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MHCⅡ类抗原的诱导性表达和同种异体软骨细胞移植的免疫排斥
本研究将不同年龄香猪的软骨细胞和可注射性材料复合物Pluronic混合在一起,以50×106/ml浓度接种到版纳猪的腹部皮下,在第1、2、4周取材作组织学检查,并进行软骨细胞表面标志的分析和测定淋巴细胞软骨细胞混合反应(MLChR)的强度.结果显示:猪的软骨细胞仅表达MHCI类分子,分别来自胎猪、幼猪和成年猪的软骨细胞刺激MLChR的能力无显著差别,均表现抗原性较弱.经IFN-γ诱导后,软骨细胞表达MHC Ⅱ类抗原,能明显地刺激淋巴细胞增殖.免疫病理学检测发现,在组织化的软骨中,第1周出现大量淋巴细胞浸润,第4周组织化软骨消失.上述结果提示,体内同种异体软骨细胞被迅速排异,可能与MHCⅡ类抗原诱导性表达有关.
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心肺联合移植术治疗艾森曼格综合征
目的:总结2例同种异体心肺移植成功的临床经验.方法:2003年12月及2004年4月分别完成2例心肺联合移植术,受体均为女性,年龄分别为41岁及43岁;病因均为先天性心脏病房间隔缺损并Eisenmenger综合征;术前肺动脉压均>130 mmHg,肺血管阻力>12 Wood U,心功能IV级.供体男性1例,女性1例,以 4℃ UW液1 000 mL及HTK液4 000 mL保存供体心肺.移植术后严格消毒隔离,按赛尼哌+环孢素A+霉酚酸酯+激素的方案进行抗排斥治疗,用第3代头孢菌素预防感染.结果:2例患者全部存活,1例术后延迟拔气管插管.1例术后存活至今并随访4年8个月,早期并发白细胞减少,无严重感染或排斥反应发生;另1例术后1年死于肺部真菌感染.结论:良好的吻合技术、完善的心肺保存及术后严格的预防感染、合理的抗排斥治疗是心肺联合移植成功的重要因素.
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同种异体硬脑膜移植在皮肤缺损的临床应用
皮肤缺损的传统治疗是自体皮肤移植,包括邮票植皮、带蒂皮瓣移植等,这些方法均可获得满意效果.但需在病人自体取皮,给病人增加了痛苦.为寻找一种既不增加病人痛苦,又能治愈其皮肤缺损的方法,我们在同种异体硬脑膜治疗消化道外瘘的基础上[1],尝试将其移植于皮肤缺损3例4处,均获得成功,现报道如下.
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骨膜瓣复合异体骨移植修复大段骨缺损
目的 探讨带血管薄层皮质骨-骨膜瓣嵌入开窗的异体骨修复大段骨缺损的效果.方法 将兔胫骨去抗原后制备异体骨标本,制作大段骨缺损动物模型.以带血管薄层皮质骨-骨膜瓣复合开窗的异体骨进行修复.将60只健康家兔随机分为3组:实验组、对照组及空白对照组.实验组以带血管薄层皮质骨-骨膜瓣嵌入开窗的异体骨进行修复;对照组以骨膜瓣直接包裹异体骨进行修复;空白对照组以异体骨直接进行修复.术后观察骨缺损大体标本及X线影像,对移植物及其周围软组织行组织学和免疫组织化学观察.结果 实验组骨缺损骨痂形成并改造塑形,新生血管长入骨缺损处,其血管化、新骨形成和骨单位成熟均较对照组早.结论 以带血管薄层皮质骨-骨膜瓣嵌入开窗的异体骨修复大段骨缺损的手术方法可缩短骨缺损修复的时间,优于以骨膜瓣直接包裹异体骨的方法.
