,并分析其表达与临床病理指标的关系.[结果]子宫内膜癌组织中P-P38和NF-kB分别表达定位于细胞核和细胞浆,其表达明显高于正常对照组织(P＜0.05).两者的表达与肌层浸润程度、淋巴结转移及临床分期有关(P＜0.05);两者之间表达呈正相关(r=0.561,P＜0.05).[结论]P-P38和NF-kB在子宫内膜癌呈高表达,且与子宫内膜癌的进展和转移相关.
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Th17通过NF-κB和P38调控急性脑梗死 大鼠炎性损伤的实验研究
目的 探讨Th17对急性脑梗死大鼠炎症损伤的调控作用.方法 手术制备急性脑梗死大鼠(MCAO 24h,MCAO 72h)模型,通过评价各组小鼠神经行为学情况进行模型鉴定,符合急性脑梗死大鼠模型者继续进行后续实验.通过流式细胞术检测外周血Th17细胞数量;Western blot检测NF-κB P65和p-P38的蛋白表达.结果 与假手术组(Sham)相比,MCAO 24 h和MCAO 72 h组外周血中的Th17细胞数量显著增加,且呈时间依赖性[(0.73±0.17),(10.83±0.69),(14.47±1.30)];NF-κB P65和p-P38蛋白表达均明显增加,但与作用时间没有明显的相关性[(1±0),(1.74±0.16),(1.93±0.2)][(1±0),(1.29±0.12),(1.32±0.05)].结论 Th17是参与脑梗死发生后脑炎症反应的重要细胞.其作用机制可能与诱导NF-κB P65和p-P38的活化,而引起下游多种免疫细胞的成熟和活化,通过促炎性因子等引起组织炎性细胞浸润并导致组织破坏.因此Th17细胞及其效应分子也许可以为急性脑梗死后继发性脑水肿和脑损伤的预防/治疗提供新的方法.
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子宫内膜癌中E2F-1和p-p38的表达及相关性分析
目的:检测子宫内膜癌组织中E2F-1和p-p38表达情况并探讨其意义.方法:采用免疫组织化学S-P法检测60例子宫内膜癌、32例正常子宫内膜组织中两者的表达.结果:子宫内膜癌组织中E2F-1和p-p38表达定位于细胞核,其阳性表达率分别为58.33％(35/60)和55.00％(33/60)明显高于正常子宫内膜组织,为0、0(P＜0.0S).两者的表达与肌层浸润程度、淋巴结转移、临床分期及病理分期有关(P＜0.05)；在子宫内膜癌组织中E2F-1和p-p38两者之间比较表达呈正相关(P＜0.05).结论:E2F-1和p-p38在子宫内膜癌呈高表达,且与子宫内膜癌的发生、发展和转移密切相关.
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Hsp70对低氧大鼠海马DG区神经细胞p53、p-p38表达的研究
目的:探讨热休克蛋白70(HSP70)高表达对低氧大鼠海马DG区神经细胞p53、p-p38表达的影响.方法:将大鼠海马DG区神经细胞在41℃温浴1h诱导HSP70高表达,然后低氧培养,Western-blot检测细胞HSP70、p53、p-p38的表达.结果:温浴可以诱导HSP70高表达;HSP70高表达可抑制p53和p-p38表达.结论:HSP70保护低氧诱导的细胞凋亡可能与抑制p53和p-p38表达有关.