关键词： 大段骨缺损 带血管薄层皮质骨-骨膜瓣 同种异体移植 -
造血干细胞移植在儿科疾病中应用指征
自 1939年 Osgood等 [1]发现再生障碍性贫血患者输注同胞骨髓可治愈疾病, Jacobson等 [2, 3]通过小鼠实验发现,屏蔽脾脏或输入同一品系小鼠骨髓液,可使经致死性照射的小鼠恢复正常造血功能,并证实骨髓液及脾结节中含有造血干细胞,而主要及次要组织相容性抗原( major and minor histocompatibitity complex, MHC,在人类,即人白细胞抗原: human leukocyte antigen, HLA) [4]相合性与同种异基因造血干细胞移植成功及移植物抗宿主反应( graft_versus leukemia, GVL)的密切相关性.美国华盛顿大学 Thomas等成功应用骨髓移植治愈白血病及再生障碍性贫血,对放射意外患者及急性白血病完全缓解期的移植可大大提高同种异体移植的成功率及急性白血病的治愈率.嗣后发现这种造血干细胞不仅存在于骨髓,而且存在于经粒细胞集落刺激因子动员的外周血及脐血中,大大推动了造血干细胞移植在临床上的应用,并成功地抢救了许多患者的生命. Thomas教授也因此而成为世界上唯一接受诺贝尔奖的临床医师.
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犬半舌同种异体移植动物模型的建立
目的:建立犬半舌同种异体移植模型,探讨舌同种异体移植的可行性.方法:选用8只Beagle犬分别作为供/受体,随机配成4对.供/受体同时进行吻合血管神经的右侧半舌交换移植手术.配对犬随机分为2组,对照组不用免疫抑制剂(A组),实验组使用免疫抑制剂(B组).术后观察移植半舌的大体情况,对存活100d动物的舌下神经进行电生理检测.结果:A组动物均发生急性排斥反应.B组动物中,1只出现不可逆转的排斥反应,2只动物因颈部感染死亡.1只术后存活100d,移植物完全成活,电生理实验发现舌下神经传导功能部分恢复.结论:采用非同胞Beagle犬进行半舌同种异体移植是可行的.先使用环孢素大剂量冲击再小剂量维持,可以获得较好的抗排斥效果.
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犬半舌移植急性排斥反应的特征观察
目的:建立犬半舌同种异体移植模型的急性排斥反应观察指标和分级标准.方法:选用8只Beagle犬,随机配成4对,交换半舌移植.配对犬随机分为2组,A组不用免疫抑制剂,B组使用免疫抑制剂.A组术后每天3-4次观察移植舌的排斥反应情况,移植后第1、3、5、7天切取活检标本,HE染色,光镜观察.B组动物根据排斥反应情况选取活检标本.结果:肉眼观察A组4只动物,术后2～8d出现颜色、质地改变,肿胀、水疱形成,活检出血减少等急性排斥反应,镜下观察,术后1～7d出现血管周炎、多形核细胞浸润、空泡性变、舌肌坏死等急性排斥反应.B组动物中,3只发生急性排斥反应,其中2只经调整免疫抑制剂用量恢复正常,另1只移植舌终被完全排斥而死亡.结论:结合大体及病理观察,建立舌移植急性排斥反应的观察指标和分级标准,可对急性排斥反应的发生时间和严重程度进行估计.
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HT合并妊娠妇女外周血T淋巴细胞亚群及细胞因子的临床分析
桥本甲状腺炎(HT)是一种器官特异性自身免疫性疾病,而HT的病理特点为大量淋巴细胞浸润,甲状腺组织破坏.妊娠是一种半同种异体移植现象,正常妊娠时母体形成一种特殊类型的外周免疫耐受,即妊娠免疫耐受,保护作为半同种移植物的胎儿不被母体免疫系统排斥而成功妊娠.本文通过比较初诊HT病人、HT合并妊娠妇女及正常对照组外周血中的T淋巴细胞亚群及细胞因子的表达变化,探讨HT病在妊娠状态下的免疫功能情况.
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五酯片与他克莫司联合应用对肾移植患者的临床疗效及药物经济学评价
目的 评价服用他克莫司(FKS06)的同种异体肾移植患者术后应用五酯片后的临床疗效及药物经济学效果.方法 65例肾移植术后患者服用他克莫司(FK506胶囊)4周,根据治疗方案分成2组,I组加用五酯片,Ⅱ组则未使用五酯片.分组后,FK506起始剂量同分组前,以后依据其血药浓度调整用量以达到相同的FK506谷浓度.用药物经济学成本-效果分析方法对2种方案进行比较.结果 I组和Ⅱ组的成本分别为42 838.00圆和46 461.00圆,有效率分别为90.91%和93.75%,成本效果比分别为471.21和495.58;Ⅱ组对于I组的增量成本效果比为1 275.70,不良反应发生率分别为21.21%及18.75%.差异无统计学意义.结论 应用五酯片组在达到相同 FK506治疗窗情况下,FK506用量减少,药物费用明显降低,而并不增加急性排斥反应的发生率.
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猪软骨细胞同种异体移植的免疫排斥机制
目的探讨猪软骨细胞同种异体移植的免疫排斥机制.方法分离制备猪软骨细胞和淋巴细胞,采用同种异体软骨细胞-淋巴细胞混合培养反应和IFN-γ诱导比较分析,经3H-TdR法观察淋巴细胞刺激指数,FACS测定软骨细胞表面猪白细胞抗原(SLA)分子表达变化;不同时间收集混合反应中淋巴细胞,分别应用PCR和ELISA技术分析其表达的IFN-γ、IL-4 mRNA和蛋白含量.结果成功制备了猪的软骨细胞和淋巴细胞,软骨细胞表达SLA I类分子,而不表达SLA II类分子;同种异体软骨细胞对淋巴细胞有轻微刺激扩增作用,经IFN-γ诱导具有明显增强作用.混合培养,18 h后上清中可检测到IFN-γ蛋白,而IL-4表达无变化.结论软骨细胞SLA I类分子刺激同种异体淋巴细胞产生IFN-γ,进一步诱导软骨细胞SLA II类分子表达,从而增强淋巴细胞对软骨细胞的免疫排斥反应.
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比格犬阴茎移植模型建立的初步探讨
目的:探讨成年比格犬作为同种异体阴茎移植动物模型可行性,进一步探讨稳定的阴茎移植动物模型建立条件. 方法:按照实验动物模型建立原则,进行移植阴茎相似性、重复性、可行性、适用性和可控性研究.20只成年比格犬阴茎与10例成人阴茎解剖学要点比较,分析主要存在的共同特点和相似性;10对成年比格犬阴茎在显微外科技术辅助下进行交叉移植,并采用FK506+ MMF+ MP免疫抑制方案,观察移植阴茎存活情况;10只显微外科技术辅助比格犬阴茎离断再植术相关指标进行可操作性比较. 结果:20只成年比格犬阴茎解剖学观察与10例成人阴茎解剖学观察具有高度相似性,相互比较统计学上无明显差异.10对成年比格犬阴茎交叉移植手术均获得成功,术后8只出现移植阴茎坏死,12只移植阴茎成功存活,恢复排尿功能;显微外科技术辅助下一次性静脉吻合成功率达95.0％ (38/40),一次性动脉吻合成功率达87.5％ (35/40),血管吻合时间(71.0 ±9.0) min,手术时间(133.0±10.3) min,失血量(135.8 ±41.4) ml.比较10只显微外科技术辅助下比格犬阴茎离断再植手术,一次性静脉吻合成功率达100％(20/20),一次性动脉吻合成功率达90.0％ (18/20),血管吻合时间(65.0±7.9) min,手术时间(117.4±10.0) min,失血量(85.0±10.8) ml.12例临床显微外科技术辅助下成人阴茎离断再植手术,一次性静脉吻合成功率达100％(24/24),一次性动脉吻合成功率达95.8％ (23/24),血管吻合时间(79.0±17.6) min,手术时间(125.0±20.6) min,失血量(140.0±44.3) ml.3组资料经统计学分析显示各项指标无显著性差异. 结论:比格犬阴茎海绵体结构与人阴茎海绵体结构具有高度相似性,在阴茎海绵体横断面解剖中其主要解剖结构均相同;显微外科技术辅助下行比格犬阴茎再植和同种异体移植手术均获得了成功,其手术操作过程中各项指标与临床中人阴茎再植手术相比较,具有相近的可操作性、重复性和较强的可行性.因此,采用成年比格犬作为实验动物建立阴茎移植手术模型切实可行.