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p-p38和SIAH2在乳腺浸润性导管癌中表达的意义
目的：研究p-p38和SIAH2蛋白在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及与临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学方法检测80例乳腺浸润性导管癌组织标本中p-p38和SIAH2的表达与临床病理因素的关系并分析两者相关性；检测10例癌旁组织中p-p38和SIAH2的表达。结果乳腺浸润性导管癌组织中p-p38及SIAH2的阳性表达率分别为57.5%和60.0%， p-p38和SIAH2表达存在正相关（r=0.330，P＜0.05）。癌旁组织中两种蛋白仅有少量点状表达。p-p38蛋白表达与肿瘤临床分期和淋巴结转移密切相关，SIAH2蛋白表达与肿瘤的组织学分级、临床分期和淋巴结转移密切相关，两种蛋白表达与肿瘤大小、患者年龄无显著相关性。结论p-p38和SIAH2过表达在乳腺癌的发展及浸润转移中具有重要的作用。
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生物学因子p-p38、MMP-3、MMP-13对大鼠关节软骨的破坏作用
目的 检测大鼠骨性荚节炎(OA)中对软骨起破坏作用的细胞因子.方法 大鼠20只,以任一后腿膝关节作为实验组(OA),另一侧为手术对照组.OA组离断大鼠前交叉韧带及切除内外侧半月板前半部分建立大鼠骨性关节炎模型;对照组只切开关节囊,打开关节腔,缝合切口即可.饲养8周摄X线片后取关节软骨观察形态学的改变,免疫组化检测p-p38以及基质金属蛋白酶3(MMP-3)、基质金属蛋白酶13(MMP-13)的表达.结果 与对照组相比,OA组膝关节p-p38、MMP-3及MMP-13阳性细胞强表达,软骨被破坏,关节表面粗糙;对照组p-p38、MMP-3、MMP-13表达明显减少,软骨完整,关节表面光滑.结论 大鼠骨性关节炎软骨细胞中因生物学因子p-p38、MMP-3、MMP-13的过度表达与骨性关节炎软骨破坏有关.
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黄芩素对BCRP介导的人乳腺癌MCF-7/MX细胞多药耐药的逆转作用
目的 探讨黄芩素对乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)介导的人乳腺癌MCF-7/MX细胞多药耐药(multidrug resistance,MDR)的逆转作用及可能机制.方法 MTT法检测黄芩素对MCF-7/MX细胞的增殖抑制及耐药逆转作用;Western blot法检测黄芩素对MCF-7/MX细胞BCRP、p38 MAPK、p-p38 MAPK、核因子NF-κB p65蛋白表达的影响.结果 MCF-7/MX细胞对米托蒽醌、顺铂和氟尿嘧啶的耐药倍数分别为70.45、6.68、21.47.2.5、5μmol·L-1的黄芩素可增强MCF-7/MX细胞对上述化疗药的敏感性,下调BCRP表达,降低NF-κB p65蛋白表达和p38蛋白的磷酸化水平.结论 黄芩素可有效逆转BCRP介导的MCF-7/MX细胞的MDR,此作用可能与抑制p38 MAPK信号通路和NF-κB信号通路有关.
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紫草素通过ROS/p38信号通路诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡
目的 探讨紫草素(shikonin)诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的机制.方法 以MTT法检测shikonin的细胞毒性;相差显微镜观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生及凋亡率;Western blot检测相关蛋白的表达.结果 Shikonin时间和剂量依赖性的抑制HeLa细胞的生长;35 μmol·L-1的shikonin 作用于细胞24 h后可使细胞皱缩、变圆,并出芽形成明显的凋亡小体,且其可时间依赖性的诱导procaspase-3的剪切.35 μmol·L-1的shikonin作用于细胞12 h和24 h均可以诱导细胞产生ROS.ROS清除剂NAC和p38抑制剂SB203580可以明显降低shikonin诱导的HeLa细胞的生长抑制和凋亡率;并且5 mmol·L-1 NAC可以上调由shikonin引起的procaspase-3的表达降低,下调由shikonin引起的p38蛋白的磷酸化.结论 Shikonin可以诱导HeLa细胞发生凋亡,ROS/p38信号通路参与了其凋亡的过程.