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同种异体黑素细胞移植治疗白癜风的进一步探索
目的:通过临床试验深入探索同种异体黑素细胞移植治疗白癜风的疗效和主要影响因素.方法:在没有任何配型、没有使用免疫抑制剂情况下,采取黑素细胞悬液疱内注射和黑素细胞膜片移植两种方法,对12例稳定期白癜风患者移植同种异体黑素细胞.结果:12例患者接受移植后没有特殊不适.移植后异体细胞移植部位明显发红,90 d左右逐渐消退,有的为轻微黄褐色;至180 d时87.5%(7/8)的患者色素未恢复,12.5%(1/8)的患者有轻微色素恢复.自体疱皮移植部位在移植后10～13 d开始有色素恢复,至180 d时色素恢复明显.取移植后发红的移植区皮肤行组织病理检查显示有炎性细胞浸润.结论:异体黑素细胞移植后存在免疫排斥,因此移植效果较差.
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液氮冷冻对成骨细胞免疫原性影响的实验研究
目的探讨液氮冷冻对成骨细胞免疫原性的影响.方法体外培养成骨细胞,传代鉴定后液氮冻存3个月,复苏.建立成骨细胞、淋巴细胞混合培养体系(MLC),测定液氮冷冻后成骨细胞的免疫原性.结果体外培养细胞经鉴定为成骨细胞,液氮冻存3个月后存活率＞90%.MLC结果显示冻存前后刺激指数(SI)差异有显著性(P＜0.01),提示液氮冷冻后成骨细胞的免疫原性降低.结论液氮冷冻是一种理想的降低成骨细胞免疫原性的方法.
关键词： 液氮冷冻 同种异体移植 免疫原性 主要组织相容性复合体 -
大鼠胰岛制备用于同种异体移植的初步研究
目的:建立一种实用可靠的大鼠胰岛制备方法,并研究胰岛在体内外的生物学活性.方法:采用胶原酶溶液经胆总管原位灌注胰腺,于37℃水浴静止消化30 min,过滤法纯化胰岛,经体外形态及功能鉴定后,移植于链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾包膜下,术后动态观察血糖.结果:平均每只大鼠胰腺消化后可获得(1 024±156)个胰岛,纯化后收获量(867±104)个胰岛,活率≥95%.该法制备的胰岛形态结构完好,体外胰岛素释放试验表明其功能良好.5例进行同种异体移植糖尿病大鼠在移植后24～72 h血糖均降至正常,完全缓解率100%,胰岛有功能存活时间(6.6O±2.07)天.实验组口服葡萄糖耐量试验曲线与正常组相似.结论:此种移植物制备技术简便、可靠,效果满意,经体外和体内实验证明获得的胰岛功能良好.但是需要进一步研究防治移植排斥反应的措施.
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清创后Ⅰ期同种异体骨移植治疗慢性骨髓炎
目的:避免Ⅱ期自体松质骨移植的缺点,探讨Ⅰ期同种异体骨移植重建慢性骨髓炎清创术后骨缺损的可行性. 方法:1999年2月至2004年4月,35例慢性骨髓炎患者(8例骨不连)在我院接受清创后Ⅰ期同种异体骨移植方法治疗. 结果:35例患者中平均随访28个月(13～55个月),32例(91.4%)获得感染控制.8例骨不连患者,其中4例骨愈合;1例因感染复发接受再次清创自体骨移植获得感染控制、骨连接;3例再不连患者,2例自体骨移植获得连接,1例再不连及另2例感染复发患者未接受再次治疗. 结论:清创后Ⅰ期同种异体骨移植治疗四肢慢性骨髓炎可以获得较高的感染控制率,但是骨不连伴节段性骨缺损患者应用该方法治疗,骨再不连的发生率高,应慎用.
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同种异体头皮及面颈部和双侧耳廓复合组织移植的应用解剖
目的:阐述同种异体头皮、面颈部和双侧耳廓复合组织移植解剖学基础.方法:对4具8侧灌注的尸体标本及8具16侧新鲜尸体标本进行解剖,观察头皮、面颈部和耳廓等面部浅表器官的血管走行、分支及其分布. 结果:头面部皮肤软组织以及头面部体表器官的血液供应均由颈外动脉分支提供的,其中颞浅动脉分支分布于额顶、耳颞、侧面颈等处,约占头面部57%的区域,面动脉供应颏部、唇部、鼻部以及眼睑等,两者间以及与其他颈外动脉分支间有丰富的交通支吻合.结论:颞浅动脉作为头皮、双侧耳廓及额颧颊颈部复合组织的血供是安全可靠的.