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亚低温对沙土鼠前脑缺血再灌注海马神经元凋亡及p38活性的影响
目的通过动态观察亚低温(33℃,4 h)对沙土鼠前脑缺血再灌注后不同时间点海马神经元凋亡细胞及磷酸化p38表达的影响,探讨亚低温脑保护的可能机制.方法采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断5 min前脑缺血再灌注损伤模型,随机分为假手术组,常温再灌注组,低温假手术组,低温再灌注组.每组根据再灌注的不同时间点(2 h、4 h、d 1、d3、d 5)又分为5个对应的亚组(n=6).在预定时间点行开阔法迷宫检查,TUNEL法检测海马CA1/3区的凋亡细胞,免疫组化检测p-p38在海马各区的动态变化.结果4 h亚低温可显著减少缺血沙土鼠d 1、d 3、d 5的探索活动及CA1/3区的凋亡细胞,明显抑制脑缺血后海马CA1区p-p38早期的表达(2 h、4 h).结论4 h亚低温治疗对沙土鼠5 min前脑缺血有明确的保护作用,抑制海马CA1区缺血再灌注早期p-p38的激活可能是其减少海马细胞凋亡、产生脑保护作用的机制之一.
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天麻素通过下调ERK1/2-p38信号通路保护谷氨酸损伤的PC12细胞
目的 研究天麻素(gastrodin,Gas)通过调控ERK1/2-p38信号通路保护谷氨酸损伤的PC12细胞.方法 建立谷氨酸损伤的PC12细胞模型;甲基噻唑基四唑比色法测定细胞活力;Hochest 33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态;罗丹明123染色流式细胞术检测细胞线粒体膜电位;Western blot法检测细胞内p38、ERK1/2、p-p38、p-ERK1/2蛋白表达.结果天麻素明显抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,在0.1~10 μmol/L剂量范围内呈一定的量效关系;天麻素升高谷氨酸损伤引起的细胞线粒体膜电位的降低,下调p-p38、p-ERK1/2蛋白的表达.结论 天麻素对谷氨酸损伤的PC12细胞具有保护作用,其机制可能与升高线粒体膜电位水平,下调p-p38、p-ERK1/2蛋白表达,抑制细胞凋亡有关.
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身痛逐瘀汤对腰椎退变模型大鼠纤维环细胞p38MAPK信号通路的影响
目的:观察身痛逐瘀汤对腰椎退变模型大鼠纤维环细胞p38MAPK信号通路的影响.方法:24只雄性SD大鼠按随机数字表法分为身痛逐瘀汤组、模型组、假手术组,每组8只.身痛逐瘀汤组、模型组采用纤维环穿刺法建立大鼠腰椎退变模型,造模1个月后行中药灌胃治疗,身痛逐瘀汤组予身痛逐瘀汤灌胃,模型组及假手术组予等量生理盐水灌胃,每日1次,连续4周.治疗结束后处死大鼠取出椎间盘,采用免疫组化法观察纤维环细胞p-p38、p38和NF-κB蛋白表达,Western Blot法测定p-p38、p38和NF-κB蛋白含量.结果:身痛逐瘀汤组p-p38、NF-κB蛋白表达较模型组明显减少(P＜0.05),模型组较假手术组明显增加(P＜0.01),假手术组p-p38、NF-κB蛋白少或无表达;3组间p38蛋白表达差异无统计学差异(P＞0.05).结论:身痛逐瘀汤可延缓椎间盘退变,其机制可能与下调p-p38和NF-κB蛋白表达,抑制p38MAPK信号通路激活有关.
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p-p38和VEGF在原发性肝癌中的表达及相关性研究
目的 研究磷酸化p38(p-p38)和血管内皮生长因子(VEGF)在原发性肝癌中的表达及与临床病理特征的关系.方法 采用免疫组织化学S-P法,检测53例原发性肝癌组织,30例非癌肝组织中的p-p38和VEGF表达情况并分析其相关件及临床病理特征.结果 p-p38和VEGF阳性表达率在原发性肝癌组织明显高于非癌肝组织,与患者年龄、性别、病理分型、肿块大径等临床病理特征参数没有相关性.但与肝癌的转移、癌栓、组织分化程度有相关性,p-p38和VEGF在肝癌中的表达呈正相关r=O.458(P=0.001,P<0.05).结论 p-p38和VEGF过表达在肝癌的发展及浸润转移中具有重要作用.