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胚胎胰组织移植的实验研究
目的:研究胚胎胰组织在同种异体内再生长发育的可能性,并根据不同胎龄、不同移植部位的移植胚胰生长状况,研究大鼠胚胰移植的适合胎龄和移植部位.方法:将远交系SD大鼠妊娠15.5d(E15.5)、E16.5、E17.5和E18.5的胚胰移植到成年健康SD大鼠的肾包膜下或网膜内.移植后14～21d期间剖腹观察器官生长情况,并取标本行病理切片和免疫组化观察.结果:①E15.5胚胰植入肾包膜21d后,发育良好,腺泡导管分化发育,β细胞增殖并聚集.植入网膜内16d后,有中度排斥反应,发育有限.②E16.5胚胰植入肾包膜下21d后,可见中度排斥,但结构发育较好.③E17.5和E18.5胚胰植入肾包膜下后,16d内就发生重度排斥,生长严重受限,β细胞也未见增殖.④E15.5胚胰移植到小鼠体内,未经任何免疫抑制处理,16d内见到重度排斥表现并导致组织坏死.结论:不使用免疫抑制剂时,一定胎龄的胚胰可在同种远交系成年大鼠体内再血管化,并发育为近似正常胰腺组织.E15.5或更早期的胚胰用来移植比较适合,排斥反应较轻,增殖潜力较大.胚胰移植在肾包膜下相对于移植在网膜内的排斥轻、发育好.
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同种异体复合组织移植术后免疫抑制剂的应用
恶性黑色素瘤恶性程度高,扩展转移快,侵犯范围广,手术切除后组织缺损多,难以用自体组织修复.1999年,Dubernard等[1]报道法国里昂Edourard Herriot医院为1例右前臂外伤性缺损15年的患者进行了世界首例异体手移植获得成功,表明同种异体复合组织移植能被用于治疗创伤或肿瘤等疾病所致的肢体缺损.我院于2003-09-16为1例"头颈、颞部、前额、面颊部和双侧外耳前后及颌颈部巨大恶性黑色素瘤病灶扩大切除术"后的患者进行了同种异体全层头皮及额颞部、乳突区、颌颈部及双侧耳廓等复合组织游离移植术[2].移植前对移植物进行放疗;移植中和移植后采用FK506+霉酚酸酯(MMF)+泼尼松(Pred)+赛尼哌(Zenapax)四联免疫抑制治疗方案.术后经临床监测及移植皮肤病理学检查,未发现排斥反应征象.现结合本例患者着重对免疫抑制治疗方法,讨论如下:
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冻干同种异体带鞘管肌腱移植的免疫学研究
目的 确定经冻干处理带鞘管同种异体移植肌腱移植的免疫学特性.方法 将成年双A鸡40只随机均分为4组:带全鞘肌腱移植组、带部分鞘(包括A2-A4滑车)肌腱移植组、不带鞘肌腱移植组及对照组,各10只.分别于手术后3d、1周、2周、4周、6周测血清免疫学指标(IL-2及sIL-2R)并进行比较.结果 冻干处理的移植肌腱并未引起外周血中IL-2及sIL-2R的显著变化,提示移植肌腱很少表达组织相容性抗原,移植物终能被受体良好接受.结论 带鞘管异体肌腱有良好的组织相容性.
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犬颜面复合组织移植及皮肤附属器变化的观察
目的 建立犬颜面部复合组织移植实验动物模型,进一步研究组织瓣移植后皮肤及附属器的变化.方法 用3只杂种犬进行解剖学研究,观察犬头颈部动静脉血管的走行、大小及变异情况.2只比格犬作异体移植[免疫抑制剂使用环抱素A(Cs-A)和强的松],术后70、100 d于移植皮瓣与受体皮肤吻合处取材,光镜和电镜观察皮肤及附件变化.结果 犬头颈部血管走行与人极为相似.比格犬术后皮瓣血运良好,无毛发脱落,皮瓣观察窗毛发生长,1例术后4d见皮瓣红斑,调整Cs-A用量后未再现排斥反应;70,100 d,光镜见附属器较正常增多、结构正常;电镜见毛囊部分线粒体肿胀,汗腺线粒体结构正常,无明显炎性细胞浸润.结论 Cs-A和强的松能有效预防和控制犬颜面移植后排斥反应.移植后皮肤毛囊、皮脂腺和汗腺数量会增多.
